芍药苷对小鼠脾细胞增殖及分泌细胞因子的影响及机制

目的:研究芍药苷对体外小鼠脾细胞增殖及细胞因子的作用,探讨其对细胞免疫功能的影响及机制。方法:昆明种小鼠颈椎脱臼处死,体外培养小鼠脾细胞,不同质量浓度的芍药苷溶液(62.5,12.5,250,500,1 000 mg·L-1),另设空白组,分别于培养3,6,9 d时取出细胞培养板,采用血球计数板计数细胞数法测定不同浓度芍药苷对小鼠脾细胞增殖活性的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中白细胞介素-2(IL-2),干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;作用9 d后取细胞,Western blot方法测定IL-2,IFN-γ,TNF-α和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达;500 mg·L-1芍药苷溶液作用5 d后,流式细胞仪(FCM)检测细胞表型变化。结果:在3,6,9 d,不同浓度芍药苷给药组的脾淋巴细胞增殖活性均高于空白组(P0.01);各给药组IL-2,IFN-γ,TNF-α的含量较空白组明显升高(P0.05,P0.01),并随芍药苷浓度的增加而增加;淋巴细胞表型分析显示,芍药苷能够刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖;不同质量浓度芍药苷能够升高IL-2,IFN-γ,TNF-α和NF-κB蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:芍药苷可通过激活NF-κB表达,促进细胞因子IL-2,IFN-γ和TNF-α的分泌和表达,促进细胞增殖,提高机体免疫功能。     

胀果甘草多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

目的:研究胀果甘草多糖Gi P-B1对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生IL-2、IL-13、TNF-α等细胞因子的影响。方法:采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测不同浓度Gi P-B1单独作用及其与有丝分裂原Con A、LPS共同作用对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;采用酶联免疫吸附实验(ELSA)法检测不同浓度Gi P-B1体外刺激对小鼠脾淋巴细胞诱生白介素-2(IL-2)、白介素-13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子的影响。结果:Gi P-B1在25~100μg/m L浓度范围内能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,并与Con A、LPS协同促进T、B淋巴细胞增殖,还能诱导脾淋巴细胞分泌l L-2、TNF-α。结论:Gi P-B1具有免疫增强作用。     

冰香散对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响

目的 观察冰香散挥发油对甲Ⅰ型流感病毒(H1N1)感染小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,探讨其影响机体免疫应答的作用机制。方法 冰香散挥发油不同途径给药(滴鼻、雾化)对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠干预性给药,用CCK-8法检测冰香散对刀豆蛋白A(ConA)、革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖(LPS)诱导T、B淋巴细胞增殖的影响;酶联免疫法(ELISA)检测冰香散对白介素-4(IL-4)、白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关细胞因子的影响。结果 与正常对照组比较,模型组H1N1对小鼠脾B淋巴细胞增殖有明显的抑制作用(P < 0.05),明显提升了TNF-α、IFN-γ和IL-2等相关致炎因子的水平(P < 0.05),而对IL-4等抗炎因子提升并不明显;利巴韦林对感染小鼠脾B淋巴细胞增殖有明显的增强作用(P < 0.01),明显提高IL-4和IFN-γ的水平,同时降低TNF-α水平(P < 0.05);冰香散滴鼻能促进感染小鼠脾B淋巴细胞的增殖(P < 0.05),抑制IL-2和TNF-α的分泌(P < 0.05);冰香散雾化能促进感染小鼠脾T淋巴细胞的增殖(P < 0.05),促进IL-4和IFN-γ产生的同时,抑制IL-2的分泌(P < 0.05)。结论 冰香散挥发油对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠脾细胞活性有一定的促进作用,对Th1/Th2免疫平衡有一定的调节作用,但不同给药途径(滴鼻、雾化)的抗病毒免疫机制有所不同。     

艾叶多糖对小鼠免疫细胞分泌细胞因子及其活性的影响

目的 为了探索艾叶多糖对体外培养脾细胞以及巨噬细胞分泌细胞因子或细胞因子活性的影响.方法 常规提取艾叶多糖,体外与培养的小鼠脾细胞以及腹腔巨噬细胞共孵育,通过对L929靶细胞的杀伤力以及胸腺细胞增殖法分别测定脾细胞培养上清液中细胞因子TNF和IL-2的活性,ELISA法检测巨噬细胞培养上清液中细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量.结果 一定浓度的艾叶多糖能明显提高小鼠脾细胞分泌的TNF和IL-2的活性(P＜0.01),对小鼠巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α无影响(P＞0.05).结论 艾叶多糖调节免疫功能的部分药理作用与其提高脾细胞的TNF和IL-2细胞因子活性有关.     

