大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF-β1基因可增强MMP-2表达

目的　研究转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）表达的影响。方法　采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦβ１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否;又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦβ１的ＭｓＣＭＭＰ２ｍＲＮＡ、蛋白及酶活性变化。结果　成功获得稳定过表达人ＴＧＦβ１的大鼠ＭｓＣ克隆（ＭＴＧ１）,该细胞克隆的ＭＭＰ２ｍＲＮＡ．蛋白表达及其酶活性均获增强。结论　ＴＧＦβ１可增强ＭｓＣＭＭＰ２ｍＲＮＡ、蛋白表达,并提高其酶活性,这为进一步阐明ＴＧＦβ１在肾小球硬化发生机制中的作用提供了重要的实验手段和依据。     

高糖下系膜细胞细胞外基质主要成分及MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TGF-β1的动态变化

目的：观察高糖下系膜细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2，MMP-9)，金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP—1)及转化生长因子β1(TGF-β1)，层粘连蛋白(LN)，胶原蛋白IV(colⅣ)的动态改变，探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法：采用Western印迹杂交、酶谱分析法及ABC-EHSA法检测。结果：随着高糖作用时间的延长，体外培养大鼠系膜细胞分泌TIMP-1，TGF-β1，LN、colⅣ逐渐增加，分泌MMP-2、MMP-9逐渐减少。结论：高糖引起系膜细胞套泄TGF-β1异常增加，同时有MMPs/TIMPs、细胞外基质合成降解的失衡，是DN的病理基础。     

肾病综合征患儿血清TGF-β1、CTGF、BMP-7检测的临床意义

目的 检测原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)患儿血清转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨形态发生蛋白-7(bone mo...     

TGF-β1、BMP-7及Gremlin在小鼠肝纤维化组织中的表达

目的研究四氯化碳（CCl4）诱导小鼠肝纤维化组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、骨形态发生蛋7（BMP-7）及Gremlin的表达,探讨其在肝纤维化发生机制中的作用。方法雄性C57小鼠40只,分为实验组和对照组,每组20 只。实验组给予腹腔注射40% CCl4橄榄油溶液,10 ml/kg;对照组腹腔注射橄榄油溶液,10ml/kg,2 次/ 周,持续8 周。苏木精-伊红染色后观察肝纤维化程度,免疫组织化学法染色后分析TGF-β1、BMP-7 及Gremlin 在肝纤维中组织中的表达和分布,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测TGF-β1、BMP-7 及Gremlin 在正常和纤维化肝组织中mRNA 和蛋白的表达。结果TGF-β1和Gremlin 在肝纤维化组织中mRNA 和蛋白表达增强（p <0.05）,而BMP-7 在肝纤维化组织中表达降低（p <0.05）。结论TGF-β1、Gremlin的表达与肝纤维化呈正相关,BMP-7与肝纤维呈负相关（ <0.05）。Gremlin可能通过下调BMP-7 的表达,诱导肝纤维化的发生。     

金雀异黄素对TGF-β1诱导大鼠肾系膜细胞CTGF表达的影响

目的了解金雀异黄素（genistein，Gen）对转化生长因子（TGF）β1诱导大鼠肾系膜细胞（MCs）结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。进一步探讨金雀异黄素抑制肾纤维化的机制。方法将体外培养的MCs分为4组：正常对照组，未加任何刺激因素；Gen组，Gen的终浓度分别为50、100μmol／L；TGF-β1组，终浓度为5ng／mL；TGF-β1＋Gen组，TGF-β1和Gen的终浓度分别同前。刺激MCs24h后，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内CTGFmRNA的水平，Westernblot法测定细胞内CTGF蛋白的表达。结果与对照组比较，Gen组CTGFmRNA的水平和蛋白的表达无显著性差异（P〉0．05），而TGF—β1组CTGFm—RNA的水平和蛋白的表达明显增加（P〈0．01）；与TGF-β1组比较，50μmol／L和100μmol／L的Gen能明显抑制TGF—β1诱导的CTGFmRNA的水平和蛋白表达，以100μmol／LGen效果最显著（P〈0．01）。结论Gen能部分抑制TGF—β1诱导CTGF的基因和蛋白的表达，提示金雀异黄素可能通过阻抑CTGF表达减少细胞外基质的积聚，具有潜在的抗肾纤维化作用.     

