产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性分析

目的研究我院住院患儿分离产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的基因型及其相关耐药性分析。方法收集2004年10月-2005年10月我院住院患儿呼吸道分离产ESBLs大肠埃希菌75株，肺炎克雷伯菌45株，PCR限制性片段长度多态性（RFLP）分析及PCR产物克隆测序等方法明确ESBLs基因型，并结合体外抗生素敏感试验研究基因分型与细菌对不同头孢菌素及氨曲南的敏感性的关系。结果上述120株细菌中112株（93．3％）产CTX—M型p内酰胺酶；未能扩增出SHV型、TEM型ESBL基因。CTX—M型基因亚型主要为CTX—M9簇中的CTX—M-14型（78、6％），其次为CTX—M-1簇中的CTX—M-3型（19．6％），仅有1．8％为CTX—M-8型；携带CTX-M-1簇的菌株对头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦、阿莫西林-克拉维酸、头孢吡肟及氨曲南的耐药率均明显高于CTX—M-9型。结论CTX—M基因型为武汉地区儿童分离大肠埃希菌以及肺炎克雷伯菌中最常见的ESBLs，CTX—M-14为最常见基因型，其次为CTX—M-3型；CTX—M-9簇及CTX-M-1簇对头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮-舒巴坦和氨曲南的水解能力差异明显。     

深圳地区产ESBLs大肠埃希菌CTX—M基因分型研究

目的 利用聚合酶链反应(PCR)技术和基因序列测定技术,了解深圳地区产CTX-M大肠埃希菌基因型分布情况,并分析产CTX-M酶大肠埃希菌的耐药性.方法 应用3组PCR引物分别扩增产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌株质粒DNA的CTX-M基因,并对所有阳性的PCR产物进行DNA测序.应用琼脂稀释法检测所有产CTX-M大肠埃希菌株的最低抑菌浓度(MIC).结果 121株产ESBLs大肠埃希菌共检出CTX-M基因阳性株87株,总阳性率为71.9%,测序结果显示6株为CTX-M-3型,10株为CTX-M-15型,58株为CTX-M-14型,9株为CTX-M-9型,4株为CTX-M-13型.检出的87株CTX-M型大肠埃希菌株对头孢噻肟的耐药最为突出,对头孢他啶、氨曲南和头孢吡肟的耐药率较低.结论 产CTX-M大肠埃希菌基因型主要为CTX-M-14基因型.产CTX-M酶大肠埃希菌对亚胺培南活性最高,其次为哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、阿米卡星和阿莫西林/克拉维酸等.临床上可依据药敏报告加以选用.     

产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌相关耐药基因研究

目的了解常州地区肺炎克雷伯菌耐药状况及β-内酰胺类耐药基因。方法用琼脂稀释法检测氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和亚胺培南对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）。采用聚合酶链反应（PCR）检测产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌16种相关耐药基因,并用DNA测序仪测序。结果120株肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率为44．2％（53株）。从53株肺炎克雷伯菌中检出TEM、SHV、CTX—M-1群、CTX—M-9群、OXA-1群、LEN、OKP和DHA8种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为75．5％、22．6％、18．9％、7．5％、11．3％、5．7％、3．8％和41．5％,其中2株菌同时检出6种B-内酰胺酶基因。基因测序证实为TEM-1、TEM-11、SHV-13、SHV．28、CTX—M-22、CTX—M-55、OXA-1和OKP-6等。结论本地区肺炎克雷伯菌已携带多种β-内酰胺酶耐药基因,是其对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因之一。     

运用多重PCR技术检测CTX-M型耐药基因的研究

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的阳性率、耐药性以及基因型分布。方法采用K-B琼脂扩散法,检测临床分离的85株大肠埃希菌和41株肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用双纸片增效试验检测产ES-BLs菌株,用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果检测菌株中,ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%。所有检测菌株对亚胺培南敏感。产ESBLs的菌株对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等的耐药率为100.0%;质粒接合试验证实,CTX-M型ESBLs介导的耐药可以水平转移;ESBLs阳性菌株中有48株扩增到CTX M型耐药基因,其中CTX-M-3型11株,CTX-M-9型7株,CTX-M-14型25株。结论产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,以CTX-M-14型为多。碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs最有效药物。     