羧甲基茯苓多糖对小鼠T淋巴细胞分泌细胞因子的影响

目的：探讨羧甲基茯苓多糖（CMP）对小鼠T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10的影响。方法：CMP溶液给小鼠腹腔注射，10天后取外周血分离T细胞，体外将不同浓度的CMP与T细胞共培养，MTT法观察其对T细胞的毒性作用，ELISA法检测IFN-γ、IL-10的含量。结果：CMP在0～500μg／ml对小鼠T细胞无明显毒性作用，CMP能显著提高IFN-γ水平，降低IL-10含量。结论：CMP具有较好的调节Th1／Th2细胞因子分泌作用。     

金钗石斛多糖提取工艺的优化及对小鼠脾细胞增殖的影响

目的:优化金钗多糖的提取工艺,并研究其对小鼠脾细胞增殖的影响。方法:采用单因素试验和L9(34)正交试验法考察了提取时间、提取温度和料液比对金钗石斛多糖得率的影响,并用MTS/PMS法测定其对小鼠脾细胞增殖的影响。结果:金钗石斛多糖的最佳提取工艺条件为液料比45∶1,提取温度90℃,提取时间2.5 h;金钗石斛精制多糖、金钗石斛粗制多糖能直接促进脾细胞的增殖,且两者能显著增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞的增殖,在此最佳工艺条件下金钗石斛粗多糖得率为2.80%。结论:金钗石斛多糖能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与Con A,LPS对T,B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用。     

关黄柏总多糖的分离纯化及其对小鼠脾细胞增殖的影响

目的:分离纯化关黄柏总多糖,研究纯化组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法:采用DEAE Cellulose 52,DEAE-Sepharose F.F,Sephacryl S-400等载体对关黄柏总多糖进行分离纯化,高效凝胶过滤色谱法鉴定纯度并测定分子量,PMP柱前衍生化测定单糖组成;采用MTT法测定各多糖组分对Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的作用。结果:关黄柏总多糖占药材的4.3%,从关黄柏总多糖中分离纯化得到3种多糖组分G1,G2,G3,分别占总多糖的6%,9%,10%,经HPLC鉴定证明为均一多糖,均主要含阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖和半乳糖醛酸,其摩尔比分别是G1(1∶1.06∶1.04∶1.14),G2(1∶1.27∶1.10∶1.09),G3(1∶1.23∶0.99∶1.55),3种均一多糖对Con A诱导的T淋巴细胞增殖有显著的抑制作用。结论:3种均一关黄柏总多糖主要由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖和半乳糖醛酸组成,具有一定显著的抑制细胞免疫的作用,为进一步研究提供了实验基础。     

金针菇多糖对小鼠免疫细胞产生细胞因子及对荷瘤小鼠血清细胞因子含量的影响

目的:研究金针菇多糖(FVP)对小鼠免疫细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)、白细胞介素-2(IL-2)的影响.方法:MTT比色法检测细胞代谢活力,ELISA方法检测TNF-α、INF-γ、IL-2的含量.结果:FVP(200、100、50 μg/mL)可增强小鼠脾细胞及腹腔渗出细胞代谢MTT的活力,促进小鼠脾细胞分泌TNF-α、 IFN-γ、IL-2,促进小鼠腹腔渗出细胞分泌TNF-α,并且以促进TNF-α分泌作用最为明显;FVP(100、50、25 mg/kg)可以提高荷S180瘤小鼠血清TNF-α、 IFN-γ的含量.结论:FVP可能通过促进小鼠免疫细胞产生TNF-α、IFN-γ、IL-2而发挥免疫调节功能.     

砒霜对狼疮鼠脾Th细胞及分泌细胞因子的影响

目的:探讨砒霜(Arsen ic Trioxide,As2O3)对体外MRL/lpr狼疮小鼠脾Th细胞及分泌相关细胞因子IFN-γ和IL-10的调节作用。方法:通过免疫磁珠分别分选MRL/lpr和C57BL小鼠脾Th细胞,Th细胞随机分PHA组和空白组,采用酶联免疫吸附反应(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法比较MRL/lpr和C57BL小鼠Th细胞分泌IFN-γ和IL-10及其mRNA水平的差异,然后观察As2O3对MRL/lpr小鼠Th细胞分泌IFN-γ和IL-10及其mRNA水平的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)观察不同浓度(0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L)及作用时间As2O3对Th细胞增殖的影响。结果:(1)与C57BL相比,MRL/lpr小鼠各组Th细胞分泌的IFN-γ和IL-10水平显著增高,1.0μmol/L的As2O3能明显抑制MRL/lpr小鼠各组上述因子的分泌;(2)PHA组的IL-10 mRNA和IFN-γmRNA水平在MRL/lpr小鼠中表达均高于C57BL小鼠,As2O3能抑制MRL/lpr小鼠Th细胞空白组和PHA组中IL-10mRNA和IFN-γmRNA的高表达;(3)除0.5μmol/L的As2O3能刺激Th细胞的增殖,≥1.0μmol/L的As2O3能抑制Th细胞的生长,但浓度增加对细胞存活率有明显的影响。结论:适当浓度的砒霜能有效下调Th细胞因子IL-10和IFN-g mRNA的异常分泌及而影响因子的表达,但并不产生过度的免疫抑制,并能下调MRL/lpr狼疮小鼠脾脏Th细胞的异常增殖而不影响其存活率,从而调节狼疮鼠的异常免疫功能,可能是砒霜治疗SLE的重要机制之一。     

