视网膜色素上皮吞噬机理的研究进展

视网膜色素上皮的吞噬分为特性和非特异性。其机理包括三个环节：受体与配体相辨认而粘着；产生跨膜信号参与第二信使分子释放；大量酶系统激活共同作用带动细胞框架成分和其它成分参与粒子摄入和消化。此外，视网膜色素上皮的吞噬功能还受到多种因素的调控。     

新生小牛视杆细胞体外发育过程中细胞形态及视色素分子分布的极性特征

目的 明确新生小牛视网膜视杆细胞体外发育过程中细胞形态及视色素分子分布的变化规律。 方法 分离培养新生小牛视网膜神经细胞，培养10、20、30和40 d的神经元用于免疫细胞化学染色，采用rho4D2抗体标记视网膜视杆细胞，观察不同培养时期的阳性细胞的形态特征及视色素分子分布的特点。用图像分析系统定量测量阳性细胞的免疫反应强度。 结果 rho4D2阳性细胞呈现两种形态，一种为无突起的小圆形细胞，另一种为带有顶端突起的细胞。体外培养10 d时，视色素弥漫地分布于整个细胞膜及顶端突起；培养20 d时视色素逐渐向顶端突起或细胞的一端集中；到培养30、40 d时，视色素聚集于顶端突起或细胞的一端，呈现极性分布特征。定量分析显示，体外培养20 d的阳性细胞，免疫反应强度较培养10 d时明显增强，培养20、30、40 d的阳性细胞的免疫反应强度没有明显差异。 结论 体外培养30、40 d的视杆细胞具备细胞结构及视色素分子分布的极性特征，并有高水平的蛋白质表达能力，是发育成熟的神经元。 (中华眼底病杂志, 2005, 21: 394-396)     

视网膜和视网膜色素上皮联合性错构瘤一例

视网膜及视网膜色素上皮联合性错构瘤是一种罕见的常发生在视盘边缘的肿瘤，眼底表现为视盘周围有一个边界模韧，轻度隆起，含有部分色素及胶质细胞增生和毛细血管扩张的肿物，现报道一例。     

视网膜和视网膜色素上皮联合错构瘤二例

例1 男,40岁.因右眼视物重影1年于2006年4月28日来我院就诊.不论眼外伤史,眼病家族史和既往眼病史.     

兔视网膜色素上皮细胞移植及长期形态学的研究

视网膜色素上皮（ＲＰＥ）功能失调或发生病理改变，可导致许多视网膜疾病，包括年龄相关性黄斑变性，青年性遗传性黄斑变性及视网膜色素变性等，严重危害人类视力。能否通过移植正常、健康的ＲＰＥ细胞治疗这类视网膜疾病，是当前眼科界关注的重要研究课题。我们采用了改良式玻璃体密闭式移植术，术中增加了玻璃体切割，应用带有色素标记的兔ＲＰＥ细胞移植于无色素性兔的视网膜下间隙。结果显示，移植长达１年后的ＲＰＥ细胞不但存活，结构形态正常，并且与邻近的ＲＰＥ细胞（包括移植的与自体的）建立了闭锁小带。移植的ＲＰＥ细胞与受体的感光细胞紧密结合，受体眼的神经外节盘正常脱落，被移植的ＲＰＥ细胞吞噬，且未发生排异反应。上述结果显示，本实验兔ＲＰＥ细胞移植的成功，为临床治疗某些视网膜疾病开辟了新的治疗途径，提供了可靠的实验室根据和应用前景。     

视网膜色素上皮受体介导的内吞作用

目的 研究视网膜色素上皮(RPE)细胞内吞光感受器细胞外基质(IPM)内大分子可溶性物质的可能性及其机制。方法 采用荧光标记的甲醛作用后的血清白蛋白(F-FSA),作为清道夫受体配体的指示物,与组织块培养的猪RPE细胞共同孵育,用荧光显微镜和电子显微镜观察RPE细胞对F-FSA的内吞情况。结果 RPE细胞能够摄入F-FSA;这一作用随配体浓度增加而提高,随孵育时间延长而增强;相同或相似的配体之间存在竞争作用;F-FSA进入RPE细胞后,以微囊泡的形式存在于细胞中。结论 RPE细胞能够摄入携带负电荷的大分子物质,这一作用是通过受体介导的内吞作用完成的,清道夫受体可能是介导这一作用的受体;受体介导的RPE细胞的内吞作用可能是IPM内大分子物质代谢的重要机制。（中华眼科杂志,2004,40：539-544)     