补肾解毒通络方对肾间质纤维化大鼠TGF-β1 BMP-7表达的影响

目的：观察补肾解毒通络方对肾间质纤维化大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）及两者mRNA表达的影响。方法：通过腺嘌呤灌胃建立大鼠肾间质纤维化模型,利用免疫组织化学方法、半定量RT-PCR分别检测大鼠肾脏TGFβ1、BMP-7及两者mRNA的表达。结果：补肾解毒通络方能下调TGF-β1和TGF-β1mRNA的表达、上调BMP-7和BMP-7mRNA的表达,治疗组与模型组比较有统计学差异（P〈0.01）。结论：补肾解毒通络方可以通过下调TGF-β1和TGF-β1mRNA表达、上调BMP-7和BMP-7mRNA的表达来减轻肾间质纤维化。     

阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达及细胞外基质合成的影响

目的 探讨阿魏酸哌嗪(PF)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质成分表达的影响及其意义.方法 将体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为正常对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β1加50、100、200 ng/mL PF干预组.分别利用免疫细胞化学法检测各组细胞CTGF蛋白表达,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞CTGF mRNA表达量,双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 CTGF蛋白及mRNA、细胞上清Col Ⅰ、FN表达量在TGF-β1组较正常组明显升高(P<0.05),阿魏酸哌嗪组上述指标均低于TGF-β1组(P<0.05).结论 阿魏酸哌嗪能抑制TGF-β1诱导下肾小球细胞外基质(ECM)的合成.其机制可能与下调系膜细胞上CTGF的表达量及功能活性有关.     

褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

p38MAPK介导的TGF-β1与BMP-7在泡型肝包虫病纤维化中的表达

目的 探讨p38、TGF-β1、BMP-7在泡型肝包虫病患者中不同纤维化程度肝组织中的基因表达差异及意义。方法 收集2017年9月～2018年11月青海省人民医院包虫病区确诊的40位泡型肝包虫病患者术后切除肝组织,采集部位为距病灶边缘、距病灶2 cm内、距病灶>2 cm的肝脏组织。根据HE染色及Masson染色结果,按照knodell肝纤维化评分标准,将不同部位的标本纤维化分级,通过RT-PCR检测p38、TGF-β1和BMP-7在各级纤维化组中的表达。结果 TGF-β1在S1、S2及S3组中相对表达量比较差异具有统计学意义(P<0.05)。p38在S1、S2及S3组中相对表达量比较差异具有统计学意义(P<0.05)。BMP-7在S、S2及S3组中相对表达量比较差异具有统计学意义(P<0.05)。p38与TGF-β1的相对表达量呈正相关(r=0.566,P<0.01)。BMP-7与TGF-β1的相对表达量呈负相关(r=-0.349,P<0.05)。结论 TGF-β1可通过p38MAPK介导通路转导TGF-β1生物信号而发挥促纤维化生物效应;BMP-7...     

BMP-7/Smads/TGF-β_1信号转导通路与肾间质纤维化

肾间质纤维化导致多种肾脏疾病发展至终末期肾衰竭,TGF-β1/Smads信号通路是肾脏纤维化重要的转导通路。骨形态发生蛋白7(BMP-7)不仅影响TGF-β1/Smads通路的信号转导,还与TGF-β1存在互逆作用,可多方面抵消TGF-β1的促肾纤维化作用。现就BMP-7/Smads/TGF-β1信号转导通路与肾间质纤维化的关系进行综述。     

Resveratrol对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的:探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响及Resveratrol的干预作用.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.①分为正常对照组(NC组,匍萄糖浓度5.6 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖浓度30 mmol/L),分别观察24、48、72 h;②分为NC组、HC组、Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+Resvemtrol 20 μmol/L)和高糖+Rcsvcratrol组(HG+Res 组,葡萄糖浓度30 mmol/L+Resveratrol浓度分别为5、10、15、20 μmol/L),各组细胞分別培养48 h.用半定量RT-PCR和Western blotting法检测细胞内TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化.结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有显著性,P值均<0.01;②与HC组相比,HG+Resveratrol干预后,大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性减少,差异均有显著性(P值分别为<0.05,<0.01).Res组和NC组之间TGF-β1 mRNA和蛋白表达的差异无显著性(P>0.05).结论:高糖能上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,Resveratrol可能通过抑制高糖引起的系膜细胞TGF-β1高表达而在糖尿病肾病中起治疗作用.     

