肝癌细胞VEGF转录调控的信号传导通路

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和p42／p44丝裂源激活的蛋白激酶(MAPK)在肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)转录调控中的作用。方法应用缺氧诱导剂氯化钴或重组人表皮生长因子(EGF)刺激HepG2细胞中VEGF的转录，在此过程中应用PI3K特异性阻断剂LY294002或p42／p44 MAPK特异性阻断剂PD98059干预，采用半定量逆转录PCR检测VEGF mRNA表达的变化。结果氯化钴或EGF可以诱导HepG2细胞中VEGF的表达。PI3K阻断剂LY294002可以在一定范围内浓度依赖性地抑制VEGF mRNA的表达，而p42／p44 MAPK阻断剂PD98059对VEGF mRNA的表达无抑制作用。结论肝癌细胞VEGF的转录调控受PI3K通路调控，而不受p42／p44 MAPK调控。     

肥胖乳腺癌患者癌组织中PI3K/Akt信号通路的活性及意义

目的：观察肥胖乳腺癌患者乳腺癌组织中磷酯酰肌醇3激酶（PI3K）/Akt信号通路的活性。 方法：选取45例肥胖乳腺癌患者（肥胖组）与37例正常体质量乳腺癌患者（对照组）的乳腺癌组织标本,分别用RT-PCR法检测两组乳腺癌组织中PI3K mRNA的表达,及免疫组化法检测PI3K和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白的表达。 结果：RT-PCR结果显示,肥胖组乳腺癌组织中PI3K mRNA表达较对照组明显增高（P<0.05）;免疫组化结果显示,肥胖组PI3K和p-Akt蛋白表达均明显升高（均P<0.05）,且PI3K与p-Akt蛋白表达水平在两种组织中均呈正相关（r=0.76,r=0.81,均P<0.05）。 结论：肥胖乳腺癌患者癌组织中PI3K/Akt信号通路活性明显高于非肥胖患者,故推测这可能是导致肥胖者乳腺癌风险增高的原因之一。     

氢吗啡酮后处理对大鼠心肌保护效应的机制：PI3K/Akt信号通路介导的自噬

目的:评价氢吗啡酮后处理对大鼠心肌保护效应的机制与磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路介导的自噬的关系。方法:健康雄性SD大鼠40只,体重220～250 g,采用随机数字表法分为5组( n＝8)：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、氢吗啡酮后处理组(HP组)、P...     

PI3K/Akt信号转导通路在EphB受体介导大鼠神经病理性痛中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号转导通路在EphB受体介导大鼠神经病理性痛中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠48只,体重150～180 g,2～3月龄,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8),C1组、E1组、C2组和E2组采用坐骨神经慢性压迫法(CCI)建立大鼠神经病理性痛模型,S1组和S2仅暴露坐骨神经.S1组和C1组分别于术前1h、术后1、2d时鞘内注射生理盐水5 μl,E1组给予EphB受体拮抗剂EphB1与IgG的重组体(EphB1-Fc)0.5μg;S2组和C2组于术后5d时鞘内注射生理盐水5μl,E2组给予EphB1-Fc0.5μg.各组分别于术前、术后1、3、5d时测定双侧热缩足潜伏期(PWL)和机械缩足阈值(PWT),计算非术侧与术侧PWL和PWT的差值(△PWL和△PWT).于术后5d测定痛阈结束后,取术侧L4-6节段脊髓,采用免疫组织化学法检测c-Fos、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平.结果 与S1组或S2组比较,C1组或C2组术后△PWL延长,△PWT增加,c-Fos、PI3K和p-Akt表达上调(P＜0.05);与C1组或C2组比较,E1组或E2组△PWL缩短,△PWT降低,c-Fos、PDK和p-Akt表达下调(P＜0.05).结论 EphB受体通过PI3K/Akt信号转导通路介导大鼠神经病理性痛的形成和维持.     

