抗猪带绦虫六钩蚴独特型抗体疫苗对猪体免疫保护作用的研究

目的　本研究在证实猪带绦虫六钩蚴抗原具有很高的免疫保护性的基础上 ,探讨六钩蚴抗独特型抗体作为六钩蚴抗原替代物对猪体的保护作用 ,为研制猪体囊虫疫苗提供理论基础。　方法　用六钩蚴粗制抗原免疫家兔 ,制备兔抗六钩蚴抗体 (Ab1) ,再用Ab1免疫昆明小白鼠 ,制备抗独特型抗体 (Ab2 ) ,免疫猪体 ,以 3节猪带绦虫孕卵节片攻击感染 ,90d后剖杀 ,观察感染情况。　结果　 5头试验猪只有 1头在膈肌发现 1个囊虫 ,而 2头阳性对照猪均被感染 ,各检查部位囊虫数平均为 4.5个 /10 0g和 3 .2个 /10 0 g。　 结论　抗猪带绦虫六钩蚴独特性抗体Ab2对猪体有较强的免疫保护作用。     

猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体免疫保护作用的初步研究

本文报告猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体的免疫保护作用，结果发现，免疫接种的实验动物没有感染，得到了完全保护，提示六钩蚴抗原对猪体有高度的保护作用；２头未免疫的对照组，１头雌猪感染较重，虫体负荷数为６６８，另１头雄猪没有感染，提示宿主的性别或不同的个体对猪带绦虫的易感性可能有判别。     

猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体免疫保护作用的初步研究

本文报告猪带绦虫六钩蚴抗原对猪体的免疫保护作用，结果发现，免疫接种的实验动物没有感染，得到了完全保护，提示六钩蚴抗原对猪体有高度的保护作用；２头未免疫的对照组，１头雌猪感染较重，虫体负荷数为６６８，另１头雄猪没有感染，提示宿主的性别或不同的个体对猪带绦虫的易感性可能有差别。     

猪带绦虫六钩蚴TSO45W基因工程疫苗研究进展

囊虫病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病。研制有保护性作用的疫苗将是控制和消灭该病的有效方法,猪带绦虫保护性抗原的研究是猪囊虫病免疫的基础。45W蛋白是猪带绦虫六钩蚴时期的重要抗原,但天然45W抗原来源有限,限制了其应用,而基因工程重组抗原的应用可解决质量控制和抗原来源的问题。本文就近年来国内外对猪带绦虫六钩蚴TSO45W基因工程疫苗的研究进展作一综述。     

抗人膀胱癌抗独特型抗体的制备和鉴定

目的：制备抗人膀胱癌抗独特型抗体（Ab2)并进行体外实验和鉴定，探讨通过免疫效应治疗或预防膀胱癌术后复发的可能性。方法：提取膀胱癌抗原（Ag)，应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体（Ab1)，Ab1经胃蛋白酶水解制备Ab1的F（ab‘)2片优，以F（ab‘）2片段免疫新西兰白兔，其血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌抗独特型抗体（Ab2），采用ELISA等方法进行鉴别。结果：Ab2与Ab1呈阳性反应，与BALB／C小鼠γ球蛋白呈阴极反应；Ab2与Ag竞争结合Ab1；Ab2与Ag的结合。结论：Ab1是针对膀胱移行细胞癌的单克隆抗体，Ab2是具有膀胱癌抗原的抗独特型抗体。     

抗囊虫病新型疫苗的研究进展

囊虫病(Cysticercosis)是常见的人、畜寄生虫病，其中对人或家畜危害严重的有猪囊虫病、牛囊虫病和羊囊虫病，分别由猪带绦虫、牛带绦虫和绵羊带绦虫的中绦期所引起。该病的防治传统上以药物为主，但肉品中药物残留及对环境安全的危胁，使人们把目光重新投向安全、有效的疫苗研制和开发。传统疫苗所用抗原有全囊虫抗原、分泌／代谢(E／S)抗原、异源抗原以及六钩蚴抗原，     

链状带绦虫六钩蚴形态与猪体感染初期分布的研究

本文通过链状带绦虫虫卵体外孵育和猪体感染，对六钩蚴形态和感染猪体初期的分布进行了观察。体外孵育的六钩蚴有４种不同的运动形式，可能与卵成熟情况有关；定向运动的六钩蚴有感染能力；扫描电镜下不能运动的六钩蚴外有一层单位膜包囊；六个小钩为六钩蚴的运动器官，感染宿主后１０～１５ｄ开始退化消失。     

猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白快速诊断试纸条研制

目的以猪带绦虫六钩蚴重组蛋白(TSOL18)为抗原,建立一种简便快速的猪囊虫抗体检测方法,评价其血清学诊断的价值。方法用胶体金颗粒标记纯化的TSOL18重组蛋白,将兔抗TSOL18-GST-IgG和TSOL18重组抗原分别喷涂于硝酸纤维素膜的质控线和检测线上,与PVC垫板等部件按顺序装配成猪囊虫抗体快速检测试纸条;用该试纸条检测猪血清样品测定敏感性和特异性。结果该试纸条与全囊虫抗原ELISA的相对敏感性和特异性分别为75.0%(12/16)和95.2%(40/42),与剖检计数法的相对敏感性达80.0%(12/15)。试纸条在4℃存放12个月,检测结果稳定,重复性好。结论基于TSOL18建立的胶体金免疫层析试纸条操作简单、快速敏感、稳定性好,可用于猪囊虫病感染的诊断和筛查。     

猪带绦虫六钩蚴超微结构的观察

目的 观察猪带绦虫六钩蚴的超微结构。 方法 猪带绦虫病患者驱虫,收集成熟虫卵。次氯酸钠法破卵壳后,等渗细胞分离液（Percoll）收集六钩蚴,人工肠液激活。热琼脂离心法制备电镜样品,透射电镜观察。 结果 猪带绦虫成熟六钩蚴呈卵圆形,（14～17）μm ×（10～13）μm,表面有不规则的突起或皱褶。六钩蚴小钩从外至内由颗粒带、纤维层和芯髓组成。成熟六钩蚴具成肌细胞、小钩生发细胞和皮层细胞等几种细胞类型。 结论 猪带绦虫六钩蚴的超微结构和缩小膜壳绦虫（Hymenolepis diminuta）六钩蚴的超微结构相似,但小钩的结构不同;猪带绦虫六钩蚴有形成上皮的双核细胞。     

应用小鼠动物模型进行猪囊虫病免疫预防的实验研究

目的 以昆明小鼠作实验动物模型,探讨猪囊虫病基因工程疫苗的免疫效果。方法 ７８只昆明小鼠随机分为３组,第一组用猪囊虫病基因工程疫苗免疫１次,每二组免疫２次,第三组不免疫。第一次免疫后２０ｄ各小鼠经尾静脉感染已孵化的有活力的六钩蚴,６３ｄ后剖检小鼠检查有无囊虫,并观察虫体的活力。用免疫学方法检测血清中囊虫抗原和抗体,以监测疫苗的免疫反应及虫体寄生状况。结果 所有免疫小鼠均未出现不良反应;免疫７ｄ后部     

日本血吸虫单克隆抗抗独特型抗体NP41的建株及初步鉴定

目的 制备日本血吸虫单克隆抗独特型抗体（anti-id,Anb2)NP30的抗抗独特型抗体（anti-anti-id,Ab3)。方法 IRS－NP30主动免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与SP2／0细胞融合,制备anti-anti-id杂交瘤细胞株。结果 获得1株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,定名为NP41。NP41的Ig同型为IgM。免疫组化显示NP41与成虫的体膜、消化管上皮、子宫内膜上皮及虫卵内皮的毛蚴头腺,毛蚴膜呈阳性反应。结论 NP41为NP30的anti-anti-id,其识别的抗原即NP30的模拟抗原。     

一氧化氮对猪带绦虫六钩蚴细胞毒作用的研究

目的　研究一氧化氮 (NO)对猪带绦虫六钩蚴杀伤作用。方法　以LPS诱导离体的小鼠腹腔巨噬细胞 ,使其产生NO ;加入猪带绦虫六钩蚴 ,测定 4 8h内六钩蚴的死亡率 ;分别用诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)的抑制剂地塞米松 (Dexam ethasone ,DXS)和左旋硝基精氨酸 (Nω -nitro -L -arginine ,L -NNA)抑制NO产生 ,与未加抑制剂组比较六钩蚴死亡率的变化。结果　LPS可有效诱导巨噬细胞产生NO ,2 0× 10 5巨噬细胞产生的NO浓度为 119 6 4 0 0 +5 115 4 μmol/L ,相应的杀虫率为 79 83%。加入抑制剂DXS和L -NNA后 ,巨噬细胞的NO产量均明显降低 ,其杀虫率也明显降低。结论　活化巨噬细胞产生的NO对猪带绦虫六钩蚴有杀伤作用。     