二氧化碳嗜纤维菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性分析及基因型检测

目的 通过检测二氧化碳嗜纤维菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性,了解其耐药机制.方法 收集3株二氧化碳嗜纤维菌,用纸片扩散法和Etest法检测二氧化碳嗜纤维菌对抗菌药物的敏感性,以Nitrocefin纸片法、三维法和PCR方法检测其β-内酰胺酶.结果 3株二氧化碳嗜纤维菌中有2株生痰二氧化碳嗜纤维菌,1株牙龈二氧化碳嗜纤维菌.3株菌对青霉素、氨苄西林、氨曲南、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢吡肟、头孢哌酮耐药,但对哌拉西林、亚胺培南、美罗培南、头孢西丁、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸敏感.三维法试验结果显示3株二氧化碳嗜纤维菌所产的β-内酰胺酶能水解青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑啉、头孢呋辛和头孢吡肟,但不能水解头孢西丁、亚胺培南和阿莫西林/克拉维酸.经PCR方法检测,3株二氧化碳嗜纤维菌的β-内酰胺酶和AmpC酶耐药基因均为阴性.结论 二氧化碳嗜纤维菌对常用抗菌药物尤其是β-内酰胺类抗生素均存在较高的耐药性,且其β-内酰胺酶可能存在新的基因型.     

CTX-M酶在北京协和医院临床分离大肠埃希菌中的流行

目的了解北京协和医院临床分离产ESBLs大肠埃希菌的耐药性及所产ESBLs的等电点和基因型特征。方法对2002年11-12月间北京协和医院临床分离的22株产ESBLS大肠埃希菌采用琼脂平皿对倍稀释法测9种抗菌药的MIC；接合试验研究ESBLs基因是否定位于质粒，并对接合于进行MIC测定和ESBLs确证；等电聚焦电泳检测各菌株及其接合子所产B内酰胺酶的等电点；以PCR通用引物对接合子扩增blaTEM，blaSHV，blaCTX-M基因后测序以确定基因亚型。结果产ESBLs的22株大肠埃希菌仅1株（4．5％）对头孢噻肟敏感，远低于对头孢他啶的敏感率（86．4％，19株），对氨曲南，头孢吡肟，头孢哌酮-舒巴坦，头孢米诺，亚胺培南的敏感率从50％～100％，对环丙沙星和加替沙星的敏感率均较低（9．1％和22．7％）。接合实验获得16株接合子，所有接合子均确证产ESBLs，接合子对上述7种β内酰胺类药物的药敏谱与供体菌相似，而对环丙沙星和加替沙星则全部敏感。接合子和供体菌所产的β内酰胺酶等电点主要为5．4，7．6和8．2，且这些酶均能被克拉维酸抑制。8株接合子扩增出blaTEM基因，将其中1株测序发现其与blaTEM1（GenBank accession no．AY293072）100％同源；3株接合子扩增出blaCTX-M-3组基因，将1株测序发现其与blaCTX-M-3（GenBank accession no．AY485338）100％同源；13株接合子扩增出blaCTX-M-14组基因，将1株测序发现其与blaCTX-M-14（GenBank accession no．AF462398）100％同源。16株接合子均未扩增出blaSHV基因和blaCTX-M-5组基因。结论我院2002年11-12月间产ESBLs的大肠埃希菌中有TEM及CTX-M酶的流行，这些酶特别是CTX—M酶的存在导致大肠埃希菌对大多数口内酰胺类药物耐药，对头孢噻肟高度耐药尤为明显。     

临床分离志贺菌中产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因型及耐药性分析

目的 了解北京地区临床分离志贺菌携带CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因型及耐药特征。 方法 收集2008-2011年本地区分离出的志贺菌83株,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M型ESBLs耐药基因,明确基因型,阳性产物序列在GenBank上进行比对确定基因亚型,并通过DNAman软件对核酸序列进行分析;对携带CTX-M型ESBLs耐药基因菌株按照Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,测定志贺菌对8种头孢类抗生素耐药情况。 结果 83株志贺菌中,13株携带CTX-M型ESBLs基因,阳性率为15.66%。对DNA序列进行比对、分析均为CTX-M-9型中的CTX-M-14亚型,未发现单核苷酸多态性(SNPs)位点。药敏结果显示,13株携带CTX-M型ESBLs基因菌株对头孢噻吩、头孢唑林、头孢噻肟等头孢类抗生素耐药,对头孢西丁、头孢他啶、头孢吡肟和头孢哌酮等头孢类抗生素均敏感,部分菌株对氨曲南耐药。 结论 本地区志贺菌中CTX-M型ESBLs以CTX-M-14亚型为主,基因结构稳定,携带CTX-M-14型ESBLs菌株呈多重耐药。     

