用BSA免疫组化法检测慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群

用ＢＳＡ免疫组化法检测慢性乙型肝炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群郑茉莉，李灼亮（空军广州医院传染病科广州５１０６０２）本文用生物素－链霉亲和素（ＢＳＡ）法和碱性磷酸酶·抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）法，同时对比检测４０例慢性乙型肝炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群，现...     

慢性肝病患者外周血淋巴细胞亚群的变化

本文采用流式细胞仪对５１例慢性肝病患者外周血淋巴细胞亚群进行了测定。结果发现慢性活动性肝为（ＣＡＨ）、慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）和肝炎后肝硬化（ＨＣ）患者与正常对照相比，ＮＫ数量明显增加（Ｐ〈０．０１），Ｄ４＾＋和ＣＤ３＾＋数量均明显降低（Ｐ〈０．０１），ＣＡＨ的ＣＤ８＾＋数量明显增加（Ｐ〈０．０１），且ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值明显下降（Ｐ〈０．０１），ＨＣ的ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值下降（Ｐ〈０     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

急性丙型肝炎患者免疫状况的研究

用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及ＬＤＨ释法，对１６例急性输血后丙型肝炎（抗－ＨＣＶ、ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性）患者，分别进行外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的Ｔ细胞亚群计数、Ｔ４／Ｔ８比值、Ｔａｃ受体的检测及血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）ＮＫ细胞活性的测定。并与正常人组比较，经ｔ检验发现，急性丙型肝炎患者的Ｔ４亚群所占百分比、Ｔ４／Ｔ８比值及ＰＢＭＣＴａｃ受体表达均明显低于正常人组（Ｐ＜０．０５），而ＮＫ细胞活性、血清ｓＩＬ－２Ｒ明显高于正常人组（Ｐ＜０．０５）。患者的这些免疫状态改变，可能对其发病机理的研究有一定意义。     

重型病毒性肝炎中丁型肝炎病毒的检测

为了探讨丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染在重型病毒性肝炎中的作用，对北京佑安医院１９８０年至１９８９年收治的５４例急性和亚急性重型肝炎和３８例急性乙肝患者血清，应用国产ＨＤＶＥＬＩＳＡ试剂测定抗－ＨＤ、抗－ＨＤＩｇＭ和ＨＤＡｇ，应用斑点杂交技术测定ＨＤＶＲＮＡ。结果发现重型肝炎组ＨＯＶ－Ｍ检出率明显高于急性乙肝组（２７．８％比５．３％．Ｐ＜０．０５）。单独ＨＢＶ感染和ＨＤＶ／ＨＢＶ混合感染的重型肝炎患者均有较高的病死率。提示ＨＤＶ感染是重型肝炎中重要的病原学因素之一，ＨＤＶ与ＨＢＶ具有协同作用加重肝损害，导致肝衰竭。     

类风湿关节炎患者外周血及滑膜液Ⅹ型胶原反应性B细胞检测及其特异性分析

目的：探讨类风湿关节炎（ＲＡ）患者体内是否存在抗Ⅹ型胶原Ｂ细胞反应。方法：以ＥＬ４ＯＵｒＢＵｒ／ｒＩＬ２／ＰＭＡ作为刺激系统,通过酶联斑点技术检测抗Ⅹ型胶原免疫球蛋白分泌Ｂ细胞（ａｎｔｉＨＣⅩＩＳＣ）频率。结果：２８例ＲＡ患者滑膜中１１例出现ａｎｔｉＨＣⅩＩＳＣ,而对照组骨性关节炎（ＯＡ）患者滑膜液中则未检测到ａｎｔｉＨＣⅩＩＳＣ。ＲＡ患者外周血及滑膜液ＣＤ１９＋及ＣＤ２０＋细胞百分率于刺激前后无明显变化,但ＣＤ５＋Ｂ细胞百分率却明显增加,外周血刺激前后分别为１７．０±６．０,２７．０±９．０,滑膜液分别为８．０±３．２,１６．０±６．０。结论：（１）ＲＡ患者体内存在抗Ⅹ型胶原Ｂ细胞反应,（２）ＣＤ４＋ＥＬ４ＯＵｒＢＵｒ／ｒＩＬ２／ＰＭＡ是激活ＣＤ５＋自身抗体产生Ｂ细胞的有效方法。     