人胚视网膜色素上皮细胞的培养和超微结构观察

目的　分析人胚眼视网膜色素上皮 (RPE)细胞的生物学特性。方法　酶分层消化法分离培养RPE细胞 ,原代细胞分别计算贴皿率、伸展率和生长率。传代细胞计算分裂时间和总分裂次数。结果　人胚RPE细胞贴皿率为85 7%± 5 2 % ,伸展率为 84 2 %± 4 8% ,生长率为 72 2 % ;成人RPE细胞的贴皿率为 79 4%± 8 3 % ,伸展率为80 3 %± 6 7% ,生长率为 63 8%。人胚RPE细胞的分裂时间 (DOT )为 1 5 8d ,总分裂次数 (PD)为 4 43 ;成人RPE细胞的分裂时间 1 91d ,总分裂次数为 3 66。结论　体外培养的人胚RPE细胞较成人生长活跃     

视网膜色素变性视网膜的组织病理和超微结构观察

目的：探讨视网膜色素变性的病理改变及其发病机制。 方法：对1例常染色体显性遗传性视网膜色素变性患者的视网膜进行组织病理和超微结构观察．结果：视网膜各层组织均有变性改变和结构紊乱，并有区域性差异，后极部变性较周边部为重．视网膜色素上皮细胞病变与感光细胞病变程度密切相关，但后者似较前者为重．感光细胞的超微结构有明显变性改变，尤以外节变性，线粒体变性、胞浆内脂褐索沉着为突出。结论：超微结构变化提示感光细胞能量代谢系统和(或)自噬系统功能障碍。 （中华眼底病杂志，1997，13：24-26）     

环孢霉素A对体外培养人视网膜色素上皮细胞的抑制

为寻找抑制玻璃体内细胞增生的有效药物,用³H-胸腺嗜啶核苷(²H—TdR)掺入及液体闪烁技术,观察了环孢霉素A(CsA)(0.125"μg/ml~4.0μg/ml)对体外培养的加或不加巨噬细胞培养调理液(MCM)的人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的影响。CsA在0.125μg/ml时细胞的抑制率为-3.8%~4.1%(P>0.05);在0.25μg/ml～4.0μg/ml时为8.4%~95.1%(P<0.05),且呈剂量依赖性(r＝0.9413)(P<0.001),ID₅₀为1.49μg/ml。加MCM组细胞增殖较对照组明显（3d,26%;5d,34%;P<0.05),CsA对细胞增殖抑制率较对照组有提高(1.0%～13.9%)．表明CsA对体外培养的人RPE细胞有明显的抑制作用． （中华眼底病杂志,1995,11：22-24）     

视网膜色素上皮细胞直接铺片法与剥离铺片法比较

目的 介绍2种视网膜色素上皮(RPE)细胞铺片实验技术,比较其实验操作的难易程度及对RPE细胞形态和铺片完整性的影响.方法 实验研究.直接铺片法:大鼠眼球取出后用4％多聚甲醛固定30 min,解剖眼球,去除眼前段部分和眼内容物,小心剥去视网膜,将RPE贴附的眼后段部分剪成花瓣形并平整贴附在载玻片上,继续固定过夜.剥离铺片法:大鼠眼球取出后用4％多聚甲醛固定过夜,解剖眼球,去除眼前段部分和眼内容物,小心剥去视网膜,用镊子将RPE-Bruch膜复合物从眼球上分离,保存在PBS液中.结果 剥离铺片法能得到完整RPE细胞铺片,RPE细胞形态完整;直接铺片法中RPE细胞部分丢失,铺片边缘的RPE细胞被部分破坏.结论 直接铺片法操作简便,难度小,但容易破坏边缘的RPE细胞.剥离铺片法操作难度大,但对RPE细胞破坏程度小.     

