骨组织脱钙技术及在免疫组化染色中的应用

与一般的软组织不同 ,骨组织石蜡切片在脱水、透明等制片前需要使用脱钙剂除去骨组织中的钙盐才能制备成 4～ 5 μm厚的切片。为了更好地了解脱钙技术对骨组织免疫组织化学染色质量的影响 ,本文根据骨组织及其免疫组织化学染色的特点 ,结合文献对影响骨组织免疫组织化学染色质量的组织的固定、常用的脱钙方法及脱钙液、低温 微波快速脱钙技术及注意事项等方面进展进行了综合分析。     

超声波骨组织电镜样品脱钙处理的实验研究

目的 探讨超声辐照能否加快骨组织电镜样品的脱钙过程。方法 固定后的样品浸入含134mol／L和NaOH 70mmol／L的脱钙液中，经21kHz的超声波辐照，每天20min共7d。未经超声波处理的样品在脱钙液中浸泡20d作为对照。在透射电镜下观察两组骨组织的超微结构。结果 经超声辐照的样品在骨基质中没有无机盐结晶残留，且超微结构保存良好，与对照组无差异。结论 超声辐照可使脱钙处理的时间大大缩短，仅为对照组的三分之一。     

骨组织脱钙技术及其应用

<正>骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的。无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、     

应用微波辐射脱钙技术改善骨组织免疫组化染色效果

应用微波辐射EDTA脱钙技术，革新传统的强酸脱钙法，缩短了脱钙时间，达到了完全保存骨组织形态结构及抗原物质的传统方法难以达到目的，增哟了免疫组化染色效果。     

酸类混合脱钙技术在骨组织病理制片中的应用

骨由于含有无机钙盐而成为一种极坚硬的结缔组织，在组织制片时非常困难，只有除去钙质，使骨组织变软，才能顺利制片。我们建立了一种酸类混合脱钙技术，应用于骨组织病理制片中，取得较好的效果。 1 材料与方法 1.1 材料 长骨组织，扁骨组织，骨髓活检组织。长骨和扁骨组织脱钙前锯成薄片，厚度2～5 mm。 1.2 试剂 盐酸、甲酸、冰醋酸、甲醛、氯化钠、磷酸……     

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。方法选择12例骨组织,随机分为3组。A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色。结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。     

骨组织快速脱钙法

在外检、教学、科研工作中,对骨组织进行镜下观察,必须脱去钙盐,才能制成切片进行镜检。一般使用的脱钙剂为强酸(如硝酸、盐酸)、有机酸(如甲酸、三氯醋酸等)或为混合液。但是不管使用何种脱钙剂,都必须保证彻底脱钙,如有钙盐残留,会影响切片的完整和损伤切片刀刃。一般骨组织脱钙法需时间较长,酸液致细胞核结构破坏,因而影响病理诊断,所以改进常规脱钙方法,缩短骨组织     

光波-微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的应用

目的探讨光波．微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的作用。方法用8％硝酸分别在单纯微波、单纯光波、光波,微波组合Ⅰ和光波-微波组合Ⅱ的条件下脱钙，同时以室温脱钙作为对照；应用光波-微波-LSAB免疫组织化学染色技术检测不同脱钙条件下ANP、CD31、CD34、5-HT、S-100、NF、GFAP和Vimentin的表达。结果8％硝酸室温脱钙时间最长，光波．微波组合脱钙时间最短；微波组、光波组、光波．微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显比对照组好；光波．微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显优于单纯微波、单纯光波法；光波-微波组合Ⅱ-LSAB免疫组织化学染色技术比常规免疫组织化学染色所用时间短、染色效果好。结论光波．微波辐射脱钙及免疫组化染色所用的时间明显缩短，染色效果好。     

骨组织标本脱钙法的改进

骨组织是一种坚硬的结缔组织，骨基质中有机成分和无机盐紧密结合，使骨组织十分坚硬。因此，在制作骨组织切片时，必须经过脱除钙盐的过程，就是通常说的“脱钙”。传统的脱钙方法常常使用硝酸、盐酸等强酸溶液，尽管脱钙效果好，但能引起组织结构的严重破坏，     

EDTA-2Na脱钙液在骨组织标本超薄切片技术中的改进

由于骨组织坚硬,很难切割,固定液渗入缓慢,按常规方法制备的骨组织电镜标本不够理想。我们在实验中改进了脱钙液的比例,获得了良好效果,现将方法报告如下。1脱钙液的配制EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠,分析纯,天津市北方天医化学试剂厂)和NaOH按1:1的比例配制,加蒸馏水至1000 m l,pH约为7.4(增加了原有的脱钙比例)。渗透压为330~340 mOsm/L,内含3%戊二醛,是等渗缓冲液。中性脱钙液基本上维持了样品的正常生理环境,可以减少各种损伤。脱钙时间可根据钙化程度做适当修正。2标本制作初固定和浸洗:取新鲜大鼠的胫骨组织,大小1 mm×1 mm×1 mm,…     

