人脐血间充质干细胞治疗大鼠肺纤维化的实验研究

目的 探讨人脐血间充质干细胞对博来霉素所致大鼠肺纤维化的影响及可能机制.方法 取第2代人脐血间充质干细胞培养至第4代;取清洁级健康雄性SD大鼠60只随机分为博来霉素组、干细胞治疗组、地塞米松治疗组和阴性对照组,每组15只.博来霉素组、干细胞治疗组和地塞米松治疗组分别经气管注入博来霉素制造肺纤维化模型,干细胞治疗组造模后立即经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记的干细胞,地塞米松治疗组造模后第2天开始连续7d腹腔注射地塞米松,阴性对照组经气管注入等量生理盐水,在第7、14、28天处死各组大鼠5只,HE、Masson染色、免疫组织化学法观察转化生长因子(TGF)-β1表达及标记细胞情况、酸解法测定肺羟脯氨酸的含量.结果 干细胞治疗组第7、14、28天肺组织均可见标记的干细胞.与阴性对照组比较,博来霉素组、干细胞治疗组和地塞米松治疗组肺泡炎评分及肺纤维化评分均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).不同处理后7、14、28 d,干细胞治疗组与地塞米松治疗组肺泡炎评分均低于博来霉素组,第28天干细胞治疗组和地塞米松治疗组肺纤维化评分低于博来霉素组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与地塞米松治疗组比较,干细胞治疗组肺泡炎评分及肺纤维化的差异无统计学意义(P＞0.05).与博来霉素组比较,各个时间点干细胞治疗组和地塞米松治疗组TGF-β1阳性细胞数和羟脯氨酸含量均减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);与地塞米松治疗组比较,干细胞治疗组肺组织TGF-β1阳性细胞数和羟脯氨酸含量的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人脐血间充质干细胞可以定植于受损的肺组织中,并可以在肺纤维化早期有效减轻肺泡炎及肺纤维化,其可能的作用机制与抑制TGF-β1的表达及减少胶原的形成有关有关.     

人脐血间充质干细胞预防博来霉素致大鼠肺纤维化效果

目的 探讨人脐血间充质干细胞(HUCBMSC)对博来霉素所致大鼠肺纤维化的预防性干预效果及可能机制.方法 取第2代HUCBMSC培养至第4代;取无特定病原体级5周龄雄性SD大鼠120只随机分为博来霉素组、干细胞干预组、地塞米松干预组和阴性对照组,每组30只.前3组分别经气管注入博来霉素建立肺纤维化模型,干细胞干预组造模后经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记的HUCBMSC,地塞米松干预组造模后第1天开始连续腹腔注射地塞米松7d,阴性对照组经气管注入等体积生理氯化钠溶液,在第7、14、28天分别处死各组中的10只动物,肺组织行苏木精-伊红、马松三色染色,碱水解法测定肺羟脯氨酸的水平.结果 干细胞干预组第7、14、28天肺组织均可见Brdu标记的干细胞.3个时间点的博来霉素组肺羟脯氨酸水平呈逐渐升高的趋势,第28天达最高水平(P＜0.01).3个时间点干细胞干预组和地塞米松干预组的肺泡炎症及肺纤维化程度均分别较博来霉素组轻,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HUCBMSC可以定植于受损的肺组织中,并可能在肺纤维化早期有效减轻肺泡炎及肺纤维化.     

积雪草苷对染矽尘大鼠肺纤维化的干预作用

目的:探讨积雪草苷（AS）对染矽尘大鼠肺纤维化的干预作用及可能的作用机制。方法:144只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药物对照组、AS低、中、高剂量组,每组24只。对照组大鼠气管内灌注1.0 ml生理盐水,其余组灌注1.0 ml 50 mg/ml二氧化硅（SiO 2）混悬液。造模后第2天给大鼠灌胃...     

人脐带间充质干细胞移植后在ATN大鼠的分布

目的观察DAPI标记的人脐带间充质干细胞经外周静脉移植后在ATN大鼠体内的分布。方法 SD大鼠120只随机平均分为三组。移植组:将总量900mg/kg庆大霉素,首次300mg/kg,12h后200mg/kg,余400mg/kg分两次每隔24h皮下注射,共3天,建立ATN大鼠模型,采用经尾静脉注射法移植人脐带间充质干细胞。模型组:造模方法同移植组。空白组:正常大鼠。分别于造模成功后1d、4d、1w、2w及4w处死大鼠,留取血液做生化检测,取肾组织荧光显微镜下观察人脐带间充质干细胞植入实验动物体内后的分布情况。结果移植组大鼠,肾组织仅在肾小管中见到DAPI阳性细胞,而肾小球中为阴性,且肾小管上皮荧光从1d持续至4w仍可见,但强度有减弱的趋势。结论 HUCMSCs移植后仅在肾小管中分布,但不同时间点分布比较逐渐减低。     

