应用Fluoro-Jade C评价小鼠匹罗卡品模型中岛皮质神经变性

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测岛皮质结构中神经元的变性情况,以了解岛皮质结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理变化和癫痫反复发作的神经基础。方法雄性昆明小鼠6只随机分为对照组3只和匹罗卡品处理组3只。对照组给予阿托品、生理盐水腹腔注射;匹罗卡品处理组给予阿托品、匹罗卡品腹腔注射。在癫痫持续状态后3 d通过经心灌注固定处死匹罗卡品处理组小鼠。对照组小鼠处死时间及方法同匹罗卡品处理组。在岛皮质水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在岛皮质中的分布情况。结果匹罗卡品处理组FJC染色的脑切片上可清楚看到岛皮质出现亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。而对照组未见此显示。结论 FJC染色技术在小鼠匹罗卡品癫痫模型中显示岛皮质发生了神经元变性,有利于更好地理解颞叶癫痫中所发生的病理变化和癫痫反复发作的发生机制。     

Fluoro-Jade C揭示小鼠匹罗卡品模型中杏仁核神经变性

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测杏仁核结构中神经元的变性情况,以了解杏仁核结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理变化和癫痫反复发作的神经基础。方法雄性昆明小鼠6只(对照组3只,匹罗卡品处理组3只)。在癫痫持续状态后12 h处死处理组小鼠。在杏仁核水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在杏仁核中的整体分布情况。结果在处理组,FJC染色的脑切片上可以很清楚地看到呈亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。杏仁核出现大量FJC阳性细胞,而对照组未见。结论该研究在小鼠匹罗卡品癫痫模型中运用FJC染色技术显示杏仁核中发生了大量神经元变性,有利于更好地理解颞叶癫痫中中枢神经系统所发生的病理变化和自发反复发作的癫痫机制。     

锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型的建立及苔藓纤维出芽的动态变化

目的 研究锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型大鼠致癇后NFDA2性发作的行为学特点及海马结构病理改变的动态变化.方法 将所有Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,实验组大鼠腹腔依次注射氯化锂、匹罗卡品诱发癫癇持续状态(SE)后,观察其自发性癫癇发作(SRS),分别于SE后1周至10周5个不同时间点取材,Nissl染色和Timm染色分别观察海马神经元损伤及苔藓纤维出芽 (MFS)的变化.结果 注射匹罗卡品后84%的大鼠可诱发出SE,经过10～20 d的缄默期后,可观察到Ⅰ～Ⅲ级的反复SRS,病理学检查可见海马神经元的损伤及齿状回内分子层MFS.结论 锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型与人类颞叶癫癇有类似发作特点及病理改变,是一种理想的颞叶癫癇动物模型.     

应用Fluoro-Jade C评价小鼠匹罗卡品模型中纹状体神经变性

目的：应用Fluoro-Jade C（FJC）染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测纹状体结构中神经元的变性情况,以了解纹状体结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理神经基础。方法：雄性昆明小鼠10只（对照组5只,模型组5只）。在癫痫持续状态后3 d处死模型组小鼠。在纹状体水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在纹状体（尾状壳核）中的整体分布情况。结果：在模型组,FJC染色的脑切片上清楚显示FJC阳性变性细胞呈亮黄绿色,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。在纹状体（尾状壳核）内背侧1/3和尾侧部分出现许多FJC阳性细胞。结论：本研究运用FJC染色技术在小鼠匹罗卡品癫痫模型中显示纹状体中发生了神经元变性,提示纹状体可能在慢性颞叶癫痫的发生机制中起重要作用。     