特异性iRNA对烧伤患者CD20~＋B细胞及增殖反应的影响

将２８名烧伤患者随机分成两组，对照组１３例进行常规治疗，治疗组１５例在常规治疗基础上应用特异性免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ），同时采用鼠抗人Ｂ细胞ＣＤ２０单克隆抗体（ＭｃＡｂ），借助ＡＰＡＡＰ桥联酶标技术，观察了两组烧伤患者外周血ＣＤ２０＋Ｂ细胞数量（百分比）及增殖反应的变化。结果发现：（１）烧伤后患者外周血ＣＤ２０＋Ｂ细胞数量百分比和ＣＤ２０＋Ｂ细胞对丝裂原刺激的增殖反应均明显低于正常组（Ｐ＜００１）；（２）治疗组经特异性ｉＲＮＡ治疗后ＣＤ２０＋Ｂ细胞数量比治疗前平均增加１１．５％，而对照组患者ＣＤ２０＋Ｂ细胞数量及增殖反应无明显变化，表明特异性ｉＲＮＡ可明显提高烧伤患者外周血ＣＤ２０＋Ｂ细胞数量，并可增强烧伤患者外周血ＣＤ２０＋Ｂ细胞对丝裂原刺激的增殖反应。     

HCV感染外周血单个核细胞及其对T淋巴细胞亚群的影响

目的：研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的情况及其对Ｔ淋巴细胞亚群的影响。方法：运用非同位素原位杂交（ＮＩＳＨ）法和链酶亲和素－生物素（ＳＡＢＣ）法分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ和非结构（Ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ,ＮＳ）蛋白ＮＳ５抗原,同时用ＳＡＢＣ法检测其Ｔ淋巴细胞亚群。结果：８例（４０．０％）患者的ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ呈构（Ｎｏｎｓｔｒｕ     

重型乙型肝炎患者β2—微球蛋白的检测及意义

对３１例重型乙肝炎患者用放射免疫分析法检测血清中β２－Ｍ含量，并用免疫组化ＡＢＣ法检测肝内β２－Ｍ、ＨＢＡｇ和Ｔ细胞亚群的表达与分布。结果发现重型肝炎血清中β２－Ｍ含量显著增高，且与病情轻重相关；肝内浸润细胞中ＣＤ＾８＋细胞占优势，提示肝内β２－Ｍ、ＨＢｓＡｇ表达及ＣＤ＾８＋细胞的浸润与细胞损伤有关。     

STUDY ON PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELL(PBMC) PROLIFERATIVE RESPONSES TO DIFFERENT HCV ANTIGENS IN PATIENTS WITH HEPATITIS C

为探讨丙型肝炎（ＨＣ）病人细胞免疫功能和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的致病机制及机体对其免疫保护作用,收集２４例ＨＣ病人（急性３例,慢性２１例）,用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对不同ＨＣＶ抗原增殖反应,并用流式细胞仪（ＦＡＣＳ）检测了ＰＢＭＣ中ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞亚群在ＨＣＶ抗原刺激后的变化。结果：ＨＣ病人ＰＢＭＣ对ＨＣＶ合成肽ＣＰ９,ＮＳ４和基因重组抗原Ｃ,Ｅ１,Ｅ２,ＮＳ３刺激后出现不同程度增殖反应,刺激指数（ＳＩ）分别为１．６９±０．５１,１．６１±０．５４,１．６８±０．５８,１．４９±０．４４,１．４４±０．４４和１．３３±０．３３。３例急性ＨＣ中２例病人的ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原呈有效增殖反应（ＳＩ≥２．１）,且血清ＨＣＶＲＮＡ阴转伴ＡＬＴ正常。细胞表型分析显示：增殖的细胞表型是ＣＤ４＋淋巴细胞,而ＣＤ８＋淋巴细胞增殖反应较弱。结论：ＨＣ病人ＰＢＭＣ确实存在对ＨＣＶ抗原的增殖反应;ＣＤ４＋淋巴细胞比ＣＤ８＋淋巴细胞增殖反应要强,急性ＨＣ病人ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原有效的增殖反应预示可能有良好的临床愈合     

戊型肝炎患者外周血T细胞亚群的改变及意义

戊型肝炎患者外周血Ｔ细胞亚群的改变及意义黄书明（江苏省南通市传染病院南通２２６００６）１９８９年Ｒｅｙｅｓ等［１］获得戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的基因克隆并建立了检测抗ＨＥＶ血清学方法，但对戊型肝炎肝细胞损伤的机制仍不十分清楚。本文通过对３１例戊型肝炎患...     

