烫伤大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型基因表达的变化

目的　观察严重烫伤应激后大鼠海马N 甲基 D 天冬氨酸受体 (N methyl D aspartatere ceptorsNMDAR)亚型基因表达的变化。　方法　制作 30 %TBSAⅢ度烫伤大鼠应激模型 ,以大鼠背部剃毛 ,浸入温水 10s为对照 ,利用RT PCR技术 ,分别检测对照组及烫伤后 0 .5、1、2、4h各时相点海马NMDAR的主要亚型NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、NMDAR2DmRNA的表达。　结果　伤后 0 .5h及1hNMDAR各亚单位mRNA表达无显著变化 ;伤后 2h及 4hNMDAR1mRNA表达比对照组增加 2 4 .3%及 2 0 .9% (P <0 .0 5 ) ,NMDAR2AmRNA表达比对照组增加 2 7.8%及 2 7.6 % (P <0 0 5 ) ,NM DAR2B及NMDAR2D的mRNA表达无明显变化。　结论　海马NMDAR1/NMDAR2A构成的受体通道在烫伤 2h后表达增强 ,这种变化可能导致了烫伤应激时NMDAR的进一步开放 ,从而可能参与烫伤应激HPA轴失调及其后续的病理生理改变     

异丙酚对N-甲基-D-天冬氨酸诱发大鼠海马神经元内游离钙离子浓度的影响

目的观察异丙酚对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱发大鼠海马神经元内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法取当天新生的Wistar大鼠海马神经元，培养12d随机分为5组，对照组（C组）、NMDA组、异丙酚10μmol／L＋NMDA组（P1组）、异丙酚100μmol／L＋NMDA组（P2组）、异丙酚400μmol／L＋NMDA组（P3组）。NMDA组培养液中加入NMDA至终浓度20μmol／L，P1组、P2组及P3组加入NMDA前即刻分别加入异丙酚至终浓度为10、100、400μmol／L，加入异丙酚后11min用激光共轭聚焦显微技术测定[Ca^2＋]。结果NMDA可诱发海马神经元[Ca^2＋]．升高，预先加入异丙酚100、400μmol／L可抑制这种改变，异丙酚10μmol／L对NDMA诱发的上述改变无影响。结论高浓度异丙酚可抑制NMDA诱发的大鼠海马神经元细胞[Ca^2＋]．的升高，这可能是其神经保护作用的机制之一。     

氯胺酮对局灶性脑缺血损伤大鼠脑N-甲基-D-天冬氨酸受体-1表达的影响

目的研究氯胺酮对局灶性脑缺血损伤大鼠脑N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)-1 (NRⅠ)表达的影响。方法40只雄性SD大鼠,随机分为2组(n=20)：氯胺酮组和戊巴比妥组,分别腹腔注射氯胺酮60 mg·kg~(-1)或戊巴比妥40 mg·kg~(-1),翻正反向消失时,用线栓法阻塞大脑中动脉阻塞制备脑缺血模型。缺血24h时每组分别腹腔注射上述剂量的氯胺酮或戊巴比妥处死5只大鼠,测定脑梗塞体积,缺血24、72h分别腹腔注射上述剂量的氯胺酮或戊巴比妥处死4只大鼠,脑组织切片甲苯胺蓝染色后,观察半暗带内存活神经元情况,并行免疫组化染色,测定NR1表达水平。结果与戊巴比妥组比较,氯胺酮组大鼠脑梗塞体积减小,半暗带内神经元密度升高,NR1表达降低(P＜0.05)。结论氯胺酮抗大鼠脑缺血损伤的作用与下调NRⅠ表达有关。     

七氟烷对新生大鼠学习记忆功能的影响

目的 探讨七氟烷麻醉对新生大鼠学习记忆功能的影响.方法 新生7dSD大鼠80只,采用完全随机设计随机分为5组(每组16只):A、B组分别吸入3％七氟烷6h和2 h;C、D组分别吸入1.5％七氟烷6h和2h;E组吸入空气对照.新生大鼠麻醉后分别于第21～23天(Ⅰ期)和第60～62天(Ⅱ期)各组行Y型迷宫试验后立即处死,取大鼠脑海马组织,进行免疫组织化学染色,测定N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-nethy-D-aspatrate receptor 1,NMDAR1)的表达.结果 与E组比较,A组Ⅰ期Y型迷宫第1天测试结果中的全天总反应时间(total reaction time,TRT)和错误次数(error number,EN)分别为(100±19)s和(9.2±1.1)次(P＜0.05),第2天～第3天时无统计学差异,余各组Ⅰ期Y型迷宫测试结果无统计学差异(P＞0.05);与E组比较,Ⅱ期各组Y型迷宫测试结果均无统计学差异(P＞0.05).Ⅰ、Ⅱ期各组海马NMDAR1的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 吸入1.5％七氟烷不会导致幼年大鼠学习记忆功能减退;吸入3％七氟烷6h对幼年大鼠早期可产生一过性学习记忆功能减退,对远期学习记忆功能未见明显影响.     