RP-HPLC法测定眼房水中三种不同剂型匹罗卡品含量

目的:建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定眼房水中匹罗卡品含量的方法.方法:RP-HPLC法采用ODS-C18柱,流动相:0.5%三乙胺的KH2PO4(10 mmol/L)缓冲液(pH 2.5)-乙腈(98/2,v/v),流速:1.0 ml/min,检测波长:215 nm.90只兔均分为3组,分别于每只兔眼滴入不同剂型滴眼剂50 μl,分别测定给药后5、10、30、40、60、90、120、180、240及360 min时眼房水中匹罗卡品滞留量,用二氯甲烷提取房水中药物.结果:RP-HPLC法适用于眼房水中匹罗卡品的含量测定,匹罗卡品质量浓度在0.1～20 μg/ml范围内线性良好(r=0.9998),平均提取回收率为68.1%±2.7%(n=9),日内精密度为2.87%,日间精密度为4.33%.3种不同剂型匹罗卡品50 μl滴眼后,药-时曲线下面积以1%脂质体为最高,且维持时间最长.结论:本方法易行,重现性好,线性范围广.将匹罗卡品滴眼液的剂型改为脂质体可以明显提高匹罗卡品的生物利用度,具有较好的应用前景.     

氯化锂联合匹罗卡品小剂量多次注射诱发癫痫持续状态模型的研究

目的 研究减少匹罗卡品癫痫持续状态模型病死率的方法 .方法 建立3种匹罗卡品癫痫持续状态模型：大剂量匹罗卡品注射、氯化锂联合匹罗卡品单次注射、氯化锂联合匹罗卡品小剂量多次注射,比较3种方法 癫痫状态发生率、病死率及自发发作率的差异.结果 3种方法 癫痫状态发生率分别为70.0%、76.7%、80.0%,差异无统计学意义;癫痫自发发作率分别为77.8%、83.3%、85.7%,差异无统计学意义;病死率分别为57.1%、47.8%、12.5%,氯化锂-小剂量多次匹罗卡品组明显降低.结论 氯化锂联合匹罗卡品小剂量多次反复注射,癫痫病死率明显降低,慢性期癫痫自发发作率高,是一种理想的癫痫持续状态模型.     

3种癫痫模型的制备及应用分析

目的:探讨不同癫痫模型的制备及其在癫痫研究方面的应用.方法:选择成年雄性SD大鼠60只随机分为杏仁核慢点燃组、杏仁核快点燃组、注射匹罗卡品组,每组20只动物,观察各组大鼠的点燃率,模型大鼠癫痫发作级别及癫痫行为Racinel评分,同时观察模型大鼠癫痫发作时的脑电图.结果:成功获得各组癫痫模型动物,各组Racinel评分差异有统计学意义(P＜0.05),其中慢点燃组动物持续时间较长,快点燃组出现典型癫痫行为较早,匹罗卡品组动物存活时间长.结论:与杏仁核电点燃模型相比,匹罗卡品点燃癫痫动物成功率高,癫痫行为保持时间较久,能更好的为临床所应用,但匹罗卡品所致癫痫大鼠痫性发作持续时间变异较大,这可能为临床筛药带来了一定的不便.     

锂-匹罗卡品颞叶癫模型的建立及苔藓纤维出芽的动态变化

目的研究锂-匹罗卡品颞叶癫模型大鼠致后性发作的行为学特点及海马结构病理改变的动态变化。方法将所有Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,实验组大鼠腹腔依次注射氯化锂、匹罗卡品诱发癫持续状态（SE）后,观察其自发性癫发作（SRS）,分别于SE后1周至10周5个不同时间点取材,Nissl染色和Timm染色分别观察海马神经元损伤及苔藓纤维出芽（MFS）的变化。结果注射匹罗卡品后84%的大鼠可诱发出SE,经过10～20d的缄默期后,可观察到Ⅰ～Ⅲ级的反复SRS,病理学检查可见海马神经元的损伤及齿状回内分子层MFS。结论锂-匹罗卡品颞叶癫模型与人类颞叶癫有类似发作特点及病理改变,是一种理想的颞叶癫动物模型。     