PI3K/Akt信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide-3 kinase/Akt,PI3K/Akt)信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖过程中的作用.方法 体外分离培养雪旺细胞,S-100免疫荧光鉴定;Western blot检测PI3K下游因子Akt磷酸化激活形式(p-Akt)的表达,并通过PI3K激酶抑制剂(wortmannin)阻断该通路后p-Akt的表达情况.结果 毗咯喹啉醌可使雪旺细胞发生形态学变化,加入吡咯喹啉醌后30 min即可检测到p-Akt的表达,4 h达高峰,12 h基本无表达;吡咯喹啉醌在1～100 nmol/L范围内可使p-Akt表达增加;加入wortmannin阻断PI3K后p-Akt上调表达消失(P<0.05).结论 吡咯喹啉醌可使雪旺细胞发生形态学变化,PI3K/Akt信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖过程中发挥重要作用.     

PI3K/Akt信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 体外培养SD乳鼠心肌细胞,接种于96孔板(细胞密度1×105/ml,200 μl/孔)或6孔板(细胞密度5×105/ml,2 ml/孔)中,采用随机数字表法,将细胞随机分为4组(n=24):常规培养组(C组)细胞常规培养6h;缺氧复氧组(H/R组)细胞行缺氧2h,复氧4h;缺氧复氧+异丙酚组(H/R+P组)于缺氧结束时行异丙酚(终浓度50 μmol/L)后处理;H/R+异丙酚+ PI3K抑制剂组(H/R+ P+W组)于缺氧结束时加入PI3K抑制剂渥曼青霉素(终浓度100nmol/L)和异丙酚(终浓度为50μmol/L).复氧结束时,采用MTT法测定细胞活力,应用生化自动分析仪测定培养液LDH活性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测心肌细胞磷酸化Akt(p-Akt)、Bcl-2及Bax表达水平.结果 与C组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡率升高,p-Akt和Bax表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).与H/R组比较,H/R+P组细胞活力升高,LDH活性和细胞凋亡率降低,p-Akt和Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P＜0.05).与H/R+P组比较,H/R+ P+W组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡率升高,p-Akt和Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).结论 异丙酚后处理减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的机制与激活PI3K/Akt信号通路有关.     

酸处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及PI3K/Akt信号通路在其中的作用

目的 评价酸处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在其中的作用.方法 清洁级SD大鼠70只,雌雄不拘,体重450-550 g,随机分为7组(n=10):缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组)、酸处理组(H+组)、缺血后处理+碱处理组(IPO+OH-组)、碱处理组(OH-组)、酸处理+渥曼青霉索组(H++wort组)和渥曼青霉素组(wort组).采用Langendorff装置行离体心脏灌注,采用全心停灌30 min、再灌注中性K-H液(pH值7.4)120 min的方法 制备大鼠离体心脏缺血再灌注模型.IPO组于再灌注即刻灌注中性K-H液15 s,停灌15 s,重复6次,行缺血后处理;H+组于再灌注即刻灌注经80%O2-20%CO2饱和的酸性K-H液(pH值6.9)3 min;IPO+OH-组于再灌注即刻灌注经100%O2饱和的碱性K-H液(pH值7.8)3min,并行缺血后处理;OH-组于再灌注即刻灌注碱性K-H液3 min;H++wort组于再灌注即刻灌注含100 nmol/L渥曼青霉素的酸性K-H液3 min;wort组于再灌注即刻灌注含100 nmol/L渥曼青霉素的中性K-H液3 min.于缺血前和再灌注30 min时记录左心室舒张末期压(LVEDP)和左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax);于再灌注30 min时测定冠状动脉流出液一氧化氮(NO)浓度;于再灌注120 min时,计算心肌梗塞区与缺血危险区的质量比,来表示心肌梗塞范围.结果 与I/R组比较,IPO组和H+组再灌注时LVEDP降低,±dp/dtmax升高,心肌梗塞范围减小,冠状动脉流出液NO浓度升高,OH-组、H++wort组心肌梗塞范围增加,wort组心肌梗塞范围增加,冠状动脉流出液NO浓度降低,IPO+OH-组LVEDP降低(P<0.05或0.01),±dp/dtmax、心肌梗塞范围和冠状动脉流出液NO浓度差异无统计学意义(P>0.05);IPO组与H+组上述指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 酸处理可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.其机制与激活PI3K/Akt信号通路有关.     

阿托伐他汀预处理对小鼠肠缺血再灌注损伤的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系

目的:探讨阿托伐他汀预处理对小鼠肠缺血再灌注损伤的影响及其与1-磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:健康雄性C57BL/6小鼠24只,6~8周龄,体重18~22 g,采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、阿托伐他汀预...     