脐带间充质干细胞移植缓解肺泡细胞衰老的作用探讨

目的 探讨脐带间充质干细胞（UC-MSCs）移植对放射性肺纤维化（RIPF）、RIPF小鼠的肺内衰老细胞的作用。方法 C57BL/6小鼠单侧右肺接受17 Gy照射构建RIPF模型,照射后3个月尾静脉注射UC-MSCs,照后6个月取材,记录小鼠生存率、统计肺脏器比,苏木素-伊红（H&E）染色、Masson染色观察肺部结构及胶原沉积;qRT-PCR检测衰老分泌相关表型（SASP）表达情况;β-Gal免疫组化评估肺内细胞衰老;WB检测P53-P21、P16通路关键蛋白表达水平;组织免疫荧光检测肺内P21表达情况。结果 经UC-MSCs治疗的RIPF小鼠生存率较未治疗组升高,胶原蛋白沉积减少,塌陷增厚的肺泡结构改善;RIPF小鼠肺内增多的β-Gal阳性衰老细胞和高表达的SASP(IL-6、IL-8、IL-1β)在UC-MSCs治疗后均下降;UC-MSCs治疗降低了RIPF小鼠体内异常增高的P53、p-P53、P21、P16蛋白水平。结论 UC-MSCs可能通过抑制P53-P21及P16通路减轻纤维化肺内细胞的衰老,缓解放射性肺纤维化,有望用于放射性肺损伤的治疗。     

脐带间充质干细胞卵巢局部移植在卵巢早衰大鼠体内的分布

目的 观察脐带间充质干细胞(UCMSCs)卵巢局部移植在卵巢早衰大鼠体内的分布.方法 建立模型移植标记UCMSCs,观察各脏器绿色荧光细胞分布情况.结果 卵巢内发现移植细胞,肺、脾可见到较多移植细胞,心、肝、肾可见到散在分布移植细胞.结论 UCMSCs能在卵巢组织内存活,部分滞留在肺、脾等组织.     

人脐带间充质干细胞注射液治疗尘肺病的作用及机制研究

目的 观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对二氧化硅所致大鼠肺损伤的治疗效果,探讨其治疗尘肺病的作用及机制。方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分3组,分别为对照组、染矽尘组和HUCMSCs治疗组,染矽尘组和HUCMSCs治疗组大鼠建立尘肺模型,HUCMSCs治疗组于染尘后第1、14 d行尾静脉注射HUCMSCs1.0 mL(1×10⁶/mL)治疗,各组大鼠分别于染尘后第7、14、28、56 d随机选取5只大鼠行胸部CT检查、处死取材行肺组织HE染色以及检测抗核抗体(anti nuclear antibody,ANA)、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、总免疫球蛋白(total immunoglobulin,TIG)、补体成分3(complement 3,C3)、补体成分4(complement 4,C4)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor Alpha,TNF-α)、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素...     

人脐带源间充质干细胞移植对肝纤维化大鼠氧化应激的影响

目的 研究人脐带源间充质干细胞(hUC-MSCs)移植对大鼠肝纤维化的治疗作用及对氧化应激的影响.方法 Wistar大鼠60只,分为正常对照组和模型组,模型组采用CCl4制备肝纤维化模型,然后随机分为移植1、2、4周组和模型对照1、2、4周组,分别经尾静脉注射hUC-MSCs和同等剂量的生理盐水.取各组大鼠肝脏称重、制...     