匹罗卡品诱导颞叶癫大鼠海马CA1区代谢型谷氨酸受体1、4、7的表达变化

目的 观察匹罗卡品诱导的颞叶癫(癎)大鼠海马CA1区代谢型谷氨酸受体(mGluR)1、4、7的表达变化.方法 56只SD大鼠随机分为对照组、癫(癎)状态(SE)2 h组、SE 12 h组、SE 24 h组、SE 72 h组、SE 7 d组和SE 14 d组,每组8只.SE各组腹腔注射325 mg/kg匹罗卡品建立癫(癎)模型,对照组注射等量生理盐水.采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测各组大鼠海马CA1 区mGluR1、4、7 mRNA和mGluR1蛋白的表达.结果 RT-PCR检测显示,SE 24 h组mGluR1 mRNA表达较对照组显著降低,而SE 7 d组则显著增加(P<0.05);SE各组mGluR4 mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05);SE 12 h组、SE 24 h组、SE 72 h组和sE 14 d组mGluR7 mRNA表达较对照组显著降低(P<0.05).免疫组织化学检测显示,mGluRl蛋白主要存在于细胞膜上,其表达变化规律与mGluR1 mRNA一致.结论 mGluR1、4、7可能参与难治性癫(癎)的发病过程.     

普瑞巴林对颞叶癫痫大鼠睡眠结构的影响

目的:研究抗癫痫发作药物普瑞巴林单药治疗对匹罗卡品诱发的大鼠颞叶癫痫睡眠结构的影响。方法:12只成年SD大鼠(雄雌各半)腹腔注射匹罗卡品建立慢性颞叶癫痫模型后,按照性别匹配原则分为模型组和普瑞巴林组,每组6只,雄雌各半。另取6只SD大鼠(雄雌各半)作为对照组。给大鼠安置颅骨电极,休息1周后开始视频与神经电生理监测。普瑞...     

细胞周期相关因子P15在痴呆鼠脑不同部位表达及针刺的影响

目的 了解细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P15)在老年性痴呆(AD)模型快速老化模型小白鼠(SAMP8)不同脑区中的表达规律及针刺对其表达的影响.方法 15只10月龄快速老化模型小白鼠,随机分为正常组、模型组、针灸组,每组5只.用免疫组化法和病理图像分析技术测定P15在SAMP8皮层、海马、纹状体、嗅球等脑区中的阳性细胞数.结果 P15在正常组和SAMP8组中4个脑区的表达趋势一致,在嗅球区的表达明显高于其他3个脑区;P15在SAMP8的海马区表达增高、在嗅球及纹状体区表达低于正常组,差异有统计学意义.针刺能够下调SAMP8皮质、海马区的表达,且有统计学意义.结论 海马区细胞凋亡、嗅球和纹状体区细胞增殖可能是AD重要的病理改变,针刺可减少皮质、海马区的神经细胞凋亡,为针刺治疗AD的分子机制提供了新的内容.     

Reduction of Glucose Metabolism in Olfactory Bulb is an Earlier Alzheimer's Disease-related Biomarker in 5XFAD Mice

Background:

Early diagnosis assumes a vital role in an effective treatment of Alzheimer''s disease (AD). Most of the current studies can only make an AD diagnosis after the manifestation of typical clinical symptoms. The present study aimed to investigate typical and other biomarkers of AD to find a possible early biomarker.

Methods:

A total of 14 5XFAD mice (at 3 and 6 months old), with 14 age-matched wild-type (WT) mice as control, were enrolled in this case-control study. Morris water maze test was performed to evaluate the cognitive function; buried food pellet test and olfactory maze test were employed to investigate the olfactory function; immunofluorescence to detect amyloid deposition and positron emission tomography to examine 2-deoxy-2-(¹⁸ F) fluoro-D-glucose ([¹⁸ F]-FDG) uptake in the hippocampus and cerebral cortex.

