苦参碱对人胃癌细胞NCI-N87体外的增殖抑制作用

目的探讨不同浓度苦参碱对体外培养的人胃癌细胞NCI-N87的增殖抑制作用。方法NCI-N87细胞经不同浓度苦参碱处理后,采用CCK-8法检测药物对肿瘤细胞的抑制作用,观察细胞形态学改变,检测细胞DNA分布。结果苦参碱浓度>3.0mg/ml,细胞毒作用较大;浓度在0.5～2.0mg/ml时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性;浓度在0.1mg/ml时,对肿瘤细胞生长几乎无抑制作用。苦参碱作用后可增加G1期细胞所占的百分比,阻止细胞进入S期。结论苦参碱对人胃癌细胞NCI-N87增殖有抑制作用,并能阻抑细胞周期的进程。     

苦参碱抑制人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖的研究

目的探讨苦参碱(matrine,MAT)对人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖的影响。方法体外培养人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1,分组予不同浓度苦参碱作用。MTT法检测0.25、0.50、1.0 mg/mL不同浓度苦参碱对细胞增殖的抑制作用以及药物作用的量效和时效关系;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;半定量RT-PCR检测bcl-2/bax mRNA表达水平的变化。结果MTT法显示药物作用后,细胞有明显的抑制增殖作用,且呈时间依赖性和剂量依赖性;流式细胞仪检测不同浓度的苦参碱作用后PA-1细胞的凋亡率依次上升,并与作用时间正相关;细胞周期结果显示苦参碱对PA-1细胞具有明显的G_1期阻滞作用,且具有剂量依赖性。结论苦参碱能使PA-1细胞bcl-2 mRNA和bax mRNA的比值下调,产生G_1期阻滞,从而调节细胞周期,最终导致PA-1细胞在体外的增殖受到明显抑制。     

苦参碱对肺腺癌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的探讨中药提取物苦参碱对人肺腺癌细胞系SPC-A-1的凋亡诱导作用及其发生的机制。方法用不同浓度的苦参碱对体外培养的SPC-A-1细胞进行干预。分别采用MTT、免疫细胞化学染色、流式细胞仪检测的方法,观察其对SPC-A-1细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;并对凋亡相关bcl-2与bax蛋白表达的变化进行定性检测。结果经不同浓度的苦参碱处理后的SPC-A-1细胞,其生长受到明显的抑制,细胞凋亡指数随药物浓度增加而明显增加;实验组bax表达明显高于对照组。结论一定浓度的苦参碱能抑制SPC-A-1细胞的增殖,促进其凋亡;其机制可能与调控bcl-2、bax表达有关。     

补骨脂素对胃癌细胞株BGC-803增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究补骨脂素对人胃癌BGC-803细胞的增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法以不同浓度的补骨脂素作用于体外培养的胃癌细胞BGC-803,不同时间后,采用MTT法检测药物对肿瘤细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜观察F-actin形态学变化。结果补骨脂素对人胃癌细胞株BGC-803具有明显的生长抑制作用,并与药物剂量及处理时间成正相关。补骨脂素作用于细胞24、48、72 h后的IC50分别为92.6、25.54、7.68μg/m L。流式细胞仪检测结果显示给药组早期凋亡的百分率显著高于对照组,细胞骨架蛋白F-actin呈现解聚状态。结论:补骨脂素可抑制胃癌BGC-803细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能是药物引起了细胞骨架蛋白F-actin解聚。     

HSP90抑制剂IPI-504影响胃癌细胞及其干细胞样细胞功能的研究

目的探讨特异性热休克蛋白90(HSP90)抑制剂盐酸瑞他霉素(IPI-504)对人胃癌细胞SGC-7901、NCI-N87及其CD44+干细胞样细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法应用流式细胞仪检测及分选SGC-7901、NCI-N87中干细胞样细胞;应用MTT比色法检测不同浓度IPI-504对SGC-7901、NCI-N87及其CD44+干细胞样细胞的生长抑制率;应用平板克隆形成实验检测不同浓度IPI-504对SGC-7901、NCI-N87及其CD44+干细胞样细胞的克隆形成能力;应用划痕实验及Transwell侵袭实验检测IPI-504对SGC-7901、NCI-N87及其CD44+干细胞样细胞迁移及侵袭力;应用流式细胞仪检测IPI-504对SGC-7901、NCI-N87及其CD44+干细胞样细胞凋亡率的影响。结果从SGC-7901、NCIN87分选出8%和6%的CD44+干细胞样细胞,纯度>95%;IPI-504能显著抑制SGC-7901、NCI-N87及其CD44+干细胞样细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,增加以上细胞的凋亡率,且呈剂量依赖性。结论 HSP90抑制剂IPI-504能够显著抑制胃癌细胞SGC-7901、NCI-N87及其CD44+干细胞样细胞的功能,并促使其凋亡。     