抗囊虫病新型疫苗的研究进展

囊虫病 (Cysticercosis)是常见的人、畜寄生虫病 ,其中对人或家畜危害严重的有猪囊虫病、牛囊虫病和羊囊虫病 ,分别由猪带绦虫、牛带绦虫和绵羊带绦虫的中绦期所引起。该病的防治传统上以药物为主 ,但肉品中药物残留及对环境安全的危胁 ,使人们把目光重新投向安全、有效的疫苗研制和开发。传统疫苗所用抗原有全囊虫抗原、分泌 /代谢 (E/S)抗原、异源抗原以及六钩蚴抗原 ,这些疫苗都能对囊虫病起到很好的预防作用。但由于囊虫不能通过体外培养增殖 ,因而E/S抗原和全虫抗原来源都很有限 ,极大地限制了其应用 ,制约了囊虫病疫苗的研究。随着…     

日本血吸虫单克隆anti—anti—id的建株及初步鉴定

日本 制备日本血吸虫抗独特型抗体（anti-id,Ab2)NP30的单克隆抗独型抗体（anti-anti-id,Ab3)。方法 应用辣根过氧化物酶标记的NP30（HRP－NP30）免疫BALB／c小鼠的脾细胞与SP2／0融合,制备单克隆anti-anti-id。结果 获得1株稳定分泌抗NP30的单克隆抗体的细胞株,定名为NP48。NP48的Ig同型为IgG2b。NP48与SWAP和SEA ELISA反应均阳性。免疫组织化学显示NP48可定位于虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜。结论 NP48是NP30的特异性anti-anti-id,可用于NP30模拟抗原的分离和鉴定。     

曼氏裂头蚴可溶性抗原DIGFA法快速检测特异性抗体的潜在诊断价值

目的 探索曼氏裂头蚴可溶性抗原金标免疫渗滤法快速检测曼氏裂头蚴特异性抗体的免疫诊断价值。方法 从自然感染的青蛙中分离出曼氏裂头蚴，经口感染小鼠；于感染后第7周剖杀小鼠，收集鼠血清和虫体并计数。以曼氏裂头蚴可溶性抗原（PsA）为探针建立PsA—DIGFA，分别检测曼氏裂头蚴感染小鼠、健康小鼠、健康人群及其他寄生虫感染者血清中特异性抗体，并与常规ELISA法进行平行检测和比较。结果 DIGFA法检测感染小鼠血清中特异性抗体的敏感性为100％（49／49）、特异性为100％（30／30），与ELISA法检测结果相同；不同虫荷数感染鼠间抗体水平差异无显著性（P〉0．05），感染鼠与正常鼠之间抗体水平差异有显著性（P〈0．01）。PSA—DIGFA检测健康人群血清100人份均为阴性，检测囊虫、包虫、旋毛虫、肺吸虫、华支睾吸虫病病人血清的阳性率分别为42．5％（17／40）、10．0％（2／20）、20．0％（5／25），80．0％（8／10）、8．0％（2／25）。结论 用曼氏裂头蚴粗抗原检测感染动物血清中特异性抗体具有较好的敏感性和特异性，但与其他蠕虫感染存在较高的交叉反应。不同虫荷数感染鼠均产生较高水平抗体，组间差异无显著性。DIGFA法与ELISA法检测的敏感性和特异性相同，但前者更为简便、快速，无需特殊仪器设备，可单份检测，适合寄生虫病的临床检验和流行病学调查。若能进一步纯化检测用抗原，减少与其他蠕虫间的交叉反应，有潜在的应用价值。     

猪带绦虫Ts14-3-3.6蛋白多克隆抗体制备及在不同发育阶段的表达

目的制备猪带绦虫Ts14-3-3.6蛋白多克隆抗体,并检测Ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫及囊尾蚴阶段的表达情况。方法合成Ts14-3-3.6基因全长,然后克隆至pCznI原核表达质粒,转化至大肠埃希菌Arctic Express中并诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析,通过Ni柱亲和纯化获得Ts14-3-3.6重组蛋白。将该重组蛋白免疫新西兰兔,制备抗Ts14-3-3.6多克隆抗体,以此为一抗采用Western blot检测Ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段的表达。结果 pCznI-Ts14-3-3.6重组表达质粒构建成功,诱导表达的Ts14-3-3.6重组蛋白存在于包涵体中,相对分子质量约29.43×10~3。Western blot检测纯化带有His标签的Ts14-3-3.6重组蛋白能被His标签抗体识别;用该蛋白免疫新西兰兔获得效价为1∶512 000的多克隆抗体;分别以提取的猪带绦虫成虫和囊尾蚴总蛋白为抗原进行Western blot,均出现与Ts14-3-3.6多克隆抗体、囊虫病人血清及囊虫病猪血清反应条带,即均有该蛋白的表达。结论成功制备猪带绦虫Ts14-3-3.6重组蛋白并获得较高纯度的特异性高效价多克隆抗体。Ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段均有表达。     