吗啡后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及PI3K/Akt信号通路在其中的作用

目的 评价吗啡后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及磷脂酰肌醇-3激酶,蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在其中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠70只,体重280～330 g,年龄16～17周.随机分为5组(n=14):假手术组(S组)、缺血冉灌注组(IR组)、吗啡后处理组(M组)、渥曼青霉素+吗啡后处理组(w+M组)和渥曼青霉素组(W组).采用结扎左冠状动脉前降支45 min、再灌注120 min的方法 制备心肌缺血再灌注模型.S组仅穿线,不结扎;M组于再灌注前3 min和再灌注后2 min时经左颈内静脉注射吗啡1.25 mg/kg;W+M组于结扎左冠状动脉前降支前20 min时经左颈内静脉注射PI3K特异性阻断剂渥曼青霉素15μg/kg,并行吗啡后处理;W组于结扎左冠状动脉前降支前20 min时经左颈内静脉注射渥曼青霉素15 μg/kg.于左冠状动脉前降支阻断前即刻、阻断20 min和再灌注120 min(T1-3)时记录心率(HR)、平均动脉压(MAP)和心率.收缩压乘积(RPP);于再灌注120 min时各组随机取9只大鼠,计算心肌缺血和梗塞范围;其余5只大鼠采用Western blot法测定心肌组织总Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果 五组HR、MAP、RPP、心肌缺血范围和总Akt表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);与T1时比较,IR组、M组、S+M组和W组再灌注时MAP和RPP均降低(P<0.05);与S组比较,IR组和M组磷酸化Akt表达上调(P<0.05),W+M组和W组差异无统计学意义(P>0.05);与IR组比较,M组心肌梗塞范围缩小,心肌组织磷酸化Akt表达上调(P<0.01),W+M组和w组心肌梗塞范围差异无统计学意义(P>0.05).结论 吗啡后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,可能与进一步激活PI3K/Akt信号通路有关.     

脊髓糖皮质激素受体在吗啡耐受大鼠PI3K/Akt信号通路中的作用

目的 探讨脊髓糖皮质激素受体(GR)在吗啡耐受大鼠磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,8～ 10周龄,体重300 ～ 350 g,取鞘内置管成功的大鼠40只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=10):对照组(C组)鞘内注射生理盐水10μl;吗啡耐受组(M组)鞘内注射吗啡10 μg;地塞米松组(GR激动剂,DEX组)鞘内注射地塞米松4μg,30 min后注射吗啡10 μg; RU38486组(GR阻断剂,R组)鞘内注射RU38486 2 μg,30 min后注射吗啡10 μg.注射药物容量均为10μl,2次/d,连续7d.于每天第1次鞘内给药前和鞘内给药结束后1d测定甩尾潜伏期,计算最大抗伤害效应百分比( MPAE),最后一次甩尾潜伏期测定结束后,取脊髓背角组织,测定PI3K、Caspase-3的表达水平和Akt活性.结果 M组、DEX组和R组发生了吗啡耐受,C组未发生吗啡耐受.与C组比较,M组脊髓背角Akt活性降低,PI3K表达下调,Caspase-3表达上调(P＜0.01);与M组比较,DEX组MPAE和Akt活性降低,PI3K表达下调,Caspase-3表达上调,R组MPAE和Akt活性升高,PI3K表达上调,Caspase-3表达下调(P＜0.05).结论 脊髓GR可通过抑制PI3K/Akt信号通路参与吗啡耐受的形成.     

