右美托咪定通过Akt/m TOR自噬通路介导NLRP3炎症小体失活而减轻脓毒症大鼠肠损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)是否通过蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬通路介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体失活从而减轻脓毒症大鼠肠损伤。方法:随机数字法对50只大鼠分组:假手术组、模型组、DEX组(0、3和6 h腹腔注射10μg/kg DEX)、DEX+NVP-BEZ235组(在DEX组基础上腹腔注射30 mg/kg NVP-BEZ235)及DEX+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(在DEX组基础上腹腔注射15 mg/kg 3-MA),每组10只。除假手术组外,其余各组盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型,建模后给药。HE染色观察肠道组织形态,对结肠标本进行结肠大体形态损伤指数(CMDI)评分;ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化检测肠道组织中自噬相关蛋白beclin-1和LC3-II蛋白水平;Western blot检测肠道组织中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1及其前体pro-caspase-1的蛋白水平。结果:模型组大鼠肠道组织完整性被破坏,细胞脱落和炎症浸润现象明显;DEX组大鼠肠道组织完整,仅出现部分细胞脱落和炎症浸润现象;DEX+NVP-BEZ235组和DEX+3-MA组大鼠肠道完整性被破坏,细胞脱落和炎症浸润明显。与假手术组相比,模型组大鼠CMDI评分,血清中IL-1β和TNF-α水平,肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平升高(P0.05);与模型组相比,DEX组大鼠CMDI评分,血清中IL-1β和TNF-α水平,肠道组织中NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平降低(P0.05),肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率及p-Akt/Akt和pmTOR/mTOR蛋白水平升高(P0.05);与DEX组相比,DEX+NVP-BEZ235组和DEX+3-MA组血清中IL-1β和TNF-α水平及肠道组织中NLRP3、ASC和caspase-1/pro-caspase-1蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中beclin-1和LC3-II蛋白阳性率及p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白水平降低(P0.05)。结论:DEX能够通过激活Akt/mTOR通路促进自噬而介导NLRP3炎症小体失活,从而减轻脓毒症大鼠肠损伤。     

丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的小鼠巨噬细胞Dectin-1 / NLRP3 信号通路抑制作用研究

目的:研究丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的巨噬细胞上Dectin-1/NLRP3信号通路的影响。方法:培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并分成空白对照组、β-1,3-葡聚糖诱导模型组、昆布多糖组和丹皮酚组,β-1,3-葡聚糖诱导巨噬细胞24 h建立ALD炎症模型。通过MTT法检测细胞活性,通过倒置显微镜观察各组形态学变化,通过Western blot检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,通过RT-qPCR检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA的表达,通过ELISA检测各组培养液中IL-1β、IL-18的分泌水平。结果:MTT结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖诱导模型组抑制细胞增殖活性减弱。与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,丹皮酚干预后细胞增殖活性增强。形态学观察发现,空白对照组细胞体积小,形态圆润。β-1,3-葡聚糖诱导后细胞体积变大,分化严重,形态狭长。丹皮酚干预后细胞分化减轻,细胞形态近似圆形。Western blot、RT-qPCR和ELISA结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖能显著升高巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。而与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,经丹皮酚干预后可明显降低巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。结论:本研究结果表明丹皮酚可能通过抑制β-1,3-葡聚糖诱导的Dectin-1/NLRP3信号通路上Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的过表达从而有效降低终末炎症因子IL-1β及IL-18的释放,进而有效抑制β-1,3-葡聚糖诱导的ALD炎症反应。     

