CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖的条件探讨

目的 探索CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖的最佳条件。方法 采用交叉设计或两因素完全随机设计探索分裂素刀豆蛋白（ConA）或脂多糖（LPS）刺激的脾细胞增殖实验的细胞制备方法、细胞浓度、分裂素浓度、刺激时间、培养基中胎牛血清（FBS）浓度、是否预培养等条件。结果 制备方法中以轻压制备的脾细胞增殖率高于轻磨;脾细胞浓度以5×10⁶/mL为最佳;ConA浓度为2、5、10 μg/mL,LPS浓度为10、20、50 μg/mL细胞增殖率未见明显差异;刺激时间在48和72 h间脾细胞增殖率未见明显差异;用含10%、15%和20% FBS的培养基培养的脾细胞增殖率未见明显差异;制备的脾细胞当天刺激比第二天刺激增殖率更高。结论 ConA和LPS刺激的Balb/C小鼠脾细胞增殖实验的最佳条件为,轻压制备脾细胞,脾细胞浓度为5×10⁶/mL,制备当天直接种板,ConA的刺激浓度为2~10 μg/mL,LPS的刺激浓度为10~50 μg/mL。     

改良MTT法检测HePG-2细胞增殖的研究

MTT比色法广泛用于检测培养细胞的生长和增殖、评价化学物的细胞毒性以及抗肿瘤药物的敏感试验。由于MTT的代谢产物甲瓒(formazan)为水不溶性的,必须采用合适的有机溶剂溶解后,才能通过酶标仪或分光光度计进行检测。通常的方法是在加入噻唑蓝(MTT)培养4 h后,吸出培养基,加入DMS     

硝酸亚铈对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

硝酸亚铈对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响程水娥，陈兴安随着农用稀士的日益推广和大面积使用，对其卫生学评价也逐步引向深入。而有关稀土免疫毒理方面的研究目前报道甚少［１］。因此，本实验对农用稀土＂常乐＂的主要成份之一──硝酸亚铈进行了小鼠脾淋巴细胞增殖影响的观...     

甜菜碱对S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的:以S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞作为研究材料,研究甜菜碱对S180町荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖影响的内在机制.方法:MTF法测S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖程度.ELISA方法检测甜菜碱对S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞分泌肿瘤坏死因子α的含量的影响.结果:培养48 h后,甜菜碱在50-5 000μg/ml,的浓度范围内可促进S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖反应(P<0.01).甜菜碱在浓度为50～500μg/ml的范围内可促进S180舶荷瘤小鼠脾淋巴细胞TNF-α的产生(P<0.01).结论:甜菜碱能够促进S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、促进TN-α的产生,说明甜菜碱的促进增殖作用主要与促进TNF-α的产生有关.     

低氧暴露对小鼠脾淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究低氧暴露诱导淋巴细胞数量减少与细胞增殖和凋亡的关系。方法 从C57BL/6小鼠脾中分离淋巴细胞,将淋巴细胞分别在低氧（1%O₂）和常氧（21%O₂）环境中培养12、24、48 h。用流式细胞术检测T、B淋巴细胞数量;羧基荧光素乙酰乙酸和AnnexinⅤ-FITC/PI方法分别检测淋巴细胞的增殖和凋亡;扫描电镜观察淋巴细胞形态;实时荧光定量逆转录PCR和Western blot检测凋亡相关因子鼠源B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2同源拮抗剂-杀伤蛋白（Bak）和胱天蛋白酶-3（caspase-3）的mRNA和蛋白表达水平。结果 低氧暴露12、24、48h,可降低T、B淋巴细胞数量,抑制淋巴细胞增殖,促进细胞凋亡;扫描电镜观察显示,同一时间下,低氧组淋巴细胞更早出现凋亡特征形态学变化;低氧暴露12、24、48 h,淋巴细胞Bak和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平均上调,而bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均下调。结论 低氧暴露通过抑制淋巴细胞增殖、促进凋亡,从而介导淋巴细胞数量下降。     