Ephrin-A1/Fc融合蛋白对人肝癌细胞系Huh-7生物学特性的影响

目的 探讨Ephritr-A1基因在肝细胞癌发生、发展以及血管生成中的作用.方法 人肝癌细胞系Huh-7分别经Ephrin-A1/Fc融合蛋白和IgG/Fc作用后,MTT法绘制细胞生长曲线,细胞基质黏附实验检测对细胞黏附能力的影响,Transwe11法检测细胞侵袭能力的改变.通过裸鼠移植瘤模型的建立检测Ephrin-A1/Fc融合蛋白对Huh-7细胞体内致瘤能力的影响,并计算瘤体的微血管密度(MVD),判断其对血管生成的影响.结果 Huh-7细胞的黏附率为(131.25±9.57)%,细胞侵袭实验显示Ephrin-A1/Fc融合蛋白作用后,穿过滤膜的细胞数.明显多于IgG/Fc组和空白对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05);裸鼠成瘤实验结果 显示,6周后Ephrin-A1/Fc组裸鼠体积为(186.35±16.24)mm3,其差异均有统计学意义(P<0.05);而瘤体内的MVD值Ephrin-A1/Fc也明显高于IgG/Fc组和空白对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05).Ephrin-A1/Fc融合蛋白对Huh-7细胞并无增殖促进作用(P>0.05).结论 Ephrin-A1基因在肝细胞癌的侵袭及血管生成的过程中发挥重要的作用,因此有望成为肝细胞癌基因治疗新的靶点.     

肝细胞癌中Ephrin-A1及其受体的表达与血管生成的关系

目的:探讨Ephrin-A1 及其受体与肝细胞癌血管生成之间的关系。方法:采用免疫组织化学SP法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测52例肝细胞癌（肝癌组）和癌旁组织（癌旁组）标本中Ephrin-A1及其受体EphA1和EphA2蛋白及mRNA的表达情况，并分析其与肝细胞癌的临床病理因素及微血管密度(microvessel density, MVD)之间的关系。结果:在52例肝癌组中 Ephrin-A1及其受体EphA1，EphA2的蛋白阳性表达率分别为59.6%(31/52)，53.8%(28/52)和17.3%(9/52),而癌旁组织中的蛋白阳性表达率分别为23.1%(12/52)，28.9% (15/52)以及21.2%(11/52)。Ephrin-A1及其受体EphA1在两组中的差异有统计学意义(P<0.05)，而EphA2在两组间的差异无显著性（P>0.05）。Ephrin-A1及其受体EphA1mRNA在肝癌组的阳性表达率为67.3%(35/52)和73.7%(38/52)，明显高于癌旁组中的阳性表达42.3%(22/52)和48.1% (25/52) (P<0.05)，而EphA2mRNA在两组间的差异无显著性（P>0.05）。Ephrin-A1蛋白的高表达与患者的甲胎蛋白(AFP)水平及有无门静脉癌栓有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示，在肝癌组中Ephrin-A1的表达与EphA1的表达呈正相关(r=0.671,P<0.01);而Ephrin-A1与EphA2的表达无相关性;肝癌组中Ephrin-A1的表达与MVD呈正相关(r=0.826,P<0.01)。结论:Ephrin-A1通过与其受体EphA1相结合，促进肝细胞癌的血管生成，从而促进肝细胞癌的生长、浸润和转移; Ephrin-A1及其受体EphA1有望成为肝癌抗血管生成治疗新的靶点。     

内皮祖细胞迁移与PI3K/Akt信号转导通路

PI3K/Akt信号转导通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过其上、下游多种效应分子的活化而影响内皮祖细胞迁移,在血管内皮损伤后修复和血管新生过程中起关键作用。该文就PI3K/Akt信号转导通路的上、下游信号通路的激活调节机制及其对内皮祖细胞迁移的影响,作一综述。     

黄连素通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制高糖条件下的肾脏系膜细胞增殖

目的：探讨黄连素（berberine,BBR）对高糖条件下的大鼠肾脏系膜细胞 HBZY-1 cells （MCS）增殖的影响及其作用机制。方法将对数生长期细胞分成正常糖处理组（NG 组）,高糖组（HG组）和黄连素组（BBR组）。NG组细胞体系常规培养培养,HG 组细胞体系加入40 mmol/L 葡萄糖,BBR组细胞培养体系中加入40 mmol/L葡萄糖＋黄连素30μmol/L。各组细胞培养48 h 后,利用MTT检测各组HBZY-1细胞增殖;RT-PCR检测各组细胞p85,Akt和mTOR基因表达;West-ern blotting检测细胞中 p85、p-p85、Akt、p-Akt,mTOR 和 Collagen-Ⅳ蛋白的变化。结果 NG 组与HG组增值率分别为（25%±3%）和（75%±5%）,与 NG组增值率比较,HG组肾脏系膜细胞增殖率明显增高（P〈0.05）,p85与 Akt mRNA表达水平和蛋白水平均无明显变化（P＆gt;0.05）,但 p-p85、p-Akt,Collagen-Ⅳ蛋白表达水平和 mTOR mRNA 表达与蛋白水平均明显增加（P〈0.05）;BBR 组增值率为（42%±5%）,与 HG 组比较,BBR 组肾脏系膜细胞增值率明显降低（P〈0.05）,但 p-p85、p-Akt、Collagen-Ⅳ蛋白表达水平和 mTOR mRNA 表达与蛋白水平均明显下降（P〈0.05）,而 p85和Akt mRNA和蛋白表达水平均无统计学差异（P〈0.05）。结论黄连素能抑制高糖导致的系膜细胞增殖,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活。     

