赖氨大黄酸通过激活JNK诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法用MTT法检测细胞增殖;用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡相关蛋白及JNK蛋白与蛋白磷酸化水平。结果 RHL能有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并能诱导其凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够激活caspase-3、caspase-7和PARP,并激活磷酸化的JNK表达,磷酸化的JNK表达增加在RHL的诱导凋亡中起主要作用。结论 RHL通过激活JNK-caspase-PARP信号通路抑制HeLa细胞增殖,并诱导其凋亡,赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的问题,有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。     

下调宫颈癌细胞FAM111B表达对增殖、周期和凋亡的影响

目的观察下调FAM111B对宫颈癌细胞系C-33A和HeLa增殖、细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法应用慢病毒载体siRNA-FAM111B及Null,分别感染C-33A和HeLa细胞。实时定量PCR方法(qRTPCR)和Western blot方法分别检查各组细胞FAM111B基因与蛋白的表达。应用CCK-8方法检测FAM111B对细胞增殖能力的影响。流式细胞术PI染色细胞周期检测各组细胞周期变化。流式细胞术Annexin V/PI双染方法检测各组细胞的凋亡情况。Western blot法检测p53及下游Bax和Bcl-2的表达。结果成功转染C-33A和HeLa细胞,FAM111B基因与蛋白表达水平均下调。转染siR-FAM111B能抑制宫颈癌细胞的增殖,C-33A和HeLa细胞发生G1期阻滞。下调FAM111B诱导宫颈癌细胞凋亡,促进p53蛋白表达,进而上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达。结论下调FAM111B抑制宫颈癌细胞的增殖,促使细胞周期G1期阻滞,诱导细胞凋亡,与调节p53蛋白进而激活下游相关信号通路相关。     

13-甲基十四烷酸诱导膀胱癌细胞株T24 凋亡的机制研究

目的： 研究13-甲基十四烷酸诱导膀胱癌T24细胞凋亡的作用,探讨其可能的机制。方法：将不同浓度的13-甲基十四烷酸作用于膀胱癌T24细胞,用MTT法检测细胞增殖, 流式细胞仪（FCM）检测细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡指数,蛋白免疫印迹法分析参与凋亡的蛋白。结果：药物处理2 h后p38、JNK磷酸化增强,AKT磷酸化减弱,8 h后线粒体中细胞色素C释放,FADD及磷酸化FADD没有明显变化,caspase酶底物 PARP、lamin B、RB在12 h出现明显的裂解片段,且药物诱导T24细胞凋亡的过程有时间浓度依赖效应。结论：在13-MTD诱导T24细胞凋亡的过程中p38MAPK和JNK/SAPK信号通路被激活,PI3K/AKT信号通路被抑制,进而激活线粒体凋亡途径,使线粒体内的细胞色素C释放到胞浆,激活caspase酶,裂解相应的凋亡底物lamin B、Rb、PARP,促进T24细胞凋亡。     

甲基乙二醛对Jurkat细胞氧化应激及分泌细胞因子的影响

目的:探讨甲基乙二醛(MGO)对Jurkat细胞氧化应激及分泌细胞因子的影响。方法:不同浓度MGO作用PHA预刺激的Jurkat细胞,MTT检测细胞生长,流式细胞检测细胞内活性氧(ROS),Western blot检测p38 MAPK、JNK磷酸化水平,ELISA检测TNF-α、IFN-γ。结果:15~60μmol/L MGO对Jurkat细胞生长无影响,但能使ROS呈浓度依赖性升高;N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)和氨基胍(AG)能明显抑制此作用。MGO作用30分钟,pp38/p38、pJNK/JNK明显升高。MGO诱导Jurkat细胞分泌TNF-α、IFN-γ;P38、JNK抑制剂及NAC能降低TNF-α、IFN-γ的分泌。结论:MGO能诱导Jurkat分泌TNF-α、IFN-γ;其机制可能通过氧化应激、P38、JNK信号通路。     

沉默Notch1基因促进人乳腺癌MCF-7细胞JNK1和p53磷酸化

 目的：探究沉默Notch1基因对人乳腺癌MCF-7细胞JNK1和p53磷酸化的影响。方法：选取人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,构建shRNA-Notch1真核表达质粒用于转染MCF-7细胞使Notch1基因沉默。采用Western blotting方法检测MCF-7细胞Notch1、Hes-1、PUMA和NOXA蛋白的表达,JNK1和p53蛋白磷酸化水平以及caspase-3活化水平的改变。应用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。结果：人乳腺癌MCF-7细胞Notch1基因被沉默后,Notch1和Hes-1蛋白表达量明显减少(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),JNK1和p53的磷酸化水平明显高于对照组(P<0.01),PUMA和NOXA表达量显著升高(P<0.05),cleaved caspase-3蛋白明显多于对照组(P<0.01),线粒体膜电位明显下降(P<0.05)。结论：沉默Notch1基因可能通过激活JNK1信号通路活化p53,促进PUMA和NOXA蛋白表达,进而通过线粒体途径导致人乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