红花多糖对人PBMC增殖活性及分泌细胞因子的影响

[目的]探讨红花多糖(SPS)对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及PBMC诱生细胞因子的影响。[方法]采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,检测PBMC的增殖活性及白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平。[结果]SPS对PBMC增殖有促进作用,以1.25g/L和0.625g/L剂量组增殖活性增加明显(P0.05);红花多糖(SPS)各组IL-2和IFN-γ水平明显高于对照组(P0.05),而各组TNF-α的水平无显著性差异。[结论]SPS可促进PBMC的增殖,提高IL-2和IFN-γ水平,增强免疫功能。     

佛手多糖对免疫低下小鼠细胞因子的影响

目的：研究佛手多糖的免疫调节作用。方法：用环磷酸胺造成免疫低下小鼠动物模型,取小鼠巨噬细胞加不同浓度佛手多糖,测定巨噬细胞内外ＩＬ－６、ＩＬ－１水平。ＩＬ－６、ＩＬ－１的检测采用放射免疫法。结果：佛手多糖浓度在４ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ可提高巨噬细胞外低下的ＩＬ－６水平;但用该方法检测不到ＩＬ－１。结论：佛手多糖具有一定的免疫增强作用。     

N-CWS中多糖的促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用

目的:从红色诺卡氏放线菌细胞壁骨架(N-CWS)中分离筛选新的免疫活性组分。方法:MTT法检测N-CWS中的主要组分对脾淋巴细胞增殖的影响,并对活性组分进行气相色谱分析。结果:在4.5～144μg.mL-1范围内,N-CWS中的多糖(PS)具有明显的刺激脾淋巴细胞增殖的生物活性,并在9～18μg.mL-1时刺激作用最强;它是一种主要由阿拉伯糖和半乳糖按照1∶1.66的摩尔比组成的阿拉伯半乳聚糖。结论:N-CWS的抗肿瘤和免疫调节活性主要与其多糖类成分有关。     

玉屏风散对小鼠变应性接触性皮炎及脾淋巴细胞增殖的影响

目的：观察玉屏风散不同提取部位对小鼠接触性皮炎及脾淋巴细胞增殖的影响。方法：用二硝基氟苯诱导小鼠变应性接触性皮炎，观察玉屏风散不同提取部位对其的干预作用；用MTT法检测玉屏风散不同提取部位对小鼠脾脏T、B淋巴细胞活化增殖活动的影响。结果：玉屏风散水提液和醇沉液能减轻小鼠耳廓的肿胀程度但对免疫器官无显著的抑制作用；水提液能显著促进静息脾细胞增殖，醇沉液、挥发油及全方各组的高剂量亦有促进作用；水提液能抑制ConA诱导的脾细胞增殖，全方亦有抑制作用；各部份对LPS诱导的脾细胞增殖未观察到明显的影响。结论：玉屏风散对小鼠接触性皮炎有改善作用，不同提取部位对脾细胞的活化增殖的影响随细胞状态的不同而有所差异。     

云芝多糖对小鼠产生细胞因子的促进作用

 本文研究了云芝多糖(CVPS)对小鼠产生细胞因子的作用．结果显示：CVPS 250或500mg/ kg可显著提高小鼠脾细胞产生白细胞介素2,淋巴毒素和Y-_干扰素的水平CVPS 500mg/kg可显著增强 小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子和白细胞介素1的能力。CVPS能促进这些在抗肿瘤免疫中具有重 要作用的细胞因子的产生，提示其在增强机体抗肿瘤免疫力方面，可能具有较好的应用前景。     