PI3K/Akt信号转导通路在人参皂甙Rb1预先给药减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号转导通路在人参皂甙Rb1预先给药减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重250～300 g,采用腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病模型,造模成功的糖尿病大鼠48只,饲养8周后,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):心肌缺血再灌注组(I/R组)、人参皂甙Rb1预先给药组(R组)、人参皂甙Rb1预先给药+PI3K抑制剂渥曼青霉素组(RW组)和渥曼青霉素组(W组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型.RW组和W组于缺血前20 min静脉注射渥曼青霉素15μg/kg,R组和RW组于缺血前10 min静脉注射人参皂甙Rb1 40mg/kg.再灌注120 min时采集动脉血样,测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;然后处死大鼠,取心肌组织,采用四氮唑法测定心肌梗死面积;采用TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡,计算心肌细胞凋亡指数(AI);采用Western blot法测定心肌组织Akt和磷酸化Akt(p-Akt)表达.结果 与I/R组比较,R组血清CK和LDH活性、心肌梗死面积和心肌细胞AI降低,心肌组织p-Akt表达上调(P＜0.05);与R组比较,RW组血清CK和LDH活性、心肌梗死面积和心肌细胞AI升高,心肌组织p- Akt表达下调(P＜0.05).结论 人参皂甙Rb1预先给药通过PI3K/Akt信号转导通路减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

Exogenous p27KIP1 expression induces anti-tumour effects and inhibits the EGFR/PI3K/Akt signalling pathway in PC3 cells

p27 is a cyclin-dependent kinase inhibitor that regulates the progression of cells from G1 to S phase of the cell cycle. Loss of p27 has been associated with disease progression and with an unfavourable outcome in prostate cancer. In this study, we investigated whether exogenous p27 expression in the human androgen-independent prostate cancer PC3 cell line had any effect on cell growth, and we studied the molecular mechanisms involved. p27 expression was restored in PC3 cells by plasmid delivery. Cell proliferation and apoptosis were assessed in PC3 cells transfected with p27. We also investigated the effects of p27 on the epidermal growth factor receptor （EGFR）/ phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/Akt signalling pathway in PC3 cells. By restoring p27 expression in PC3 cells, we observed that p27 reduced proliferation and induced arrest in G0/G1 phase. Moreover, p27-transfected PC3 cells underwent apoptosis, as shown by flow cytometric analysis and western blotting analysis of Bcl-2, Bax, Bad, caspase-3 and poly（ADP-ribose）polymerase expression. Furthermore, the p27-induced anti-tumour action corre- lated with inhibition of the EGFR/PI3K/Akt signalling pathway, as confirmed by western blotting analysis and densitometry of EGFR, PI3K （p85）, Akt and p-Akts473 expression. Our results suggest that exogenous expression of p27 inhibits the proliferation of PC3 cells through induction of G1 arrest and apoptosis, and this process correlates with inhibition of the EGFR/PI3K/Akt signalling pathway.     

肿节风对人前列腺癌DU-145细胞PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的影响

目的:探讨中药肿节风溶液对人前列腺癌DU-145细胞PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的影响.方法 采用细胞培养的方法,用不同浓度的肿节风溶液作用于DU-145细胞48h,用MTT法检测肿节风溶液对DU-145细胞增殖的影响,用RT-PCR检测用药后细胞PI3K、Akt、mTOR和P70(S6K)的基因表达情况.结果:肿节风溶液作用48h后,DU-145细胞增殖受到抑制,并表现为量效关系;DU-145细胞的PI3K、Akt、mTOR和P70(S6K)的表达均呈不同程度的抑制,但不表现为量效关系.结论:肿节风溶液能抑制人前列腺癌DU-145细胞增殖,其抑制细胞增殖的机制与其抑制了细胞的PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的作用有关.     

