大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。适用组织化学、免疫组化等技术的染色。大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10％硝酸和乙二胺四乙酸二钠（EDTA）复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。     

骨髓活检组织前脱钙法与后脱钙法的体会

鉴于骨髓组织含有大量的钙盐而非常坚硬致密,不能直接进行石蜡制片.需经过脱钙处理后,才能进行切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色[1].一种好的脱钙方法能够提高骨髓活检组织的制片质量,提高HE染色和免疫组化染色的效果,更好地满足临床病理的精准诊断.目前常用的方法是前脱钙法即传统脱钙法:在脱水前采用4％盐酸甲醛溶液先行脱...     

甲酸混合酸脱钙液在兔股骨头制片中的应用

目的观察甲酸混合酸脱钙液对股骨头组织的制片效果。方法采用成年新西兰大白兔10只,切断股骨头圆韧带,取股骨上1/3段置于甲酸混合酸脱钙液中脱钙1周,随即常规脱水、透明、石蜡包埋,制备5μm厚纵切片,行HE染色。结果所有组织切片厚薄均匀,未见脱片现象,股骨头完整性较好,各层次分明,骨小梁结构完整,软骨细胞、骨细胞细胞形态清晰,着色鲜艳。结论选用甲酸混合酸脱钙液制片股骨头组织具有脱钙时间相对较短、操作简单、组织结构完整、染色效果较好的特点。     

改良脱钙液在骨骼组织切片中的应用

在日常病理工作中,骨骼组织做病理切片之前,要进行脱钙处理.通常用的脱钙液有硝酸、盐酸、甲酸为主配制的脱钙液,还有铬酸和螯合剂配制的脱钙液[1].现介绍一种对脱钙组织损伤较小而且配制简便的脱钙液,固定脱钙组织时不需要配制专用固定液,只用10％中性甲醛液即可,方便了脱钙组织和其他组织共同进行固定、脱水,经过这种脱钙液脱钙后的组织制作出的切片完整,染色效果好,组织形态结构清晰,是一种适合于日常骨骼组织病理制片工作的脱钙液.     

骨髓活检标本脱钙及除酸方法的改良

许多单位都采用石蜡切片技术制作骨髓活检组织切片,因骨髓组织富含钙盐,所以制片前一定要先脱钙。过去我们一直用14%硝酸脱钙液脱钙,脱钙后流水冲洗,但此法制作组织切片时常出现组织切片破碎、组织形态和细胞结构严重     

内耳组织石蜡制片技术的改进与应用

豚鼠内耳耳蜗石蜡制片技术是耳科组织形态学实验研究中最常用的技术之一，它具有方便、快捷的特点，适用于组织化学、免疫组化等新技术。耳蜗制片的关键步骤是脱钙，其直接影响到制片的成败。我们在豚鼠耳蜗毒性损伤的实验研究中，用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液，在微波辐射下进行脱钙，缩短了脱钙时间，做出了高质量的耳蜗组织切片。     

RapidCal．Immuno脱钙剂在石蜡组织制片中的应用

我们在日常石蜡组织切片时经常会遇到一些诸如子宫肌瘤、角化严重的皮肤纤维瘤等硬韧组织或脱钙不佳的骨组织石蜡标本.对此类组织往住不易获得较好的石蜡组织切片.我们在工作中试用了RapidCal.Immuno脱钙剂,可以迅速和方便地软化此类硬韧的石蜡组织块,也可以对脱钙不佳的骨组织石蜡标本直接重复脱钙,易于切取较好的组织切片,从而提高HE染色质量.     

骨及钙化组织脱钙过度后的补救

骨及钙化组织的石蜡切片,组织在充分固定后,应进行脱钙处理,一般先经有机酸或无机酸稀溶液浸渍脱钙,再用流水冲洗24h,除去组织内的酸,然后才能按常规脱水、浸蜡、切片、HE染色。但脱钙是否完全不好掌握,如果脱钙过度会对组织和抗原造成破坏,影响染色,造成病理诊断困难,至今尚未见解决办法的报道。我们应用酸碱中和的原理对脱钙过度的组织进行处理,染色效果得到很大改善,现将此法介绍如下。1材料和方法活检骨及钙化组织,锯成1.2cm×1.2cm×0.3cm薄片;10%中性福尔马林固定;10%硝酸脱钙过度,然后水洗流水冲洗30min;梯度乙醇脱水、浸蜡、包埋、…     

