非小细胞肺癌11个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化的研究

目的观测11个基因在非小细胞肺癌中的甲基化谱,探讨肺癌基因诊断的新途径.方法应用甲基化特异性的PCR（methyl-specific PCR,MSP）.方法检测甲基化率,回收产物测序.结果11个基因中有6个基因在癌组织中的甲基化率均＞40%并且高于癌旁组织,6个基因的甲基化率分别是APC 61%,RASSF1a 55%,p73 45%,p16INK4a 43%,CDH13 43%及RAR-β 41%,＞65岁组RASSF1a、p16INK4a和RAR-β甲基化率高于≤65岁组;吸烟史组APC、RASSF1a、p16INK4a和CDH13的甲基化率高于无吸烟史组;腺癌组APC、CDH13和RAR-β甲基化率高于鳞癌组,而鳞癌组p16INK4a甲基化率高于腺癌组;RASSF1a和p16INK4a甲基率随TNM 临床分期而逐渐增加.结论6个基因甲基化率的发生具有肿瘤特异性,并且相关基因的甲基化与NSCLC患者的病理生理密切相关,我们的研究为早期诊断NSCLC提供帮助.     

p16基因甲基化联合检测在肺癌诊断中的意义

目的 探讨检测外周血血浆、痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)、胸腔积液以及活检组织中p16基因启动子异常甲基化对肺癌诊断的临床意叉.方法 利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测2007年4月至2008年5月柳州市第三人民医院收治的67例怀疑肺癌患者的外周血血浆、痰液、BALF、胸腔积液以及活检组织中p16基因的甲基化状态.结果 42例确诊肺癌患者p16基因异常甲基化阳性例数在胸腔积液、活检组织、BALF、血浆和痰液中依次为10例(71.4%)、26例(61.9%)、25例(59.5%)、22例(52.4%)和20例(47.6%),各个标本的阳性率差异无统计学意义(P>0.05);25例确诊良性病变患者中除在血液、活检标本和胸腔积液中各检测到1例异常甲基化外,其余标本中均未检测到p16基因的异常甲基化,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).联合不同标本检测p16基因甲基化能提高肺癌的诊断阳性率,以3～4个标本联合检测较好(P<0.05).结论 MSP方法检测外周血血浆、痰液、BALF、胸腔积液以及活检组织中p16基因启动子的甲基化状态,对肺癌具有辅助诊断价值;联合不同标本检测p16基因甲基化能提高肺癌诊断的敏感性.     

恶性浆膜腔积液脱落细胞中P21 ras蛋白表达状况及其意义

目的:检测浆膜腔积液脱落细胞P21 ras蛋白表达状况,探讨其对恶性浆膜腔积液的诊断价值.方法:将新鲜浆膜腔积液离心后收集脱落细胞,取部分细胞涂片进行常规细胞学诊断,据此将积液分为良性与恶性两组.对余下脱落细胞作"标准化"处理,包括去除红细胞、多聚甲醛固定、调整细胞浓度、制备细胞涂片,然后进行P21 ras蛋白免疫化学染色(SP法).结果:共108例浆膜腔积液,恶性53例,良性55例.39例恶性积液P21 fas蛋白免疫化学染色阳性(73.6%),且多为强阳性或阳性;12例良性积液P21 ras蛋白染色阳性(21.8%),且多为弱阳性或阳性,两组间阳性率(χ2=29.02,P＜0.001)及阳性强度(Uc=6.786,P＜0.001)的差异均有显著性统计学意义.P21 ras蛋白免疫化学染色诊断恶性积液的敏感度为73.6%,特异度为78.2%,诊断符合率达75.9%.结论:浆膜腔积液中脱落细胞P21 ras蛋白免疫化学染色在肿瘤细胞多为阳性,良性细胞多为阴性,对恶性体腔积液的诊断有较大的价值.     

