非酒精性脂肪肝大鼠小肠黏膜上皮屏障及紧密连接蛋白表达的变化

目的：非酒精性脂肪性肝病（ NAFLD）与肠道屏障功能受损密切相关,本研究探讨非酒精性脂肪肝时肠上皮紧密连接蛋白Zonula Occluden-1（ZO-1）和Occludin的表达变化及其在肠黏膜屏障功能减退中的作用。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组（普通饮食）和高脂模型组,分别于造模的12周、16周检查肝指数（肝湿重/体重）、血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、血清胆固醇（ TC）、甘油三酯（ TG）、肝组织匀浆丙二醛（ MDA）和超氧化物歧化酶（ SOD）水平,光镜下观察末端回肠黏膜形态,透射电镜下观察小肠上皮细胞紧密连接超微结构,免疫组化方法检测小肠紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达。结果16周模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,肝指数[（6.3±0.18）％ vs．（5.8±0.12）％]、血清 ALT [（68.61±12.12） U/L vs．（25.10±9.06）U/L]、血 TG[（1.30±0.14）mmol/L vs．（0.72±0.06）mmol/L]和肝组织匀浆 MDA 水平[（6.02±0.92）μmol/g vs．（2.15±0.66）μmol/g]均显著高于对照组（P＜0.01）,肝组织匀浆SOD水平显著低于对照组[（5.12±1.88）U/g vs．（10.52±2.2）U/g,P＜0.01];模型组大鼠末端回肠黏膜形态和小肠上皮细胞紧密连接超微结构未见明显异常,但肠上皮细胞凋亡增加。与对照组比较,16周模型组大鼠小肠ZO-1及Occludin蛋白的表达皆显著下降（0.65±0.12 vs．1.08±0.08;0.62±0.08 vs．0.95±0.10, P ＜0.01）。结论非酒精性脂肪肝时肠黏膜上皮屏障功能减退可能与小肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达异常有关。     

梗阻性黄疸对大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1和肠黏膜通透性的影响

目的研究梗阻性黄疸对大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO－1和肠黏膜通透性的影响。方法30只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组、假手术组、梗阻性黄疸组（OJ组）。OJ组制成梗阻性黄疸动物模型,7d后各组同一时间点取材。检测门静脉血D-乳酸含量,免疫组化检测肠黏膜紧密连接蛋白ZO-I的分布。结果OJ组大鼠门静脉血D晋L酸水平显著高于正常对照组和假手术组（P〈0．05）,ZO-1染色变淡,分布不均匀,边缘粗糙,强阳性表达率下降。结论梗阻性黄疸时大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白ZO－1分布紊乱、表达下降,肠黏膜通透性增加,肠黏膜屏障受损。     

梗阻性黄疸时肠黏膜屏障的损伤及机制

肠黏膜屏障（intestinal barrier function,IBF）由化学屏障、机械屏障、生物屏障、免疫屏障构成,以保持机体内环境相对稳定,维持机体的正常生命活动。梗阻性黄疸（obstructive jaundice,OJ）会引起IBF的损伤,导致内毒素血症和细菌移位,甚至引起死亡。本文就OJ时IBF的损伤及其机制作一综述。     

益生菌对梗阻性黄疸患者肠黏膜屏障的影响

目的探讨益生菌治疗对梗阻性黄疸患者肠黏膜屏障的影响。方法选择梗阻性黄疸患者47例,随机分为治疗组(24例)和对照组(23例)。治疗组入院后即予以口服双歧三联活菌(培菲康)630mg/次,3次/d,连续服用7d;对照组仅常规治疗。两组患者均在入院时及入院后7d检测血清内毒素、尿乳果糖/甘露醇(L/M)值。结果入院7d后,两组患者内毒素及L/M均较入院时明显下降(P<0.01);治疗后血清内毒素两组间无明显差异,而L/M治疗组较对照组明显下降,具有统计学差异(P<0.05);两组患者并发症无统计学差异。结论口服益生菌可以改善梗阻性黄疸患者的肠黏膜屏障功能。     