硝酸液对骨组织脱钙后方法的改良

常规骨及钙化组织石蜡切片其脱钙过程往往需要酸处理 ,酸必然在脱钙的同时对骨的有机物质引起一定的损害。在制作前一般先经无机酸稀溶液浸渍脱钙再用流水洗涤 2 4小时 ,除去组织内原性酸性物质 ,然后才能按常规制片染色。此种方法脱钙时间长、速度慢 ,在客观上延长了病理诊断和临床治疗 ,而且染色效果并不太理想。我们经过反复实践 ,探索出一种有效的快速脱钙方法。1　材料和方法骨及钙化组织 ,锯成 1.2 cm× 1.0 cm× 0 .3cm薄片 ;10 %～15 %中性福尔吗林固定 ,8%硝酸脱钙 ,水洗 1分钟 ,置入 3%氢氧化钠液浸渍 5分钟 ,经 A- F液、95 %乙…     

改良骨及钙化组织快速脱钙法在病理诊断中的应用

目的:探讨骨及钙化组织改良快速脱钙法在病理诊断中的应用。方法:回顾性分析31例骨肿瘤患者需脱钙处理的骨组织病理切片资料。结果:改良骨及钙化组织快速脱钙法脱钙时间较常规脱钙法缩短48 h,切片厚薄均匀,平坦完整,结构清晰,着色均匀。结论:对骨及钙化组织脱钙方法进行改良,可缩短骨及钙化组织的制片时间、并制出优良切片。     

改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较

目的:常规的脱钙骨切片制作方法在脱钙、组织结构完整性等方面存在一定的缺陷.比较用改良后方法制作的脱钙骨组织切片与常规制作的脱钙骨组织切片质量的差异.方法:①实验材料:实验于2004-12/2007-12在广东医学院组织和胚胎学教研室及药理教研室完成.SPF级雌性SD大鼠10只,鼠龄6个月.②实验方法:取大鼠左右股骨和胫骨标本各20个,分为两组,左股骨和右胫骨为实验组,右股骨和左胫骨为对照组.实验组经过常规同定,而后应用改良脱钙液(甲酸10 mL、浓盐酸(相对密度1.19)8 mL、氯化铝3 g、体积分数为0.4的甲醛20mL、冰乙酸3mL,加生理盐水至总体积200mL)脱钙、脱水、氯仿透明、包埋时间延长、染色、封固和切片;对照组进行常规固定、脱钙、脱水、透明、包埋、染色、封固和切片.③实验评估:比较两组切片的质量和效果.结果:①实验组大鼠的脱钙骨切片与对照组比较,标本脱钙时间缩短,脱水时间变化不大,而透明效果明显改善.②与对照组比较,实验组骨组织切片标本薄均匀、平坦完整,脱蜡完整均匀.染色成功的切片,骨与骨周围的组织形态保持完整.结论:改良的脱钙大鼠股骨和胫骨石蜡切片制作方法能使标本脱钙更彻底、结构更清晰、组织完整性更好.     

超声处理在含血吸虫卵沉着标本脱钙中的应用

病理制作技术是确诊胃肠道组织是否有血吸虫卵沉着的主要技术手段之一。常规方法脱钙需5～6h,超声处理可使脱钙时间大大缩短,25min内即可完成,且组织结构完整,切片染色清晰。     

骨及钙化组织脱钙过度后的补救

骨及钙化组织的石蜡切片,组织在充分固定后,应进行脱钙处理,一般先经有机酸或无机酸稀溶液浸渍脱钙,再用流水冲洗24h,除去组织内的酸,然后才能按常规脱水、浸蜡、切片、HE染色.     

不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响

目的探讨不同脱钙液对牙齿牙周联合切片HE染色质量的影响。方法选用10%乙二胺四乙酸钠（EDTA）、复合酸（Plank-Rychlo脱钙液）和5%硝酸3种不同的脱钙液,分成A、B、C3组用于犬和大鼠牙齿牙周组织联合石蜡切片脱钙,通过记录脱钙时间,观察HE染色效果,评价室温下（20℃～28℃）不同脱钙液对切片制作的影响。结果A组脱钙液所制切片染色效果良好,但脱钙速度缓慢,所需时间较长;B组脱钙液脱钙速度快,所制切片染色好;C组脱钙液所制切片的染色强度和对比度均不如前两种脱钙液。结论在制作牙齿牙周联合切片时,EDTA脱钙液和Plank-Rychlo脱钙液所制切片均能取得良好的染色效果,但EDTA脱钙液脱钙周期过长;Plank-Rychlo脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合于临床速检工作;硝酸脱钙液组染色效果较差。     