橙皮素对矽尘暴露大鼠肺组织中细胞因子的影响

目的探讨橙皮素干预对二氧化硅染尘大鼠肺组织损伤的拮抗作用及其对细胞因子的影响。方法将54只健康SPF级Wistar雄性大鼠随机分为6组,分别为阴性对照(生理盐水)组、二氧化硅(50 mg/ml)模型组、吡非尼酮(100 mg/kg)对照组和低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高剂量(400 mg/kg)橙皮素治疗组,每组9只。二氧化硅模型组、吡非尼酮对照组和不同剂量橙皮素治疗组均给予1 ml二氧化硅溶液(50 mg/ml)一次性经气管灌注造模;24 h后,吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组采用灌胃方式进行干预,染毒容量为10 ml/kg,每天1次,连续28 d;阴性对照组和二氧化硅模型组均给予等容积生理盐水。检测大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-4、IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)的水平,并进行肺组织肺泡炎及纤维化评分。结果与阴性对照组比较,二氧化硅模型组、吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠的肺泡炎和肺纤维化评分均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着橙皮素染毒剂量的升高,大鼠的肺泡炎和肺纤维化评分均呈下降趋势。与二氧化硅模型组比较,吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠的肺泡炎和肺纤维化评分均较低,差异有统计学意义(P0.05)。与阴性对照组比较,二氧化硅模型组、吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着橙皮素染毒剂量的升高,大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β的水平均呈下降趋势,TNF-α、IL-4、IL-10的水平均呈先上升后下降的趋势,而IFN-γ的水平呈上升趋势。与二氧化硅模型组比较,吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α、IL-4的水平均降低,除低剂量橙皮素治疗组IL-1β和吡非尼酮对照组IL-4外,差异均有统计学意义(P0.05);而中、高剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中IL-10的水平和高剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中的IFN-γ水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论橙皮素可能通过抑制促炎因子的释放、促进抗炎因子的分泌从而减轻二氧化硅对肺组织的损伤作用,进而抑制矽肺纤维化的形成和发展。     

改良的人脐带间充质干细胞培养方法

目的:建立人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的分离和培养方法,探讨hUCMSCs的成脂成骨分化潜能。方法:用酶消化法、传统组织块法和改良组织块法从人脐带中分离间充质干细胞,流式细胞仪检测其免疫表型;用不同的培养体系诱导hUCMSCs向成骨细胞及成脂细胞分化,并对其进行鉴定。结果:改良的hUCMSCs培养方法培养细胞纯度更高,在相同的培养时间内,改良组织块法所获得的细胞数量是酶消化法的2～3倍,是传统组织块法的20～30倍,细胞呈长梭形生长;高表达CD73、CD90、CD44、CD105,不表达CD31、CD45、CD34;茜素红染色及油红O染色证实了hUCMSCs可分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论:建立了hUCMSCs的培养新方法,证实了hUCMSCs的增殖能力和多向分化潜能,为其治疗应用提供支持。     

移植人脐带间充质干细胞治疗缺氧缺血性脑损伤的两种方法比较

目的比较人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)经颈静脉及经腹腔两种途径移植后在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠脑内的分布、分化情况,寻找简单易行且有效的移植途径。方法 RICE法制备7日龄新生大鼠HIBD模型,随机分组:HIBD组(n=10)、腹腔移植组(n=15)、颈静脉移植组(n=15),另随机取未造模的10只为正常对照组。造模后72h后分别对颈静脉移植组和腹腔移植组移植等量的hUCMSCs(1×106个/只),而HIBD组及正常对照组不移植。于移植后36d免疫荧光染色比较Dil标记的hUCMSCs移植后在各组大鼠脑中的分布情况;神经元前体细胞标记DCX特异性染色观察hUCMSCs移植后分化成神经元前体细胞的情况。结果移植后hUCMSCs能迁徙到脑组织中,能分化成神经元前体细胞。经颈静脉移植途径优于经腹腔移植(P0.01)。结论 hUCMSCs移植后可以在HIBD新生大鼠脑内存活,并向神经元前体细胞分化,对HIBD新生大鼠脑功能有修复作用,尤以经颈静脉移植明显。     

脐带间充质干细胞治疗急性百草枯中毒致肺损伤临床观察

目的 探讨脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UMSC)治疗急性百草枯中毒致肺损伤的临床疗效和安全性.方法 将2008年12月至2011年12月广州市第12人民医院收治的13例急性百草枯中毒致肺损伤患者分为观察组(5例)及对照组(8例).所有患者均予常规治疗,观察组加用UMSC治疗.应用欧洲重症医学监护医学协会(ESICM)感染相关问题工作组制定的SOFA评分体系,结合我国急性生理学和长期健康评价Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEⅡ)对患者进行病情序贯器官衰竭综合评分[SOFA(a)];同时行肺损伤评分(LIS)评价损伤程度.比较两组患者中毒后第1、3、5、7、14及15天后最大SOFA(a)的差异.结果 观察组患者中毒后第15天最大的SOFA(a)评分为(1.80±2.05),明显低于对照组(13.50±7.59),差异有统计学意义(P＜0.05);观察组治疗后LIS(0.45±0.27)比治疗前(1.15±0.34)明显下降,也明显低于对照组治疗后(2.94±1.20),差异均有统计学意义(P＜0.01).观察组5例患者均存活,复查无诉不适,肝、肾、肺等功能复查正常.肺部CT复查1例患者左下肺后段原病灶部分未完全吸收,其他患者均未见异常.对照组8例患者有1例存活,其余7例均死亡.观察组患者在接受UMSC治疗期间无出现寒战、发热等不良反应.结论 UMSC治疗急性百草枯中毒致肺损伤可能有一定临床应用价值.     