紧密连接Occludin蛋白在缺血性脑卒中肠屏障改变中的作用

目的 研究缺血性脑卒中时是否存在肠黏膜屏障功能改变以及紧密连接蛋白Occludin在其中的可能机制.方法 杂种犬20只,随机分为实验组和对照组(即假手术组),每组10只.实验组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型.实验前及实验后12、24 h行血浆内毒素脂多糖(LPS)浓度检测;光镜下对肠黏膜病理形态进行观察;免疫组化法分析肠黏膜紧密连接Occludin蛋白的表达.结果 实验组动物均形成脑梗死.与对照组比较,实验组实验后12、24 h 血浆LPS浓度显著增高,紧密连接蛋白Occludin蛋白平均光密度显著降低(P均<0.01).相关和回归分析显示,Occludin蛋白平均光密度与实验后12、24 h 血浆LPS浓度均呈负相关(P均<0.05).光镜下观察,实验组存在小肠病理损伤,对照组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时肠道屏障功能有明确的损害.血浆LPS能反映缺血性脑卒中时的肠屏障损伤.缺血性脑卒中时肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达降低,从而导致紧密连接破坏,这是肠屏障功能障碍的重要分子机制之一.     

紧密连接Occludin蛋白在大鼠脑出血致肠屏障改变中表达的变化

目的:研究紧密连接Occludin蛋白在大鼠脑出血致肠屏障改变中表达的变化。方法:健康成年雄性Wistar大鼠36只,随机分为脑出血组和假手术组,每组18只。脑出血组建立急性脑出血模型。HE染色观察空肠病理形态,免疫组化法观察肠粘膜紧密连接Occludin蛋白的表达。结果:15只大鼠脑出血造模成功;脑出血组大鼠空肠出现明显病理改变,紧密连接Occludin蛋白平均光密度低于假手术组(P<0.05)。结论:急性脑出血时,空肠组织出现病理改变,紧密连接破坏,肠粘膜紧密连接Occludin蛋白表达下降。     

紧密连接蛋白occludin在三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎肠黏膜屏障中的作用研究

目的探讨紧密连接蛋白occludin在三硝基苯磺酸（trinitro-benzen-sulfonic acid,TNBS）诱导大鼠结肠炎肠黏膜屏障中的作用。方法建立大鼠结肠炎模型。SD大鼠18只,按随机数字表法分为TNBS诱导大鼠结肠炎模型组（n=10）和正常对照组（n=8）,进行疾病活动指数（DAI）和组织学损伤评分,用ELISA法测定结肠组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-10（IL-10）和血清内毒素,采用免疫组织学染色检测紧密连接（tight junction,TJ）相关蛋白occludin的分布。结果TNBS诱导大鼠结肠炎后,和正常组比较,TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白的表达亦减少,结肠组织TNF-α水平升高、IL-10水平降低和血清内毒素水平升高（P〈0.05）。结论TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞TJ相关蛋白occludin表达下降,肠黏膜上皮屏障的完整性被破坏,导致肠黏膜屏障功能低下,促发炎症反应。     

急性重症大鼠胰炎大鼠肠黏膜超微结构的改变

目的 探讨肠黏膜超微结构改变在急性重症胰腺炎时肠膜屏障功能障碍中的意义。方法 对急性重症胰腺炎（ASP）模型大鼠及假手术组大鼠（SO）于术后6、12h取回肠黏膜组织进行光镜及电镜（利用辣根过氧化酶作为黏膜通透性改变的示踪剂）。同时对血、肠系膜淋巴结（LMN）、肝、脾、肺组织进行了细菌培养及鉴定,测定门静脉血中内毒素水平。结果 ASP大鼠6及12h时相点肠黏膜组织结构基本正常;电镜观察制膜12h肠上皮细胞紧密连接间有高密度电子物质沉着,细胞紧密连接开放;假手术组肠黏膜上皮细胞紧密连接完整,细胞间隙无示踪剂沉着。12h时相点ASP组大鼠远隔部位细菌移位率较假手术组显著增加,培养出的细菌为大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、芳香杆菌、枯草杆菌及肺炎克雷伯杆菌,几乎均为肠源性细菌;12h时相点ASP组大鼠血浆内毒水平较SO组显著增加。结论 肠黏膜上皮细胞间紧密连接开放,通透性增加是ASP早期肠道细菌、内毒素移位,肠黏膜屏障功能障碍的形态学基础。     