利多卡因致大鼠惊厥时海马神经元含NR2B亚基的N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的变化

目的 评价利多卡因致大鼠惊厥时海马神经元含NR2B亚基的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体表达的变化.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重220～250 g,6月龄,采用随机数字表发法,将其分为2组(n=12):生理盐水组(N组)和利多卡因组(L组).L组经尾静脉输注2％利多卡因4 mg· kg-1·min-1至大鼠发生RacineⅢ级惊厥,N组以等容量等速率生理盐水替代.于惊厥停止后即刻、6、12 h(T1～3)时取海马,采用免疫印迹和RT-PCR法检测NR2B蛋白及mRNA的表达水平.结果 与N组比较,L组NR2B蛋白及mRNA表达上调.与T1时比较,L组T2,3时NR2B蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05).与T2时比较,L组T3时NR2B蛋白表达下调(P＜0.05).结论 利多卡因诱发大鼠惊厥时海马神经元含NR2B亚基的NMDA受体表达上调,该变化可能与利多卡因诱发惊厥发作有关.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体参与神经病理性疼痛的机制研究进展

背景 N-甲基-D-天冬氨酸(N- methyl- D- aspartate,NMDA)受体依赖的神经可塑性不仅与学习、记忆等生理学功能有关,而且在慢性痛等伤害性病理学损伤中发挥重要作用.目的 就NMDA受体在神经病理性疼痛的研究进展作简要介绍. 内容 探讨NMDA受体在疼痛传输通路中的表达及作用的相关机制.趋向 为更好地治疗神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)提供理论依据.     

异丙酚对大鼠海马神经元NMDA受体通道电流的影响

目的 研究异丙酚对大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体通道电流的影响。方法 体外培养新生Wistar大鼠海马神经元8—12d，采用全细胞膜片钳技术和压力喷射给药方式，钳制电压为-80mV，记录3、48μg∥ml异丙酚对100μmol／LNMDA诱发NMDA受体通道电流的影响；然后用7-氨基丁酸（GABA）受体拮抗剂荷包牡丹碱100μmol／L阻断GABA．受体，观察3、48μg／ml异丙酚对NMDA受体通道电流的影响。结果 3、48μg／ml异丙酚抑制自发兴奋性突触后电流并直接激动GABA．受体，使Cl．内流，产生外向超极化的GABA电流，从而间接抑制NMDA受体通道电流。用荷包牡丹碱100μmol／L阻断GABA．受体后，3、48μg∥ml异丙酚仍可抑制100μmol／LNMDA诱发的NMDA受体通道电流（P〈0．05）。结论 异丙酚通过激活GABA．受体影响NMDA受体通道电流，对NMDA受体通道也有直接抑制作用。     

慢性疼痛对新生大鼠海马形态结构和学习记忆功能的影响

目的 探讨慢性疼痛刺激对新生大鼠海马形态结构和学习记忆功能的影响。方法60只出生7 d SD大鼠,随机化区组实验设计,每天予以疼痛组(n=30)新生大鼠后脚掌注射0.5％福尔马林0.1 ml,连续两周至哺乳期结束;对照组(n=30)新生大鼠后脚掌则用棉签予以接触刺激。两周后用Morris水迷宫试验检测大鼠空间学习记忆功能的情况;水迷宫试验完成后,取两组大鼠海马组织,作病理切片,对海马齿状回颗粒细胞、CA3区锥体细胞进行计数,对海马CA3区锥体细胞超微结构进行观测。结果在Morris水迷宫试验中,疼痛组潜伏期明显长于对照组(P<0.01);与疼痛组比较,对照组海马齿状回单位面积的颗粒细胞数目、CA3区单位面积的锥体细胞数目显著性升高(P<0.01);对照组海马CA3区锥体细胞线粒体形态正常、线粒体嵴清晰可见,胞浆内粗面内质网丰富、清晰可见。疼痛组海马CA3区锥体细胞体积缩小,线粒体嵴及粗面内质网减少。结论 长期慢性疼痛刺激可抑制新生大鼠空间学习记忆功能的发育,可抑制新生大鼠海马齿状回颗粒细胞的发育,并引起海马CA3区锥体细胞丢失。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基基因重组腺病毒镇痛疫苗的构建