选择卵蛋白致敏豚鼠建立哮喘模型实验研究

目的探讨选择卵蛋白 (OVA) 致敏豚鼠建立哮喘模型的意义及其效果, 并分析模型建立的注意事项。方法选用健康豚鼠24 只, 随机均分成哮喘模型组 (A组)、模型对照组 (B组)。A组采用 OVA致敏+OVA气雾攻击建立模型; B组给予相同剂量的生理盐水替代卵蛋白雾化, 余同A组。检测A组与B组豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中炎症细胞分类及计数, 并进行比较, 观察肺组织病理形态学表现。结果A组豚鼠激发哮喘均表现出不同程度的过敏反应症状, B组无明显反应。A组与 B组支气管肺泡灌洗液中嗜酸性细胞数分别为(97 .70±58. 03) ×106/L与 (11 .68±9. 95) ×106/L, 比较 P<0. 01; 中性粒细胞数分别为 (24. 30±16 .52) ×106/L与 (8 .68±6 .63) ×106/L, 比较P<0 .05。光镜肺组织病理形态学检查, A组可见炎症细胞渗出, 上皮细胞变性, 部分脱落坏死, 嗜酸性粒细胞浸润明显, 而B组细支气管上皮细胞规整, 管腔内无明显炎症渗出物; 实验过程中A组与B组均死亡2只, 存活率均为83. 3%。结论卵蛋白致敏豚鼠哮喘模型建立方法简便、可靠, 成功率高, 值得相关哮喘动物实验推荐使用, 清洁卫生的饲养环境是模型顺利建立的重要保证。     

8-姜酚对小鼠脾淋巴细胞增殖和脾巨噬细胞吞噬作用的影响

目的研究8-姜酚处理小鼠脾淋巴细胞和脾巨噬细胞等免疫细胞的影响。方法分离并培养小鼠脾淋巴细胞和脾巨噬细胞,用MTT比色法测定8-姜酚对小鼠脾淋巴细胞及经革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖(LPS)和刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞增殖能力的影响;用巨噬细胞吞噬中性红试验考察8-姜酚对脾巨噬细胞及经LPS和ConA活化的脾巨噬细胞吞噬功能的影响。结果 8-姜酚(终浓度3.125、6.25、12.5、25、50和100μg/ml)对检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力和脾巨噬细胞吞噬功能均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为3.795和0.185 mg/ml;对LPS和ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力和脾巨噬细胞的吞噬功能有显著的抑制作用(P0.05)。结论在该试验条件下,8-姜酚对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞及其经LPS和ConA活化后的增殖与吞噬作用均有抑制作用。     

两种枸杞糖肽促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用比较

目的比较两种枸杞糖肽的免疫活性。方法常规制备小鼠脾细胞悬液，分别加入浓度为500，100，10，1 μg·mL 1的两种枸杞糖肽样品（实验室提取和工业化生产的枸杞糖肽样品）溶液，空白对照组不加入药物。将各组细胞悬液平均分成两组，其中一组加入10 μg·mL 1的ConA（作为阳性对照）。将各细胞悬液置于37 ℃、5%二氧化碳温箱培养72 h后，分别采用流式细胞仪和MTT比色法对样品进行分析。结果流式细胞仪分析结果显示，两种枸杞糖肽样品均能促进小鼠脾细胞增殖反应，与ConA合用时，均具有协同作用。MTT比色法结果表明：实验室提取的枸杞糖肽样品能明显促进小鼠脾细胞增殖反应，与空白对照组比较，差异有极显著性（P＜0.01）；工业化生产的枸杞糖肽样品在较大剂量时对脾细胞有明显促增殖作用；与ConA合用时，实验室生产的样品在较大剂量时具有协同作用，工业化生产的样品有明显的协同作用（P＜0.05）。结论两种样品均具有较强的免疫活性。     

分枝杆菌多糖的制备及对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的:制备分枝杆菌多糖并考察其对小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法:用苏通培养基培养分枝杆菌,菌体脱脂后,用5种方法提取,比较多糖得率,并用正交试验优化超声提取工艺,再用稀碱提取残渣,粗多糖经Sevag法除蛋白、DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱纯化后得到分枝杆菌多糖;用MTT法检测分枝杆菌多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果:超声后热水提取多糖得率最高,超声提取的优化工艺是提取时间40 min,固液比为1∶150,超声功率600 W;单因素试验优化的Sevag法除蛋白条件为体积比1∶5,萃取时间为20 min,萃取6次;提取得到的4种多糖组分在6.25~50 mg.L-1范围内均能显著促进脾淋巴细胞的增殖。结论:用本实验工艺成功制备了分枝杆菌多糖,制备物具有刺激小鼠脾淋巴细胞增殖的作用。     

