rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞的生物学效应

目的 制备rhBMP—2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统，检测其对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物学效应。方法 采用改良的乳化溶液聚合法制备rhBMP—2纳米微球；采用MTT法检测微球对BMSCs的增殖状况的影响；碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性以反映微球对其分化状况的影响，并与单纯rhBMP—2的作用进行比较。结果 该微球缓释系统有生物活性，能显著促进BMSCs的增殖及分化，并呈剂量依赖性。其效应高于单纯施加rhBMP—2的效应。结论 在组织工程技术中应用生长因子缓释系统的作用明显优于单纯生长因子的作用。     

rhBMP2纳米缓释系统的制备及其对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响

目的：制备甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐（dex-GMA）载重组人骨形态发生蛋白2（rhBMP2）凝胶纳米微球（NPs）缓释系统,检测其理化及生物学特性.方法：采用改良乳化溶液聚合法,制备rhBMP2纳米微球（rhBMP2-dex-NPs）;观察其形态、粒径与稳定性,检测其载药、释药特征;采用体外细胞培养技术,将rhBMP2-dex-NPs和兔骨髓间充质干细胞一起培养,MTT法检测其对细胞增殖状况的影响,碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒检测细胞ALP活性,以反应rhBMp2-dex-NPs对其分化状况的影响,并与单纯rhBMP2的作用进行比较;实验按照培养液中所含成分不同分为4组：培养液中加入单纯rhBMP2（A组）、加入rhBMP2-dex-NPs（B组）、加入空白NPs（C组）和对照组（D组）,其中A、B 2组均分别按照rhBMP2的不同量设置100μg/L、200μg/L、400μg/L 3个浓度组,采用SPSS 10.0对结果进行统计学分析.结果：rhBMP2-dex-NPs大小均匀,粒径分析表明,80%的纳米球粒径在20nm左右,包封率高达83%,80%的rhBMP2在前12d释放;其具有良好的生物学活性,能显著促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖和分化,效应高于单纯施加rhBMP2的效应（P＜0.01）.rhBMP2-dex-NPs与BMSCs共培养3d内,反应BMSCs增殖和分化的OD值与A组无显著差异（P＞0.05）,但显著高于C、D组（P＜0.01）;3d后,rhBMP2-dex-NPs对细胞增殖和分化的促进作用较单纯rhBMP2明显加快;5～7d后,A、B组差异具有显著性（P＜0.01）;12d左右,B组细胞仍然有较强的增殖与分化能力,与其他3组有非常显著差异（P＜0.001）,而此时A、C、D组间差异已无统计学意义（P＞0.05）.结论：所制备的rhBMP2-dex-NPs形态良好、包封率高,理化与生物学性能稳定,可以达到对生长因子的良好缓释,比单纯rhBMP2对BMSCs有更为明显的生物学效应,可以持续促进其增殖与分化达10d以上,在组织工程领域有着广阔的应用前景.     

重组人骨形成蛋白-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞增殖分化影响的实验研究

目的明确重组人骨形成蛋白(rhBMP)-2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和分化的影响。方法在rhBMP-2纳米微球作用于BMSCs后,采用嗜银蛋白(AgNORs)染色法检测细胞的增殖状况;采用反转录PCR方法,观察细胞中骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原mRNA水平表达的改变以反映对细胞分化的影响,并与单纯rhBMP-2作用细胞后的结果进行比较。结果该纳米微球缓释系统能显著促进BMSCs的增殖以及细胞中骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原mRNA水平的表达,且均高于单纯rhBMP-2的作用。结论rhBMP-2纳米微球缓释系统促进BMSCs增殖以及向成骨细胞方向分化的作用强于单纯rhBMP-2的作用。     

rhBMP-2-PLA纳米微球的制备及生物学效应观察

目的:制备rhBMP-2-PLA纳米微球缓释系统,观察其对兔成骨细胞的生物学效应。方法:采用复乳-干燥法制备rhBMP-2纳米微球,观察其一般特性,并模拟体内条件研究BMP-PLA纳米微球的体外缓释特性。采用MTT法检测微球对成骨细胞增殖状况的影响,并与单纯rhBMP-2的作用进行比较。结果:纳米微球表面光滑圆整,球体大小均匀,平均粒径为45 nm,rhBMP-2-PLA纳米微球的包封率和载药量分别为(90.67±1.23)%和[(134.65±0.44)×10-3]%,微球体外释药符合Higuichi方程。该微球缓释系统有生物活性,能显著促进兔成骨细胞的增殖,其效应高于单纯施加rhBMP-2的效应。结论:rhBMP-2-PLA纳米微球缓释系统的作用明显优于单纯rhBMP-2,在骨创伤的治疗中有良好的前景。     