视网膜色素上皮细胞的损伤因素与治疗进展

视网膜色素上皮（RPE）细胞在维持视网膜和脉络膜的正常功能和组织结构方面发挥重要作用,许多因素可导致RPE细胞的损伤,如缺氧、物理因素、化学物质和药物、免疫因素、氧化应激等。RPE细胞的损伤可导致多种眼底疾病,引起视功能的损害或丧失。深入研究引起RPE细胞损伤的因素对各种RPE细胞相关性眼病的预防和治疗具有十分重要的意义。近年来相关的研究日益受到关注,对RPE细胞损伤的影响因素及治疗方法进行综述。     

培养大鼠视网膜色素上皮细胞5－HT_2受体分析

利用培养大鼠视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞，我们观察了多种受体激动剂／拮抗剂对ＲＰＥ细胞内第二信使磷酸肌醇（ＩｎｓＰｓ）水平的影响。结果表明，５－羟色胺（５－ＨＴ）及５－ＨＴ２受体激动剂如α－甲基－５－羟色胺、Ｑｕｉｐａｚｉｎｅ、和ＤＯＩ（１－［２．５ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ－４－ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ］－２－ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｃ）均刺激大鼠ＲＰＥ细胞［３Ｈ］－ＩｎｓＰｓ形成，５－ＨＴ刺激［３Ｈ］－Ｉｎｓｐｓ形成的效应可被５－ＨＴ２受体拮抗剂Ｋｅｔａｎｓｅｒｉｎ完全阻断，而５－ＨＴ３，拮抗剂ＭＤＬ７２２２２对之无阻断作用。５－ＨＴ的效应还可被蛋白激酶Ｃ激活剂ＰＭＡ（４β－ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｃ１３－ａｃｅｔａｔｅ）部分抑制。结果清晰表明，在大鼠ＲＰＥ细胞存在着与Ｉｎｓｐｓ信使通路相偶联的５－ＨＴ２受体。     

Photooxidation of RPE lipofuscin bisretinoids enhances fluorescence intensity

Light-related cycling of chemically reactive vitamin A aldehyde leads to the formation autofluorescent bis-retinoid pigments that accumulate as lipofuscin in retinal pigment epithelial cells. The amassing of these diretinoid compounds is implicated in the pathogenesis of age-related macular degeneration and in some inherited forms of retinal degeneration. For all of these fluorophores, extended conjugation systems confer absorbance maxima in the visible spectrum. We report that an increase in fluorescence emission can accompany photoxidation of the bisretinoids A2E and all-trans-retinal dimer. These findings are relevant to the quantification of RPE lipofuscin based on inference from fluorescence intensity.     

RPE transplantation and its role in retinal disease

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation aims to restore the subretinal anatomy and re-establish the critical interaction between the RPE and the photoreceptor, which is fundamental to sight. The field has developed over the past 20 years with advances coming from a large body of animal work and more recently a considerable number of human trials. Enormous progress has been made with the potential for at least partial restoration of visual function in both animal and human clinical work. Diseases that have been treated with RPE transplantation demonstrating partial reversal of vision loss include primary RPE dystrophies such as the merTK dystrophy in the Royal College of Surgeons (RCS) rat and in humans, photoreceptor dystrophies as well as complex retinal diseases such as atrophic and neovascular age-related macular degeneration (AMD). Unfortunately, in the human trials the visual recovery has been limited at best and full visual recovery has not been demonstrated. Autologous full-thickness transplants have been used most commonly and effectively in human disease but the search for a cell source to replace autologous RPE such as embryonic stem cells, marrow-derived stem cells, umbilical cord-derived cells as well as immortalised cell lines continues. The combination of cell transplantation with other modalities of treatment such as gene transfer remains an exciting future prospect. RPE transplantation has already been shown to be capable of restoring the subretinal anatomy and improving photoreceptor function in a variety of retinal diseases. In the near future, refinements of current techniques are likely to allow RPE transplantation to enter the mainstream of retinal therapy at a time when the treatment of previously blinding retinal diseases is finally becoming a reality.     