大鼠急性心肌梗死后NLRP3炎性体-IL-1β信号轴激活与End-MT的关系

目的:研究在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)引发的心肌纤维化过程中,NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与内皮-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition,End-MT)是否存在同一性。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)与AMI组(n=15),术后28 d采用Masson染色检测心肌纤维化水平;Western blot检测NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、pro-caspase-1和caspase-1)、内皮细胞标志物(CD31和VE-cadherin)及间充质细胞标志物(α-SMA和FSP1)的表达;酶联免疫吸附法检测NLRP3炎性体下游因子IL-1β的表达。结果:与假手术组相比,冠脉结扎组AMI大鼠心肌纤维化水平、End-MT进展程度、NLRP3炎性体活性及caspase-1和IL-1β的表达均显著增加(P0.05)。结论:NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与End-MT进程具有显著同一性,提示NLRP3炎性体-IL-1β作为激活End-MT的潜在靶点将为研究AMI后心肌纤维化及心力衰竭提供新的理论依据。     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结...     

沙库巴曲缬沙坦抑制心肌细胞焦亡改善心梗后心衰大鼠心室重构

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦对心梗后心衰大鼠的心肌损伤和心脏重构的改善作用,并初步研究其与细胞焦亡之间的关系。方法45只SPF级Wistar大鼠,分为假手术组(Sham,n=15）、心衰模型组（HF,n=15）和沙库巴曲缬沙坦组（SK,n=15）。小动物超声用来评估各组大鼠心脏功能;Masson染色检测各组大鼠心脏组织病理变化;免疫荧光法检测pro-IL-1β和pro-IL-18在各组大鼠心肌细胞中的表达;ELISA检测各组大鼠心脏组织中IL-1β、IL18的表达。Western blot检测各组大鼠心脏组织中焦亡相关因子NLRP3和炎症因子pro-caspase-1、ASC的表达水平。结果 与HF组相比,沙库巴曲缬沙坦组大鼠的EF和FS显著升高,而LVIDs和LVIDd显著降低;大鼠心肌纤维化范围明显减小,胶原蛋白染色区域显著降低。沙库巴曲缬沙坦可以显著抑制心衰大鼠ASC的表达,抑制IL-1β和IL-18在心衰大鼠心脏组织中的含量,下调NLRP3和caspase-1的水平,并上调pro-IL-1β和pro-IL-18的表达水平。结论 沙库巴曲缬沙坦可以抑制心肌纤维化和改善心室重构,该结果...     

双氢青蒿素对CNP模型大鼠的治疗作用及对炎症小体NLRP3信号通路的影响北大核心CSCD

目的:探究双氢青蒿素(DHA)对慢性前列腺炎(CNP)模型大鼠的治疗作用及对炎症小体NLRP3信号通路的影响。方法:6周龄健康雄性SPF级SD大鼠分为5组:对照组、模型组、DHA低、高剂量组和前列康组,每组6只。除对照组外,其余组大鼠均建立CNP模型。对照组和模型组不采取治疗,DHA高、低剂量组每天灌胃给予40、20 mg/kg DHA,前列康组每天灌胃给予0.5 g/kg前列康片,连续治疗1个月。von Frey法检测大鼠痛觉敏感性,统计大鼠体质量和前列腺重量,HE染色观察大鼠前列腺组织病理损伤,ELISA检测大鼠前列腺组织TNF-α、IL-6和IL-10表达,Western blot检测大鼠前列腺组织NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达。结果:高、低剂量DHA和前列康片均显著降低了CNP大鼠痛觉敏感性和前列腺指数,增加了体质量,改善了前列腺组织病理损伤,并显著降低了前列腺组织TNF-α和IL-6含量,增加了IL-10含量,高剂量DHA和前列康片治疗效果优于低剂量DHA。高、低剂量DHA均显著降低了大鼠前列腺组织NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达。结论:DHA通过抑制NLRP3炎症小体通路减弱CNP大鼠炎症反应。     