人脐带间充质干细胞联用神经节苷酯GM1治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)移植及联用神经节苷酯GM1治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)的效果。方法 RICE法制备七日龄新生大鼠HIBD模型, 随机分为hUCMSCs移植组(n=15)、hUCMSCs+GM1组(n=15), 72 h后经颈静脉移植等量的hUCMSCs, hUCMSCs+GM1组再腹腔注射GM1, 两组均在移植后第31、32、33、34、35天用Morris水迷宫对两组大鼠行为学测试, 比较两组大鼠脑功能恢复情况。免疫荧光染色观察DiI标记的hUCMSCs移植后在两组大鼠脑中的分布情况;神经元前体细胞标记DCX特异性染色观察hUCMSCs移植后分化成神经元前体细胞的情况。结果 Morris水迷宫测试:hUCMSCs+GM1组逃避潜伏期明显短于hUCMSCs移植组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。移植后hUCMSCs能迁徙到脑组织中, 并分布于缺血区的小血管旁, 能分化成神经元前体细胞。hUCMSCs+GM1组大鼠脑片干细胞分布明显多于hUCMSCs移植组(P＜0.05)。结论 hUCMSCs移植对HIBD新生大鼠脑功能有修复作用, 联用GM1, 有协同作用。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后再修复作用的研究

目的 探讨间充质干细胞（MSCS）移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响.方法 选取SD大鼠4只作骨髓间充质细胞的分离与培养,提取MSCS;60只大鼠制做脊髓横断损伤模型,细胞移植组24只,PBS（磷酸盐缓冲液）液组24只,空白对照组12只.于脊髓损伤后第7天,无菌条件下,细胞移植组以微量注射器缓慢注入含MSCS的培养液5μl,PBS组注入缓冲液体5 μl,对照组未加任何干预因素.分别于术后7、14、28 d麻醉下行心脏灌流固定取T10节段脊髓,细胞移植组与磷酸盐缓冲组取出损伤节段的脊髓（8只/时点）,空白对照组于同一节段取出相应脊髓（4只/时点）.应用免疫组化法观察MSCS移植后大鼠脊髓损伤区BDNF的表达变化.结果 细胞接种24 h后贴壁生长,72 h细胞增殖,有细胞团形成,在传代过程中,4代以前的细胞倍增时间约为4～6 d,至10代以后细胞增殖能力有所减弱,胞体变得扁平,若加入碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,则可维持基增殖能力和形态.脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达,间充质干细胞移植术后第7、14及28天,细胞移植组脑源性神经营养因子均高水平表达,与缓冲液组相比较差异有统计学意义（14 d：0.31±0.03 vs 0.25±0.04,P＜0.01）.结论 间充质干细胞在移植后通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进轴突的再生可能是治疗脊髓损伤的重要机制.     

两种示踪技术在人脐带间充质干细胞治疗子痫前期大鼠模型中的应用

目的探讨含绿色荧光蛋白慢病毒(LV-GFP)和荧光染料四甲基-吲哚羧花青-高氯酸盐(CM-Di I)两种标记干细胞的示踪技术在人脐带间充质干细胞(HU-MSCs)治疗子痫前期(PE)大鼠研究中的应用。方法采用酶消化法分离培养HU-MSCs,分别以LV-GFP和CM-Di I标记HU-MSCs。建立脂多糖(LPS)诱导的PE大鼠模型,移植HU-MSCs后分别通过荧光显微镜和活体成像技术示踪HU-MSCs的分布。结果荧光显微镜下见LV-GFP标记的HU-MSCs分布于大鼠胎盘组织和肾脏组织中;胎鼠肾脏、肝脏、心脏和肺脏组织中未见分布。活体成像技术显示CM-Di I标记的HU-MSCs分布于大鼠胸腹部脏器及胎盘,而脐带及胎鼠内未见分布。结论 LV-GFP标记后荧光显微镜可显示最终HU-MSCs归巢并定位准确,CM-Di I标记后活体成像技术则可以观察活体内HU-MSCs分布变化。     

脐带血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性研究

目的观察脐带血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法抽取骨髓穿刺液10ml,采用含10％脐带血清的DMEM／F12培养,流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨诱导体系及脂肪诱导体系诱导BM—MSCs定向分化。结果BM—MSC—Ss高表达CD29、CD73、CD105,不表达CD34、CIM5、CD31,BM—MSCs体外能诱导为成骨细胞和脂肪细胞。结论脐带血清培养的BM—MSCs的具有较高的纯度和体外分化能力,脐带血清培养BM—MSCs适合临床应用。