黄芩苷对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜保护作用的研究

目的 探讨黄芩苷对梗阻性黄疸幼鼠肠黏膜损害的保护作用.方法 40只Wistar幼鼠随机分为假手术组、梗阻性黄疸组(OJ组)、梗阻性黄疸+黄芩苷处理2周组(OJ1组)和梗阻性黄疸+黄芩苷处理3周组(OJ2组),每组10只.假手术组仅游离胆总管,OJ、OJ1、OJ2组幼鼠于近肝门处游离并部分结扎胆总管.OJ1和OJ2组术后1 d开始给予黄芩苷(80 mg·kg-1·d-1)灌胃,其余组相同时间给予生理盐水1.5 ml灌胃.观察实验鼠回肠黏膜结构改变及分级;应用免疫组化技术检测肠黏膜金属基质蛋白酶-9(MMP-9)和核因子-κBp65(NF-κBp65)的表达及TUNEL法检测肠黏膜细胞凋亡,对所得数据进行统计学处理.结果 (1)假手术组、OJ1组和OJ2组较OJ组实验鼠回肠黏膜损伤轻,黏膜损伤分级为0.4±0.3、1.9±0.2、1.5±0.3 vs.3.2±0.5,差异有统计学意义(P<0.01).(2)MMP-9与NF-κBp65表达的平均光密度检测OJ组显著高于假手术组、OJ1组及OJ2组,差异有统计学意义(P<0.01).(3)细胞凋亡指数OJ组(27.6±2.1)明显高于OJ1组(15.1±1.6)、OJ2组(14.3±2.2)及假手术组(7.5±1.6),差异有统计学意义(P<0.01).结论 黄芩苷通过抑制NF-κB的激活,减少MMP-9的表达,减少细胞凋亡,减轻了黏膜损伤,对梗阻性黄疸导致的幼鼠肠黏膜损害起到保护作用.     

增味小承气汤对梗阻性黄疸大鼠腹部切口愈合的影响

目的研究增味小承气汤对梗阻性黄疸大鼠腹部切口愈合程度的影响。 方法将SD大鼠随机分为对照组、假手术组、梗阻性黄疸＋中药组和梗阻性黄疸组,每组10只,梗阻性黄疸＋中药组和梗阻性黄疸组大鼠建立梗阻性黄疸模型,建模前1 d至建模后第7天,梗阻性黄疸＋中药组大鼠每日以增味小承气汤灌胃2次,同时给予其他各组大鼠等量蒸馏水灌胃。模型建立后第3、5、7天自大鼠尾静脉取血,测定直接胆红素水平;术后第8天处死大鼠,留取标本,行皮肤切口抗张力实验、腹壁切口抗张力实验,皮肤切口行HE染色、Masson染色,免疫组化法检测α-平滑肌激动蛋白（SMA）。 结果与梗阻性黄疸组相比,梗阻性黄疸＋中药组大鼠精神状态好转,活动量有所增加;建立模型后第3、5、7天留取的血清检查发现,梗阻性黄疸＋中药组和梗阻性黄疸组血清直接胆红素水平较对照组、假手术组均程度明显升高,说明模型建立成功。与梗阻性黄疸组相比,梗阻性黄疸＋中药组大鼠皮肤切口所抗张力程度明显提高（F=127.4,P<0.05）,腹壁切口抗张力程度明显提高（F=101.9,P<0.05）;皮肤切口组织HE染色可见,与梗阻性黄疸组比较,梗阻性黄疸＋中药组大鼠切口愈合较好,Masson染色可见梗阻性黄疸＋中药组胶原纤维分布均匀紧密;各组皮下α-SMA表达量有差异,差异具有统计学意义（F=16.59,P<0.05）,与梗阻性黄疸组相比,梗阻性黄疸＋中药组皮下α-SMA表达量增加,差异具有统计学意义（t=5.245,P<0.05）。 结论增味小承气汤明显加快了梗阻性黄疸大鼠腹部切口纤维化的形成,增加了切口的抗张力程度,促进了腹部切口的愈合。     