骨组织脱钙方法的改良

骨组织必须经过脱钙才能制作切片。选择适当的脱钙液、脱钙方法以及脱钙时间与骨组织的制片质量有密切关系。我们运用超声波技术及两种传统的脱钙方法对不同的骨性组织分组进行脱钙制片,并进行比较,发现该方法在不破坏组织结构及影响染色的同时,缩短了诊断时间,保证了切片质量。现将方法介绍如下。     

脱钙液加微波技术在骨组织脱钙中的应用

骨和含钙组织脱钙法是影响临床病理检查时间和效果的一个较为重要的环节。以前种种脱钙技术时间均较长，组织细胞结构很难保持完整清晰，从而影响病理学的诊断和研究，也难以保证在规定的时间发出报告，直接影响了患者的治疗。随着微波技术在病理检验中的普遍应用，我们在工作中尝试使用微波技术对骨和含钙组织进行脱钙处理。为此，我们做了这方面的实验。     

骨组织石蜡包埋后脱钙不理想快速补充脱钙法

在工作中常会碰到有的骨组织脱钙至包埋后 ,在修蜡块时 ,发现有的骨组织部分脱钙不理想 ,无法将蜡块的组织面修平 ,而且会损坏切片刀。因此必须再次进行脱钙。1　材料与方法1 1　材料　脱钙液氯化钠 10ｇ溶于 10 0ｍｌ蒸馏水中 ,再加甲酸 ( 95 % ) 10ｍｌ和盐酸 ( 3 7% ) 10ｍｌ混合均匀。1 2　方法　我们把脱钙不理想或组织中有钙化的块组织暴露出来 ,将组织面朝下浸放在脱钙液中 ,脱钙时间一般 3小时 ,针刺无阻挡时说明脱钙已彻底。取出水洗后即可切出完整的切片 ,对染色没有影响。染色时 ,在脱蜡后入饱和碳酸锂水溶液 2分钟 ,再染苏木素 …     

骨组织脱钙后进行原位杂交检测的经验

原位杂交技术作为核酸分子杂交的一种方法，具有较高的敏感性、特异性和定位特点。近年来已被广泛采用，它可从分子水平探讨细胞功能的表达及其调控机制，已成为细胞生物学研究的重要手段。但如何有效地制备可用于原位杂交的脱钙骨切片，以获得满意的结果并非易事。我们将近年来摸索、实践获得的点滴经验做一介绍。     

EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色

目的：改进传统骨组织的脱钙方法，改善免疫组化效果。方法：采用20％EDTA微波脱钙法对兔骨组织进行脱钙。结果：EDTA微波脱钙法能够更好的保持骨组织结构和组织中的抗原物质，得到更好的免疫组化切片。结论：EDTA微波脱钙法优于传统脱钙法，更适合于骨组织脱钙和免疫组化制片。     

骨组织脱钙后除酸方法的改进

骨、牙齿及其他钙化的组织 ,在制作切片前必须先经有机酸 (蚁酸、醋酸、甲酸 )及无机酸 (硝酸、盐酸、硫酸 )稀溶液浸渍脱钙后 ,还需经 2 4h流水冲洗除酸后才能常规脱水、浸蜡、切片、HE染色[1] 。此种方法除酸时间较长 ,而且染色效果并不十分理想。笔者经过大量的反复实践 ,探索出一种有效、方便、易掌握的快速除酸方法 ,染色效果比较满意 ,现报道如下。1　方法与结果　　将骨及钙化组织锯成 1.2cm× 1.2cm× 0 .3cm薄片 ,10 %甲醛固定 ,10 %硝酸脱钙 ,水洗 1min ;置入 2 %氢氧化钠液浸 10min ,流水冲洗 10min除酸 ;梯度乙醇脱水后再进行…     

骨组织制片中改良脱钙液与传统脱钙液的比较

目的探讨改良脱钙液与传统脱钙液脱钙能力的差异和对HE染色的影响。方法选取36例手术切除的新鲜骨标本,分别使用改良的脱钙液和传统的脱钙液脱钙,比较脱钙效果和HE染色效果。结果改良脱钙液组脱钙时间短于传统脱钙液组(P<0.01);改良脱钙液组切片质量良好率高于传统脱钙液组(P<0.05);改良脱钙液组染色效果良好率高于传统脱钙液组(P<0.01)。结论改良脱钙液脱钙彻底,组织清晰结构完整性更好。     

甲酸脱钙法在骨标本制片中的应用

骨标本必须脱钙后方可制片 ,过去常规用硝酸脱钙 ,使组织酸性过强 ,胞核不易着色 ,制片效果不佳 ,严重影响观察。我们对骨组织标本用甲酸进行脱钙 ,取得了很好的效果。1　材料与方法1.1　材料　选择 1999年 6月— 2 0 0 0年 12月骨组织标本 4 0例 ,组织块最大 6 cm× 5 cm× 4 .5 cm,最小如粟粒大。1.2　脱钙方法　 (1) 4 0 %的甲酸水溶液即为脱钙液 ,须放入密闭玻璃容器中。脱钙液临时配制即可。 (2 )将骨组织锯成 0 .3— 0 .4 cm厚的薄片 ,放入脱钙液中。(3)对于硬骨组织 ,2 4小时须更换脱钙液。 (4 )骨组织能用手术刀划开即脱钙成功 ,一…