EGF促进RPE细胞毒蕈碱受体诱导的磷酸肌醇形成：受体间交互作用分析

对培养人眼视网膜色素上皮（RPE）细胞磷酸肌醇（InsPs）水平的分析表明，Carbachol显著刺激RPE细胞InsPs水平的升高，且该效应可被阿托品所阻断，表明在人眼RPE细胞存在毒蕈碱受体。去甲肾上腺素、5-羟色胺、表皮生长因子（EGF）、异丙肾上腺素和NECA对InsPs基础水平无明显影响。异丙肾上腺素和NECA对Carbachol刺激InsPs的效应也无明显影响；但EGF显著促进Carbacol刺激人眼RPE细胞InsPs水平升高的效应。提示在人眼RPE细胞EGF与毒蕈碱受体之间存在有受体间交互作用。 （中华眼底病杂志，1994，10：220-222）     

新生期视网膜色素上皮细胞动态吞噬功能及其αvβ5受体表达的研究

目的观察新生期视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）结合和内吞感光细胞外节段（photoreceptor outer segment,POS）能力的变化,为指导临床防治RPE相关病变提供依据。方法体外培养新生牛RPE,采用第3代（传2代）近融合RPE,加入异硫氢酸荧光素（fluorescein isothiocyanate-POS,FITC-POS）悬液,分别观察孵育1h、2h、3h、4h、5h、6h时RPE结合和内吞POS情况,同时检测胞膜上参与结合的整合素受体—αVβ5的表达情况。结果与POS孵育1h时,新生期RPE以结合POS为主,未见明显吞噬现象,但至第2h和第3h后,其吞噬能力迅速增强,并缓慢增加,达到平台期。而新生期RPE在前2h内未见明显的内吞现象,至第3h、4h、5h迅速增加,之后达到平台期,新生期RPE上参与结合阶段的受体-αVβ5受体表达丰富。结论在新生期RPE的吞噬周期中,孵育后的第2h和第3h主要是结合阶段,第3～5h主要是内吞阶段,提示其已具备较好的吞噬功能。     

Regulated secretion of complement factor H by RPE and its role in RPE migration

Background  Variants in the gene for complement factor H (CFH) have been implicated as a major risk factor for the development of age-related macular degeneration (AMD). Little is known, however, about the factors regulating local expression and secretion of CFH by retinal pigment epithelial cells (RPE). Methods  Cultured human early passage RPE cells, highly differentiated, polarized human RPE cultures, and bovine RPE explants were incubated in the presence or absence of recombinant human or bovine interferon-γ (IFN-γ; 25 ng/ml). CFH expression in cell lysates, and secretion into culture supernatants were examined by Western blot. CHF expression and localization was analyzed by confocal microscopy. Migration assay was performed in a modified Boyden chamber with early passage human RPE cells after stimulation with recombinant CFH protein (1–100 ng/ml). Results  CFH was expressed in the cell lysates of RPE cells, and this expression was significantly upregulated by IFN-γ. Immunoreactivity for CFH was detected in RPE cells of bovine explants and highly differentiated human RPE monolayers, and the level of immunoreactivity increased after IFN-γ stimulation. Confocal microscopy revealed that CFH was predominantly localized in the apical cytoplasm of polarized human RPE. Western blot confirmed that IFN-γ increased CFH secretion into RPE supernatants. Dose-dependent RPE cell chemotactic migration was induced by CFH. Conclusion  IFN-γ promotes CFH expression in the apical compartment of RPE cells and increases secretion of CFH into RPE culture supernatants. Furthermore, CFH promotes chemotactic migration of RPE. This study suggests that interactions between CFH and IFN-γ have the potential to play a role in the pathogenesis of AMD. Shikun He contributed equally to the work, and therefore should be considered equivalent first author     

HTRA1基因过表达对视网膜色素上皮细胞增殖及迁移影响

目的 研究HTRA1基因过表达对人视网膜色素上皮细胞(RPE)的增殖和迁移能力的影响,探讨HTRA1基因在老年黄斑变性(AMD)发病中的作用.方法 用携带人HTRA1基因的慢病毒感染体外培养的人RPE细胞,荧光显微镜下观察细胞的感染效率,RT-PCR和Westem Blot检测HTRAlmRNA和蛋白的表达,MTT比色法检测感染细胞毒性及细胞增殖能力,TransweH小室检测细胞迁移能力变化.结果 与空载体慢病毒感染RPE细胞相比,HTRA1基因慢病毒感染的RPE细胞HTRA1mRNA和蛋白的表达量明显增加,细胞增殖能力及迁移能力均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 过表达HTRA1基因能抑制人视网膜色素上皮细胞的增殖及迁移,THRA1基因可能通过影响RPE细胞功能参与AMD的进程.