目的 构建携带N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)基因的重组腺病毒镇痛疫苗.方法 以携带NR2B基因的腺病毒穿梭质粒pDC515-NR2B和腺病毒骨架质粒pBHGfrt(del)E1,3FLP共转染腺病毒包装细胞293细胞,连续观察细胞的形态学.取形成病毒空斑的293细胞,分别采用PCR、RT-PCR及Western blotting的方法从基因水平、转录水平和蛋白水平对病毒空斑筛选和鉴定,对鉴定正确的病毒空斑进行扩增和纯化.结果 转染后12 d可观察到细胞病变效应,15 d后形成病毒空斑.NR2B基因不仅正确插入重组腺病毒载体,而且可在293细胞正确表达NR2B蛋白.鉴定正确的病毒空斑命名为NR2B基因重组腺病毒5型镇痛疫苗,滴度为5×1011 VP/ml,纯度100%.结论 成功地构建了NR2B基因重组腺病毒镇痛疫苗,可用于疫苗镇痛的研究.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体介导的脑损伤及脑保护研究进展

各种原因所致的脑损伤性疾病是目前危害人类健康的主要疾病之一。N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptors，NMDAR)在中枢神经系统(central nerve system，CNS)各种生理功能的调节上起着重要的作用，在许多脑损伤疾病的病理生理发展过程中也起着关键的作用。近年来对NMDAR介导的脑损伤的保护作用做了大量研究，其中包括对NMDAR拮抗剂、受体调节剂、离子通道阻滞剂、甘氨酸位点拮抗剂、自由基清除剂等。本文综述了NMDAR介导的脑损伤发生机制及其相应脑保护作用研究的最新进展。     

雌激素对血管性痴呆大鼠学习记忆功能和海马p53、超氧化物歧化酶表达的影响

目的 观察雌激素对血管性痴呆大鼠学习记忆功能和海马p53、超氧化物歧化酶(SOD)表达的影响.方法 将60只SD大鼠随机分成4组.对照组和模型组腹腔注射生理盐水,雌激素高、低剂量组注射雌激素2 mg/kg和1 mg/kg.8周后测试学习记忆能力和海马p53、SOD表达.结果 与雌激素低剂量组大鼠比较,雌激素高剂量组大鼠的逃避潜伏期、第三象限活动时间、穿越站台均明显减少(P＜0.05).雌激素低剂量组p53平均吸光度(IA)值为0.25士0.01,雌激素高剂量组p53 IA值为0.30±0.02,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 雌激素显著下调p53促凋亡基因,提高SOD的活力,对海马区的神经元起到了保护作用.     

异丙酚联合电休克治疗对抑郁大鼠行为学和学习记忆功能的影响

目的探讨异丙酚联合电休克治疗对抑郁大鼠行为学和学习记忆功能的影响。方法成年健康雄性SD大鼠50只,随机分为5组（n=10）：对照组（C组）、抑郁模型组（D组）、电休克组（E组）、异丙酚联合电休克组（M组）和异丙酚组（P组）。C组正常喂养,其余组建立抑郁模型。造模后D组正常喂养,E组和M组分别给予单纯电休克和异丙酚联合电休克治疗各6次,P组腹腔注射异丙酚100 mg/kg。各组分别于造模前、造模后第2天、干预结束后第2天用旷场法进行行为学评分。干预结束后第2天Morris水迷宫法测试学习记忆功能。采用分光光度计检测海马组织一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮（NO）含量,RT-PCR法检测神经元型一氧化氮合酶mRNA（nNOS mRNA）表达。结果与C组比较,其余4组行为学评分均降低,学习记忆功能均减弱（P〈0.05）。与D组和E组比较,M组干预结束后第2天行为学评分升高,学习功能减弱,记忆功能增强,NOS活性、NO含量和nNOS mRNA表达降低（JP〈0.05）。与P组比较,M组干预结束后第2天行为学评分升高,学习功能减弱,记忆功能增强（P〈0.05）。结论异丙酚联合电休克治疗可明显改善抑郁大鼠的行为学和学习记忆功能,其对学习记忆功能的影响可能与异丙酚抑制电休克介导的海马组织nNOS mRNA的过度表达,降低NO生成过多所致的中枢神经毒性反应有关。     