同种异体脱钙骨基质复合自体骨髓基质干细胞修复兔关节软骨缺损

背景:脱钙骨基质具有良好的生物相容性,是临床常用的骨缺损修复材料.骨髓基质干细胞具有向骨及软骨细胞分化的潜能,适合骨软骨缺损修复.目的:观察同种异体脱钙骨基质复合自体骨髓基质干细胞修复兔关节软骨缺损的效果.方法:27只兔均建立骨软骨缺损模型,造模后随机分为3组:复合材料组钻孔植入复合自体骨髓基质干细胞培养8 d的脱钙骨基质块,单纯脱钙骨基质组钻孔单纯植入脱钙骨基质块,模型对照组钻孔后不植入任何材料.取材后对修复组织进行大体观察、组织学观察及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定,并参照Wakitani评分标准对修复组织进行评分.结果与结论:植入后12周,复合材料组修复组织呈透明软骨样,表面光滑平坦,与周围软骨及软骨下骨结合良好;单纯脱钙骨基质组有部分软骨样修复;而模型对照组仅有少量纤维性修复.植入后12周,复合材料组、单纯脱钙骨基质组修复组织Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性,修复细胞表达Ⅱ型胶原,为软骨细胞;模型对照组呈阴性表达.植入后4,8,12周,复合材料组修复效果评分均显著优于单纯脱钙骨基质组、模型对照组(P<0.01).说明自体骨髓基质干细胞复合同种异体脱钙骨基质支架材料修复兔全层关节软骨缺损的效果良好.     

复合配方脱钙液处理兔股骨髁标本

背景:兔骨缺损修复模型被广泛应用于骨替代材料的研究中,在实验过程中经常需要对兔股骨髁标本进行脱钙制作病理切片,但普遍存在脱钙困难的问题。目的:尝试应用一种复合脱钙液实现软骨覆盖兔股骨髁有效脱钙。方法:取兔股骨髁标本12个,分为2组,分别用自制复合脱钙液和普通甲酸脱钙液进行常温条件下的脱钙处理,复合脱钙液的组成比例如下:盐酸8mL,甲酸10mL,醋酸5mL,中性甲醛固定液100mL。在经过1周的常规脱钙过程之后,进行标准化的脱水、包埋、切片和染色程序。统计切片的完整率,观察苏木精-伊红染色后切片的质量和细微结构,并对两种脱钙液的经济性进行比较。结果与结论:复合脱钙液组的切片完整率显著高于甲酸组,差异有显著性意义(74%vs18%,P<0.05)。复合脱钙液组的切片着色优良,背景清亮,微观结构清晰,细微结构保存完整,不同组织染色对比鲜明。该复合脱钙液的应用成本较常用的甲酸脱钙液降低65%。提示自制复合脱钙液可有效解决兔骨缺损修复模型实验中的脱钙困难问题,且复合脱钙液配置简便,成本低。     

天然可降解脱钙骨基质材料复合脂肪干细胞的三维培养

背景:脱钙骨基质是一种常用的组织工程支架材料,脂肪干细胞是近年来发现的一种成体干细胞,二者均可自体取材,二者复合培养的研究还未见报道.目的:观察脂肪干细胞与脱钙骨基质复合后三维培养的生长、增殖情况.方法:无菌切取兔腹股沟皮下脂肪垫,采用I型胶原酶搅拌消化法分离培养原代脂肪干细胞,系列传代传至第3代,倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况,免疫荧光细胞化学染色检测细胞表面抗原的表达.切取兔髂骨,制备脱钙骨基质.取第3代脂肪干细胞,与脱钙骨基质复合后共培养,1周后扫描电镜观察细胞黏附和生长情况,2周后石蜡包埋切片进行苏木精-伊红染色.结果与结论:自兔皮下脂肪分离培养获得的脂肪干细胞增殖迅速,第3代脂肪干细胞表面抗原CD44呈阳性表达,CD34为阴性;制备的脱钙骨基质为三维立体多孔结构,具有良好的可塑性,并有一定的机械强度.复合培养后电镜扫描、苏木精-伊红染色显示,细胞在脱钙骨基质表面和孔隙内黏附生长良好,并能继续增殖和分泌胞外基质.结果提示脂肪干细胞与脱钙骨基质复合共培养生长增殖良好,并能分泌细胞外基质.     

