基于SOCS-JAK/STAT负反馈调节的复方鱼腥草对糖尿病肾损伤的干预作用研究

目的：糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）是糖尿病（Diabetic mellitus,DM）临床常见的慢性并发症之一,本实验旨在研究复方鱼腥草三种提取部位及其完整成分对db/db小鼠肾损害的保护作用,并通过探究各提取物对JAK2/STAT3通路及其下游蛋白的影响来探讨复方鱼腥草防治糖尿病肾病的可能机制.方法：1、提取复方鱼腥草水提物、醇提物、挥发油成分,并将三种成分按照所得质量比配制得到复方鱼腥草完整成分。2、选取8只db/m小鼠为正常组;56只db/db小鼠分为模型组、盐酸二甲双胍组、AG490组、复方鱼腥草水提物组、复方鱼腥草醇提物组、复方鱼腥草挥发油组以及复方鱼腥草完整成分组,每组8只,给药8周,记录小鼠体重以及血糖,8周后检测小鼠血糖、肾功能指标及肾脏指数,酶联免疫试剂盒法检测血浆胰岛素水平（FINS）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、纤连蛋白（FN）、HE染色观察小鼠肾脏病理变化。3、RT-PCR法检测各组小鼠肾组织中的JAK2mRNA、STAT3mRNA,SOCS-1mRNA表达的变化情况; Western blot法检测肾组织中的JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS-1、c-fos及c-jun蛋白表达变化,运用免疫荧光法检测肾组织c-fos、c-jun蛋白的表达。结果：1、给药八周后,与正常组比较,模型组db/db小鼠血浆转化生长因子-β1（TGF-β1）、纤连蛋白（FN）、治疗组小鼠血清胰岛素水平、胰岛素敏感指数较模型组升高,转化生长因子-β1（TGF-β1）,纤连蛋白（FN）,水平降低（P<0.05）,各治疗组小鼠肾脏组织病理改善明显。2、模型组小鼠肾组织p-JAK2,p-STAT3及JAK2 mRNA,STAT3mRNA的表达均对比正常组小鼠肾组织的表达明显增高(P<0.05);与模型组相比,各给药组小鼠肾组织p-JAK2,p-STAT3表达均有降低,挥发油组及完整成分组小鼠肾组织SOCS-1基因及蛋白明显升高（p<0.05）;各给药组的JAK2、STAT3基因表达及蛋白变化不显著。各治疗组的c-fos、c-jun在肾小管及肾间质的表达均有不同程度下降。结论：复方鱼腥草对糖尿病肾损伤具有改善作用,其保护肾脏的作用可能与降低尿蛋白排泄,调节血糖,维持肾脏结构、功能的完整性有关。其改善糖尿病肾损伤的分子机制可能通过SOCS 负反馈调节JAK/STAT信号转导通路相关基因及蛋白表达,从而抑制降低下游原癌基因c-fos、c-jun的表达,减少炎症因子的活化,降低FN的分泌,减少ECM聚积有关。     

复方鱼腥草合剂对db/db小鼠糖尿病肾损伤的保护作用

目的:比较复方鱼腥草合剂水提物、醇提物、挥发油以及完整成分对db/db小鼠肾损伤的作用,并探索其可能机制。方法:选取8只db/m小鼠为正常组;48只db/db小鼠分为模型组、盐酸二甲双胍组、复方鱼腥草合剂水提物组、醇提物组、挥发油组以及完整成分组,每组8只,给药8周,记录小鼠体质量以及血糖,8周后检测小鼠血糖、肾功能指标及肾脏指数,ELISA试剂盒法检测血清胰岛素水平、TGF-β1、FN、GLP-1、GIP水平,HE染色观察小鼠肾脏病理变化。结果:与模型组相比,醇提物、挥发油、完整成分组小鼠血清胰岛素水平、胰岛素敏感指数升高,BUN、Scr水平有所改善,差异无统计学意义。血清TGF-β1,FN,GIP水平降低(P<0.05),GLP-1含量升高(P<0.05)。肾脏组织病理改善明显,且以完整成分组改变最为显著。结论:复方鱼腥草合剂对糖尿病所致肾损伤有一定改善作用,其保护机制可能与下调TGF-β1、FN水平,减少ECM沉积,调节GLP-1、GIP分泌有关。     