益胃饮含药血清对胃癌细胞MFC增殖凋亡及NR4A3/HGF表达的影响

目的:探讨不同浓度益胃饮对体外培养的胃癌细胞MFC的增殖、凋亡及NR4A3蛋白表达的影响。方法:MFC细胞经不同浓度益胃饮含药血清处理后,采用MTT法检测药物对肿瘤细胞的抑制作用,显微镜观察细胞形态学改变;采用流式细胞仪及Annexin V/PI染色的方法检测益胃饮含药血清对MFC胃癌细胞周期及凋亡的影响,并以RT-PCR芯片技术(Mouse TumorM etastasis PCR Array)分析该方对胃癌细胞MFC肿瘤相关基因表达的影响;结果:益胃饮含药血清浓度在4%~12%时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,而RT-PCR芯片技术分析结果显示NR4A3表达则随之增强而HGF显著下调。结论:益胃饮含药血清对人胃癌细胞MFC增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡,其作用机制可能是益胃饮通过促进Nr4 a3表达,下调HGF而达到的。     

α-细辛醚通过Bcl-2途径诱导人肺癌A549细胞凋亡研究

目的:探讨α-细辛醚通过bcl-2途径对人肺癌细胞系A549增殖抑制作用及凋亡诱导作用。方法:人肺癌A549细胞孵育24 h后,分别加入不同剂量α-细辛醚(0.25、0.5、1 mg/ml)作用于A549细胞,继续培养12,24,36,48 h,采用MTT法检测不同浓度α-细辛醚对A549细胞的增殖抑制情况;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达,western blot检测bcl-2和bax蛋白表达水平。结果:随着α-细辛醚剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)的增加,可明显抑制A549细胞的增殖,这种抑制作用具有时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞发生了凋亡;α-细辛醚不同剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)作用48h后bcl-2 mRNA和蛋白表达明显减少,bax mRNA和蛋白表达明显增加。结论:α-细辛醚对人肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;α-细辛醚可通过下调bcl-2表达和上调bax表达而诱导人肺癌A549细胞发生凋亡。     

胃复春胶囊通过调节Bcl-2/Bax号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的 研究胃复春胶囊对人胃癌细胞的作用,为胃复春胶囊在抗消化道肿瘤方面的应用提供依据。方法 NCI-N87人胃癌细胞与不同浓度的胃复春胶囊提取物共孵育,采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活力;流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot法检测与细胞凋亡相关的蛋白表达情况。结果 胃复春胶囊提取物能够剂量和时间依赖地抑制NCI-N87细胞生长,诱导NCI-N87细胞产生凋亡,且使细胞周期阻滞在G0/G1期;经过胃复春胶囊提取物处理24 h后,实验组NCI-N87细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w表达量下调;促凋亡蛋白Bax、Bad表达量上调,呈剂量依赖性。结论 胃复春胶囊提取物能抑制胃癌细胞的增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其作用机制推测与Bcl-2/Bax信号通路有关。文章为临床上胃复春胶囊治疗胃癌提供了依据。     

右旋柠烯对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨右旋柠烯(D-limonene)对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法：以D-limonene作用于SGC-7901、BGC-823及AGS三种不同类型人胃癌细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪及电镜检测细胞生长抑制率、凋亡率以及形态学改变，免疫细胞化学法检测p53、bax和bcl-2基因表达。结果：D-limonene处理后的细胞生长抑制率与凋亡率均增加，与药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经D-limonene处理后SGC-7901、BGC-823细胞株p53、bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。AGS细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。结论：D-limonene对人胃癌细胞的抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡，不同类型的细胞株作用途径可能不同。升提p53与bax及降低bcl-2的蛋白表达为其诱发冒癌细胞．凋亡的机制之一。     

益气健脾解毒方对胃癌细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨益气健脾解毒方对胃癌细胞的抑制作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT法观察不同浓度的益气健脾解毒方溶液体外作用于胃癌细胞株不同时间后对其增殖的抑制作用;运用流式碘化丙啶(Annexin-V/PI)双染色法研究不同浓度益气健脾解毒方对人胃癌细胞株凋亡的诱导作用;利用流式细胞仪检测益气健脾解毒方对人胃癌细胞株的周期阻滞效应;采用免疫印迹(Western blot)法观察B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cysteinyl aspartate-specific proproteases-3,Caspase-3)蛋白的变化情况。结果:益气化瘀解毒方对人胃癌细胞株MGC-803细胞有较好的抑制增殖作用(P0.05),并呈一定的浓度依赖性;益气健脾解毒方在作用于人胃癌细胞24小时后,细胞早期凋亡率随着给药浓度的增加呈上升趋势,呈浓度依赖关系;表明益气健脾解毒方可阻滞MGC-803细胞于S期,并呈浓度依赖性;Bcl-2、Caspase-3在4、2、1 mg/mL组的蛋白表达下调;而Bax、Cleaved-caspase-3在4、2、1 mg/mL组表达上调。结论:益气健脾解毒方能抑制人胃癌细胞株的增殖并诱导其凋亡,杀伤肿瘤细胞,可能是通过启动caspase的级联反应及下调Bcl-2,上调Bax来实现。     