老年非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液中视黄酸受体-β基因甲基化与P53突变的相关性

目的探讨非小细胞肺癌老年患者支气管肺泡灌洗液内P53基因特定位点的突变及视黄酸受体(RAR)-β基因的甲基化与肺癌的关系,并分析两者相关性。方法非小细胞肺癌老年患者97例为癌症组,同时选取非肺癌老年患者89例为正常组。取其支气管肺泡灌洗液标本,进行基因组DNA的提取,同时采用特异性引物对P53基因特定的位点进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,通过一代测序技术对P53基因特定的位点进行测序验证;同时采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)对RAR-β基因甲基化水平进行检测。结果癌症组支气管肺泡灌洗液中P53基因突变发生率(43.30%)与对照组(7.87%)差异有统计学意义(P<0.05);癌症组RAR-β基因甲基化率(53.61%)显著高于对照组(17.98%,P<0.05);肺癌组Ⅲ期和Ⅳ期RAR-β基因甲基化水平及P53基因突变发生率均显著高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05);Ⅰ期和Ⅱ期肺癌老年患者中RAR-β基因甲基化阳性率显著高于P53基因突变发生率(P<0.05);RAR-β基因甲基化的老年患者P53基因突变发生率显著升高(P<0.05);P53基因突变的阳性老年患者RAR-β基因甲基化阳性率明显提高(P<0.05);RAR-β基因甲基化和P53基因突变的发生呈正相关(P<0.05,r=0.521)。结论 P53基因突变率与RAR-β基因甲基化水平在非小细胞肺癌中显著升高,提示其在老年癌症发生发展中有重要作用,通过检测其变化或许有利于肺癌早期诊断。     

p16基因高甲基化在胃癌发展中的作用

目的:通过检测胃癌、癌前病变和正常对照组中p16基因启动子区CpG岛甲基化水平及其表达,并结合临床病理资料,分析他们在胃癌发生、发展中的作用.方法:用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测41例胃癌组织、40例癌前病变组织和38例正常对照组织中p16基因启动子5′CpG岛甲基化;应用免疫组化检测基因的蛋白表达.结果:胃癌组织中p16基因甲基化阳性率为56.1%(23/41),癌前病变组织中为17.5%(7/40),而正常对照组织中为2.6%(1/38),前组与后两组之间的差异有显著性(P<0.05).胃癌组织中p16基因表达阳性率为51.2%,癌前病变组织中为90.0%,正常对照组织中为100.0%,前组与后两组之间的差异有显著性(P<0.05).低分化型胃癌组织中的p16基因甲基化阳性率明显高于高分化型(81.3%vs 40.0%,P<0.05).有淋巴结转移的胃癌组织中,p16基因甲基化阳性率与无转移组的差异有显著性(81.0%vs 30.0%,P<0.05).浸润深达浆膜层的胃癌组织中,甲基化阳性率与未达浆膜层组无统计学差异(60.0%vs 52.4%,P>0.05).胃癌组织中p16基因甲基化阳性组的蛋白表达阳性率显著低于甲基化阴性组(26.1%vs 83.3%,P<0.01).结论:胃癌组织中存在有p16基因启动子5′CpG岛高甲基化,并导致其基因表达率显著低于正常对照及癌前病变组织.p16基因的高甲基化与胃癌分化程度、淋巴结转移相关.p16基因甲基化的发生,从正常、癌前病变到胃癌有逐渐增加的趋势,提示其基因CpG岛高甲基化有可能作为诊断早期胃癌的一项较为敏感的指标.     

肝内和肝外胆管癌肿瘤抑制基因启动子甲基化分析

目的探讨胆管癌的表遗传学改变。方法用甲基化特异PCR(MSP)法，检测了12个候选肿瘤抑制基因(APG E-cadherin／CDH1，MGMT，RASSF1A，GSTP，RAR-β，P14^ARF，p15^INK4b，p16^IND4a，p73，hMLH1，DAPK)启动子在72例胆管癌中的甲基化情况，其中肝内和肝外胆管癌各36例，10例良性胆管上皮作为对照。结果85％的胆管癌至少有一个肿瘤抑制基因的甲基化，在胆管癌中，肿瘤抑制基因的甲基化顺序是：RASSF1A(65％)，p15^IND4b(50％)，p16^INK4a(50％)，APC(46％)，E．cadherin／CDH1(43％)，p14^ARF(38％)，p73(36％)，MGMT(33％)，hMHL1(25％)，GSTP(14％)，RAR-β(14％)和DAPK(3％)。虽然单个肿瘤抑制基因的甲基化可见于良性胆管上皮，但是多个肿瘤抑制基因的甲基化只见于胆管癌。约70％(50／72)的胆管癌有3个或3个以上的肿瘤抑制基因的甲基化，52％(38／72)有4个或4个以上肿瘤抑制基因的甲基化。多个肿瘤抑制基因的协同甲基化，和RASSF1A，p15^INK4b，p16^INK4a和／或hMHL1密切相关。RASSFIA的甲基化在肝外胆管癌(83％)较肝内胆管癌更常见(47％)(P=0．003)，而GSTP更多见于肝内胆管癌(肝内3l％，肝外6％，P=0．012)，本研究提示肿瘤抑制基因启动子CpG岛的甲基化在胆管癌中是一个常见的表遗传学改变，从这些基因甲基化情况来看，肝内和肝外胆管癌密切相关，但在肿瘤发生上具有不同生物学特点。结论利用特异的多基因协同甲基化检测，可以鉴别良恶性的胆管病变。     

