统计学处理规范描述

应说明研究设计的名称和主要做法,用均数±标准差（x珚±s）表达近似服从正态分布的定量资料,用M（QR）表达呈偏态分布的定量资料。关于统计学处理的规范描述一般包括：①统计分析使用的软件名称及版本号,如：     

《广东医学》杂志对来稿中统计学处理的有关要求

1 资料的表达与描述 用“均数±标准差”（ˉx ±s）表达服从或近似服从正态分布的定量资料,用“中位数（四分位数）”［M（P25,P75）］表达呈偏态分布的定量资料;采用表格,要合理安排纵横标目,并将数据的含义表达清楚;采用统计图时,所用统计图的类型应与资料性质相匹配,并使数轴上刻度值的标法符合数学原则;采用相对数时,分母不宜小于20,要注意区分率与构成比。     

《广东医学》杂志对来稿中统计学处理的有关要求

1 资料的表达与描述 用“均数±标准差”（ˉx ±s）表达服从或近似服从正态分布的定量资料，用“中位数（四分位数）”［M（P25，P75）］表达呈偏态分布的定量资料；采用表格，要合理安排纵横标目，并将数据的含义表达清楚；采用统计图时，所用统计图的类型应与资料性质相匹配，并使数轴上刻度值的标法符合数学原则；采用相对数时，分母不宜小于20，要注意区分率与构成比。     

《广东医学》杂志对来稿中统计学处理的有关要求

1资料的表达与描述用“均数±标准差”（ x珋±s）表达服从或近似服从正态分布的定量资料，用“中位数（四分位数）”［ M（ P25，P75）］表达呈偏态分布的定量资料；采用表格，要合理安排纵横标目，并将数据的含义表达清楚；采用统计图时，所用统计图的类型应与资料性质相匹配，并使数轴上刻度值的标法符合数学原则；采用相对数时，分母不宜小于20，要注意区分率与构成比。     

《广东医学》杂志对来稿中统计学处理的有关要求

1资料的表达与描述用“均数±标准差”（ x珋±s）表达服从或近似服从正态分布的定量资料，用“中位数（四分位数）”［ M（ P25，P75）］表达呈偏态分布的定量资料；采用表格，要合理安排纵横标目，并将数据的含义表达清楚；采用统计图时，所用统计图的类型应与资料性质相匹配，并使数轴上刻度值的标法符合数学原则；采用相对数时，分母不宜小于20，要注意区分率与构成比。     

5’-氮杂-2’-脱氧胞苷对 HT-29 和 LoVo 结直肠癌细胞株中 Wif-1 基因甲基化状态、mRNA 表达及蛋白表达的影响

目的：探讨甲基化酶抑制剂5’-氮杂-2’-脱氧胞苷（5’-Aza-2’-deoxycytidine,5’-Aza-CdR）对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。方法用不同浓度（0.5、1.0、1.5μmol/L）5’-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中W if-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5’-Aza-CdR处理后W if-1基因mRNA和蛋白重新表达,实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5’-Aza-CdR（0.5、1.0、1.5μmol/L）在HT-29细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.207±0.052）、（1.790±0.033）和（2.016±0.123）;在LoVo细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.294±0.048）、（1.893±0.061）和（2.204±0.041）。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5’-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为（0.456±0.040）、（0.511±0.025）、（0.857±0.031）和（0.934±0.047）;LoVo细胞株相对表达量分别为（0.842±0.032）、（0.844±0.044）、（0.854±0.037）和（0.856±0.034）。以上作用均呈时间、剂量±赖性,W if-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义（F=144.823,P=0.000;F=476.195,P=0.000）。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义（F=129.674,P=0.000）,但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义（F=0.117,P=0.948）。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5’-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1基因的甲基化状态?     

纺锤体检查点蛋白Cenp-E在肝癌组织的表达及临床意义

目的观察纺锤体检查点蛋白（Cenp-E）在肝癌组织和人类正常肝组织表达水平的差异,以探讨Cenp—E蛋白在肝癌细胞中的表达反临床意义。方法用荧光定量PCR和Westernblot分别检测Cenp．E基因和蛋白在肝癌组织和正常肝组织的表达水平。结果正常肝组织中Cenp-E基因mRNA水平（0．02378±0．00973）明显高于肝癌组织（0．01458±0．00873）;Cenp—E蛋白表达量在正常肝组织中（0．656±0．012）明显高于在肝癌组织中的表达（0．301±0．009）,且二者有显著性差异。结论Cenp—E低表达在肝癌的发生过程中起重要作用。     