Y-box结合蛋白-1促进大鼠系膜细胞增生及TGF-β1分泌

目的:观察Y-box结合蛋白-1(Y-box binding protein 1,YB-1)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增生及分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1),构建YB-1真核表达载体,转染系膜细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及细胞计数法检测大鼠MC过表达YB-1后的增生情况,双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1分泌,real-time PCR法测定细胞TGF-β1基因相对表达量?结果:YB-1过表达后MC增生和TGF-β1基因表达增加,同时MC分泌TGF-β1增加?结论:YB-1能促进MC增生及TGF-β1分泌增加?     

全反式维甲酸抑制TGF-β1诱导的大鼠肾系膜细胞纤维连接蛋白表达及Smad 2,3,4核转位

目的 采用转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）在体外刺激大鼠肾系膜细胞表达纤维连接蛋白（fibronectin）,观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,atRA）对它的作用及对TGF-β1的Smad通路的影响.方法 用Western blot方法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达,Smad 2的磷酸化,磷酸化Smad 2、总Smad 2/3和Smad 4的核转位,以及atRA对TGF-β1的这些作用的影响.结果 atRA能抑制TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达.atRA对TGF-β1引起的Smad 2的磷酸化无明显作用,但atRA能部分阻断TGF-β1引起的磷酸化Smad 2、Smad 2/3和Smad 4核转位.结论 atRA体外拮抗TGF-β1的致纤维化效应可能是由其减少磷酸化Smad 2、Smad 2/3、Smad 4的核转位所致.     

鱼腥草对糖尿病大鼠肾脏组织中BMP-7和TGF-β1表达的影响

[目的]探讨鱼腥草对糖尿病肾脏组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白-7(BMP-7)表达的影响。[方法]建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型,随机分为模型组、鱼腥草组和洛汀新组,另设正常组;观察8周后肾质量/体质量比值、肾小球面积及24h尿β₂微球蛋白、24h尿白蛋白和肌酐清除率,并应用免疫组化检测肾脏组织中TGF-β1、BMP-7的蛋白表达。[结果]鱼腥草给药可明显抑制糖尿病模型大鼠肾小球的肥大,降低24h尿β₂微球蛋白、24h尿白蛋白排泄率和肌酐清除率(P<0.05);免疫组化半定量显示,与模型组比较,鱼腥草组TGF-β1表达明显减少(P<0.05),BMP-7表达增多(P<0.05),而与洛汀新组比较无显著差异(P>0.05)。[结论]鱼腥草对糖尿病肾脏组织有明显的保护作用,其机制可能与其降低肾脏中TGF-β1表达,增加BMP-7的表达有关。     

LOX-1在ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞TGF-β1表达的作用

目的:探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HGMC)表达转化生长因子(TGF-β1)中的作用。方法:体外培养HGMC,在不同时间加入不同浓度的ox-LDL及LOX-1阻滞性抗体JTX92,用半定量RT-PCR法检测细胞LOX-1和TGF-β1mRNA表达,用Westernblot法检测细胞LOX-1蛋白合成,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中TGF-β1浓度。结果:ox-LDL以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1mRNA和蛋白表达的同时,也以时间和浓度依赖的方式增加细胞内TGF-β1mRNA表达和培养液中TGFβ1蛋白的含量,JTX92(10μg/ml)可以明显抑制LOX-1和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:ox-LDL通过激活LOX-1调节HGMCTGF-β1基因表达、蛋白合成与分泌。     