α-亚麻酸在缺血性心衰中的保护作用及其对缺血早期炎症小体NLRP3的抑制作用

目的探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)在缺血性心衰中的保护作用及其对TNF-α、IL-6和炎症小体NLRP3(pyrin domain containing 3)等炎症介质的影响。方法通过结扎冠状动脉建立大鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型,给予ALA或其对照,监测MI后1周、2周和4周大鼠血清中TNF-α和IL-6炎症因子变化,检测MI后1周心肌组织中NLRP3相关蛋白及和MI后4周心脏功能的变化。结果与假手术组比较,血清中TNF-α和IL-6水平在MI后1周和2周均显著增加。MI后1周缺血区心肌组织中NLRP3表达显著增加,半胱氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific protease-1,caspase-1)活性升高,IL-1β和TNF-α蛋白含量显著升高。补充ALA不仅显著降低大鼠MI后1周和2周血清中TNF-α和IL-6水平,而且减少MI后1周心肌组织中的NLRP3含量和caspase-1活性,进而降低了IL-1β和TNF-α含量,减少了中性粒细胞在心肌组织中的浸润,改善了MI 4周后的心脏功能。结论 MI前补充ALA可减少MI后1周炎症小体NLRP3相关蛋白表达,抑制TNF-α、IL-1β及IL-6炎症因子的生成,改善MI 4周后的心脏功能,延缓缺血性心衰的发生发展。     

基于NLRP3 炎性小体通路探讨金樱子乙醇提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的保护作用

目的:探究金樱子乙醇提取物(RLM)对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠的保护作用,并初步探究其作用机制。方法:将SD大鼠分为假手术组(Sham),MsPGN组,金樱子乙醇提取物低、中、高剂量组(RLM-L、RLM-M、RLM-H),阳性对照组(醋酸泼尼松组,Prednisone acetate),每组12只大鼠,给药4周后收集24 h蛋白尿液处死大鼠,观察各组大鼠体重变化情况,检测血清肾功能相关指标肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)等;HE染色检测肾组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(WB)、免疫组化法检测肾组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(caspase-1)表达;ELISA法检测肾组织匀浆中IL-1β和IL-18表达。结果:与Sham组相比,MsPGN组大鼠体重降低,24 h尿蛋白、BUN、Scr水平升高,TP、ALB水平降低,肾组织损伤评分升高,肾组织中NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达升高,组织匀浆中IL-1β、IL-18水平升高(P0.05);与MsPGN组相比,RLM-L、RLM-M、RLM-H、Prednisone acetate组大鼠体重升高,24 h尿蛋白、BUN、Scr降低,TP、ALB水平升高,肾组织损伤评分降低,肾组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达降低,组织匀浆中IL-1β、IL-18水平降低(P0.05)。结论:RLM对MsPGN大鼠肾脏损伤具有保护作用,这种作用可能通过抑制NLRP3炎性小体通路,进而抑制通路介导的促炎性因子IL-1β和IL-18的表达,最终缓解肾损伤。     

山柰酚对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障变化及免疫功能的影响北大核心CSCD

目的:探究山柰酚对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障的变化及免疫功能的影响。方法:建立重症急性胰腺炎大鼠模型,将大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、山柰醇低剂量组、山柰醇中剂量组、山柰醇高剂量组和地塞米松组。HE染色检测胰腺组织病理损伤并进行病理评分;ELISA检测血清二胺氧化酶(DAO)、血清D-乳酸、IL-6、TNF-α和IL-1β水平;全自动生物化学分析仪检测血清淀粉酶和脂肪酶;全自动图像分析仪测定黏膜厚度、绒毛高度;Western blot检测NLRP3、ASC和Cleaved caspase-1/Caspase-1、p-Nrf2、Nrf2、NQO1和HO-1表达。结果:与假手术组比较,模型组血清DAO、D-乳酸、淀粉酶和脂肪酶水平升高(P<0.05),黏膜厚度、绒毛高度降低(P<0.05),IL-6、TNF-α和IL-1β水平升高(P<0.05),NLRP3、ASC和Cleaved caspase-1/Caspase-1表达升高(P<0.05);与模型组比较,山柰酚中、高剂量组和地塞米松组胰腺组织病理损伤明显改善,胰腺组织病理学评分降低(P<0.05),血清DAO、D-乳酸、淀粉酶和脂肪酶水平降低(P<0.05),黏膜厚度、绒毛高度升高(P<0.05),IL-6、TNF-α和IL-1β水平降低(P<0.05),NLRP3、ASC和Cleaved caspase-1/Caspase-1表达降低(P<0.05),p-Nrf2/Nrf2和NQO1、HO-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:山柰酚可有效改善重症急症胰腺炎模型大鼠免疫功能,提高肠黏膜屏障功能的保护能力,抑制炎症因子释放,抑制NLRP3/ASC/Caspase-1通路活化,激活Nrf2/NQO1/HO-1通路。     