甘草蜜炙前后对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的比较甘草蜜炙前后对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响。方法采用MTT法,检测不同浓度的生甘草、蜜炙甘草对小鼠静息期脾淋巴细胞、刀豆蛋白A(Con A)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞增殖的作用。结果与空白组比较,生甘草和蜜炙甘草均能有效的促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,且与Con A、LPS对T、B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用。相同剂量下,蜜炙甘草增殖效果显著优于生甘草。结论甘草蜜炙后相比甘草生品能显著增加小鼠的免疫功能。     

五味子不同炮制品对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的:比较五味子不同炮制品对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响,为五味子临床合理用药提供实验依据。方法:将五味子不同质量浓度(400,200,100,50 mg·L-1)提取液与细胞密度为4×106个/m L的脾淋巴细胞于96孔板中共同培养48 h,每组6个复孔,以增殖率为指标,采用CCK-8比较生五味子、酒五味子、醋五味子对小鼠脾淋巴细胞、刀豆蛋白A(Con A)和脂多糖(LPS)诱导的T,B淋巴细胞增殖的影响。结果:与空白组比较,Con A,LPS可诱导T,B淋巴细胞增殖;与不同指标相应空白组比较,五味子给药组均能不同程度促进未活化脾淋巴细胞及Con A和LPS诱导的T,B淋巴细胞的增殖,同等剂量下,酒五味子增殖效果最佳,优于生五味子、醋五味子(P0.05,P0.01)。结论:五味子酒制后对小鼠淋巴细胞增殖作用显著增强,符合"入补药熟用"传统理论。     

藏药忍冬果对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌细胞因子的影响

目的:研究藏药忍冬果水提物(FLM)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌细胞因子的影响。方法:运用吞噬中性红试验观察FLM对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,用小鼠腹腔巨噬细胞分泌物对小鼠胸腺细胞增殖及对L929细胞杀伤作用的影响分别测定IL-1及TNF-α的活性,用RT-PCR技术观察药物对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA和IFN-γmRNA表达的影响。结果:FLM在1～100μg.mL^-1剂量内对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有明显促进作用,同时能诱导巨噬细胞分泌IL-1及TNF-α,并促进细胞因子TNF-αmRNA和IFN-γmRNA的表达。结论:FLM对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌细胞因子都有促进作用。     

商陆皂苷甲对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:观察商陆皂苷甲(EsA)对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖影响,并探讨其作用机制。方法:用不同浓度的EsA(0.625mg/L,1.25mg/L,2.5mg/L,5.0mg/L,10mg/L,20mg/L)刺激rGMC,并设对照组(不加药物干预),4-甲基偶氮四唑蓝(multiply-table tournament,MTT)法检测其对rGMC增殖与毒性的影响。结果:与正常对照组比较,EsA(2.5～5mg/L)作用48,72h能够显著抑制血清诱导的rGMC的增殖(P<0.05或P<0.01),在本实验浓度(0.625～20mg/L)内EsA对rGMC无明显细胞毒性作用(P>0.05)。结论:在体外EsA(2.5～5mg/L)可显著抑制rGMC的増殖;肾小球系膜细胞可能是EsA的作用靶细胞。     

柽柳水提物对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖反应的影响

目的 探讨中药柽柳水提物(Tamarix chinensis Lour.extract with water,TEW)的生物学活性.方法 采用MTT法检测了TEW对小鼠脾细胞及肿瘤细胞增殖的作用.结果 无论有无ConA诱导,TEW均可刺激小鼠脾细胞增殖;高浓度的TEW对肿瘤细胞K562及TE13有一定抑制作用,而对于SK-OV3,BGC823及BxPC-3,PANC-1等基本无抑制作用.结论 TEW对小鼠脾细胞具有丝裂原样作用,但对肿瘤细胞的抑制作用甚微.     

四逆汤类方不同工艺及配伍提取物对小鼠脾细胞增殖的影响

目的:观察四逆汤类方不同工艺、不同配伍提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法:采用小鼠脾淋巴细胞为实验模型,MTT比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性。结果:与对照组比较,四逆汤类方乙醚提取物均有刺激脾淋巴细胞增殖的作用,与FGC1(四逆汤)组比较,FGR1(人参四逆汤)组作用显著低于FGC1组,四逆汤类方的乙醚提取物样品中,四逆汤的活性最强。四逆汤类方的氯仿提取物中,除FGB2(白通汤)组外,其它各组均无刺激脾淋巴细胞增殖的作用。四逆汤类方的水提取物,FGC3(四逆汤)和FGB3(白通汤)组有刺激脾淋巴细胞增殖作用。结论:四逆汤类方乙醚、氯仿和水提取物能刺激淋巴细胞增殖活性,醚提乙取物的活性较强,四逆汤类方的乙醚提取物样品中,四逆汤的活性最强。