Results:

With the increasing age, cognitive performance (P = 0.0262) and olfactory function were significantly deteriorated (day 1 P = 0.0012, day 2 P = 0.0031, day 3 P = 0.0160, respectively) and the (¹⁸ F)-FDG uptake was markedly decreased in multi-cerebral regions including the olfactory bulb (P < 0.0001), hippocampus (P = 0.0121), and cerebral cortex (P < 0.0001). Of note, in 3-month-old 5XFAD mice, a significant decline of (¹⁸ F)-FDG uptake in the olfactory bulb was found when compared with that of age-matched WT mice (P = 0.023) while no significant difference was present when the uptakes in other cerebral regions were compared.

Conclusions:

The decline of (¹⁸ F)-FDG uptake in the olfactory bulb occurs earlier than other incidents, serving as an earlier in vivo biological marker of AD in 5XFAD mice and making early diagnosis of AD possibly.     

Effects of rhidosin on expression of fibroblast growth factor on olfactory bulb in rats and its relation with senile hyposmia

ＯｌｆａｃｔｉｏｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｈｕｍａｎｂｏｄｙａｎｄｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｄａｉｌｙｌｉｆｅＭａｎｙｐｅｏｐｌｅａｒｅｄｉｓｔｕｒｂｅｄｂｙｈｙｐｏｓｍｉａ,ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｃａｕｓｅｄｂｙｖａｒｉｅｄｆａｃｔｏｒｓＡｍｏｎｇｔｈｅｓｅｆａｃｔｏｒｓａｇｉｎｇｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅＷｉｔｈａｇｉｎｇ,ｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｓｄｅｃｒｅａｓｅｓａｎｄｔ…     

损毁嗅球对痴呆大鼠学习记忆功能影响作用的实验研究

目的:研究损毁嗅球对AD模型大鼠学习记忆功能的影响程度。方法:制作AD及损毁嗅球大鼠模型,Morris水迷宫测试大鼠水迷宫学习记忆能力。结果:AD模型组及AD造模后嗅球损毁组大鼠2、4、8周的平均逃避潜伏期和跨越原平台位置的次数与正常对照组比较有极显著性差异(P<0.01);AD造模后嗅球损毁组大鼠2、4、8周与AD模型组比较无显著性差异(P>0.05);嗅球损毁模型组大鼠2、4、8周与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:单纯损毁嗅球能够降低正常大鼠的学习记忆功能,但尚不能达到痴呆程度;大鼠AD造模后损毁嗅球与单纯造AD模型比较,其学习记忆功能无显著性差异。     

INTRANASAL DELIVERY OF NERVE GROWTH FACTOR TO PROTECT THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM AGAINST ACUTE CEREBRAL INFARCTION

Objective To confirmed reliability and feasibility of intranasal nerve growth factor (NGF) bypassing the blood-brain barrier and its potential neuroprotective effects on acute cerebral ischemia. Methods (1) To assay NGF concentrations in different brain regions after middle cerebral artery occlusion (MCAO).Rats were randomly divided into intranasal (IN) NGF, intravenous (IV) NGF, and untreated group (n = 4). The concentrations of NGF of different brain regions in the three groups after MCAO were measured by ELISA. (2) To observe neuroprotective action of NGF on focal cerebral ischemic damage. Rats were randomly assigned to 4 groups: IN vehicle, 1N NGF,1V vehicle, 1V NGF (n = 8). Treatment was initiated 30 minutes after onset of MCAO and given again 24 hours later. Three neurologic behavioral tests were performed 24 and 48 hours following onset of MCAO. Corrected infarct volumes were determined 48 hours after onset of MCAO. Results The olfactory bulb in IN NGF group obtained the highest concentration (3252 pg/g) of NGF among all regions, followed by the hippocampus. The NGF concentrations in the olfactory bulb and hippocampus in IN NGF group were markedly higher than that in 1V NGF and control groups. The infarct volume in IN NGF group was markedly reduced by 38.8% compared with IN vehicle group. IN NGF group vestibulum function markedly improved compared with IN vehicle group at 24 and 48 hours after onset of MCAO (P24h = 0.02 and P48h = 0.04, respectively), Conolmion Intranasal NGF could pass through the blood-brain barrier, reach the central nervous system, reduce infarct volume, and improve neurologic function in rats following MCAO. Intranasal delivery of NGF may be a promising treatment for stroke.     