柚皮素减轻重症急性胰腺炎小鼠心肌损伤

目的探讨小鼠重症急性胰腺炎(SAP)相关性心肌损害的发生机制和柚皮素的保护作用。方法将小鼠随机分为:对照组(control组)、模型组(SAP组)和柚皮素干预组(Nar组),每组12只。应用L-精氨酸(8%,4 mg/kg,p H=7. 0,间隔1h腹腔注射2次)制备小鼠SAP模型,Nar(200 mg/kg)溶于0. 5%CMC-Na中制备混悬液,在首次注射L-精氨酸后0、24和48 h腹腔注射。试剂盒检测血浆c Tn I、CK-MB及LDH浓度。实时荧光定量PCR和Western blot检测心脏组织NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1βmRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,SAP组小鼠胰腺组织水肿、腺泡细胞坏死、大量炎性反应细胞浸润。心肌细胞肿胀、部分细胞崩解、心肌纤维结构消失,并有较多炎性反应细胞浸润。血浆CK-MB、LDH及c Tn I水平明显升高(P0. 05),心肌NLRP3、caspase-1、ASC及IL-1βmRNA和蛋白表达显著增高(P0. 05)。柚皮素干预可以降低SAP小鼠血浆淀粉酶和脂肪酶水平、减轻胰腺组织损伤和心肌组织损伤,降低血浆CK-MB、LDH及CTn I水平(P0. 01),下调心肌组织NLRP3、caspase-1、ASC及IL-1βmRNA (P0. 01)和蛋白表达(P0. 05)。结论柚皮素可能通过抑制心脏中NLRP3炎性小体激活保护SAP相关的心肌损伤。     

西地那非对勃起功能障碍模型大鼠主动脉血管组织中NLRP3/caspase-1通路的影响

目的 探讨西地那非(Sil)对勃起功能障碍(ED)大鼠主动脉血管组织中NLRP3/caspase-1通路蛋白表达的影响作用。方法 建立ED大鼠模型,随机分为ED组、Sil组,另取10只大鼠作为对照组。Sil组给予20 mg/kg西地那非灌胃(1次/d,连续2周)后,HE染色观察主动脉血管组织形态变化;Masson染色检测主动脉纤维化;免疫组化测定主动脉中白细胞介素-1β(IL-1β)和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的含量及分布;RT-qPCR及Western blot检测主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和eNOS的表达。结果 ED组大鼠主动脉血管组织形态发生病理变化,内皮细胞局部脱落较多,纤维化明显;主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达均增高,eNOS的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与ED组相比,Sil组大鼠主动脉血管组织形态学病理变化改善,内皮局部细胞脱落减少,纤维化减轻;主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达降低,eNOS的mRNA和蛋白表达增...     