巢式MSP法检测胃癌患者血浆p16、MGMT基因甲基化

目的:探讨胃癌患者血p16和MGMT基因启动子区甲基化状态.方法:采用巢式甲基化特异性PCR法(nestedmethylation-specific PCR,nMSP)对6例胃癌患者血浆中p16和MGMT基因启动子区甲基化状态进行研究.同时以16例健康体检作为对照.结果:在受检的69例胃癌患者中,p15、MGMT基因启动子区甲基化率分别为30.4%(21/69)、17.4%(12/69).对照组未见p16、MGMT基因启动子区甲基化.胃癌患者血浆中存在p16和MGMT基因启动子区甲基化,其中p16基因启动子区甲基化与对照组相比差异显著,具有统计学意义.结论:检测血浆循环DNA中p16、MGMT基因启动子区的甲基化状态,可为胃癌的早期分子诊断提供了有用信息.     

联合检测血清、浆膜腔液多项肿瘤标志物的诊断价值

目的探讨联合检测血清、浆膜腔积液多项肿瘤标志物对浆膜腔积液性质的诊断价值。方法应用放免法分别检测血清、浆膜腔积液中ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ５０、ＣＡ１９－９及计算浆膜腔积液／血清（ｄ／ｓ）值。共检测７１例,分为恶性积液、恶性肿瘤伴良性积液、结核性积液、非结核性良性疾病伴积液四组。结果ＣＡ１２５在结核组与恶性积液组血清、积液中均有较高的阳性率。积液中ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ５０、ＣＡ１９－９至少一项以上阳性并ｄ／ｓ值＞１．５,恶性积液诊断率达９８５％。积液中ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ５０、ＣＡ１９－９中至少一项以上阳性并ｄ／ｓ值＜０．６７,恶性肿瘤伴良性积液诊断率９８３％。积液中ＣＡ１２５阳性并ｄ／ｓ值＞１．５而ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ５０、ＣＡ１９－９均阴性诊断结核性浆膜腔积液诊断率１００％。结论联合检测血清、浆膜腔积液中的ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ５０、ＣＡ１９－９、ＣＡ１２５及计算其ｄ／ｓ值,对恶性积液、恶性肿瘤伴良性积液及结核性积液的鉴别诊断有重要临床价值。     

癌胚抗原和C-反应蛋白联合检测在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的意义

目的探讨肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)和C反-应蛋白(CRP)联合检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中的临床意义。方法采用免疫放射法分别检测23例恶性胸腔积液(恶性组)和35例良性胸腔积液患者(良性组)胸水样本中CEA含量和CRP水平,并进行对比分析。结果恶性组患者胸水样本中CEA含量明显高于良性组(P<0.05),CRP水平明显低于良性组,差异有统计学意义(P<0.001),采用胸水中CEA含量及CRP联合检测诊断良、恶性胸腔积液的灵敏度、特异性和准确率分别为65.7%、70%和67.2%。结论联合检测胸腔积液中CEA和CRP水平在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中具有重要的临床价值。     

p16基因启动子区甲基化在人嗜铬细胞瘤和副神经节瘤中的变化

目的 检测嗜铬细胞瘤(PHEO)和副神经节瘤(PGL)中p16基因突变和启动子区DNA甲基化改变,分析其与患者临床特征之间的关系.方法收集34例(PHEO 20例、PGL14例)组织标本及患者临床资料,通过甲基化特异性PCR(MSP)测定p16基因启动子区甲基化状态,DNA测序检测基因序列以及RT-PCR方法测定其mRNA表达.结果 (1)34例肿瘤组织中未发现p16基因纯合缺失及点突变;(2)35.3%(12/34)的患者存在p16基因高甲基化,p16基因甲基化阳性标本中,PHEO和PGL分别占25%和75%,两者差异有统计学意义(P=0.005);p16基因甲基化在恶性、单发肿瘤、发病年龄早的亚组中有增高趋势(P＞0.05);(3)甲基化与非甲基化肿瘤组织之间p16 mRNA表达无统计学差异;不同特点的肿瘤中其mRNA表达亦无统计学差异,但恶性肿瘤p16 mRNA表达与良性肿瘤相比有下降的趋势(0.83±0.65对1.12±0.81,P=0.278).结论人PHEO和PGL中,p16基因纯合缺失和突变并不常见,但p16基因启动子区甲基化是其失活的主要形式.     