猪带绦虫Tsl4-3-3.6蛋白多克隆抗体制备及在不同发育阶段的表达北大核心CSCD

目的制备猪带绦虫Ts14-3-3.6蛋白多克隆抗体,并检测Ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫及囊尾蚴阶段的表达情况。方法合成Ts14-3-3.6基因全长,然后克隆至pCznI原核表达质粒,转化至大肠埃希菌ArctieEx-press中并诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析,通过Ni柱亲和纯化获得Ts14-3-3.6重组蛋白。将该重组蛋白免疫新西兰兔,制备抗Ts14-3-3.6多克隆抗体,以此为一抗采用Western blot检测Ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段的表达。结果pCznI一Ts14-3-3.6重组表达质粒构建成功,诱导表达的Ts14-3-3.6重组蛋白存在于包涵体中,相对分子质量约29.43X102。Western blot检测纯化带有His标签的Ts14-3-3.6重组蛋白能被His标签抗体识别;用该蛋白免疫新西兰兔获得效价为1:512000的多克隆抗体;分别以提取的猪带绦虫成虫和囊尾蚴总蛋白为抗原进行Westernblot,均出现与Ts14-3-3.6多克隆抗体、囊虫病人血清及囊虫病猪血清反应条带,即均有该蛋白的表达。结论成功制备猪带绦虫Ts14-3-3.6重组蛋白并获得较高纯度的特异性高效价多克隆抗体。Ts14-3-3.6蛋白在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段均有表达。     

福建省绦、囊虫病流行现状调查

目的 了解福建省猪带绦虫病、囊虫病流行现状。方法 随机选择5个县（市、区）16个村（点）。检测受检者血清猪带绦、囊虫抗体，阳性者询问病史。结果共查16371人，人群抗体阳性率为2．28%（89／3899）；人体猪带绦虫感染率为0．02％（3／16371）。结论 福建省流行猪带绦、囊虫病，应引起重视。     

猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定

目的预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。方法利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B抗原FnⅢ结构域序列并预测其线性B细胞表位;采用SWISS-MODEL软件预测TSO45-4B的蛋白空间结构,并合成两条预测表位肽。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪囊尾蚴病人血清与两条预测表位肽的免疫反应性。结果获得2个TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞预测表位,其中1条预测表位合成肽可为猪囊尾蚴病患者血清识别。结论成功预测并鉴定了猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。     

猪带绦虫抗原刺激囊虫病患者PBMC Th1/Th2细胞因子的表达及其免疫调节

目的检测猪带绦虫不同虫期抗原刺激囊虫病患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子的表达水平,并分析其在囊虫病免疫调控中的作用。方法用流式细胞仪检测囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群,并以猪带绦虫六钩蚴抗原或囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC,分别在刺激的第0d、5d、10d和15d时检测Th1/Th2细胞因子(IFN-γ及IL-4),对分泌IFN-γ或IL-4的不同细胞群体进行数据分析。结果囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群CD3+与CD4+细胞较正常人升高,CD4+/CD8+较正常人升高,分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率较正常人升高;猪囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PB-MC第0d、5d、10d和15d时,分泌IFN-γ的CD3+细胞百分率分别为25.42%±5.53%,30.46%±4.94%,36.52%±4.73%,38.69%±5.58%;分泌IL-4的CD3+细胞百分率分别为2.52%±0.52%,3.00%±0.57%,3.81%±0.70%,5.03%±0.73%。六钩蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率亦呈现相同的变化趋势。结论囊虫病患者与正常人相比PBMC中存在T淋巴细胞的极化水平异常,CD3+与CD4+细胞百分率均显著升高,T细胞亚群比例失调,免疫功能紊乱;随着囊尾蚴抗原刺激外周血PBMC时间延长,分泌IFN-γ和IL-4的CD3+细胞百分率逐渐升高。