肝细胞癌中RhoC mRNA的表达及其临床意义

目的：探讨RhoC mRNA在人肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的表达及其与HCC复发转移的关系。方法：用荧光定量PCR技术检测82例HCC及其癌旁肝组织,16例正常肝组织中RhoC mRNA的表达情况。分析mRNA表达量与临床资料之间的关系。结果：RhoC mRNA在HCC、癌旁组织和正常组织中均可检测到表达,表达量分别为1.18±0.77、0.67±0.29和0.38±0.18,组间表达量比较差异有统计学意义（P〈0.05）,RhoC mRNA在HCC组织中的表达水平明显高于癌旁肝组织中的表达水平,两者差异有统计学意义（P〈0.05）;RhoC mRNA在HCC中的表达量与结节数目多,门静脉癌栓,术后复发转移相关（P〈0.05）,RhoC mRNA高表达的患者术后5年生存率明显低于RhoCmRNA低表达的患者（P〈0.05）。结论：RhoC mRNA的过表达可能与HCC的发生及复发转移有关,有可能做为HCC患者术后复发转移的预测指标。     

RNA干扰抑制树突状细胞CD80和CD86基因表达研究

目的探讨体外合成的小干扰RNA（siRNA）对人树突状细胞（DC）共刺激分子CD80和CD86基因表达的影响。方法设计并合成了3条siRNA（siRNA1、siRNA2和siRNAc）,在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测CD80和CD86 mRNA的变化,用蛋白印迹检测CD80、CD86蛋白的表达。结果转染24、48、72h后,DC CD80 mRNA均有明显减少（P〈0.01）,抑制率分别为（50.0±3.63）%、（66.8±4.12）%和（76.6±4.87）%;CD86 mRNA均有显著降低（P〈0.01）,抑制率分别为（53.0±3.70）%（、60.5±3.92）%和（73.4±4.46）%,而单纯脂质转染和siRNAc转染对CD80、CD86 mRNA表达均无影响（P〉0.05）。Western Blot结果显示转染48、72h后,siRNA1对CD80蛋白表达的抑制率为（67.3±4.80）%和（80.9±5.23）%;siRNA2后对CD86蛋白表达的抑制率为（60.7±4.15）%和（74.7±4.63）%。结论 siRNA可特异抑制树突细胞B7基因的转录和表达,为进一步研究siRNA诱导移植免疫耐受提供了理论和实验基础,为诱导器官移植免疫耐受提供了新思路和途径。     

本刊对稿件中科研设计方法和统计学分析方法的描述要求

1．科研设计名称与方法的描述：文中应写明科研设计名称和主要方法。（1）调查设计，分为前瞻性调查研究、回顾性调查研究、横断面调查研究。（2）实验设计，请写明设计类型：自身配对设计、成组设计、交叉设计、析因设计、正交设计等。临床试验设计，应写明属于第几期临床试验、何种盲法措施；主要方法应围绕重复、随机、对照、均衡4个基本原则概要说明，并且写明控制重要非试验因素的干扰和影响的方法。2．研究资料的描述：用珋x ±s 表达正态分布的定量资料，用M（QR）表达偏态分布的定量资料；统计表应合理安排纵横标目，数据的含义应表达清楚；统计图的类型应与资料性质匹配，数轴上刻度值的标法应符合数学原则；相对数分母不应小于20，并注意区分百分率与百分比。     

HBeAg阳性/阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA与肝组织炎症的相关性

目的探讨慢性乙型肝炎患者乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性与阴性血清乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）水平与肝组织炎症分级的相关性。方法将121例慢性乙型肝炎患者分为HBeAg阳性组（62例）及阴性组（59例）,乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物用化学发光法检测;丙氨酸氨基转移酶（ALT）用全自动生化分析仪检测;血清HBV DNA定量检测采用荧光定量聚合酶链反应法;肝组织行常规病理染色判断炎症活动度。结果 HBeAg阴性组和阳性组平均年龄及病程分别为（36.95±8.5）岁和（33.23±10.42）岁（,118.79±72.29）个月和（82.45±52.24）个月（两组比较均P〈0.05）;HBeAg阳性组和阴性组血清HBV DNA定量及ALT水平分别为（6.43±1.18）IU.mL-1 vs（4.16±2.48）IU.mL-1（、222.54±272.68）IU.L-1 vs（134.88±120.85）IU.L-1（两组比较均P〈0.05）;HBeAg阳性组血清HBV DNA定量与肝组织炎症分级相关性检验rs=-0.095,P〉0.05;HBeAg阴性组血清HBV DNA定量与肝组织炎症分级相关性检验rs=0.261,P〈0.05。结论 HBeAg阳性与阴性的慢性乙型肝炎的的临床表现及病理学特点有所不同,慢性乙型肝炎的病变程度应综合一般临床资料、血清HBV DNA水平及肝穿刺病理来共同评判。     