重症急性胰腺炎大鼠HMGB1对肠上皮细胞occludin表达的影响

目的 观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠组织中高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)表达对肠黏膜上皮细胞紧密连接occludin蛋白表达的影响.方法 逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制作SAP模型.健康Wistar大鼠随机(随机数字法)分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理组.测定血淀粉酶(AMY)、内毒素(LPS)及D-乳酸水平;光镜下观察胰腺和肠组织的病理变化;免疫组织化学法观察occludin分布和表达的变化;RT-PCR法检测大鼠肠组织中HMGB1的表达水平;Western blot法检测大鼠肠组织中HMGB1及occludin蛋白的表达水平.采用SPSS 13.0统计分析软件进行处理,P＜ 0.05为差异具有统计学意义.结果 在建模后24 h,SAP组大鼠血浆LPS及D-乳酸水平明显高于对照组,提示肠屏障通透性明显增加;PDTC处理组大鼠血浆LPS及D-乳酸水平明显低于SAP组(P＜0.05).SAP组大鼠肠组织HMGB1表达水平较对照组明显升高,而occludin蛋白的表达较对照组下降;PDTC组大鼠肠组织HMGB1表达水平明显低于SAP组,occludin水平较SAP组升高(P＜0.05).结论 SAP时,大鼠肠组织内HMGB1表达升高,通过降低occludin蛋白表达,来增加肠黏膜屏障通透性;PDTC可抑制HMGB1表达,上调occludin蛋白表达,改善肠黏膜屏障通透性.     

超声引导下PTGD在低位恶性梗阻性黄疸疾病中的应用

目的讨论超声引导下经皮经肝穿刺胆囊置管引流术(PTGD)在低位恶性梗阻性黄疸疾病中的应用价值。方法对2006年3月—2007年3月在我院超声科所施行的8例PTGD术进行回顾性分析。结果8例PTGD术均获得成功。术中超声均能较清晰地显示穿刺针穿入胆囊床的位置、导丝进入胆囊的深度,导管在胆囊中的位置。并发症主要有:疼痛、发热、渗血、引流管阻塞等。结论在低位恶性梗阻性黄疸疾病的诊治中,超声引导下PTGD具有实时、准确,置管快捷、方便等优点,提高患者的生活质量,延长了患者的生存时间,同时为外科手术提供了必要的准备和条件,但也存在携带不便等缺点。     

Bile modulates intestinal epithelial barrier function via an extracellular signal related kinase 1/2 dependent mechanism