敲除PTEN改善心肌缺血再灌注大鼠心脏功能并抑制NLRP3介导的心肌细胞焦亡

目的通过敲除第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源蛋白(PTEN),探索其对大鼠心脏功能和含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)介导的心肌细胞焦亡(pyroptosis)的影响。方法建立大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠模型,分为假手术组(野生型健康大鼠)、野生型I/R组(野生型大鼠进行心肌I/R处理)、敲除PTEN(PTEN KO)的I/R组(PTEN KO大鼠进行心肌I/R处理)。反转录PCR检测PTEN mRNA水平, HE染色观察心肌病理损伤;超声心动图仪检测心率(HR)和左心室壁厚度(LVWT)并通过BL-420F生物机能实验系统记录左心室收缩压(LVSP)、左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS); ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的含量; Western blot法检测心脏组织NLRP3、 ELAV样RNA结合蛋白1(ELAVL1)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达,免疫组织化学染色法检测心肌组织中caspase-1的含量;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色观察心肌组织的凋亡。结果与假手术组相比,野生型I/R组PTEN mRNA和蛋白水平显著增加, HR、 LVSP、 LVEF、 FS和LVWT均显著降低,血清CK-MB、 Mb、 cTnI含量均显著升高, NLRP3、 ELAVL1、 caspase-1、 IL-1β蛋白表达水平均显著升高,敲除PTEN后PTEN mRNA和蛋白水平显著降低。敲除PTEN心肌细胞病理损伤减轻, HR、 LVSP、 LVEF、FS和LVWT均显著升高,血清CK-MB、 Mb、 cTnI含量显著降低。NLRP3、 ELAVL1、 caspase-1、 IL-1β蛋白水平均显著降低,凋亡心肌细胞数量显著减少。结论敲除PTEN减缓心肌病理损伤,抑制NLRP3介导的心肌细胞焦亡,表明敲除PTEN能减轻心肌I/R损伤。     

乌梅丸通过调控NLRP3炎症小体改善溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡

目的：研究乌梅丸通过调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体改善溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡的作用及机制。方法：选择雄性SD大鼠进行动物实验,采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠的方式建立UC模型,造模后给予不同剂量乌梅丸灌胃,阴性对照（NC）-慢病毒（LV）或NLRP3-LV尾静脉注射。评价各组大鼠疾病活动指数（DAI）,测量结肠长度,检测病理改变及组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达。结果：UC组大鼠结肠黏膜出现典型UC病理改变,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达高于对照组,结肠长度短于对照组（P<0.05）;不同浓度乌梅丸组大鼠结肠黏膜UC病理改变改善,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达低于UC组,结肠长度长于UC组（P<0.05）;高剂量乌梅丸灌胃同时注射LV,NLRP3-LV+UC...     

基于NF-κB/NLRP3/caspase-1通路研究白及多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症损伤的保护作用北大核心CSCD

目的:探究白及多糖对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)通路蛋白表达及对肠道屏障损伤的影响。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)+乙醇法建立UC模型,并将SD大鼠随机分为空白组、模型组、白及多糖低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组、柳氮磺胺吡啶阳性组(0.67 g/kg),除空白组外,其余各组均建立UC模型。白及多糖低、中、高剂量组和阳性组分别灌胃给予相应剂量白及多糖和柳氮磺胺吡啶,空白组和模型组灌胃给予10 ml/kg生理盐水,各组大鼠连续给药2周,1次/d。末次给药12 h后,观察大鼠一般行为并对大鼠进行疾病活动指数(DAI)评分;取大鼠结肠组织,苏木精-伊红染色观察组织病理形态;ELISA检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、炎症因子IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肠道屏障功能受损指标二胺氧化酶(DAO)和肠型脂肪酸结合蛋白(i-FABP)水平;Western blot检测结肠组织通路蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠形体消瘦、大便稀溏、结肠组织可见黏膜溃疡、充血、扩张及炎症细胞浸润等病理损伤,DAI评分、结肠组织MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均升高(P<0.05),DAO和i-FABP含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,白及多糖各剂量组及柳氮磺胺吡啶组大鼠DAI评分、结肠组织病理损伤程度、MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05),DAO和i-FABP含量均升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,高剂量白及多糖改善效果与柳氮磺胺吡啶相近(P>0.05)。结论:白及多糖可抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1通路激活,降低炎症反应和肠屏障损伤,改善UC症状和肠黏膜损伤。     