蜈蚣三七有效成分W3对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的：研究林荫银莲花根茎蜈蚣三七中所含有效成分W3对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.方法：利用硅胶柱和C18色谱柱分离纯化W3,采用四甲基偶氮唑蓝法分别检测蜈蚣三七总皂苷、W3及其苷元齐墩果酸对小鼠脾淋巴细胞体外增殖反应的影响.结果：W3对正常增殖的淋巴细胞活性无明显影响;剂量≥0.1μmol·L-1时,W3对刀豆蛋白诱导的淋巴细胞增殖活性有显著的抑制作用（P＜0.05）.结论：蜈蚣三七有效成分W3具有较强的抑制淋巴细胞增殖活性.     

人工蛹虫草子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的：观察人工蛹虫草子实体及其不同提取物对正常小鼠脾淋巴细胞增殖的影响，分析其影响免疫功能的有效提取部位。方法：以不同浓度提取物与脾细胞共孵育72h，采用MTT法测定淋巴细胞的增殖，观察提取物对淋巴细胞增殖的影响。另以10mg·kg^-1，30mg·kg^-1剂量人工蛹虫草子实体的水提取物及微粉化原药水溶液小鼠ig给药11d，制备脾淋巴细胞悬液，培养72h后测定细胞增殖。结果：在体外。水提取物有显著增强脾淋巴细胞增殖效应，且与ConA和LPS有协同促增殖效应，水提醇沉提取物可促进正常淋巴细胞增殖，而对ConA、LPS活化后的增殖无明显影响；甲醇提取物对淋巴细胞增殖有抑制作用。体内给予水提物和子实体微粉水溶液两个剂量也均显示促进淋巴细胞的自然增殖作用（P〈0．05），但对ConA或LPS活化后的淋巴细胞无协同作用。结论：人工蛹虫草子实体含有免疫促进和免疫抑制的成分。其水溶性和中等浓度的醇溶性成分有免疫促进作用。甲醇提取物抑制淋巴细胞增殖。     

MTT法检测树突状细胞杀伤肿瘤细胞活性的实验研究

目的:用MTT法检测树突状细胞(DC)杀伤肿瘤细胞的活性.方法:将人外周血分离出单个核细胞,在细胞因子的刺激下形成DC,观察其细胞形态、增殖情况,采用MTT法检测DC对肿瘤K562细胞的杀伤活性.结果:DC培养至第1l天时,增殖高达120倍,经MTT法检测证实,DC对K562细胞的4h杀伤活性为3l%.结论:MTT法检测进一步证实了DC对肿瘤细胞有较强的细胞毒作用.     

MTT法检测树突状细胞杀伤肿瘤细胞活性的实验研究

目的:用MTT法检测树突状细胞(DC)杀伤肿瘤细胞的活性.方法:将人外周血分离出单个核细胞,在细胞因子的刺激下形成DC,观察其细胞形态、增殖情况,采用MTT法检测DC对肿瘤K562细胞的杀伤活性.结果:DC培养至第1l天时,增殖高达120倍,经MTT法检测证实,DC对K562细胞的4h杀伤活性为3l%.结论:MTT法检测进一步证实了DC对肿瘤细胞有较强的细胞毒作用.     

二乙基亚硝胺对小鼠脾淋巴细胞增殖及巨噬细胞吞噬的影响

二乙基亚硝胺对小鼠脾淋巴细胞增殖及巨噬细胞吞噬的影响吴纯启何传民（济南军区军事医学研究所，济南２５００１４）昆明种雌性小鼠经不同剂量２．５，５．０及１０．０ｍｇｋｇ－１二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）ｉｇ染毒１ｗｋ后，脾淋巴细胞对刀豆蛋白（ＣｏｎＡ）及植物血凝...     