一种新CTX-M型超广谱β-内酰胺酶及其临床意义

目的 查明肺炎克雷伯菌的耐药情况及其超广谱β－内酰胺酶(ESBLs)的分型。方法 采用琼脂稀释法对1999年7－12月分离的80株肺炎克雷伯菌进行药敏试验，用美国临床实验室标准化委员会2000年制定的方法测ESBLs，并对所有ESBLs阳性菌株进行质粒接合试验、等电点（pI）测定，并对其中CK23株的ESBLs耐药基因做了序列分析。结果 28／80株（35％）的肺炎克雷伯菌产ESBLs。该28株中20株临床菌的耐药质粒接合成功。 等电聚焦电泳显示：结合子的粗提酶中13／20（65％）有pI为8．8的酶，10／20（50％）有pI为7．6的酶，9／20（45％）有pI为5．6的酶。13株有pI值为8．8的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌对头孢噻肟的耐药明显高于头孢他啶，从中抽取CK23结合子进行耐药基因的PCR扩增和测序，证实为CTX－M型酶，与CTX－M－3比较，仅有3个氨基酸序列不同。结论 28／80株（35％）的肺炎克雷伯菌产ESBLs。13／20（65％）株肺炎克雷伯菌接合子产pI8．8的β－内酰胺酶。系CTX－M型的ESBLs，它极类似CTX－M－3。     

头孢他啶与头孢噻肟对泌尿系产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌检出率分析

目的：了解头孢他啶（CAZ）和头孢噻肟（CTX）对我院引起泌尿系感染的肺炎克雷伯菌（Kpn）产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的体外检出特点，以更好地筛选出高度耐药菌株，避免漏检。方法：用K—B纸片筛选及确证试验，对42株肺炎克雷伯菌（Kpn）进行产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测分析。结果：头孢噻肟对产ESBLs的Kpn检出率为92．31％、头孢他啶对产ESBLs的Kpn检出率为76．92％。结论：头孢噻肟对产ESBLs的Kpn检出率显著高于头孢他啶对产ESBLs的Kpn检出率。     

宋内志贺菌中ESBLs的检测

目的了解宋内志贺菌中ESBLs的基因型别。方法琼脂稀释法测定3株宋内志贺菌对8内酰胺类等抗菌药物的耐药性，改良三维试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定，并进行转移接合试验；采用TEM、SHV、CTX—M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-13组β内酰胺酶基因通用引物以及TEM、CTX—M-β组全编码基因引物进行PCR检测和DNA序列分析；同时对这些菌株进行指纹分析脉冲场电泳（PFGE）检测。结果3株宋内志贺菌对青霉素类、第一、二代头孢菌素以及庆大霉素、四环素、复方磺胺甲嗯唑显著耐药，对第三代头孢菌素中头孢曲松、头孢噻肟中度敏感，对亚胺培南、头孢美唑、氟喹诺酮类、头孢噻肟-克拉维酸、头孢他啶-克拉维酸显示敏感。这些菌株均为产ESBLs菌株，ESBLs基因型别为CTX-M-14，并同时产生TEM-1型广谱β内酰胺酶；CTX-M-14编码基因可以接合方式发生水平转移；3株菌株的PFGE谱型相同。结论3株宋内志贺菌产生CTX—M-14型ESBLs，引起对多种β内酰胺类抗生素耐药，并存在克隆传播，应加强监测。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌儿童分离株的耐药性和基因型检测

目的 研究我院临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及ESBLs基因型与耐药表型的关系.方法 收集我院2007年1-3月临床分离的92株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用K-B纸片法作药敏试验,酶抑制剂增强法表型确证,应用PCR、产物测序,确定ESBLs基因型.结果 我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的检出率分别为50.6%和57.3%;产ESBLs菌株对亚胺培南100%敏感,产ESBLs大肠埃希菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟和环丙沙星的耐药率分别为88.2%、14.7%、5.9%和29.0%,产ESBLs肺炎克雷伯菌则分别为75.6%、35.6%、28.9%和5.2%.92株产ESBLs菌株中,共检出7种β内酰胺酶基因型,TEM型酶的检出率为70.7%,均为TEM-1广谱酶, CTX型、SHV型ESBLs的检出率分别为66.3%和44.6%,其中CTX-M-14阳性率为48.1%;SHV基因型都在肺炎克雷伯菌中检出.结论 我院临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药情况严重,且其耐药表型也不尽相同.CTX-M型是我院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型.     