复方鱼腥草改善db/db小鼠肾损伤及对JAK/STAT通路部分基因的影响

目的:比较复方鱼腥草不同提取部位对db/db小鼠肾损伤和JAK/STAT通路中部分基因的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法:8周龄的db/m和db/db小鼠分为7组:db/m小鼠为正常组,db/db小鼠分为模型组,JAK酶抑制剂治疗组(AG490,1 mg·kg-1),复方鱼腥草石油醚提取部位组(SYM组),复方鱼腥草乙酸乙酯提取部位组(YSYZ组),复方鱼腥草正丁醇提取部位组(ZDC组),复方鱼腥草水提组(ST组),ig给药8周(7.8 g·kg-1)。检测小鼠尿白蛋白(Alb),24 h尿蛋白定量,血糖,天冬氨酸转氨酶(AST),丙氨酸转氨酶(ALT);粘连蛋白(FN);RT-PCR检测肾组织中的JAK2mRNA,STAT1mRNA,STAT3mRNA,SOCS-1mRNA的变化。结果:与正常组比较,模型组尿Alb,24 h尿蛋白定量,血糖,FN显著升高(P0.05);与模型组比较,尿Alb,24 h尿蛋白定量,FN均有不同程度的改善,且各提取部位组与水提组比较,复方鱼腥草正丁醇提取部位好于其他组,其中尿Alb与FN降低明显(P0.05)。与模型组比较,AG490组,SYM组,YSYZ组,ZDC组肾组织中的STAT1mRNA表达均明显下降(P0.05);ST组,ZDC组的SOCS-1mRNA表达升高(P0.05);但各治疗组的JAK2mRNA,STAT3mRNA表达没有显著差异。结论:复方鱼腥草能降低尿Alb,24 h尿蛋白定量及FN的分泌,且其正丁醇提取部位好于其他提取物组,并能调节JAK-STAT-SOCS-1相关基因表达,改善糖尿病肾损伤。     

基于JAK1/STAT3通路的寿胎丸对复发性流产小鼠细胞自噬的影响

目的 观察寿胎丸对复发性流产（RSA）小鼠的妊娠保护作用，基于JAK1/STAT3通路及细胞自噬探讨其作用机制。方法 分别构建正常妊娠小鼠模型及RSA小鼠模型，将小鼠分为空白组、模型组、地屈孕酮组和寿胎丸组，分别予相应药物干预，连续12 d。观察小鼠妊娠情况，计算胚胎丢失率及子宫脏器系数；HE染色观察小鼠蜕膜及胎盘组织病理改变；ELISA检测血清孕酮、β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）含量；Western blot检测蜕膜组织Janus激酶1(JAK1)、p-JAK1、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3、ATG5、Beclin1、LC3蛋白表达；实时荧光定量PCR检测蜕膜组织JAK1、STAT3、ATG5、Beclin1 mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠胚胎丢失率显著升高（P<0.01），子宫脏器系数显著降低（P<0.01）；蜕膜及胎盘组织形态受损，血清孕酮、β-HCG含量显著减少（P<0.01）；蜕膜组织p-JAK1、p-STAT3、ATG5、 Beclin1蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低（P<0.01, P&l...     

益肝胶囊对刀豆蛋白A所致小鼠肝损伤JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究益肝胶囊对刀豆蛋白A(ConA)所致小鼠肝损伤Janus蛋白酪氨酸蛋白激酶2/信号传导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响及作用机制。方法:50只清洁级雄性小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组及益肝胶囊高、中、低剂量组(剂量分别为1.872g/kg、0.936g/kg和0.468g/kg)每组各10只,连续灌胃给药14 d。末次给药后1h,除正常组外其余各组小鼠均一次性尾静脉注射ConA 20mg/kg诱导小鼠肝损伤,禁食不禁水8 h后处死。检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子а(TNF-а)和γ干扰素水平,Western blot法检测肝组织中细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS-3)、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达,HE染色观察肝组织的病理变化。结果:与模型组比较,益肝胶囊各剂量组小鼠血清中ALT、AST、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平显著降低;肝组织中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低,SOCS-3蛋白表达显著升高,益肝胶囊各剂量组小鼠肝组织的病理损伤程度均有明显减轻。结论:益肝胶囊可能通过SOCS-3调控JAK2/STAT3信号通路以抑制炎症反应,从而起到肝保护作用。     

“调肝肾,祛痰瘀”复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠肾脏TGF-β1,CTGF和FN的影响