全氟辛烷磺酸通过NLRP3炎症小体诱导幼年期大鼠肺损伤及格列本脲干预的研究

目的:探讨含NLRP3家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体参与全氟辛烷磺酸(PFOS)诱导幼年期大鼠肺损伤的可能机制。方法:28只21日龄SD大鼠随机分为对照(C)组、PFOS(P)组、格列本脲(G)组和格列本脲+PFOS(GP)组。将实验动物根据不同分组建立PFOS暴露模型和格列本脲保护模型,留取肺标本进行HE染色,ELISA法检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)含量以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量,高效液相色谱法(HPLC)检测血清中PFOS浓度,Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase-1和含CARD凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的蛋白水平。结果:肺组织病理切片HE染色结果显示,与C组相比,P组的气管及肺泡间质可见明显炎症浸润;格列本脲可使炎症反应显著减轻。ELISA结果显示,P组肺组织中MPO含量较C组显著升高(P<0.05),P组BALF中的IL-1β和IL-18含量较C组也明显升高(P<0.05);GP组肺组织MPD含量及BALF中IL-1β和IL-18含量均较P组降低(P<0.05)。Western blot结果显示,P组的NLRP3、caspase-1及ASC蛋白表达量较对照组均显著升高(P<0.01);格列本脲可使NLRP3、caspase-1及ASC蛋白表达水平降低(P<0.05)。免疫组化结果提示,P组的NLRP3蛋白表达水平较其余3组均显著升高(P<0.01)。结论:PFOS暴露可能通过激活NLRP3炎症小体,继而引发炎症反应,释放IL-1β等炎症因子导致大鼠肺损伤。格列本脲可以通过特异性抑制NLRP3炎症小体的组装,抑制炎症反应,减轻PFOS诱导的肺损伤。     

槲皮素抑制糖尿病大鼠炎症小体激活并减轻心肌损伤

目的:研究槲皮素对糖尿病心肌病(DCM)大鼠NLRP3炎症小体激活的抑制作用及对心肌的保护作用。方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(10只)和造模组(30只)。造模组一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg),建立糖尿病(DM)模型,每周测血糖,4周后测随机血糖,将随机血糖≥16.6 mmol/L的大鼠选入模型。将模型组大鼠随机分为DM组、DM+溶剂对照组和DM+槲皮素组,DM+槲皮素组每日给予槲皮素(100 mg/kg)灌胃。第16周末行超声检测心功能后麻醉处死大鼠,通过HE染色和Masson染色观察大鼠心肌组织形态学变化,Western blot、ELISA和免疫组化等方法观察NLRP3、ASC、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18等指标的变化,TUNEL染色观察心肌凋亡情况。结果:槲皮素显著抑制了糖尿病大鼠心肌中炎症小体的激活,DM+槲皮素组较DM组和DM+溶剂对照组的心肌组织中胶原含量明显降低,IL-1β和IL-18蛋白表达水平明显下降,减少了心肌凋亡(P0.05),心功能得到明显改善。结论:槲皮素显著抑制了NLRP3炎症小体的激活,降低了炎症水平,从而减轻了DCM大鼠心肌的损伤。     

辛伐他汀对糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的影响及其机制研究

目的 探讨辛伐他汀糖尿病脑病大鼠认知功能的改善作用及可能机制。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病脑病大鼠模型，选取模型制备成功的大鼠随机分为模型组与辛伐他汀组(20 mg/kg),每组8只，另取同龄8只SD大鼠作为对照组，连续灌胃5周。测定大鼠空腹血糖水平；Morris水迷宫测定大鼠认知功能；HE染色观察大鼠脑组织海马病理损伤；Nissl染色观察大鼠海马神经元；ELISA检测大鼠脑组织白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平；Western blot检测大鼠脑组织中SIRT1、NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-18蛋白表达。结果 与模型组相比，辛伐他汀组大鼠空腹血糖水平显著降低，认知功能显著改善，海马区病理性损伤减轻，海马尼氏体数量增加，IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低，SIRT1蛋白表达水平升高，而NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-18蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 辛伐他汀可通过调控SIRT1/NLRP3通路改善糖尿病脑病大鼠认知功能。     