宿州市大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的检测及基因型分布

目的探讨安徽省宿州市临床分离菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的检出率、耐药性及基因型分布。方法采用2005年CLSI推荐方法对收集菌株进行ESBLs确证试验;平皿琼脂对倍稀释法测定产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对13种抗菌药物的耐药性;用PCR法对产ESBLs菌株使用8对引物进行B内酰胺酶基因的扩增,扩增产物回收纯化后测序。结果宿州市临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs株的检出率分别为64．7％和60．5％。ESBLs产生株对三代头孢菌素头孢曲松、头孢塞肟、头孢他啶的耐药率为41．9％～86．3%,对环丙沙星、左氧沙星的耐药率为48．4％～85．5％,对哌拉西林／他唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦的耐药率为4．2％～25．8％,对亚胺培南和美洛培南100．0％敏感。PCR及测序结果显示产ESBLs菌株中,β内酰胺酶基因型以TEM和CTX—M13型为主,分别为61株和55株;亚胺培南和美洛培南是治疗产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌感染的首选药物。结论宿州市临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs株的检出率和对头孢菌素类及喹诺酮类的耐药率均达到很高水平,应加强对产ESBLs株的临床监测。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶的基因分型

目的 :分析我院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的主要基因型。 方法 :用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌 ,用Etest检测其最低抑菌浓度 (MIC) ,分别用TEM、SHV和CTX M通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 :大部分产ESBLs菌株体外对头孢噻肟耐药而对头孢他啶敏感 ,PCR扩增结果显示TEM、SHV和CTX M的阳性率分别为 6 8%、39%和 83% ,序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM 1基因 ,CTX M扩增产物均属于CTX M 3基因 ,而SHV扩增产物则分别属于SHV 12、SHV 11或SHV 1基因。结论 :CTX M 3和SHV 12是我院产ESBLs菌株的主要基因型 ;尚未发现TEM起源ESBLs。     

粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因研究

目的 调查粘质沙雷菌临床分离株β-内酰胺类耐药基因的携带情况,研究其对β-内酰胺类抗菌药物的耐药机制.方法 采用Vitek2-Compact全自动微生物系统对临床分离菌进行鉴定,检出粘质沙雷菌287株,同时进行药敏试验,选出多重耐药粘质沙雷菌135株;采用双纸片确证试验对所有287株粘质沙雷菌进行ESBLs检测、三维试验法检测AmpC酶,采用PCR法对135株多重耐药粘质沙雷菌进行β-内酰胺类抗菌药物相关基因SHV、TEM、OXA、PER、VEB、GES、IMP、VIM、FOX、CTX、KPC、DHA、MOX和oprD2检测.结果 粘质沙雷菌对氨苄西林、头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星以及哌拉西林等临床常用抗菌药物的耐药率较高,耐药率均大于60％,对亚胺培南、美罗培南、舒普深的耐药率较低,耐药率均小于10％.在287株粘质沙雷菌中,共有32株产ES-BLs,检出率为11.1％,产AmpC酶44株,检出率为15.3％,同时产ESBLs和AmpC酶细菌16株,占5.6％;PCR结果显示,在135株多重耐药的粘质沙雷菌中,检出含CTX-M基因菌株91株、TEM基因25株、SHV基因19株、DHA基因48株、KPC基因10株、MOX基因3株、OXA基因1株、oprD2基因7株.结论 本地区粘质沙雷菌多重耐药现象较为严重,其耐药基因型主要为CTX-M型和DHA基因型.     