目的:探讨"调肝肾,祛痰瘀"复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1),结缔组织生长因子(CTGF)和糖蛋白纤维连接蛋白(FN)的影响。方法:将30只SHR(12周龄),随机分为复方组(4 g·kg-1),氯沙坦组(30 mg·kg-1)和模型组,设SD大鼠10只为正常组,治疗12周后,采用RT-PCR和Western blot法分别检测肾组织中TGF-β1,CTGF和FN的m RNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β1,CTGF和FN m RNA表达均明显上调(P0.01),CTGF,FN蛋白表达均明显上调(P0.01);与模型组比较,复方组TGF-β1,CTGF,FN的m RNA的表达均明显下调(P0.01,P0.05),TGF-β1,CTGF,FN蛋白表达均明显下调(P0.01);氯沙坦组TGF-β1,FN m RNA表达均明显下调(P0.01),TGF-β1和FN蛋白表达均明显下调(P0.01,P0.05)。与氯沙坦组比较,复方组TGF-β1的m RNA表达较明显下调(P0.05),CTGF和FN的蛋白表达亦下调(P0.05)。结论:"调肝肾,祛痰瘀"复方血压峰值前给药能够明显减少ECM聚积而改善SHR肾损害。其作用机制应是在中医阴阳升降机制协同下,通过降低肾组织TGF-β1,CTGF,FN的表达而达致。     

生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路的影响

目的?观察生慧汤对APP/PS1痴呆小鼠海马酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）/信号传导及转录激活因子3（STAT3）/细胞因子信号抑制物1（SOCS-1）信号通路的影响，并探讨其改善阿尔茨海默病（AD）突触可塑性的机制。方法?将36只APP/PS1小鼠随机分为APP/PS1组、多奈哌齐（donepezil）组和生慧汤（SHD）组，另将12只C57BL/6JNju小鼠设为空白（WT）组。Donepezil组按0.92 mg / （kg·d）的剂量灌胃多奈哌齐配置的混悬液，SHD组按13.5 g / （kg·d）的剂量灌胃生慧汤水煎液，WT组和APP/PS1组灌胃等体积的纯水。各组连续治疗4周，采用Morris水迷宫实验和跳台实验评价小鼠的认知功能。尼氏染色观察小鼠海马区神经元病理形态；高尔基染色观察小鼠海马区神经元树突棘的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测小鼠海马中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量及其mRNA表达水平；采用蛋白免疫印迹（Western Blot）检测小鼠海马离子钙结合蛋白（IBA1）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、JAK2、p-JAK2-Tyr1007、STAT3、p-STAT3-Tyr705、SOCS-1的蛋白表达水平。结果?与WT组比较，APP/PS1组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数增加（P<0.01），穿越平台次数、目标象限停留时间和潜伏期减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数减少（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数、目标停留象限时间和潜伏期增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度显著减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平增加（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平减少（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平升高（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平减少（P<0.05，P<0.01）。结论?生慧汤可通过抑制神经炎症改善APP/PS1小鼠海马突触可塑性，其机制可能与其抑制JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路有关。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨姜黄素改善脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用研究

目的探讨姜黄素通过抑制Janus激酶2-信号转导转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路改善脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的机制。方法将30只雄性小鼠分为对照组、模型组和姜黄素干预组。姜黄素干预组连续灌胃给予姜黄素(100 mg/kg)7 d,每日1次,末次给药1 h后模型组和姜黄素腹腔注射给予脂多糖(10 mg/kg),对照组给予腹腔注射等量生理盐水,6 h后麻醉处死大鼠,进行小鼠肺组织切片观察,计算大鼠肺组织湿干重(W/D)比,检测支气管肺泡灌洗液中蛋白、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)水平,同时检测肺组织中JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。结果对照组小鼠肺组织切片未见明显异常,模型组小鼠肺组织切片见肺泡壁部分增厚,细支气管腔内有大量脱落炎细胞及渗出物,泡壁毛细血管充血严重,姜黄素干预组小鼠肺组织病理症状较模型组轻;与对照组比较,模型组肺组织W/D和支气管肺泡灌洗液中蛋白、TNF-α、IL-8含量增加,给予姜黄素干预后,上述指标均降低;小鼠肺组织中JAK2和STAT3蛋白表达变化不显著,模型组小鼠肺组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达较对照组增加,给予姜黄素干预后,小鼠肺组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达降低。结论姜黄素可以通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤。     