精神分裂症患者血清差异 microRNA 谱的检测

目的：目前精神分裂症的临床诊断缺乏统一的标准。文中研究精神分裂症患者血清中差异miRNA表达谱,为该病的临床诊断提供依据。方法采用FlashTag TM Biotin RNA芯片技术和SAM软件筛选精神分裂症患者与健康受试者血清中差异表达的miRNA,用实时荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）进行验证。结果筛选出3个差异表达的miRNA,其中hsa-miR-1281上调,表达倍数变化为1．50881;hsa-miR-2861、hsa-miR-638下调,表达倍数变化分别为0．64193和0．51624。实时定量PCR结果证实,精神分裂症患者较健康受试者hsa-miR-2861与hsa-miR-638表达下调,分别为[（0．037±0．037） vs （3．159±2．761）,χ2＝4．089, P＜0．05]及[（0．006±0．006） vs （0．689±0．314）,χ2＝4．083, P＜0．05],hsa-miR-1281在精神分裂症患者组呈高表达[（1．221±0．041） vs （0．145±0．036）,χ2＝5．333,P＜0．05）。结论精神分裂症患者血清中存在差异表达的miRNA谱,miR-1281、miR-2861和miR-638可作为诊断精神分裂症的一个新的血清标志物。     

重组人转化生长因子-β1荧光质粒的构建及转染软骨细胞的基因表达

目的：探讨重组人转化生长因子（TGF）-β1荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况.方法：体外酶消化分离法培养兔关节软骨细胞并采用特异性细胞外基质Ⅱ型胶原免疫细胞染色进行鉴定.双酶切法切取TGF-β1的cDNA片段,通过T4 DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上构建pEGFP-C1-TGF-β1表达质粒.用构建的pEGFP-C1-TGF-β1表达质粒经脂质体转染软骨细胞,在12、24 h、2、4、6 d通过荧光显微镜观察细胞内TGF-β1基因的表达,应用荧光定量PCR检测表达水平.结果：成功分离培养软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞染色显示细胞胞质染成棕黄色,胞核基本不着色.pEGFP-C1-TGF-β1真核表达载体质粒成功构建,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确.荧光显微镜观察转染后的软骨细胞有绿色荧光蛋白表达,软骨细胞的转染率分别为12 h：（8.22±2.02）%,24 h：（16.54 4±2.91）%,2 d：（14.06±3.67）%,4 d：（14.24±2.62）%,6 d：（12.36±2.28）%.荧光定量PCR检测转染软骨细胞TGF-β1基因拷贝数为16 277±1779,高于未转染软骨细胞的3095±205（P〈0.05）.结论：构建的TGF-β1荧光质粒可以转染软骨细胞并获得表达,为基因治疗骨性关节炎的研究提供基础.     

紫外线对SLE白介素-6和白介素-10mRNA表达的影响

目的探讨紫外线对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）表达白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）mRNA的影响。方法提取SLE患者及健康对照的PBMC,用不同剂量311nm窄谱中波紫外线（NB-UVB）照射,以实时荧光相对定量聚合酶链反应分析照射前后PBMC IL-6、IL-10mRNA的相对表达。结果 SLE患者中狼疮肾炎（LN）患者PBMC高表达IL-6、IL-10mRNA,与非狼疮肾炎（非LN）患者及正常人差异很大,分别是正常人的（105.44±112.94）倍和（1.82±3.41）倍、（28.41±21.14）倍和（1.17±1.43）倍,其中狼疮肾炎（LN）患者PBMC高表达IL-6、IL-10 mRNA,且与临床中24h尿蛋白定量高度相关（r=0.82,0.87,P〈0.05）,而非狼疮肾炎系统性红斑狼疮患者与正常人相比,差异无统计学意义（t’=0.43,0.87,P〉0.05）;在紫外线照射后LN患者PBMC IL-6、IL-10mRNA的表达有升高也有降低,升高组SLE疾病活动指数、抗SSA抗体阳性率以及光敏性发生率明显高于降低组。结论紫外线可改变SLE患者PBMC表达IL-6、IL-10mRNA,紫外线可能通过此途径影响SLE病情。     

膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝组织CTGFmRNA和PDGF-A蛋白表达的影响

目的观察膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠肝脏组织结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）mRNA和血小板衍生生长因子（platelet_derived growth factor,PDGF）-A蛋白表达的影响。方法 Sprague-Dawley（SD）大鼠60只随机分为空白对照组（n=20）、模型对照组（n=20）和膈下逐瘀汤组（n=20）,共3组。用40%四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）复制大鼠肝纤维化模型,膈下逐瘀汤干预12周后处死大鼠。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝组织CTGFmRNA的表达,免疫组化染色法检测PDGF-A蛋白表达。结果模型组CTGFmRNA2-ΔΔCt值（3.59±0.52）和PDGF-A积分光密度（IOD）值（23.38±1.55）,显著高于正常对照组（分别为1.02±0.23和15.02±1.34）（P〈0.05）,表明模型组CTGF mRNA和PDGF-A蛋白表达上调。与模型组比较,膈下逐瘀汤组CTGF mRNA2-ΔΔCt值（1.62±0.25）和PDGF-A IOD值（18.04±0.83）显著降低（P〈0.05）,表明CTGFmRNA表达下调。结论膈下逐瘀汤可能通过下调CTGF mRNA和PDGF-A蛋白的表达而发挥抗肝纤维化作用。     

致敏血清诱导大鼠气道平滑肌细胞嗜酸粒细胞趋化因子的表达及机制探讨

目的观察气道平滑肌细胞经哮喘致敏血清刺激后嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达变化,并探讨其可能的机制。方法贴壁法体外培养大鼠气道平滑肌细胞。建立大鼠哮喘模型,采血收集致敏血清。用致敏血清刺激体外培养的气道平滑肌细胞,或同时予以致敏血清和地塞米松干预。采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中Eotaxin水平,放射免疫法测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）表达,逆转录聚合酶链反应半定量检测细胞中Eotaxin mRNA表达。结果致敏血清干预后,细胞培养上清Eotaxin水平和细胞内Eotaxin mRNA表达均较正常对照组显著升高[（107.09±7.12）ng/L比（0.63±0.56）ng/L,P〈0.05;1.39±0.04比0.05±0.01,P〈0.05],细胞内cAMP表达显著降低[（17.58±3.62）ng/L比（32.39±3.36）ng/L,P〈0.05]。地塞米松与致敏血清同时干预后,上清中Eotaxin水平[（64.18±4.04）ng/L]和胞内Eotaxin mRNA（0.77±0.19）表达较哮喘组显著降低,细胞内cAMP表达显著升高[（58.99±5.94）ng/L]（P〈0.05）。上清Eotaxin水平与胞内cAMP水平呈负相关（r=-0.788,P〈0.01）。结论气道平滑肌细胞在致敏状态下Eotaxin基因和蛋白表达均显著增强,可能作为炎性自分泌细胞分泌炎症因子,通过cAMP信号途径参与哮喘的发生。     

代谢综合征大鼠不同组织血管紧张素转换酶2的表达

目的：探讨代谢综合征（MS）模型大鼠心脏、血管内皮、肺、肝、胰腺、肾、睾丸和脑组织血管紧张素转换酶2（ACE2）的表达.方法：20只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和果糖诱导MS组,每组10只.6wk后测定三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、胰岛素敏感指数（ISI）、内脏脂肪/体质量、体质量指数（Lee′sindex）、口服糖耐量（OGTT）为指标,判断造模成功情况.用免疫组化法检测上述8种组织中ACE2表达;用实时荧光定量PCR技术观察ACE2 mRNA表达.结果：与对照组相比较MS模型组大鼠血清TG[（1.18±0.19）vs（1.74±0.12）mmol/L];TC[（1.44±0.13）vs（2.04±0.18）mmol/L];LDL-C[（0.39±0.09）vs（0.89±0.12）mmol/L];体质量指数（297.48±9.82）vs（323.50±12.95）;内脏脂肪/体质量（0.0373±0.0019）vs（0.0442±0.0014）;血压[（109.34±5.02）vs（144.47±3.26）mmHg]（1mmHg=0.133kPa）等均高于对照组（P均〈0.05）.HDL-C[（0.75±0.12）vs（0.43±0.10）mmol/L];ISI[（-4.48±0.07）vs（-5.26±0.16）];OGTT[（8.26±0.56）vs（9.22±0.59）mmol/L]均低于对照组（P均〈0.05）.与对照组相比较MS模型组大鼠ACE2mR-NA的表达量在心脏[（0.97±0.13）vs（0.55±0.12）],血管内皮[（16.71±0.46）vs（8.53±0.28）],肺[（31.11±0.24）vs（12.45±0.11）],肾[（37.48±0.27）vs（15.64±0.15）],睾丸[（4.85±0.05）vs（1.78±0.15）],脑组织[（24.27±0.25）vs（4.82±0.15）]也均低于对照组（P均〈0.05）.结论：MS减少大鼠心脏、血管内皮、肺、肾、睾丸和脑组织中ACE2的表达.     