雷公藤多苷通过NOXs-ROS-NLRP3炎症小体信号通路抑制结肠炎症

目的:观察雷公藤多苷对右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的防治作用及对黏膜组织NADPH氧化酶(NADPH oxidases,NOXs)-活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)-NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体信号通路表达的影响,探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用及机制。方法:BALB/c小鼠随机分为5组:模型组;低、中及高剂量雷公藤多苷灌胃组;正常组。采用DSS诱发UC动物模型,雷公藤多苷灌胃21 d后,取结肠组织,运用实时荧光定量PCR法检测结肠黏膜组织NLRP3、ASC及caspase-1的mRNA表达,免疫组化法检测结肠黏膜组织caspase-1的表达,ELISA法检测结肠组织匀浆上清IL-1α、TNF-α及IL-13的含量,鲁米诺化学发光法检测结肠黏膜组织ROS的生成和经DPI(NOXs抑制剂)抑制后的NADPH消耗率来分析NOXs活性;体外分离结肠组织中性粒细胞,检测分离的中性粒细胞中ROS的生成、NOXs活性以及NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达。结果:雷公藤多苷灌胃各组小鼠结肠黏膜组织病理均存在不同程度异常,但组织病理学评分均低于模型组;雷公藤多苷灌胃各组结肠黏膜组织和分离的中性粒细胞中,除高剂量组结肠黏膜组织caspase-1的mRNA表达与正常组相比差异无统计学显著性外,其余各组ROS生成、NOXs活性及NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达水平低于模型组(P0.05),高于正常组(P0.05);雷公藤多苷灌胃各组间两两比较发现,除中、高剂量组结肠黏膜组织及分离的中性粒细胞caspase-1的mRNA表达差异无统计学显著性外,其它指标相比均有统计学显著性(P0.05);雷公藤多苷灌胃各组小鼠结肠组织匀浆上清中促炎因子(IL1α和TNF-α)含量低于模型组(P0.05),高于正常组(P0.05),抑炎因子(IL-13)含量各组间比较差异无统计学显著性。结论:雷公藤多苷可能通过抑制NOXs-ROS-NLRP3炎症小体信号通路来降低IL-1α、TNF-α等促炎因子的表达从而对DSS诱导的UC小鼠起保护作用,中性粒细胞可能是参与其保护作用的主要炎性细胞。     

复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠视网膜白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α水平的影响

目的:观察复荣通脉胶囊对糖尿病(DM)大鼠视网膜白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法:60只Wistar大鼠随机留取10只作为正常对照组;另外50只经一次性腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)制备DM模型;40只成模大鼠随机分为DM模型组、复荣通脉低剂量组、复荣通脉中剂量组、复荣通脉高剂量组,每组10只。复荣通脉低、中、高剂量组分别给予0.7g、1.4g、2.8g/kg体重复荣通脉胶囊灌胃,其余两组给予等量纯净水灌胃,每日1次,连续8周。腹主动脉采血测定各组大鼠血糖(BG)及总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平,之后处死大鼠,摘取视网膜行组织病理切片及SP法免疫组化染色,观察各组IL-1β及TNF-α的水平。结果:与正常对照组比较,DM模型组BG明显升高(P0.01),复荣通脉各剂量组BG、TC、TG水平与DM模型组差异均无统计学意义(P0.05),DM模型组IL-1β和TNF-α水平较正常对照组明显增加(P0.05),复荣通脉低剂量组IL-1β和TNF-α水平明显低于DM模型组(P0.05),复荣通脉中、高剂量组较低剂量组明显降低(P0.05),复荣通脉中、高剂量组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:复荣通脉胶囊可能通过降低炎性因子水平发挥抗炎和保护视网膜作用。