补阳还五汤合参芪地黄汤化裁调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生对糖尿病肾病小鼠的保护作用

目的 基于调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾 病 （DKD） 小鼠的保护作用及机制。方法 将 24 只雄性 db/db 小鼠随机分为模型组、中药组 （补阳还五汤合参芪 地黄汤化裁,生药量 24.44 g·kg-1 ） 和西药组 （厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1 ） ,每组 8 只,另外取 8 只 db/m 小鼠作为 对照组。灌胃给药,每日 1 次,连续 12 周。检测小鼠血糖 （FBG） 、总胆固醇 （TC） 、甘油三脂 （TG） 、尿白蛋白/ 肌酐比值 （ACR） 及肾脏指数;采用 HE、Masson 染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连 蛋白 （FN） 、Ⅰ型胶原蛋白 （ColⅠ） 、波形蛋白 （Vimentin） 、α 平滑肌肌动蛋白 （α-SMA） 、转化生长因子 β1 （TGF-β1） 、血管内皮生长因子受体 3 （VEGFR3） 、血管内皮生长因子 C （VEGF-C） 、淋巴管内皮透明质酸受体 1 （LYVE-1） 、平足蛋白 （PDPN） 、肿瘤坏死因子 α （TNF-α） 和白细胞介素 1β （IL-1β） 的表达;Western Blot 法检 测肾脏组织 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达; Real-time PCR 法检测肾脏组织 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达。 结果 与对照组比较,模型组小鼠的血清 FBG、TG、TC、ACR 水平及肾脏指数均明显升高 （P＜0.05） ;肾小 球肥大,系膜外基质增加,基底膜增厚,囊腔变窄,肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润, 肾小管萎缩,纤维化水平明显升高 （P＜0.05）;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α -SMA、TGF- β1、 VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、 PDPN 蛋白表达均明显上调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、 LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达均明显上调（P＜0.05）;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、 VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明显升高 （P＜0.05） 。与模型组比较,中药组小鼠的血清 TG、TC、ACR 水平均明显降低 （P＜0.05） ;肾脏组织损伤有不同程度好转,炎性细胞浸润有一定程度减轻,纤维化水平 明显降低 （P＜0.05） ;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、PDPN 蛋白表达均明显下调 （P＜0.05） ; 肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明 显下调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明 显降低 （P＜0.05） 。结论 补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可降低 DKD 小鼠肾脏组织炎症及纤维化水平,其机制 可能与调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生有关。     

基于JAK2/STAT3信号通路研究七味净肝灵保肝作用机制

目的:基于JAK2/STAT3信号通路研究七味净肝灵的保肝作用机制。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟宾(0.5 g/kg)阳性对照组及七味净肝灵高(20 g/kg)、中(10 g/kg)、低(5 g/kg)剂量组,每组10只。各给药组小鼠均按相应剂量灌胃给药,正常对照组与模型组灌胃等体积注射用水,1次/d,共7 d。末次给药后,正常对照组腹腔注射花生油,其余各组均按10 mL/kg腹腔注射0.12%CCl4花生油建立急性肝损伤模型。禁食不禁水24 h后,测定血清ALT、AST、MDA、SOD、GSH-Px水平及肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测肝组织SOCS-3、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达;并观察肝组织病理改变。结果:与模型组比较,七味净肝灵各组小鼠血清MDA、AST及ALT水平显著降低,SOD及GSH-Px活性显著升高;肝组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平及pJAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低,SOCS-3表达显著升高(P0.05或P0.01);七味净肝灵组小鼠肝损伤程度明显减轻。结论:七味净肝灵有显著的保肝作用,其作用机制可能与抗氧化及通过SOCS-3调控JAK2/STAT3信号通路抑制炎症反应有关。     