PI3K/Akt信号通路在乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 Wistar乳鼠60只,乳鼠心肌细胞于24孔培养板原代培养后,采用缺氧2 h复氧2 h建立缺氧复氧模型.乳鼠心肌细胞随机分为6组,每组8孔,正常对照组(C组):按正常条件继续培养4 h;A/R组:制备缺氧复氧模型;EI组:于细胞缺氧前即刻在培养液中加入乳化异氟醚,终浓度为1.68 mmol/L;EI+wortmannin(PI3K特异性抑制剂)组(EIW组):于细胞缺氧前即刻在培养液中加入乳化异氟醚和wortmannin,终浓度分别为1.68 mmol/L和100 nmol/L;wortmannin组(W组):于细胞缺氧前即刻在培养液中加入wortmannin,终浓度为100 nmol/L;脂肪乳组(F组):与细胞缺氧前即刻在培养液中加入30%脂肪乳,终浓度为0.05%.复氧2 h时,取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌钙蛋白I(cTnI)浓度,心肌细胞匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,并测定心肌细胞磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平.结果 与C组比较,其余5组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量升高,心肌细胞SOD活性降低(P<0.05);与A/R组比较,EI组和EIW组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量降低,心肌细胞SOD活性升高,F组除心肌细胞SOD活性升高外(P<0.05),其余指标差异均无统计学意义(P>0.05),W组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与EI组比较,EIW组、W组和F组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量升高,心肌细胞SOD活性降低(P<0.05).C组、EIW组、H/R组、F组和EI组心肌细胞p-Akt表达水平依次升高(P<0.05).结论 乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤可能与进一步激活PI3K/Akt信号通路有关.     

PI3K/Akt信号转导通路在乌司他丁后处理减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号转导通路在乌司他丁后处理减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡中的作用.方法 择期CPB下心脏瓣膜置换术患者40例,性别不限,年龄21 ～ 59岁,心功能和ASA分级Ⅱ或Ⅲ级.采用随机数字表法,将患者分为2组(n=20):生理盐水对照组(C组)和乌司他丁后处理组(U组).U组于主动脉开放前5min经主动脉根部灌注乌司他丁4000～5000 U·kg-1 ·min-1(剂量1万U/kg);C组给予等容量生理盐水.于升动脉开放后45 min时取右心耳心肌组织,检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)与细胞色素c、caspase9、Bcl-2、Bax表达和细胞凋亡情况,并计算Bcl-2与Bax表达的比值(Bcl-2/Bax)和凋亡指数(AI).结果 与C组比较,U组心肌组织p-Akt与Bcl-2表达上调,心肌组织细胞色素c、caspase-9及Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高,AI降低(P＜0.05).结论 乌司他丁后处理通过激活PI3K/Akt信号转导通路减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡.     

磷脂酰肌醇3-激酶信号转导通路在胃肠道间质瘤中的表达及其意义

目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/Akt)信号转导通路在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及其意义.方法 用RT-PCR检测PI3K、Akt和PTEN在124例GIST及瘤旁正常组织中的mRNA水平,Western印迹法检测PI3K、Akt和PTEN蛋白在GIST中的表达.结果在GIST中,随着NIH分级增高,PI3K和Akt的mRNA表达水平上调,低危组分别为0.90、0.53,中危组分别为0.88、0.58,高危组分别为0.97、0.58(P<0.05或P<0.01);而抑癌基因PTEN的mRNA表达水平下调,低危组为0.44,中危组为0.37,高危组为0.32(P<0.05或P<0.01).三者阳性表达率与性别、年龄、组织学类型无关,与肿瘤侵袭转移和黏膜受侵关系密切.PI3K与Akt蛋白阳性表达之间呈显著正相关(r=0.292,P:0.031);PI3K与PTEN蛋白阳性表达之间呈显著负相关(r=-0.412,P=0.036);PTEN与Akt蛋白阳性表达之间呈显著负相关(r=-0.386,P=0.024).结论 PI3K/Akt与PTEN在GIST的发生发展中可能互相拮抗、共同作用,可能是恶性肿瘤生长、侵袭、转移的重要指标.