神经病理性疼痛致抑郁大鼠海马促炎细胞因子含量的变化

目的观察神经病理性疼痛致抑郁大鼠海马促炎细胞因子含量的变化,并探讨其与抑郁严重程度的关系。方法成年雄性SD大鼠28只,随机分为两组:假手术组(Sham组)和保留性坐骨神经损伤组(SNI组),每组14只。于术前1d及术后7、14、21d测试机械痛阈值(MWT);于术前1~3d测试糖水偏好、强迫游泳实验基础值;术后21~23d进行糖水偏好实验、强迫游泳实验;行为学测试结束后取海马组织,采用ELISA法检测海马中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,并对其与糖水偏好的相关性进行分析。结果与Sham组比较,SNI组大鼠在术后7、14、21d MWT明显降低(P0.001),术后21d糖水偏好明显降低(P0.01),术后23d强迫游泳不动时间明显延长(P0.05);术后21d海马组织IL-6、TNF-α含量明显升高(P0.05或P0.01),而IL-1β含量差异无统计学意义;SNI组海马组织IL-1β(r2=0.60,P0.01)、IL-6(r2=0.55,P0.01)、TNF-α(r2=0.60,P0.01)含量与糖水偏好呈明显负相关。结论神经病理性疼痛致抑郁大鼠海马促炎细胞因子IL-6、TNF-α含量升高,且与抑郁严重程度呈负相关。     

氯胺酮对未成年大鼠学习能力和细胞外信号调节激酶的影响

目的研究氯胺酮对未成年大鼠学习记忆能力的影响,并观察其对海马神经元细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法48只21日龄SD大鼠随机均分为六组,分别为空白对照组(C组)、训练组(T组)、氯胺酮注射后6、12、24和72h组(K6、K12、K24、K72组)。氯胺酮组大鼠予以50mg/kg氯胺酮腹腔注射,在各时间点用Y型迷宫测试各组大鼠的空间搜索和学习能力。训练组只接受Y迷宫测试。所有动物训练后即刻取大鼠海马行免疫组化染色,观察ERK1、ERK2和p-ERK1/2的表达。结果K6、K12、K24组大鼠的学习次数和总反应时间与T组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示C组大鼠海马仅有极少量p-ERK1/2表达,而ERK1和ERK2有少许表达;所有接受迷宫测试大鼠的ERK1、ERK2和p-ERK1/2表达比C组均有显著增多(P<0.01)。K6、K12组大鼠海马ERK1、ERK2和p-ERK1/2的表达与T组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论单次注射50mg/kg氯胺酮可在短时间内损害21日龄SD大鼠的空间学习能力,而这个损害与海马ERK信号转导通路受到抑制有关。     

Changes of learning and memory in aged rats after isoflurane inhalational anaesthesia correlated with hippocampal acetylcholine level

Background and purpose

It has not been clearly described for mechanisms of postoperative cognitive dysfunction (POCD), but not yet for narcotic in connection with POCD. Acetylcholine plays important roles in learning and memory especially in elderly people. It is not very clear that cholinergic changes in the hippocampus are in relation to spatial memory impairment. The effects of isoflurane, a commonly used inhalation anaesthetic, as well as acetylcholine on learning and memory in the brain tissue of aged rats were observed in present study. We investigated the inhalation anaesthesia drug's effect on cholinergic system to examine whether the regional and progressive cholinergic changes may lead to POCD.

Methods

Seventeen-month-old rats were randomly assigned to either an isoflurane anaesthesia group (n = 17) or propofol anaesthesia group (n = 17). In isoflurane anaesthesia experiment group, isoflurane (1.4 to 1.7% for 2 hours) was delivered via a ventilator to make freely moving microdialysis model. In propofol group, propofol was administered by continuous infusion via a tail vein catheter to make freely moving microdialysis model. They were all mechanically ventilated. Morris Water Maze test was used to assess the learning and memory abilities of all the two groups’ rats twice a day for 5 days. Microdialysis was performed on the freely moving rats to determine the levels of acetylcholine in the brain tissues immediately after each Water Maze test.

Results

The isoflurane anaesthesia treatment increased the escape latency contrast to propofol anaesthesia group. The isoflurane anaesthesia's rats were then divided into isoflurane-induced severe learning/memory impairment group (n = 6, mean escape latency is 1.96 times more than that of in propofol anaesthesia group) and the isoflurane-induced mild learning/memory impairment group (n = 11, mean escape latency is equal or less than 1.96 times of that in propofol anaesthesia group). The results demonstrated that those rats that were categorized in the isoflurane-induced severe learning/memory impairment group had decreased levels of acetylcholine in the brain tissue as compared to those rats categorized in the mild learning/memory impairment group and in propofol anaesthesia group.

Conclusion

The results indicated that isoflurane may impair learning and memory in aged rats.     