氯喹对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响

目的 探讨氯喹(CQ)对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将HeLa细胞分为对照组(不加药物)和实验组(氯喹-1组至氯喹-5组,分别用25、50、75、100、150μmol/L CQ处理)。细胞均培养24和48 h; CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS产生;流式细胞测量术检测细胞凋亡率。蛋白免疫印迹检测自噬蛋白p62、LC3和Beclin1,凋亡蛋白Bax、Bcl-2和PARP以及PI3K/AKT/MDM2通路蛋白的表达水平。结果 CQ呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);CQ显著抑制细胞自噬活性,诱导胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,CQ可明显抑制PI3K/AKT/MDM2信号通路的激活(P<0.05)。结论 氯喹可能通过PI3K/AKT/MDM2通路抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

氧化应激在乙醛引起的心肌细胞凋亡中的作用

目的： 探讨活性氧（ROS）的氧化损伤机制在经乙醛诱导心肌细胞凋亡过程中的作用，阐明氧化应激水平增高导致细胞凋亡可能是乙醇性心肌病（AHMD）的主要原因之一。 方法: 体外培养大鼠心肌细胞，分别用乙醇（100 μmol/L）和乙醛（100 μmol/L）干预24 h，比较细胞凋亡程度；检测48 h内细胞胞内ROS水平变化、胞外分泌SOD活性变化；并用Western blotting技术检测ROS介导MAPK信号途径相关蛋白磷酸化水平变化；并与氧化剂H2O2处理组和预先加入抗氧化剂乙酰半胱氨酸（NAC）的乙醛处理组比较。 结果: 乙醇和乙醛分别干预心肌细胞24 h后，凋亡途径激活因子caspase 3均被激活(P<0.05)，乙醛较乙醇具有更强的诱导凋亡作用（P<0.05）。乙醛诱导心肌细胞ROS水平增高呈时间依赖性，相应抗氧自由基SOD酶活性也随之增高，分别于18-24 h达到峰值。同时，ROS通过JNK和ERK磷酸化水平增高而激活MAPK途径，诱导心肌细胞凋亡，这种效应可以被NAC逆转，等浓度乙醛弱于H2O2的诱导作用。结论: 乙醛通过增高胞内ROS水平损伤心肌细胞，激活ROS介导JNK途径诱导细胞凋亡。其作用弱于H2O2等强氧化剂，提示降低细胞ROS 水平，阻断凋亡信号通路可有效抑制乙醛诱导的心肌凋亡，对于AHMD临床预防和治疗具有指导意义。     

三叶青黄酮诱导髓系白血病NB-4细胞凋亡及信号通路的研究

目的:研究三叶青黄酮(RTHF)对人急性早幼粒细胞白血病NB-4细胞活力、凋亡及MAPK信号通路的影响。方法:采用CCK-8法及BrdU实验分别检测RTHF对NB-4细胞活力及增殖的影响;流式细胞术检测RTHF诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期的作用。Western blot分析RTHF对细胞凋亡及MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。结果:RTHF有效地抑制NB-4细胞的活力及增殖,呈时间和剂量依赖性,作用48 h的IC_(50)为2.26 g/L。RTHF阻滞NB-4细胞进入增殖周期,停滞在G_2期,并诱导其凋亡(P0.01),呈剂量依赖性。RTHF下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax、caspase-3和Cyt-C的表达,呈剂量依赖性(P0.05)。RTHF对ERK1/2及JNK的表达无明显影响,但可降低ERK5蛋白表达,提高p38的表达水平(P0.05)。结论:RTHF在体外有效地抑制白血病NB-4细胞活力及增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过p38 MAPK信号通路及凋亡蛋白途径。     

汉黄芩素对人口腔鳞状细胞癌细胞生长和侵袭的影响

目的:探讨汉黄芩素对人口腔鳞状细胞癌SCC-4细胞生长和侵袭的影响及其作用机制。方法:使用不同浓度(0、20、40、60、80和100 mg/L)的汉黄芩素处理SCC-4细胞不同时间,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路的活化。结果:汉黄芩素呈剂量及时间依赖性地抑制细胞生长,同时诱导细胞大量凋亡,抑制细胞的侵袭。汉黄芩素明显抑制了细胞中β-catenin的活化,同时其下游靶分子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达水平降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加。用Wnt/β-catenin通路激动剂Li Cl处理后,汉黄芩素抑制的Wnt/β-catenin通路分子活化明显增强,同时细胞生长能力明显增强,而凋亡能力降低,还明显减弱了汉黄芩素对细胞侵袭能力的抑制作用。结论:汉黄芩素主要通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来调控口腔鳞状细胞癌细胞的生长及侵袭进程,具有一定的抗口腔鳞状细胞癌发展的作用,可成为临床上口腔鳞状细胞癌防治的潜在药物。     