应用背向散射和二次发射扫描电镜观察未脱钙未染色组织块关节软骨形态:一项描述性研究

背景:在与关节软骨有关的组织工程研究中,应用未脱钙和未染色的样本对于保留关节软骨的三维结构十分有利.当分析大量样本时,应用未脱钙的组织块将减少实验时间和复杂性.目的:检验在未脱钙、未染色的组织块上研究关节软骨形态的可能性,这样可以避免切割并染色薄切片.方法:取新西兰白兔和Sardinian绵羊的股骨髁,在多聚甲醛溶液中固定,乙醇中脱水,包埋于多异丁烯酸甲酯中,切成组织块,并染色.将金钯溅镀于标本上,然后用JeolJSM 6310电子显微镜进行观察.将背向散射和二次发射扫描电镜对组织块相同部位的观察结果进行合并分析.结果与结论:在兔的关节软骨组织块上,可明显区分未钙化与钙化软骨的传代,但较难辨认位于Ⅱ区和Ⅲ区的小软骨陷窝.在绵羊的软骨组织块中,则能较为容易地区分关节软骨各区和细胞结构.应用背向散射电镜能容易分辨出钙化软骨结构和潮标.合并二次发射扫描电镜和背向散射电镜,可在样本上观察到大的腔道.这些腔道穿过软骨下骨和钙化软骨,终止于未钙化的软骨.结果表明,应用背向散射和二次发射扫描电镜能在未脱钙和未染色的包埋组织块上观察到关节软骨的三维结构.     

低强度脉冲式超声对兔脱细胞脱钙骨基质负载关节软骨细胞及骨髓间充质干细胞复合体的影响

背景:有关低强度脉冲式超声波促进关节软骨损伤修复的研究较多,可供选择的细胞支架亦较多,但是有关低强度脉冲式超声波的应用条件及构建出理想的组织工程软骨细胞支架尚未达到共识.目的:构建新西兰兔同种异体脱细胞脱钙骨基质负载关节软骨细胞及骨髓间充质干细胞的复合体.给予一定条件的低强度脉冲式超声波刺激,以探讨脱细胞脱钙骨基质作为组织工程软骨支架的可行性和低强度脉冲式超声波刺激对关节软骨细胞及骨髓间充质干细胞的促进作用.设计、时间及地点:多个样本观察,实验于2009-05/08在解放军第二军医大学生物医学工程研究所完成.材料:应用新型改良Urist法制备兔脱细胞脱钙骨基质.采用机械粉碎结合酶消化法获取兔关节软骨细胞;采用全骨髓漂洗法分离出骨髓间充质干细胞并加以纯化,进行体外单层培养扩增.方法:按与脱细胞脱钙骨基质复合的细胞成分不同及是否应用低强度脉冲式超声波刺激不同分为4组:软骨细胞组、骨髓间充质干细胞组、复合细胞组:脱细胞脱钙骨基质分别与软骨细胞、骨髓间充质干细胞、软骨细胞/骨髓间充质干细胞复合,未进行低强度脉冲式超声波刺激.超声组:将脱细胞脱钙骨基质与软骨细胞/骨髓间充质干细胞复合,第2天进行低强度脉冲式超声波刺激,刺激频率1.0 MHz、瞬时空间强度10 mW/cm~2,20 min/d.主要观察指标:①平面培养第2代关节软骨细胞及骨髓间充质干细胞行免疫组织化学检测.②新型改良Urlet法制备的脱细胞脱钙骨基质行苏木精一伊红染色.③于细胞-支架复合第21天行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测.结果:①平面培养第2代关节软骨细胞行Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,可见细胞形态为多角形、星形、圆形,有伪足伸出,胞质内容丰富,胞浆明显呈棕黄色,胞核为圆形.②平面培养第2代骨髓间充质干细胞的CD34免疫组织化学染色呈阴性,CD44及CD105免疫组织化学染色呈阳性.③新型改良Urist法制备的兔脱细胞脱钙骨基质内未见明显的细胞样结构,空隙大小均匀.④复合第21天后,骨髓间充质干细胞组的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阴性,软骨细胞组的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色弱阳性,复合细胞组的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性,超声组的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈强阳性.结论:①第1-3代关节软骨细胞及骨髓间充质干细胞与原代细胞的生物学性能相似.②在脱细胞脱钙骨基质内,软骨细胞和骨髓间充质干细胞可以保持较高的增殖能力.③10 mW/cm~2的低强度脉冲式超声波不影响骨髓间充质干细胞活性,并且能够加速其向关节软骨细胞分化,但未发现有明显促进细胞增殖的作用.     

Rapidcal. Immuno在骨髓脱钙中的应用

近年来血液病呈高发趋势,骨髓穿刺活检更广泛地应用于临床。骨髓活检标本制片的质量及免疫组化染色的准确表达,对骨髓病理诊断起着极其重要的作用。骨髓组织中含有丰富的钙盐、脂肪及大量造血细胞,成分复杂,软硬程度不一致。在去除不利于制片的钙盐成分的同时,又要保证造血细胞形态的完好及其免疫原性的完整保留。