糖肾方对db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用

目的:观察糖肾方(Tang Shen Fang,TSF)对于自发性2型糖尿病肾病db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用。方法:8周龄雄性db/db小鼠随机分为2组,分别为模型组(db/db)和观察组(db/db+TSF),每组9只;8周龄雄性db/m小鼠为正常对照组(db/m),顺应性喂养2周后,给予糖肾方干预12周,处死小鼠,分离小鼠肾脏用于后续检测。利用PAS和Masson染色观察肾脏病理;利用Western Blotting、Real-time PCR和免疫组化等技术检测肾脏组织纤维化TGF-β1/Smad3通路以及miRNA21和miRNA29b的表达。结果:糖肾方可以改善db/db小鼠尿微量白蛋白水平,减轻小鼠肾脏损伤;Western Blotting、Real-time PCR和免疫组化结果显示,糖肾方可下调db/db小鼠肾脏中纤维化标志分子TGF-β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达;下调db/db小鼠肾脏miRNA 21的表达,上调miRNA 29b的表达。结论:糖肾方可作用于TGF-β1/Smad3信号通路抑制肾脏纤维化。     

基于JAK/STAT信号通路探讨复方竹节参片对膝关节骨性关节炎兔的作用机制

目的探讨JAK/STAT信号通路在膝关节骨性关节炎(KOA)发生、发展和转归中的作用,初步揭示复方竹节参片治疗KOA的作用环节和靶点。方法取6只雄性日本大耳白兔作为对照组,取34只雄性日本大耳白兔采用关节腔注射木瓜蛋白酶诱导KOA模型。将造模成功的兔随机分为模型组8只和复方竹节参片高、中、低剂量组各6只。造模结束后,复方竹节参片高、中、低剂量组分别按150 mg/kg、75 mg/kg、37.5 mg/kg的剂量灌胃给予复方竹节参片混悬液,模型组和对照组同法给予蒸馏水,均每天1次,连续14 d。分别于造模前、造模结束后、灌胃7 d和灌胃14 d测量各组兔脚踝周径;于末次灌胃后24 h,取膝关节、血清和滑膜组织,采用HE染色法观察膝关节组织病理学形态,ELISA法测定血清中白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot法测定滑膜组织中JAK2、p-JAK、STAT3、ERK1蛋白表达量。结果与对照组比较,模型组兔脚踝周径显著增加(P<0.05),血清IL-6水平及滑膜中JAK2、p-JAK、STAT3、ERK1蛋白表达量均显著升高(P均<0.05)。与模型组比较,复方竹节参片各组兔脚踝周径明显缩短(P均<0.05),复方竹节参片高、中剂量组血清IL-6水平均显著降低(P均<0.05);复方竹节参片高剂量组滑膜组织中JAK2蛋白表达量及复方竹节参片各组滑膜组织中p-JAK2、STAT3、ERK1蛋白表达量均显著降低(P均<0.05)。结论复方竹节参片能显著缓解KOA的关节肿胀,其机制可能与调控JAK/STAT信号通路上下游相关的细胞因子和蛋白表达有关。     

芪归益肾方对UUO小鼠肾组织TGF-β1/Smads/PI3K信号通路的影响

目的:利用单侧输尿管梗阻(UUO)模型探讨芪归益肾方通过调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路延缓肾脏纤维化进展的机制。方法:Balb/C小鼠32只,制造UUO肾病模型,根据干预的药物分为芪归益肾方组(中药组,10 g·kg~(-1)),洛汀新组(10 m L·kg~(-1)),模型组,假手术组。实验结束后取肾组织采用苏木素-伊红(HE)染色及Masson染色进行病理学检测,观察肾小管-间质指数的变化;采用免疫组化检测肾组织中TGF-β_1,Smads,PI3K,纤维连接蛋白(FN)蛋白的表达,蛋白免疫印迹(Western blot)及逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对肾组织的TGF-β1,PI3K蛋白及mRNA表达进行分析。结果:与假手术组比较,模型组肾小管-间质指数明显升高,免疫组化显示TGF-β1,Smads,FN蛋白表达均明显升高,PI3K蛋白表达明显降低(P0.05),TGF-β_1蛋白及mRNA表达明显升高,PI3K蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05);与模型组比较,中药组和洛汀新组明显降低肾小管-间质指数,免疫组化显示明显降低TGF-β_1,Smads,FN蛋白表达,明显升高PI3K蛋白表达(P0.05),明显降低TGF-β1蛋白及mRNA表达,明显升高PI3K蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:芪归益肾方对于UUO模型小鼠延缓肾脏纤维化有较好的治疗作用,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads/PI3K信号通路有关。     