哮喘患者支气管肺泡灌洗液中细胞分类及其T细胞亚群的改变

目的和方法：采用间接免疫荧光法和支气管肺泡灌洗液（ｂｒｏｎｃｈｉａｌａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ＢＡＬＦ）技术观察１２例过敏性哮喘患者和２３例健康人外周血和ＢＡＬＦ中的Ｔ淋巴细胞亚群变化：结果：与健康对照组比较，过敏性哮喘患者外周血的Ｔ淋巴细胞亚群无明显改变，但其ＢＡＬＦ中的ＣＤ４＋细胞显著增高（５４．９７±４１４）％ｖｓ（７９．７１±９．６３）％，Ｐ＜００５；ＣＤ４＋与ＣＤ８＋细胞的比值也显著增高（１６４±０．３２ｖｓ２．３２±０．８３，Ｐ＜００５）。此外，过敏性哮喘患者ＢＡＬＦ中肥大细胞和嗜酸细胞百分比（００９±０．０４）％和（３６２±１．０６）％明显高于健康对照组（００２±０．０１）％和（０．３９±０．３０）％，Ｐ＜００５和Ｐ＜００１。结论：ＣＤ４＋细胞在哮喘的气道炎症中发挥重要作用。     

重型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因的变异研究

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）不是致细胞病变性病毒，重型肝炎的发生一般认为主要是机体对ＨＢＶ过强的免疫应答所致。ＨＢＶ的清除主要依赖ＣＫＤ８＋细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）对ＨＢｃＡｇ的免疫应答。我们对１１例重型肝炎患者中扩增的ＨＢＶＣ基因序列测序分析，试图阐...     

慢性肝炎和肝癌病人血清中乙型肝炎病毒DNA的检测

为了了解慢性肝炎和肝癌病人患者体内乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）复制与ＨＢＶ血清标志之间的关系，用酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）、聚合酶链反应（ＰＣＲ）及斑点杂交方法对６１例慢性肝炎和４７例肝癌患者的ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、相关ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）、表面抗体（抗－ＨＢｓ）、核心抗体（抗－ＨＢｃ）、相关ｅ抗体（抗－ＨＢｅ）进行了检测。结果表明：ＨＢＶＤＮＡ在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、／抗－ＨＢｃ阳性的慢性肝炎和肝癌患者血清中的检出率分别为９０．５０％和５０．００％；在ＨＢｓＡｇ／抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性者的检出率分别为４５．４０％和７．１４％；在ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阴性／抗－ＨＢｅ阴性者中的检出率分别为６０．００％和４０．００％；ＨＢｓＡｇ阴性、／抗－ＨＢｃ阳性或／抗－ＨＢｅ阳性或／抗－ＨＢｓ阳性者中的检出率分别为２０．００％和２２．２２％；在血清学指标全阴性时，慢性肝炎和肝癌患者血清中ＨＢＶＤＮＡ的检出率均为０。实验提示：无论是肝炎或肝癌，在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ同时阳性时，ＨＢＶ复制最为活跃；在单独ＨＢｓＡｇ阳性时，ＨＢＶ有一定程度的复制；ＨＢＶ复制在肝癌细胞中受到一定程度的抑制。     

e抗体阳性的慢性乙型肝炎病人携带乙肝病毒前C区变异的研究

某些抗－ＨＢｅ（＋）的慢性乙型肝炎病人血清仍可检出ＨＢＶＤＮＡ。本工作对９例这类病人的病毒基因组，在聚合酶链反应后直接进行序列分析，发现８例其前Ｃ区第８３位核苷酸发生Ｇ→Ａ（Ａ８３）点突变，使编码色氨酸（ＴＧＧ）的第２８个密码变异为终止密码（ＴＡＧ）。其中２例Ａ８３变异发生在ＨＢｅＡｇ→抗－ＨＢｅ血清转换过程中。分析１例肝内ＨＢＶＤＮＡ，亦与其血清有相同的Ａ８３变异。以３例抗－ＨＢｅ（＋）的慢性无症状携带者为对照，均无Ａ８３变异。本文６例为慢性活动性肝炎，３例为慢性重症肝炎。变异病毒逃避了免疫清除，可能与病变持续活动甚至重症化有关。     