非小细胞肺癌hTERT与p16基因甲基化的表达

目的 探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发病中的作用.方法 应用实时荧光定量RT-PCR法和甲基化特异性PCR法检测45例NSCLC组织、21例肺正常组织hTERT和p16基因甲基化的表达.结果 NSCLC、正常肺组织hTERT mRNA的表达分别为2.854±0.728、2.042±0.378,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);NSCLC组织、肺正常组织p16基因甲基化阳性率分别为57.8%、14.3%(P<0.01).hTERT mRNA与NSCLC病理类型相关,p16基因甲基化与NSCLC细胞分化程度及淋巴结转移相关(P均<0. 05).结论 hTERT与p16基因甲基化存在相关性,hTERT和p16基因甲基化的表达与NSCLC的发生、发展有关.     

细胞块技术应用质量控制方法对恶性浆膜腔积液诊断效能探讨

目的探讨细胞块病理技术在恶性浆膜腔积液细胞学诊断应用中的价值、存在的问题及质控方法,以进一步提高细胞块病理诊断的准确性。方法选择2016-02～2018-02该院276例恶性浆膜腔积液,均进行传统细胞学涂片(conventional smear,CS)和质控前常规细胞块技术(routine cell block,RCB)操作流程,对RCB切片诊断中可疑或阴性病例按预设5项主要质量控制指标再行质控后细胞块制备技术(quality control in cell block technology,QCCB)切片检查,将三者诊断结果进行对比分析,比较三者结果的准确性,分析各自存在的问题。结果 276例恶性浆膜腔积液中用CS确诊恶性肿瘤218例(78.99%),其中确诊恶性且肿瘤分类明确199例(72.10%)。RCB确诊恶性肿瘤233例(84.42%),其中确诊恶性且肿瘤分类明确225例(81.52%)。QCCB确诊恶性肿瘤272例(98.55%),其中确诊恶性且肿瘤分类明确270例(97.83%),无误诊或漏诊病例。RCB相对于CS能提高恶性肿瘤诊断率5.43%,提高分型诊断准确率9.42%,但两者差异无统计学意义(P0.05)。QCCB相对于CS和RCB,在提高确诊恶性肿瘤和分型诊断准确率方面差异均有统计学意义(P 0.05)。结论细胞块技术在恶性浆膜腔积液细胞学病理诊断中显著优于传统细胞学,加强细胞块病理技术各环节质量控制有利于减少不确定诊断,并有助于避免误诊和漏诊。     

多基因甲基化检测对结直肠癌早期诊断的意义

目的 通过对结直肠癌（CRC）组织中多基因甲基化水平的检测,探讨多基因甲基化对CRC早期诊断的意义.方法 选取25例CRC患者胃镜采集标本组织,通过甲基化特异性PCR（MSP）检测CRC和炎性组织中甲基化水平,分析其与CRC患者临床各指标的关系.结果 在CRC患者中,APC、P16、MLH1、DCC甲基化率分别为52.0%（13/25）、32.0%（8/25）、44.0%（11/25）、60.0%（15/25）.炎性组织中仅有1例DCC甲基化异常表达,甲基化率为10.0%（1/10）,甲基化阳性率显著高于炎性组织（P＜0.05）,4种基因甲基化联合检测诊断CRC的阳性率为92.0%（23/25）,高于单个基因检测的甲基化阳性率,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 APC、P16、MLH1、DCC基因在CRC患者中甲基化水平异常表达,联合检测APC、P16、MLH1、DCC可能作为CRC早期诊断的标志物.     

多发性骨髓瘤患者p16基因甲基化及砷剂诱导去甲基化的研究

目的探讨p16基因启动子区CpG岛甲基化在多发性骨髓瘤(MM)患者发病中的作用以及三氧化二砷(As2O3)诱导p16基因的去甲基化作用。方法采用巢式甲基特异性PCR法检测MM患者以及利用As2O3作用前后人MM细胞株U266的p16基因的甲基化状态,RTPCR检测U266细胞用药前后p16基因mRNA的表达变化,生长曲线、MTT法检测As2O3对细胞的生长和增殖抑制。利用流式细胞仪检测DNA含量分析法探讨As2O3对骨髓瘤细胞系U266周期的影响。结果MM患者p16基因的甲基化比例为54.8%,U266细胞存在p16基因甲基化,p16基因不表达,As2O3作用后p16基因甲基化程度明显减弱至消失,与未处理组相比,不同剂量作用72h后p16基因表达阳性条带灰度值与βactin比值分别为0.22±0.10、0.59±0.11、0.68±0.09,阳性对照灰度比值为0.77±0.13,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论p16基因甲基化在MM患者中较为常见,这可能为MM的诊断和治疗提供借鉴;As2O3可诱导p16基因去甲基化,使p16基因表达上调,恢复其活性,为去甲基化治疗提供新思路。     