顺铂通过p66Shc-线粒体信号通路诱导人肾小管上皮细胞凋亡

 目的：探讨p66Shc-线粒体信号通路在顺铂诱导的人肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法：体外培养人肾小管上皮细胞,Western blotting法检测顺铂对p66Shc及磷酸化p66Shc(Ser36)蛋白表达的影响,然后将细胞分为对照组、顺铂组及顺铂+p66ShcS36A（第36位Ser突变为Ala的p66Shc）组,用激光共聚焦显微镜观察p66Shc对顺铂诱导的细胞活性氧簇、线粒体活性氧簇及细胞凋亡的影响,Western blotting法检测线粒体凋亡信号通路相关蛋白的表达。结果：顺铂促进p66Shc蛋白磷酸化,对p66Shc蛋白表达无影响;顺铂诱导细胞凋亡,细胞及线粒体活性氧簇产生增加,细胞色素C释放,caspase-9表达增加,p66ShcS36A可以抑制顺铂诱导的细胞氧化损伤及凋亡。结论：顺铂通过p66Shc-线粒体信号通路诱导人肾小管上皮细胞凋亡。     

过表达JNK2增强SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖及抗凋亡能力

目的探讨c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)或JNK2过表达对SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法将JNK1、JNK2分别与p HBAD-EF1-MCS-3FLAG-CMV-GFP载体结合,构建JNK1和JNK2的重组腺病毒表达载体,感染SCL-1细胞,优化感染条件,实时荧光定量PCR和Western blot法鉴定过表达效果。CCK-8法测定SCL-1细胞的增殖活性,细胞克隆形成实验观察细胞集落形成能力,划痕实验检测细胞划痕愈合率;流式细胞术检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测JNK1、JNK2、c-Jun mRNA水平; Western blot法检测磷酸化c-Jun的蛋白水平。结果 JNK1、JNK2过表达腺病毒载体最佳感染条件为感染复数(MOI)=100,感染48 h后,SCL-1细胞的JNK1和JNK2的表达水平显著升高。与对照组相比,过表达JNK1对SCL-1细胞的增殖和抗凋亡能力无显著影响,过表达JNK2的SCL-1细胞增殖和抗凋亡能力明显增强,且磷酸化c-Jun蛋白水平上调。结论过表达JNK2可以增强SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖能力和抗凋亡能力。     

曲古抑菌素A通过JNK/MAPK信号通路介导乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡

目的　探讨TSA对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。 方法　采用MTT、克隆形成、流式细胞术检测TSA对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学功能的影响;Western Blot 和qRT-PCR 检测细胞增殖、凋亡和MAPK信号通路蛋白及mRNA 的表达水平的影响;抑制JNK通路检测可能的作用机制。 结果　TSA呈剂量依赖性抑制细胞增殖和诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期;TSA可上调P21、Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白及mRNA表达,下调Cyclin D1、Cdk4、Bcl-2蛋白及mRNA表达;抑制JNK通路后,p-JNK蛋白和细胞总凋亡率降低,Caspase-3、Bax蛋白及mRNA表达减少,Bcl-2蛋白及mRNA表达增多。 结论　TSA通过MAPK信号通路介导JNK的磷酸化,调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡。     

枸橼酸铁铵通过提高ROS水平激活MAPK通路并诱导成骨细胞凋亡

 目的：探讨铁超载提高人成骨细胞(hFOB1.19)活性氧（ROS）水平在激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路和诱导细胞凋亡中的作用。方法：采用细胞贴壁法培养成骨细胞hFOB1.19,将不同浓度枸橼酸铁铵(100、300、500 μmol/L)加入细胞培养基,用MTT法检测成骨细胞增殖活性;DCFH-DA荧光探针检测成骨细胞ROS水平;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Western blotting检测MAPK通路相关蛋白。结果：枸橼酸铁铵处理成骨细胞后,细胞增殖活性明显降低,早期凋亡和总死亡率显著增加;不同浓度的枸橼酸铁铵处理成骨细胞后,其ROS水平分别增高至(35.73±2.52)%、(62.89±4.24)%和(76.06±3.55)%,MAPK通路相关蛋白的表达也明显增加并呈剂量效应关系,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以在降低ROS水平及MAPK通路相关蛋白表达的同时抑制枸橼酸铁铵所致的细胞凋亡。结论：枸橼酸铁铵能使成骨细胞增殖受到抑制,并且通过增加细胞内ROS水平,激活MAPK通路,诱导成骨细胞凋亡。     