电针迎香穴对嗅觉功能障碍大鼠胰岛素样生长因子-1的影响

目的 探讨电针迎香穴对嗅觉功能障碍大鼠胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)的影响.方法 将50只SD大鼠随机分为5组,分别是正常组、嗅觉功能障碍组、嗅觉功能障碍+眶下神经切断组、嗅觉功能障碍+电针组、嗅觉功能障碍+眶下神经切断+电针组,电针干预迎香穴后,运用嗅觉迷宫实验和对大鼠嗅球组织及血液中IGF-1进行ELISA、免疫组织化学等方法进行分析研究.结果 嗅觉功能障碍+电针组大鼠与正常组相比,其嗅觉功能明显改善(P<0.01),其嗅球组织及血液中IGF-1表达明显升高(P<0.05),而嗅觉功能障碍+眶下神经切断+电针组大鼠与正常组相比,其嗅觉功能和嗅球组织及血液中IGF-1表达无明显改善(P>0.05).结论 电针迎香穴对嗅觉功能障碍模型大鼠具有显著干预效应,其作用机制可能是通过三叉神经通路,促进大鼠体内IGF-1的产生,从而有利于嗅觉系统嗅感神经元(ORN)再生,改善嗅觉功能障碍.     

经鼻腔给予神经生长因子治疗急性脑梗死的实验研究

目的 :探讨经鼻腔 (IN)给予神经生长因子 (NGF)避开血 脑屏障 (BBB)进入中枢的可行性 ,证实进入各脑区的NGF对急性脑梗死是否具有神经保护效应。　方法 :SD大鼠采取线栓法制作大脑中动脉闭塞模型 (MCAO) ,在随机双盲状态下分组予以不同处理。利用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定经鼻腔和静脉注射NGF后各脑区的NGF浓度 ,通过行为学评分和测定脑梗死体积来判定IN给予NGF对于急性缺血性脑损伤的疗效。　结果 :INNGF组嗅球部位的NGF浓度最高 ,达 32 5 2pg/g ,其次为海马。嗅球与海马部分的浓度与静脉注射 (IV)NGF组及对照组相比显著增高 (P <0 .0 1)。INNGF组的脑梗死体积明显减小 ,与对照组相比降低了 38.8% (P =0 .0 0 2 ) ,IVNGF组与对照组相比无显著差异。INNGF组的运动平衡功能在脑缺血后 2 4h和 4 8h时与对照组相比均得到显著改善 (P =0 .0 2 ,P =0 .0 4 )。IVNGF组各项神经功能评分与对照组相比均未见明显差异。　结论 :IN给予的NGF可以避开BBB的阻碍 ,进入各脑区和脊髓上颈节段 ,能够有效地降低脑梗死体积 ,并在一定程度上促进神经功能的恢复 ,对于脑梗死的治疗具有显著的神经保护效果。     

大鼠嗅球发育过程中的凋亡与增殖

目的:探讨大鼠嗅球发育过程中细胞凋亡和增殖的变化规律.方法:胚胎14 d,新生1 d (postnatal day, P1),P20及成年大鼠各10只,取嗅球以40 g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片. 采用TUNEL和免疫荧光染色方法检测大鼠嗅球中凋亡细胞和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)免疫反应阳性细胞的分布. 结果: 在胚胎14 d和P1大鼠嗅球中,凋亡细胞广泛分布而PCNA免疫反应阳性细胞主要分布在室管膜周围区域,凋亡细胞和PCNA免疫反应阳性细胞在P20和成年大鼠嗅球中主要分布在小球层和颗粒细胞层. 嗅球中的凋亡细胞和增殖细胞随龄逐渐减少,差异有显著性意义.结论:大鼠从胚胎到成体嗅球细胞凋亡和增殖逐渐减少.