安胃汤干预慢性萎缩性胃炎大鼠JAK/STAT信号传导通路的作用机制

目的:从JAK/STAT信号传导通路角度探讨安胃汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠疗效的作用机制。方法:采用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)慢性萎缩性胃炎大鼠模型,应用安胃汤进行干预;采用实时荧光定量PCR方法、Western blot检测JAK1、STAT3、SOCS-3、c-myc基因表达及其蛋白含量的水平。结果:该方可以明显下调JAK1、STAT3、c-myc基因以及其蛋白含量的表达,升高SOCS-3基因以及其蛋白含量的表达。结论:安胃汤可能通过调节JAK1/STAT3信号传导通路关键因子JAK1、STAT3、c-myc、SOCS-3的表达,缓解炎症并防治慢性萎缩性胃炎。     

槲皮素联合吡喹酮对小鼠日本血吸虫病心肌组织即早基因与转化生长因子β1表达的影响

目的 研究血吸虫肝硬化致心肌损害作用及其机制,探讨槲皮素对吡喹酮杀虫治疗后血吸虫肝纤维化进一步发展及其致心肌损伤的抑制作用及其机制.方法 80只小鼠随机分为4组.A、B、C 3组小鼠感染日本血吸虫尾蚴,D组小鼠为对照组.A、B、C 3组小鼠感染尾蚴8周后,A组小鼠以吡喹酮500 mg/kg治疗2 d;B组小鼠以吡喹酮500 mg/kg治疗2 d后继以槲皮素30 mg/kg治疗8周;C组小鼠不作任何治疗(模型组).D组小鼠正常饲养.第16周末处死小鼠,留取肝脏、心肌组织,应用HE染色法、透射电镜、RT-PCR及免疫组化染色法,观察各组小鼠肝脏、心肌组织病理及心肌组织超微结构改变,分析心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达变化.结果 模型组、吡喹酮组、吡喹酮+槲皮素联合治疗组小鼠均存在不同程度心肌损伤.吡喹酮治疗后肝纤维化及心肌损伤程度减轻,心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原表达均明显低于模型组,杀虫治疗后继以槲皮素治疗,可进一步减轻肝纤维化及心肌损伤程度,降低心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原表达,但其表达仍高于对照组.结论 晚期血吸虫病肝硬化可通过刺激心肌即早基因表达、促使TGF-β1过度产生而致心肌重塑.抗肝纤维化治疗可减轻心肌重塑程度.槲皮素可通过减轻肝纤维化程度、抑制心肌即早基因表达,降低心肌TGF-β1水平而发挥保护心肌作用.     

基于miRNA-146a/JAK/STAT/SOCS-3信号通路探讨安肠汤对溃疡性结肠炎大鼠炎症免疫的影响

目的 研究安肠汤低、中、高剂量对SD大鼠溃疡性结肠炎的抗炎作用，通过研究不同给药剂量对miRNA-146a/非受体型酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号传导与转录激活因子（STAT）/细胞因子信号传导抑制蛋白-3（SOCS-3）信号通路及其下游蛋白的影响探讨安肠汤防治溃疡性结肠炎的可能机制。方法 实验大鼠分为正常组，模型组，美沙拉嗪组（1 g·kg^-1），安肠汤低、中、高剂量组（6，12，24 g·kg^-1），每组10只。除正常组外，其余各组均采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型，分别给药14 d。观察大鼠神态、大便性状、毛发等一般情况的变化，并参照疾病活动指数（DAI）表进行评分，苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠结肠组织病理改变，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-10（IL-10），IL-17，IL-1β，IL-6水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中JAK2，磷酸化STAT3（p-STAT3），STAT3，SOCS-3蛋白表达的变化，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定大鼠结肠组织中JAK2，p-STAT3，STAT3，SOCS-3 mRNA以及血浆miRNA-146a的表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠JAK2，p-STAT3，STAT3蛋白表达及JAK2，p-STAT3，STAT3 mRNA表达明显增高（P<0.05），模型组大鼠miRNA-146a，SOCS-3 mRNA以及SOCS-3蛋白表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，给药组大鼠精神状态，进食量，毛色等情况均明显改善，DAI评分明显降低（P<0.05），给药组大鼠结肠溃疡组织明显改善，给药组大鼠结肠组织JAK2，p-STAT3，STAT3蛋白表达及JAK2，p-STAT3，STAT3 mRNA表达明显降低（P<0.05），给药组大鼠miRNA-146a，SOCS-3 mRNA以及SOCS-3蛋白表达明显增高（P<0.05）。结论 安肠汤可能通过影响miRNA-146a/JAK/STAT/SOCS-3信号转导通路相关基因及蛋白表达，抑制溃疡性结肠炎病情的发展。     

肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠HGF、TGF β1的调节作用

目的:观察中药复方肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠肾组织肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白表达的调节作用,探讨其抗肾间质纤维化的机制。方法:将60只小鼠随机分为假手术组,模型组,中药低、高剂量组,苯那普利组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,术后7天观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织HGF、TGFβ1蛋白,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果:中药高剂量组和苯那普利组较模型组小鼠肾组织HGF蛋白表达增强,TGFβ1蛋白表达减弱,而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、FN生成减少,两组无显著差异,而HGF表达与TGFβ1表达呈明显负相关。结论:肾衰泄浊汤可能是通过诱导HGF蛋白表达,抑制TGFβ1表达,抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN等ECM的过度沉积,加强肾保护作用,对抗肾间质纤维化。     

番石榴叶抑制db/db小鼠肾脏TGF-β1蛋白表达研究

目的:观察番石榴叶提取物对自发2型糖尿病db/db小鼠肾脏HE染色及TGF-β1免疫组化的影响,探讨其肾脏保护的机制。方法:10周龄雄性肥胖db/db小鼠16只,适应性喂养2周后,随机分为模型组和番石榴叶提取物组,所有动物给予高脂饲料喂养,番石榴叶提物组按照0.11g/kg灌胃(相当于生药材2g/kg),模型组给予同体积蒸馏水灌胃,疗程为12周。每4周观察体重、血糖变化,试验结束后,HE染色观察肾脏病理变化,免疫组化法观察TGF-β1蛋白表达。结果:与对照组相比,经过12周的治疗后,番石榴叶提取物显著降低db/db小鼠体重和血糖。HE染色结果显示,番石榴叶提取物可以显著改善db/db小鼠肾小球系膜细胞增生、球旁器增生,颗粒样变性。免疫组化结果提示,番石榴叶提取物可以显著下调db/db小鼠肾脏TGF-β1蛋白表达(P0.05)。结论:番石榴叶提取物通过抑制肾脏组织TGF-β1免疫组化蛋白表达,改善db/db小鼠糖尿病肾病肾脏纤维化。     

肾络通对肾小管间质纤维化大鼠肾素-血管紧张素系统的影响

目的:观察肾络通对阿霉素诱导的肾小管间质纤维化大鼠肾组织肾素血管紧张素系统(RAS)及转化生长因子-β1(TGF-β1)、TGF-β1 mRNA袁达和纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的影响.方法:采用生化、放射免疫法及免疫组织化学、原位杂交等方法观察大鼠肾功能,肾组织肾素活性、血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)水平及TGF-β1、FN、LN的蛋白表达和TGF-β1 mRNA表达.结果:肾络通及缬沙坦组肾功能明显改善,肾素活性、ANGⅡ水平有所下降,TGF-β1、FN、LN的蛋白表达及TF-β1 mfRNA减少.结论:肾络通可能通过调节RAS,抑制TGF-β1和TGF-β1 mRNA的表达,减少细胞外基质的沉积,减轻肾小管间质纤维化进程.     

健脾补肾解毒方通过JAK2/STAT3通路抑制肝癌上皮间质转化的研究

目的研究健脾补肾解毒方通过JAK2/STAT3通路对小鼠HCCLM3皮下移植瘤上皮间质转化的影响。方法构建小鼠HCCLM3皮下移植瘤模型。将造模成功的24只裸鼠按随机数字表法分为对照组、中药组、联合组, 每组8只。中药组灌胃健脾补肾解毒方醇提物0.68 mg/ml, 联合组灌胃索拉非尼混悬液3.5 mg/ml加健脾补肾解毒方醇提物0.68 mg/ml, 1次/d, 连续给药4周。观察各组小鼠HCCLM3皮下移植瘤体积、瘤重、小鼠体重;采用Western blot法检测HCCLM3皮下移植瘤组织中上皮间质转化相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果与对照组比较, 中药组、联合组小鼠HCCLM3皮下移植瘤平均瘤重降低(P<0.05), 皮下移植瘤组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、N-cadherin、Vimentin表达降低(P<0.05), E-cadherin表达升高(P<0.05)。结论健脾补肾解毒方对小鼠HCCLM3皮下移植瘤生...