临床分离革兰阴性杆菌对头孢吡肟耐药分析

目的：调查我院1999--2003年间临床分离革兰阴性杆菌对头孢吡肟和4种β内酰胺类抗生素的耐药状况，为临床合理用药提供依据。方法：用MicroScan WalkAway-40全自动微生物鉴定和药敏系统对我院临床标本中分离的13721株革兰阴性杆菌进行鉴定和药敏试验。结果：肠杆菌科细菌和非发酵菌等主要临床分离革兰阴性杆菌对头孢吡肟总耐药率为32．4％，对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南的耐药率分别为31．9％、47．9％、48．5％和38，4％，对头孢吡肟的耐药率略高于头孢他啶，优于其余3种头孢菌素。结论：5年来我院临床分离革兰阴性杆菌除铜绿假单胞菌对头孢吡肟等耐药率无明显变化。头孢吡肟对临床分离的大部分革兰阴性杆菌具有良好的体外抗菌活性，尤其是对易产Bush—Ⅰ型头孢菌素酶的肠杆菌属菌株及柠檬酸杆菌属的抗菌活性远优于其他4种头孢菌素。     

革兰阴性菌超广谱β-内酰胺酶及耐药性的检测结果分析

[目的]调查产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌(E．coil)和肺炎克雷伯菌(K．Pneumoniae)的耐药性。[方法]对166株革兰阴性菌进行药物敏感性试验,同时,对其中的104株肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌进行超广谱β-内酰胺酶的检测。[结果]20．8％肺炎克雷伯菌和13．6％的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶,显示产超广谱β-内酰胺酶株组对头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢哌酮(CFP)及头孢唑啉(CEZ)、头孢三嗪(CET)、丁胺卡那(AMK)耐药率明显高于非产酶组,这些菌株对IMP的耐药率最低,产ESBLs的大肠埃希菌对环丙沙星(CIP)、庆大霉素(GM)和复方新诺明(SMZ)的耐药率高于肺炎克雷伯菌。[结论]产超广谱β-内酰胺酶对所测试多数抗菌素的耐药程度比不产酶株为高,但所有产酶株对IMP均敏感。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的 了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型和基因型分布情况.方法 对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应（PCR）扩增分析,选部分产物测序.结果 88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs（35.2%）菌株.产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%.PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型（90.3%）,其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型.结论 我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型和基因型分布情况。方法对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增分析,选部分产物测序。结果88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs(35.2%)菌株。产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%。PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型(90.3%),其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型。结论我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见。     

对肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的对临床分离肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶情况以及不同产酶模式进行耐药性分析。方法采用法国BioMerieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定仪对临床分离菌株进行鉴定及药敏检测。超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测，采用美国临床实验室标准化协会推荐的纸片表型确证试验。头孢菌素酶（AmpC）的检测，采用头孢西丁纸片琼脂法筛选，筛选阳性菌株再经改良三维试验确证为AmpC阳性菌株。结果137株肺炎克雷伯菌中ESBLs和AmpC的阳性率为37．2％和8．8％，其中ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌产AmpC的阳性率为58．3％。产ESBLs的菌株对头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟及安曲南的耐药率均为100％，此外，AmpC阳性菌株对头孢替坦的耐药率为41．7％。二者对亚胺培南及厄它培南耐药率最低，均为0％。结论β-内酰胺酶的产生是肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因，碳青霉烯类抗生素仍然是产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的有效抗生素。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌bla_(CTX-M)基因型及耐药性检测

目的运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对已经确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的临床分离株CTX-M型质粒进行基因分型,探讨其敏感性和特异性,建立一种快速检测CTX-M型ESBLs基因型的新方法。同时了解产CTX-M酶菌的耐药情况。方法利用逆转录聚合酶链反应(PCR)技术从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出CTX-M型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLC技术进行分析和测序确定其基因突变的类型,最后通过对比两者结果后确定其基因型;采用K-B法进行药敏试验。结果从34株临床分离株中扩增出35份CTX-M型质粒的编码序列(其中1株同时扩增到2份CTX-M型编码序列)。对比DHPLC和测序结果,洗脱峰型一致的样本均为同一基因亚型。产CTX-M酶菌对亚胺培南或美洛培南高度敏感,对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林高度耐药。结论 DHPLC准确性较高,具有简便快捷、经济等特点,可应用于CTX-M型ESBLs的基因型检测;产CTX-M酶菌耐药表型呈多样性,亚胺培南或美洛培南是临床治疗产CTX-M酶菌感染的首选药物。