非小细胞肺癌患者血清DAPK基因、p16基因甲基化的联合检测

目的 分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中死亡相关蛋白激酶（DAPK）、p16启动子区域甲基化的改变状况及其联合检测的意义.方法 运用甲基化特异性PCR技术,检测89例NSCLC患者血清DAPK、p16基因启动子区域甲基化的改变情况,并分析与临床病理资料的关系.结果 NSCLC患者血清DAPK基因甲基化检出率为30.3%（27/89）,p16基因甲基化检出率为43.8%（39/89）,联合检测两基因甲基化检出率为76.4%（68/89）,而正常对照组和良性肺部疾病组血清未检出DAPK基因、p16基因甲基化,DAPK基因、p16基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显关系.结论 DAPK基因、p16基因检出启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标志物之一.联合检测两基因优于各单基因检测.     

TuM2-PK、CEA、ADA和LDH在鉴别诊断恶性胸腔积液中的价值

目的探讨胸腔积液癌胚抗原(CEA)、丙酮酸激酶M2型(TuM2-PK)、腺苷脱氨酶(ADA)和乳酸脱氢酶(LDH)在鉴别诊断恶性胸腔积液中的价值。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测恶性胸腔积液36例、良性胸腔积液38例中的CEA及TuM2-PK含量。采用酶法进行ADA、LDH含量测定。结果 (1)恶性组胸腔积液中CEA、TuM2-PK水平显著高于良性组(P<0.01)。(2)恶性组胸腔积液中ADA水平低于良性组(P<0.05)。(3)恶性组胸腔积液中LDH水平与良性组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胸腔积液TuM2-PK、CEA和ADA联合检测有助于恶性胸腔积液临床诊断。     

随机、开放、平行对照、多中心评价重组人腺病毒P53治疗恶性浆膜腔积液的临床研究

目的探讨浆膜腔内注射重组人腺病毒P53注射液(r Ad-P53)治疗晚期肺癌恶性浆膜腔积液的临床疗效及不良反应。方法选择西安交通大学医学院第二附属医院、西安交通大学医学院第一附属医院及长安医院等多家医院2012年1月至2015年10月临床确诊晚期肺癌合并恶性浆膜腔积液患者107例,随机分为两组,Ⅰ组56例浆膜腔内注射r Ad-P53,Ⅱ组51例浆膜腔内注射顺铂和白介素-2,所有患者均可辅以放疗、化疗或靶向等全身治疗。分析两组患者治疗疗效及不良反应。结果经治疗Ⅰ组病例中有43例有效,有效率为76.8%;Ⅱ组病例中有18例有效,有效率为35.3%。Ⅰ组有效率高于Ⅱ组,差异有统计学意义(P0.001)。Ⅰ组比Ⅱ组疗效好。I组各种不良反应发生率分别为发热30.4%(17/56)、头痛3.6%(2/56)、恶心1.8%(1/56)、白细胞减少0%(0/56)、肝功能异常7.1%(4/56),Ⅱ组各种不良反应发生率分别为发热11.8%(6/51)、头痛5.9%(3/51)、恶心11.8%(6/51)、白细胞减少7.8%(4/51)、肝功能异常15.7%(8/51),比较Ⅰ组和Ⅱ组间各种不良反应的发生率,发热和白细胞减少的发生率,差异均有统计学意义(P0.05),而头痛、恶心、肝功能异常的发生率,差异均无统计学意义(P0.05)。结论浆膜腔内注射r Ad-P53治疗晚期肺癌恶性浆膜腔积液是一种有效、副作用极少的治疗方法。     