bFGF聚乳酸纳米微球对兔成骨细胞增殖的影响

目的：观察碱性成纤维生长因子聚乳酸纳米微球缓释系统（bFGF—PLA—Ns）对体外培养的兔成骨细胞的增殖影响。方法：体外培养兔成骨细胞并鉴定,将bFGF—PLA—Ns和成骨细胞一起培养,采用MTr法检测微球对成骨细胞增殖状况的影响,免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）在成骨细胞中表达,并与单纯bFGF的作用进行比较。结果：bFGF—PLA—Ns具有良好的生物活性,能显著促进兔成骨细胞的增殖,其效应高于单纯施加bFGF的效应。结论：制备的bFGF—PLA—Ns比单纯的bFGF有更为显著的生物学效应,在骨创伤的治疗中有良好的前景。     

复合重组人骨形态发生蛋白-2缓释微球的引导组织再生膜的制备

目的设计制备包含活性生长因子的引导组织再生生物膜(以下称功能性复合膜)。方法利用天然材料右旋糖酐(dextran,dex)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dextran-glycidylmethacrylate,dex-GMA)作为重组人骨形态发生蛋白-2(recombinedhumanbonemorphogeneticprotein-2,rhBMP2)新型缓释载体,采用乳化交联技术制备dex-GMA凝胶微球,考察其形态、溶胀系数、载药、释药及降解性能;以壳聚糖为材料,复合载rhBMP2的dex-GMA凝胶微球制备生物膜并对其进行生物学评价。结果dex-GMA在一定条件下可以成球;该凝胶微球溶胀、载药和降解性能良好,体外释药可达20d以上,利用简单的工艺就可以制备复合rhBMP2缓释载体的功能性复合膜,其理化性能与没有复合该缓释载体的生物膜没有变化。结论利用生长因子缓释载体可以制备功能性复合膜,其生物学性能有待进一步研究。     

重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的:研究重组人骨形成蛋白2 (rhBMP2) 对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs) 的生物学作用。方法:原代培养HPDLFs ,并观察rhBMP2 对HPDLFs 增殖、碱性磷酸酶(ALP) 活性、骨钙素(OC) 合成及矿化结节形成的作用。结果:0125～2 mgPml rhBMP2 对HPDLFs 的增殖无明显作用,015～2 mgPml rhBMP2 显著提高HPDLFs 的ALP 活性,刺激OC合成和矿化结节形成。结论:rhBMP2 对HPDLFs 的作用具有剂量依赖性。rhBMP2 能够刺激HPDLFs 表达成骨细胞表型并促进其表型成熟。     

TGFβ和rhBMP2对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的 研究转化生长因子β（TGFβ）和重组人骨形成蛋白2（rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs)增殖和分化的作用。方法 观察TGFβ和rhBMP2单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性，骨钙素（OC）合成及矿化结节形成的作用。结果 TGFβ刺激HPDLFs增殖，对ALP活性，OC合成和矿化结节形成无明显影响；rhBMP2对HPDLFs增殖无明显作用。却显著提高其ALP活性，刺激OC合成和矿化结节形成；两者同时应用时对细胞增殖和分化的作用居于单独作用之间；先应用TGFβ对随后rhBMP2的促分化作用无明显影响；先应用rhBMP2再应用TGFβ对HPDLFs的分化具有显著的刺激作用。结论 RhBMP2能刺激HPDLFs表达成骨细胞表型，TGFβ对BMP2诱导的细胞分化具有明显的刺激作用。两者可能在促进HPDLFs向成骨细胞表型分化的不同阶段发挥作用。     

rhBMP-2及其纳米微球缓释系统对成骨细胞钙结节影响的实验研究

目的 :观察rhBMP 2聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微球缓释系统对成骨细胞钙结节的影响。方法 :培养诱导成骨细胞形成钙结节 ,并对其行特异性染色 ;在rhBMP 2纳米微球对钙结节作用后 ,采用扫描电镜观察其表面形态的改变 ,采用能谱仪分析比较其组成成分的改变。结果 :rhBMP 2纳米微球能明显促进钙结节形成 ,且rhBMP 2纳米微球作用后钙结节中钙磷含量显著高于单纯rhBMP 2组。结论 :rhBMP 2纳米微球缓释系统促进成骨的作用优于单纯rhBMP 2。     