Objective Obstructive jaundice is frequently complicated by infections and has been associated with increased bacterial translocation and gut mucosal hyperpermeability in animal models. Proper expression of the tight junction (TJ) proteins ZO-1 and occludin is important for normal gut barrier function. We tested whether bile modulates intestinal epithelial ZO-1 and occludin expression.Animals (a) Male C57BL/6 mice; (b) male Sprague-Dawley rats.Interventions (a) Mice were subjected to common bile duct ligation (CBDL) or a sham procedure, and 96 h later all surviving animals were killed for measurement of ileal mucosal permeability to FITC-labeled dextran (everted gut sac technique), bacterial translocation to mesenteric lymph nodes, and ileal epithelial ZO-1 and occludin expression (western blots). (b) Rat IEC-6 enterocytic monolayers were incubated in the presence or absence of graded concentrations of rat bile and/or U0126, an inhibitor of extracellular signal related kinase (ERK) 1/2 activation.Results (a) Compared to sham-treated controls, CBDL significantly increased gut mucosal permeability and bacterial translocation and markedly decreased ileal epithelial expression of ZO-1 and occludin. In a follow-up in vivo experiment, gavaging mice with fresh rat bile twice daily significantly ameliorated the deleterious effects of CBDL on gut barrier function. (b) Addition of 1% (v/v) bile to media enhanced phosphorylation of ERK1/2, increased the expression of ZO-1 and occludin and decreased permeability to FITC-dextran. All of these bile-mediated effects were blocked by 10 µM U0126.Conclusions These data support the view that the presence of bile in the intestinal lumen is essential for normal gut barrier function, possibly because compounds present in bile initiate ERK1/2-dependent signaling that is essential for normal expression of key TJ proteins.This revised version was published online in April 2005 with a corrected section title.Grant support: 5R01 GM 37631-18 from the National Institutes of Health     

梗阻性黄疸胆道支架置入术后合并胆汁胸膜瘘1例

患者,女,67岁，因呼吸困难两个月、皮肤黄染一周于2007年12月3日入院。患者曾于2006年11月因胆囊癌行胆囊切除术。2007年4月，周身皮肤出现黄染，伴有腹胀、乏力、食欲减退等症状,行CT检查示胆道梗阻，梗阻部位在胆总管中上段，无法行外科手术治疗．遂行经皮肝穿刺胆道支架置入术，于胆总管内置入10mm&#215;40mm国产胆道支架一枚。术后3天患者不适症状明显缓解后出院。     

阻塞性黄疸抗体、补体及IL-18水平检测的意义

目的:探讨阻塞性黄疸血清白介素-18的变化及其临床意义。方法:将37例阻塞性黄疸患者及16例总胆红素正常病人分别分组。(1)按良恶性分为:良性阻塞性黄疸组25例、恶性阻塞性黄疸组12例、对照组16例。(2)按总胆红素高低分为:低胆红素组21例(总胆红素≤85.5mmol/L),高胆红素组16例(总胆红素>85.5mmol/L),对照组16例。分别抽血测定:总胆红素、白蛋白、球蛋白、IgG、IgA、IgM,补体CH50、C3、C4、白介素-18等。结果:良性阻塞性黄疸组、恶性阻塞性黄疸组、低胆红素组、高胆红素组的白介素-18、IgA较对照组升高,IgG、补体CH50、C3较对照组降低。白介素-18与IgG、CH50、C3呈负相关。结论:阻塞性黄疸病人白介素-18水平升高具有重要意义,可能对机体的免疫功能产生一定影响。     

64层螺旋CT灌注成像评价梗阻性黄疸肝血流动力学变化

目的 采用64层螺旋CT灌注成像研究梗阻性黄疸肝脏血流动力学的变化.方法 对21例梗阻性黄疸患者和18名正常志愿者行64层螺旋CT肝脏灌注扫描,应用灌注软件获得肝脏灌注参数:肝动脉灌注量(ALP)、门脉灌注量(PVP)、肝脏灌注指数(HPI)、血流量(BF)、血容量(BV)和渗透性(P),并进行统计学分析.结果 梗阻性黄疸组的ALP、HPI较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),并随黄疸程度的加重呈逐渐升高的趋势;中重度黄疸组的ALP与轻度黄疸组比较差异有统计学意义;梗阻性黄疸组的BV和P较对照组降低,其中中重度黄疸组的BV值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),轻度黄疸和中重度黄疸组P值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);PVP与BF组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 64层螺旋CT肝脏灌注成像能够反映梗阻性黄疸的肝脏血流灌注改变,对临床的早期诊断和治疗有重要价值.