MicroRNA在非特异性精神发育迟滞患者外周血中的异常表达

目的 研究非特异性精神发育迟滞患者外周血中miRNA的异常表达.方法 采用基因芯片筛查技术对3例非特异性精神发育迟滞儿童和健康儿童外周静脉血的miRNA进行筛查,进行生物信息学分析,并选取其中10个感兴趣miRNA,运用实时定量PCR技术在34例非特异性精神发育迟滞患者与32例正常个体之间进一步验证芯片筛查的结果.结果 经筛查27个miRNA的表达差异具有统计学意义（上调或者下调倍数变化值≥2.0,P≤0.05）,其中22个表达上调,5个表达下调.经实时定量PCR验证miR-664a-5p,miR-1207-5p,miR-3141,miR-1228-5p,miR-4505在病例组（3.93±3.82,2.48±3.45,2.75±3.62,10.03±3.59,5.35±3.44）中表达较对照组（5.47±3.59,3.95±1.3.57,4.14±3.68,13.23±5.05,6.85±3.22）上调,差异有统计学意义（P＜0.05 ～ 0.01）.结论 多种miRNA在非特异性精神发育迟滞患者外周血中有异常表达.     

乙肝病毒X基因阻断降低肝癌细胞HepG2.215与纤维连接蛋白的黏附

目的探讨乙肝病毒X基因（HBX）在肝细胞癌（HCC）侵袭转移中的作用。方法利用psiRNA-hH1neo质粒,构建针对HBX的shRNA表达载体psiRNA1、psiRNA2、psiRNA3,转染肝癌细胞株HepG2.215,用荧光定量PCR仪检测siRNA对HBX mRNA表达的抑制作用,用Western blot法检测siRNA对HBX蛋白表达的抑制作用。以Transwell小室测定HepG2.215细胞与纤维连接蛋白（Fn）的体外黏附能力。结果成功构建shRNA表达载体,shRNA表达载体均可不同程度地抑制HBX的表达,其中psiRNA1对HBX的抑制作用最强,对HBX mRNA抑制率达80.27%,对HBX蛋白的抑制率为65.59%;细胞体外黏附能力受到明显抑制,在培养至48、72h后,对照组和转染组跨膜细胞数分别为442.6±57.1vs376.4±55.2和588.2±70.1vs513.6±68.5,两时相点均有明显差异（P〈0.05）。结论阻断HBX的表达可明显抑制肝癌细胞HepG2.215的体外侵袭性生长。     

Apollon和COX-2基因在急性白血病患者中的表达及意义

目的通过半定量逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）对急性白血病（acute leukemia,AL）患者及健康人群Apollon和COX-2这2种mRNA表达水平进行检测,探讨两者在AL诊断中的临床意义及在AL发生中的作用关系。方法常规收集40例新诊断的AL患者及20例健康人骨髓液或外周血标本,提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术,内参照物选择β-actin,半定量检测靶mRNA的表达水平。结果新诊断的AL患者组Apollon mRNA表达水平为0.332±0.296,高于正常对照组表达水平0.026±0.018,差异有统计学意义（P〈0.05）;COX-2mRNA表达水平为0.916±0.154,高于正常对照组表达水平0.554±0.131,差异有统计学意义（P〈0.05）;两者的表达呈正相关（r=0.406,P〈0.05）。结论 Apollon、COX-2mRNA在新诊断的AL患者中异常过度表达,并且呈正相关关系,两者的表达水平及相互作用可能是导致AL发生、发展的重要因素。