苦参碱对人T淋巴细胞增殖及IL-2IFN-γ影响的机制探讨

目的：探讨苦参碱对T淋巴细胞增殖和细胞因子IL-2、IFN-γ的影响。方法：使用苦参碱在不同浓度或在不同时间内对人T淋巴细胞进行体外诱导培养,利用CCK-8法检测不同浓度苦参碱对T淋巴细胞增殖的影响程度。用ELISA试剂盒测定培养上清液中的IL-2、IFN-γ细胞因子水平。结果：苦参碱在0.1、0.5mg/mL剂量范围内能促进T淋巴细胞增殖反应,而1.0、2.0和3.0mg/mL苦参碱对人T淋巴细胞增殖呈抑制作用。人T淋巴细胞受不同浓度苦参碱刺激时,0.1、0.5mg/mL苦参碱组IL-2和IFN-γ水平与对照组相比显著升高（P〈0.01）,1.0mg/mL苦参碱抑制IL-2和IFN-γ的分泌。结论：苦参碱对人外周血T淋巴细胞的增殖呈双向作用;低浓度苦参碱能诱导人T淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ。     

苦参碱抑制人大肠癌HT29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

目的探讨苦参碱对人大肠癌HT29细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其可能机制。方法分别采用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡、透射电镜观察细胞结构变化、基因芯片检测细胞基因表达改变。结果0.0625～0.5mg/mL苦参碱处理48h后,细胞增殖明显受抑制;但1mg/mL时增殖抑制率降低而凋亡诱导作用明显增强;苦参碱对细胞G2/M和G1/S期均有阻滞作用;电镜下可见凋亡的形态学变化;基因芯片检测发现苦参碱影响细胞增殖、周期和凋亡相关基因的表达。结论苦参碱通过影响HT29细胞一些与增殖、周期和凋亡相关基因的表达发挥增殖抑制和凋亡诱导作用,且与苦参碱质量浓度相关。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L~(-1))能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖。作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L~(-1),Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P0.05)。结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关。     

复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响

目的:研究复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响。方法:体外培养胃癌细胞系SGC-7901,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用粘附试验、Transwell趋化运动和Matrigel侵袭实验,研究复方苦参注射液及其不同浓度下对SGC-7901细胞的粘附、运动以及侵袭能力的影响。结果:复方苦参注射液浓度在0.25、0.5、1.0、1.5 mg/ml时均有一定的抑制胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,且呈明显的量效和时效关系。复方苦参注射液不同浓度处理SGC-7901细胞后,体外粘附、侵袭和运动能力呈剂量依赖性下降。经复方苦参注射液(1.5 mg/ml)作用后SGC-7901细胞CD44V6蛋白表达减弱,胞浆棕黄色颗粒减少。结论:复方苦参注射液可以抑制胃癌细胞生长,降低细胞粘附、侵袭和运动能力,其机制可能与抑制CD44V6蛋白表达有关。     

苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及Survivin基因表达的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:应用不同浓度的苦参碱作用于人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin基因表达.结果:苦参碱对Hela细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.60 g·L-1.经流式细胞仪检测表明,苦参碱能使Hela细胞G0-G1期逐渐增加,G2-M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,Hela细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).苦参碱对Hela细胞Survivin 基因表达有一定的抑制作用(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论:苦参碱能有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Survivin基因的表达有关.     

苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响

 目的研究苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响。方法用MTT法观察不同浓度苦参碱对培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测其凋亡细胞,并用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的改变。结果苦参碱明显抑制A375细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关。凋亡细胞的比例与药物浓度呈剂量依赖性。光镜和电镜观察证实随着苦参碱浓度的增加,A375凋亡细胞增多。结论苦参碱对人恶性黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡。     

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的 探讨复方中药紫龙金(简称紫龙金)对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNcaP的体外作用机制。方法 应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响,应用RT-PCR方法检测前列腺特异性抗原基因(PSA)和雄激素受体(AR),凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响;应用western blot方法测定对bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G1/G1期阻滞和诱导凋亡作用,作用72h时IC50为0．79mg／ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl-2的表达,降低bcl～2蛋白表达,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0／G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl-2基因表达,降低bcl-2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。