rhBMP-2微球温敏型凝胶剂的药剂学特征及对人PDLCs增殖的影响

目的：观察rhBMP-2微球温敏型凝胶的药剂学特征及对人牙周膜细胞（PDLCs）增殖的影响。方法：采用W／O／W型乳化溶剂挥发法以聚乳酸-乙醇酸共聚物（PLGA）为材料制备空白微球,通过吸附法制备rhBMP-2载药微球。以单甲基聚乙二醇-羟基乙酸共聚物（MPEG—PLGA）为材料制备凝胶,采用夹心酶联免疫吸附法测定释药速度。采用四唑盐比色法（MTT）及酶动力学法测定细胞增殖和碱性磷酸酶活性。结果：rhBMP-2微球呈规则球形,表面多孔,粒径为（19．6±2.3）μm,微球凝胶剂相转变温度为36℃左右,微球凝胶剂体外释药曲线符合Higachi方程,28d的累积释放度为80％。rhBMP-2微球凝胶剂能明显促进牙周膜细胞的增殖和提高ALP活性,随时间推移在第10d时rhBMP微球凝胶促PDLCs生长的作用明显强于rhBMP溶液。结论：rhBMP-2微球温敏型凝胶剂具有明显的缓释特征,与溶液剂相比促进PDLCs增殖作用更持久。     

载他克莫司可注射温敏水凝胶促牙髓干细胞成骨向分化作用研究

目的:研究载他克莫司可注射温敏水凝胶(FK506-TH)对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响.方法:酶消化法体外分离培养hDPSCs,CCK-8法检测不同浓度FK506FK506-TH对hDPSCs增殖的影响,采用Real-time PCR、茜素红S和碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨分化能力的影响.结果...     

神经生长因子对体外培养的人牙乳头间充质细胞ALP活性的影响

目的：观察神经生长因子（nerve growth factor NCGF)对人牙乳头间充质细胞ALP活性的影响。方法：酶组织化学法，结果：100U／ml NGF,在培养3d时即显著刺激人牙乳头间充质细胞ALP活性，培养5d和7d时，刺激作用进一步加强，且ALP活性在培养5、7d时明显高于3d者。NGF（100U／ml)在各培养时间点，对照组细胞ALP的分泌差异不显著。结论：NGF对人牙乳头间充质细胞ALP活性的刺激作用可能在成牙本质细胞的分化过程中具有重要意义。而促进细胞局部环境ALP的分泌可能与细胞间基南的生物矿化过程有关。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

神经生长因子对人牙髓细胞增殖与分化作用的研究

目的 研究神经生长因子对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化作用的影响。方法 组织块法行人牙髓细胞的原代培养后，采用四唑盐比色法和酶动力学方法，测定不同浓度（1、10、100U／mL）的神经生长因子对体外培养的第5-8代人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的作用。结果 与对照组相比，10U／mL的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖（P〈0．05）；100U／mL的神经生长因子可显著促进碱性磷酸酶的活性（P〈0．01）。结论 不同浓度的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖与分化。     

人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞与人牙周膜干细胞成骨分化能力的对比研究

目的:比较人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesechymal stem ceils,hUCWJMSCs)与人牙周膜干细胞(periodontal mesenchymal stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力.方法:体外培养hUC-WJMSCs和hPDLSCs.MTT法检测细胞增殖情况;成骨诱导后测定细胞的ALP活性,茜素红染色检测细胞矿化能力,Real-timePCR分析OPN和Runx2基因的表达.结果:hUCWJMSCs增殖能力高于hPDLSCs;经矿化诱导后hPDLSCs ALP表达、矿化结节形成高于hUCWJMSCs(P＜0.05);Runx2在hPDLSCs中表达高于hUCWJMSCs(P ＜0.05);而hUCWJMSCs中OPN表达高于hPDLSCs(P＜0.05).结论:hUCWJMSCs、hPDLSCs均具有成骨分化能力,hPDLSCs成骨分化能力较强.     

Leptin对人牙周膜细胞骨向分化作用的实验研究

目的探讨瘦素(leptin)对人牙周膜细胞增殖和骨向分化的作用。方法采用酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用不同浓度梯度的leptin处理细胞,通过四唑盐(MTT)比色试验和碱性磷酸酶活性测试,检测leptin对细胞体外增殖分化的影响。将人牙周膜细胞与羟基磷灰石/磷酸三钙材料作为复合体,植入BALBc免疫缺陷裸鼠,12周后采用组织学和免疫组化法检测裸鼠体内生成物。结果体外实验leptin对人牙周膜细胞增殖有明显抑制作用,但leptin能促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性表达。体内试验中leptin可提高牙周膜细胞生成类骨质的能力。结论 leptin抑制牙周膜细胞的增殖活性,但可明显促进牙周膜细胞骨向分化。