慢性炎性疼痛对新生大鼠学习记忆功能发育及海马前脑啡肽mRNA表达的影响

目的观察完全弗氏佐剂所致慢性炎性疼痛对新生大鼠空间学习记忆功能发育的影响及其机制。方法10窝新生SD大鼠,每窝6只,随机分为疼痛组和对照组,在大鼠出生后第2天,疼痛组大鼠左足底皮下注射完全弗氏佐剂20μl,对照组注射等量生理盐水。分别在大鼠出生后第10天和第21天,两组每窝各取1只幼鼠处死后取海马组织,采用逆转录聚合酶链反应技术测定海马前脑啡肽mRNA的表达。幼鼠出生后第21天开始,两组每窝各取1只幼鼠进行Morris水迷宫实验。结果隐藏平台实验中,在出生后第21天和第24天疼痛组大鼠潜伏期较对照组延长(P<0.05),在空间探索实验中,疼痛组大鼠穿过平台所在象限游泳时间与总游泳时间、路径与总路径的比例均低于对照组(P<0.05),两组大鼠可视平台实验中潜伏期比较差异无统计学意义(P>0.05);在出生后第10天和第21天,疼痛组大鼠海马前脑啡肽mRNA表达均低于对照组(P<0.05)。结论慢性炎性疼痛可影响新生大鼠海马学习记忆功能的发育,海马前脑啡肽表达的下调可能是其中的机制之一。     

阿米替林和氯诺昔康对神经病理性疼痛大鼠学习记忆的影响

目的观察阿米替林和氯诺昔康对L5脊神经横切所致神经病理性疼痛大鼠学习记忆和海马脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法雄性SD大鼠60只随机均分为六组:生理盐水对照组(A组)、生理盐水组(B组)、阿米替林对照组(C组)、阿米替林组(D组)、氯诺昔康对照组(E组)、氯诺昔康组(F组)。术前和术后第2、7、10、14、17、21、28天测机械痛和热痛阈值;第29天行强迫游泳实验观察抑郁行为改变;第30天行Morris水迷宫实验观察学习记忆改变。用Real-time-PCR技术和免疫组化法测定海马BDNF表达。结果与A组比较,B组大鼠术后出现显著机械痛和热痛阈值下降,静止漂浮时间延长,学习记忆能力减退,海马BDNF表达减少(P<0.01)。与B组比较,D组应用阿米替林后机械痛和热痛阈值增加,静止漂浮时间缩短,学习记忆能力提高,海马BDNF mRNA、蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)。与B组比较,F组应用氯诺昔康后机械痛和热痛阈值增加(P<0.05或P<0.01),但静止漂浮时间、学习记忆能力和海马BDNF表达差异无统计学意义。结论阿米替林可有效镇痛、减轻疼痛大鼠抑郁症状、改善学习记忆能力,可能与阿米...     

麻醉期间低体温对新生大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨麻醉期间低体温状态对新生大鼠学习记忆能力的影响及其可能的作用机制。方法出生7 d的SD新生大鼠40只,按随机数字表法分为四组(n=10):对照组(C组)、麻醉保温组(A组)、麻醉低温组(AH组)、物理低温组(H组)。C组腹腔注射0.1 ml生理盐水并配备加热垫保持直肠温度在38~39℃;A组以25 mg/kg腹腔注射丙泊酚0.1 ml,每20分钟追加初始剂量的1/2,麻醉维持2 h,同C组方法保持直肠温度在38~39℃;AH组麻醉方式和时间与A组相同,大鼠在麻醉过程中不保温,控制室温为23℃,允许体温自然下降;H组大鼠腹腔注射0.1 ml生理盐水,同样控制室温为23℃,使体温自然下降。麻醉过程中持续吸氧,2 h内每20分钟监测记录一次体温。清醒后即刻,每组随机取5只大鼠采用Western blot法检测海马磷酸化-细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化-环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(p-CREB)相对表达量。每组剩余5只大鼠继续饲养至30日龄进行水迷宫实验检测其空间学习记忆能力和海马p-ERK、p-CREB相对表达量。结果降温60 min,AH、H组大鼠的直肠温度分别下降至(25.38±0.22)℃、(25.54±0.20)℃,明显低于C组(38.36±0.24)℃和A组(37.40±0.29)℃(P0.05)。清醒后即刻,AH、H组p-ERK和p-CREB蛋白相对表达量明显低于C组和A组(P0.05)。30 d四组大鼠逃避潜伏期、穿越平台次数和原平台象限逗留时间差异无统计学意义。水迷宫测试结束时,四组大鼠p-ERK和p-CREB蛋白相对表达量差异无统计学意义。结论麻醉期间体温降至25℃时可短期抑制新生大鼠海马p-ERK、p-CREB表达,而对其远期学习记忆能力无明显影响。