蓖麻毒素修饰对小鼠脾淋巴细胞增殖及巨噬细胞吞噬功能的影响

蓖麻毒素修饰对小鼠脾淋巴细胞增殖及巨噬细胞吞噬功能的影响李霖邹伯英王文学（第四军医大学毒理学教研室，西安７１００３３）本实验采用３－（２－吡啶二硫基）Ｎ－羟基丙酸琥珀酰亚胺酯（ＳＰＤＰ）异型双功能交联剂修饰蓖麻毒素（ＲＴ）．研究其对小鼠脾淋巴增殖以及...     

不同制备工艺板蓝根多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响

目的研究板蓝根在不同制备工艺条件下得到的多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法用不同浓度乙醇将板蓝根水提液进行分级沉淀,并结合二乙基氨基乙基纤维素离子交换层析柱,凝胶色谱柱分离纯化得到IP-Ⅰ、IP-Ⅱ、IP-Ⅲ…IP-Ⅷ8个粗多糖部分及IP-Ⅸ、IP-Ⅹ、IP-Ⅵ、IP-Ⅻ4个均一多糖部分。采用四甲基偶氮唑蓝法检测板蓝根多糖对小鼠脾细胞增殖反应的影响。结果板蓝根多糖各部分均具有促进淋巴细胞增殖作用,且存在一定的量效关系。结论板蓝根多糖对淋巴细胞的促增殖作用的最适剂量为IP-Ⅸ(0.125mg.mL-1)和IP-Ⅻ(0.125mg.mL-1)。     

酵母葡聚糖硫酸酯化修饰及其对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进作用

目的:研究免疫增强活性较好的酵母葡聚糖硫酸酯(SPS)的修饰条件.方法:通过L9(3)4正交设计对氯磺酸-吡啶法制备SPS的工艺进行优化,并以MTT法测定其对小鼠脾淋巴细胞体外增殖的促进作用.结果:最佳修饰条件为氯磺酸∶吡啶=1∶6(V/V),反应温度70℃,反应时间3h,硫酸基取代度可达1.092.在50～200μg·mL-1内,最佳工艺所得SPS对小鼠脾淋巴细胞生长有显著促进作用,平均增殖率可达89.85%.结论:优化方法制备的SPS对小鼠脾淋巴细胞生长具有显著的促进作用.     

MTT法检测复方珊瑚糊剂对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 探讨复方珊瑚糊剂对体外培养牙周膜细胞的毒性作用。方法 运用MTT分析法分析珊瑚糊剂的细胞毒性。结果 复方珊瑚糊剂的浸出液及稀释液对牙周膜细胞的生长影响与对照组无明显差异。结论 复方珊瑚糊剂在体外是一种生物相容性较好的生物材料，对于牙周膜细胞的生长再生没有明显的抑制作用，可考虑作为根管充填材料。     

褪黑素和哌替啶的耐受性及对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响

采用热板法测定小鼠痛阈，发现ｉｐ褪黑素（ＭＴ）４０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１连续６ｄ，镇痛作用持续、明显；ｉｐ哌替啶４０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１连续６ｄ，镇痛作用逐渐减弱，至ｄ６时已无镇痛作用。ｄ７ｉｐＭＴ和哌替啶同上剂量１ｈ时测定小鼠ＣｏｎＡ诱导的脾淋巴细胞增殖反应，发现ＭＴ能明显提高淋巴细胞增殖反应，而哌替啶对小鼠脾淋巴细胞增殖反应有抑制趋向。结果提示：ＭＴ不同于哌替啶无耐受性，且能促进脾淋巴细胞功能。     

商陆多糖I对小鼠脾淋巴细胞增殖及脾淋巴细胞、巨噬细胞分泌细胞因子的影响

商陆多糖Ⅰ(Phytolacca acinosa polysaccharides Ⅰ,PAP-Ⅰ)体外能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,促进丝裂原诱导的淋巴细胞转化及双向混合淋巴细胞反应。检测PAP-Ⅰ和小鼠脾淋巴细胞培养上清液发现PAP-Ⅰ可显著促进小鼠脾淋巴细胞产生白细胞介素2(IL-2)及集落刺激因子(colony stimulating factor,CSF)。PAP-Ⅰ和小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液中也存在CSF活性及促进重组粒单系集落刺激因子诱导骨髓细胞增殖的细胞因子。PAP-Ⅰ,ip可显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-2产生。