TGF-β1和BMP-2对终板软骨细胞增殖和糖胺多糖合成的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)对体外培养大鼠终板软骨细胞增殖和合成糖胺多糖的影响。方法:取原代大鼠终板软骨细胞,体外培养传代至第二代,常规培养液培养组为对照组,培养液中加入TGF-β1及BMP-2作用于软骨细胞为实验组,观察细胞的生长情况,测定终板软骨细胞增殖和糖胺多糖(GAG)含量的变化,分析两种因子对软骨细胞增殖行为和合成糖胺多糖的影响。结果:单独应用TGF-β1与BMP-2刺激,终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖合成较对照组增高,而TGF-β1与BMP-2联合使用能够更加明显地促进终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖的合成。结论:一定浓度的TGF-β1与BMP-2联合使用,能有效促进体外培养的软骨细胞增殖和合成GAG基质的能力。     

Smad7基因转染拮抗TGF-β1对培养肾小管细胞的影响

目的 探讨Smad7基因转染对TGF-β1诱导的小管细胞生长阻滞，细胞凋亡和FN分泌的影响。方法 采用Tfx-50脂质体将小鼠Smad7转染入原代培养的。肾小管细胞，用MTT法观测小管细胞的增殖、流式细胞仪观测其细胞周期的变化；ELISA法测定小管细胞FN的分泌。结果 培养基添加TGF-β1(10ng/ml)48h后，小管细胞增殖能力明显下降，停滞于G1期的细胞数增多，细胞分泌的FN量也明显增高，相反，Smad7基因转染后可明显拮抗TGF-β1对小管细胞的上述作用。结论 Smad7基因转染可明显拮抗TGF-β1对小管细胞的影响，此结果为今后体内Smad7基因治疗研究奠定了基础。     

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞酸性核糖体蛋白P0表达的影响

目的筛选转染人转化生长因子β1(TGFβ1)基因的大鼠系膜细胞相关反应性基因,并观察TGFβ1对其中之一的酸性核糖体蛋白P0的影响。方法筛选经SSHPCR和反向杂交法构建的大鼠系膜细胞TGFβ1相关反应性基因cDNA消减杂交库,并进行测序及与GenBank资料作同源性比较;分别用NorthernBlot、半定量RTPCR观察TGFβ1、酸性核糖体蛋白P0基因在培养的大鼠系膜细胞和动物模型体内表达的变化。结果经筛选获得的28个反应性基因cDNA片段,长度为59～535bp,其中7个片段均和已知酸性核糖体蛋白P0基因同源性一致。在转染TGFβ1的大鼠系膜细胞中P0基因mRNA表达增强;在大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎模型的病变肾组织中,P0基因mRNA和TGFβ1基因mRNA的上调表达趋势一致。结论酸性核糖体蛋白P0是一个与TGFβ1基因表达密切相关的基因,可能参与TGFβ1介导的肾小球肾炎和肾小球硬化的发生机制。     

TGF-β1反义寡核苷酸对高糖下肾小球系膜细胞分泌MMP-9、TGF-β1、collⅣ的影响

目的观察TGF-β1反义寡核苷酸(antioligodeoxynucleotide,antiODN)对高糖下肾小球系膜细胞分泌MMP-9、TGF-β1、collⅣ的影响。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)、酶谱分析法及ELISA法观察TGF-β1antiODN对高糖下系膜细胞表达细胞因子TGF-β1mRNA以及MMP-9、ECM主要成分COLLⅣ等蛋白的调控。结果TGF-β1antiODN可阻止高糖引起的TGF-β1mRNA表达增加,尤其高浓度的TGF-β1antiODN作用明显,48h基本接近正常(与对照组比较p>0.05);TGF-β1antiODN可以阻止高糖下系膜细胞分泌MMP-9蛋白减少及collⅣ增加;TGF-β1正义寡核苷酸(senseoligodeoxynucleotide,senseODN)、TGF-β1错义寡核苷酸(missoligodeoxynucleotide,missODN)无论高浓度还是低浓度都没有上述作用。结论TGF-β1antiODN可以通过减少TGF-β1mRNA的表达而使MMP-9表达接近正常,从而减少系膜细胞外基质的堆积,在糖尿病肾病的治疗方面有重要的参考价值。