胰岛素瘤抑癌基因p27的表达及其与CpG岛甲基化表型的关系

目的 探讨胰岛素瘤抑癌基因p27的表达及其与CpG岛甲基化表型(CpG island methylation phenotype,CIMP)间的关系.方法 用免疫组化方法检测27例胰岛素瘤组织及11例瘤旁正常胰腺组织中p27的表达.用甲基化特异性PCR (MSP)方法检测这些组织中p16、MLH1、RAR-β、MGMT、THBS1基因的甲基化状态.分析p27表达、CIMP与临床病理参数间的相关性.结果 胰岛素瘤组织p27蛋白表达阳性率较瘤旁胰腺组织显著降低(48％比91％,P=0.008).胰岛素瘤组织的高CIMP发生率为33％(9/27),瘤旁正常胰腺组织的高CIMP发生率为18％(2/11),肿瘤组织为正常胰腺组织的2倍,但差异无统计学意义(P =0.350).胰岛素瘤的MGMT甲基化与p16的甲基化呈显著负相关(P=0.004),胰岛素瘤的p27表达与高CIMP呈负相关的趋势,但差异无统计学意义(P =0.420);p27的表达和CIMP的发生与胰岛素瘤的临床病理参数均无显著相关性.结论 胰岛素瘤p27表达下调,并存在高CIMP,提示p27的失活和多基因的表观遗传学异常在该肿瘤的发生过程中可能起一定作用.     

前列腺癌组织中多基因异常甲基化检测及临床意义

目的 探讨前列腺癌组织中RARβ2、GSTP1和DAPK基因异常甲基化,与前列腺临床病理特征间的关系,及其在前列腺癌诊断中价值.方法 采用巢式甲基化特异性PCR(nestedmethylationspecificpolymerasechainreaction,NMSP)法对57例前列腺痛组织和35例良性前列腺增生(BPH)组织进行甲基化检测;分析其甲基化的发生与前列腺癌临床病理特征间的关系,以及在前列腺癌诊断中价值.结果 前列腺癌组织中RARβ2、GSTPI和DAPK基因甲基化检出率显著高于BPH组织(RARβ32:52.6%对0%;GSTPl:61.4%对2.9%;DAPK:43.9%对8.6%;均P<0.01).RARβ2基因甲基化率在前列腺癌不同Gleason评分和不同临床分期之间差异有统计学意义(4～7分对8～10分:34.8%对64.7%,B、C期对D期:37.0%对66.7%,x2=4.927和x2=5.004,P=0.026和P=0.025);GSTP1基因甲基化率在不同Gleason评分间差异有统计学意义(4～7分对8～10分:43.5%对73.5%,x2=11.530,P=0.001),而在不同临床分期之间差异无统计学意义(B、C期对D期:51.9%对70.0%,x2=1.975,P=0.16);DAPK基因甲基化率在不同Gleason评分和不同临床分期之间差异均无统计学意义(4～7分对8～lO分:39.1%对50.0%,B、C期对D期:33.3%对53.3%,x2=1.290和x2=2.309,均P>0.05).GSTP1基因诊断敏感度最高为61.4%(35/57),特异度为97.1%(34/35);RARβ2基因特异度最高为100%(35/35),敏感度为52.6%(30/57);DAPK基因的诊断敏感度和特异度分别为43.9%和91.4%(25/57和32/35).而RARβ2、GSTP1和DAPK基因甲基化联合检测能明显提高前列腺癌诊断敏感度,但诊断特异度却有所下降.结论 RARβ2、GSTP1和DAPK基因异常甲基化与前列腺癌的发生与发展相关,可作为前列腺癌的诊断有效指标之一.     

肿瘤相关基因启动子甲基化在非小细胞肺癌细胞株中的作用研究

目的探讨基因甲基化在肺癌发生中的作用。方法南京医科大学附属南京第一医院呼吸科、复旦大学附属中山医院肺科和上海市肿瘤研究所于2004年10月至2005年12月应用甲基化特异性的多聚酶链反应(MSP)和RT-PCR检测甲基化的发生和mRNA的转录水平。结果肺癌细胞株A549部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、RASSF1a和CDH1等,完全甲基化的靶点包括MGMT、CDH13等;SH-77部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、WT1和CDH1等,完全甲基化的靶点包括RASSF1a和MGMT;SPC-A1部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、CDH1、MYOD1和CDH13等,完全甲基化的靶点包括WT1和RAR-β。RASSF1a、WT1、MYOD1、MGMT和RAR-β等5个基因发生甲基化的细胞株其mRNA的转录水平均低于未发生甲基化的细胞株甚至完全不转录。结论NSCLC细胞株中抑癌基因经常发生启动子CpG岛的甲基化,并且甲基化可能与抑癌基因mRNA转录水平下降相关。