胡椒碱抑制LPS活化的人结肠腺癌细胞SW480表达IL-8的作用机制研究

目的研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)活化的人结肠腺癌细胞SW480表达炎症因子的调节效应及可能的作用机制。方法采用WST-1法检测PIP对SW480细胞增殖的作用,利用流式微球捕获蛋白定量技术(cytometric beads array,CBA)检测炎症因子的蛋白表达水平,以实时定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子mRNA的表达水平,免疫印迹法检测p38MAPK信号通路和JNK信号通路的活化水平。结果 PIP处理可剂量依赖性地抑制SW480细胞的增殖,但PIP对细胞的毒性较小;CBA检测结果显示PIP以剂量依赖性方式抑制LPS诱导的SW480细胞中IL-8的分泌;实时定量RT-PCR检测显示,LPS+PIP处理组与LPS刺激组相比,IL-8的mRNA表达水平明显下降;免疫印迹分析表明,PIP可抑制LPS诱导的p38和JNK MAPK信号通路的活化水平。结论 PIP能够抑制LPS激活的人结肠腺癌细胞SW480中IL-8的分泌从而发挥抗炎作用,其机制可能与抑制p38和JNK MAPK信号通路有关。     

青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的：探究青藤碱（SIN）通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法：培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果：LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高（P<0.05）;Bcl-2、P62蛋白水平均降低（P<0.05）。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控（P<0.05）。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用（P<0.05）。结论：SIN可通过调控JNK/cJun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。     

赖氨大黄酸通过抑制EGFR信号通路诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡

目的 研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖、凋亡的影响及EGFR信号通路在其中的作用.方法 应用MTT法检测RHL对CaSki细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测EGFR信号通路蛋白表达水平及其蛋白磷酸化水平.结果 RHL能有效抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,48和72 h的ⅠC50值分别是84.57 μmol/L和74.79μmol/L,RHL能诱导CaSki细胞凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够抑制EGFR、AKT蛋白磷酸化,并显著下调NF-κB、BCL-2及Survivin蛋白的水平(P＜0.01),同时RHL还上调BAX蛋白的表达(P＜0.01).结论 RHL可能通过EGFR/AKT/NF-κB/Survivin信号通路诱导CaSki细胞凋亡.     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

JNK抑制剂对D-氨基葡萄糖衍生物诱导人食管癌Eca-109细胞周期阻滞和凋亡的影响

目的 观察特异性C-JUN氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)诱导的Eca-109细胞凋亡和细胞周期阻滞的影响,并探讨COPADG诱导Eca-109细胞凋亡的潜在分子机制.方法 体外培养Eca-109细胞,以COPADG及SP600125与细胞作用;Western blot法检测P-JNK蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期.结果 COPADG显著增加Eca-109细胞P-JNK蛋白的表达和细胞凋亡率,且诱导Eca-109细胞发生G0/G1期细胞阻滞,SP600125明显减少Eca-109细胞凋亡,并使G0/G1期细胞阻滞向G2/M期细胞阻滞发展.结论 COPADG可能通过激活JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡.     

细胞凋亡相关的信号通路

目前研究较多的细胞凋亡信号通路有wnt及JNK两条。Wnt信号通路有经典wnt通路,wnt/PCP通路和wnt/钙离子通路三个分支,引起细胞凋亡的机制主要有β-连环蛋白/tcf的转录调节途径,APC激活途径两种。JNK信号通路通过MKKKs-MKKs-MAPK转导。激活的JNK信号通路通过磷酸化转录因子、细胞骨架相关蛋白、酶等多种底物来调节细胞的生理过程,最终导致细胞凋亡。     

p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的：探究p53对核仁应激诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法：体外培养SKOV3细胞，根据实验药物不同分成4个实验组：control组、BMH-21（核仁应激诱导剂）组、pifithrin-α(PFT-α;p53抑制剂)+BMH-21组和RG7112（抑制p53降解并激活p53通路）+BMH-21组。MTT法检测细胞活力；免疫荧光染色检测细胞中p53蛋白定位和表达水平，以及BMH-21诱导的核仁应激的发生；Western blot法检测蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：MTT结果显示，BMH-21组细胞活力比control组显著下降（P<0.01）,PFT-α+BMH-21组细胞活力与BMH-21组相比无显著变化（P>0.05），而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著下降（P<0.01）；荧光显微镜观察发现，BMH-21组p53蛋白表达水平比control组显著升高，PFT-α+BMH-21组p53蛋白表达水平比BMH-21组显著降低，而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高，且大部分入核堆积；Western blot结果...