类风湿性关节炎患者外周血淋巴细胞凝集素受体的表达及细胞免…

采用生物素标遍的７种植物凝集系和Ｔ细胞花环法，检测了类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血中淋巴细胞（ＰＢＬ）的凝集素受体的表达和细胞亚群的变化。结果显示这７种凝集系（ＣｏｎＡ，ＤＢＡ，ＢＰＡ，ＳＢＡ，ＰＮＡ，ＵＥＡ和ＷＧＡ）均与患者和正常对照组ＰＢＬ相结合，但ＷＧＡ和ＣｏｎＡ的受体结合率在ＲＡ组明显高于正常组（Ｐ〈０．０５）。ＲＡ患者ＰＢＬ中Ｔ８细胞亚群减少和Ｔ４／Ｔ８比率增十分明显，同时伴有淋巴细胞     

重型乙型肝炎患者β_2－微球蛋白的检测及意义

对３１例重型乙型肝炎患者用放射免疫分析法检测血清中β＿２－Ｍ含量，并用免疫组化ＡＢＣ法检测肝内β＿２－Ｍ、ＨＢＡｇ和Ｔ细胞亚群的表达与分布。结果发现重型肝炎血清中β＿２－Ｍ含量显著增高，且与病情轻重相关；肝内浸润细胞中ＣＤ８￣＋细胞占优势，提示肝内β＿２－Ｍ、ＨＢｓＡｇ表达及ＣＤ８￣＋细胞的浸润与细胞损伤有关。     

HIT^＋4细胞的分布及增殖特性的研究

观察了ＨＩＴ４＋细胞在正常人外周血ＣＤ４和ＣＤ８亚群中的分布及ＣＤ４＋ＨＩＴ４＋、ＣＤ４＋ＨＩＴ４－细胞的增殖特性。结果发现：１．ＨＩＴ４＋细胞在ＣＤ４和ＣＤ８亚群所占的百分率分别为３６．９±６．６％和１９．７±４．８％。２．ＣＤ４＋ＨＩＴ４＋细胞对ＣｏｎＡ、ＴＴ、ＰＰＤ和Ａｕｔｏ－Ｂ刺激的增殖反应明显低于ＣＤ４＋ＨＩＴ４－细胞，而后者与总ＣＤ４亚群的增殖反应水平接近。将ＨＩＴ４＋细胞和ＨＩＴ４－细胞的分布与增殖特性与已报道的Ｔ亚－亚群细胞比较，提示ＨＩＴ４可能为识别Ｔ亚－亚群的一个新标志。     

抗胸腺细胞球蛋白（ATG）对再生障碍性贫血患者淋巴细胞亚群的影响

利用ＡＰＡＡＰ桥联免疫酶标技术，对３６例接受ＡＴＧ治疗的再生障碍性贫血（ＡＡ）患者进行了淋巴细胞亚群检测，结果发现，ＡＡ患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ＾＋３ＣＤ＾＋４细胞治疗前后无明显变化，但ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋８比值，ＣＤ＾＋８细胞数目治疗前后却有显著性差异。ＡＡ患者外周血ＨＬＡ－ＤＲ＾＋细胞较正常明显增高，但ＡＴＧ治疗后却有所下降，本研究的结果表明，ＣＤ＾＋８，ＨＬＡＤＲ＾＋细胞增高及ＣＤ＾＋４     

类风湿性关节炎患者外周血淋巴细胞凝集素受体的表达及细胞免疫功能的测定

采用生物素标记的７种植物凝集素和Ｔ细胞花环法，检测了类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血中淋巴细胞（ＰＢＬ）的凝集素受体的表达和细胞亚群的变化。结果显示这７种凝集素（ＣｏｎＡ，ＤＢＡ，ＢＰＡ，ＳＢＡ，ＰＮＡ，ＵＥＡ和ＷＧＡ）均与患者和正常对照组的ＰＢＬ相结合，但ＷＧＡ和ＣｏｎＡ的受体结合率在ＲＡ组明显高于正常组（Ｐ＜０．０５）。ＲＡ患者ＰＢＬ中Ｔ８细胞亚群减少和Ｔ４／Ｔ８比率增高十分明显，同时伴有淋巴细胞转化功能的降低及其他血清学方面的改变。