小檗碱及8-羟基二氢小檗碱对2型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响

 目的 研究小檗碱及8-羟基二氢小檗碱对2型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响。方法 采用高脂喂养并尾静脉注射小剂量链脲佐菌素的方法制备2型糖尿病动物模型,将2型糖尿病大鼠随机分为模型组、小檗碱组、8-羟基二氢小檗碱组（低、中、高剂量组）,另设正常对照组。药物干预治疗前后对各组动物进行口服糖耐量实验（OGTT）,干预治疗6周之后检测血清胰岛素（Ins）、血管活性因子（ET-1,NO,PGI2,TXA2）、von Willy Brand因子（vWF）、血管紧张素-2（AngⅡ）、凝血-纤溶系统因子（Fg,PAI-1）等水平。结果 小檗碱组及8-羟基二氢小檗碱各剂量组OGTT,血脂较模型组均改善;INS、ET、AngⅡ、TXA2、vWF因子、Fg、PAI-1水平低于模型组（均P＜0.01）,而NO、PGI2水平高于模型组(均P＜0.01）。与小檗碱组相比,8-羟基二氢小檗碱各剂量组治疗后OGTT、血脂、血管活性因子、vWF、AngⅡ及凝血-纤溶系统因子改善情况均优于小檗碱组。结论 小檗碱及8-羟基二氢小檗碱能够降糖,降脂,改善胰岛素抵抗,调节血管内皮,对2型糖尿病早期出现的血管内皮损伤有良好的保护作用,且8-羟基二氢小檗碱比小檗碱更有优势。     

吴茱萸碱、小檗碱对SGC-7901/DDP耐药性及耐药相关蛋白的影响

目的：探讨吴茱萸碱、小檗碱及其联合使用对顺铂（Cisplatin, DDP）耐药胃癌细胞SGC7901/DDP敏感性的作用。方法：体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,实验分为对照组、DDP组、吴茱萸碱+DDP 组、小檗碱+DDP 组及吴茱萸碱+小檗碱+DDP 组,CCK8 检测各组SGC-7901/DDP 细胞增殖能力;Western Blot 分析耐药及凋亡相关蛋白P-gp、MRP、caspase-3、caspase-9的表达。结果：CCK8实验表明吴茱萸碱、小檗碱在不影响SGC-7901/DDP 细胞活力的情况下可显著增强DDP抑制细胞增殖的作用,且小檗碱（8 μM）与吴茱萸碱（3.2 μM）联合给药增强SGC-7901/DDP化疗敏感性的作用明显强于二者单独给药（P <0.001）;Western Blot结果表明,SGC-7901/DDP细胞经吴茱萸碱、小檗碱处理后,caspase-3、caspase-9表达上调,P-gp、MRP表达下调。结论：吴茱萸碱、小檗碱单用及其联用可在体外显著增强SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性,其效应与凋亡蛋白caspase-3、caspase-9表达升高,耐药相关蛋白P-gp、MRP表达下调相关。     

紫外分光光度法测定盐酸小檗碱的含量

目的：探讨盐酸小檗碱的含量测定方法，避免还原剂对测定结果的影响。方法：紫外分光光度法。结果：盐酸小檗碱浓度在2．0μg-10.0ug/ml范围内，浓度与吸收度呈良好的线性关系。结论：紫外分光光度法可用于盐酸小檗碱的含量测定。     

从miRNA-17-92途径探讨小檗碱和吴茱萸碱对大肠癌HT29细胞周期调控机制

目的:探讨盐酸小檗碱和吴茱萸碱通过调控miR-17-92基因簇对大肠癌HT29细胞周期的作用机制,为中医药防治大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,盐酸小檗碱(2.5,5.0,10.0μM)和吴茱萸碱(1.8,3.75,7.5μM)作用于稳定转染miR-17-5p和miR-20a的HT29细胞后,采用MTT法、流式细胞术、实时荧光定量PCR及Western印记法检测药物对HT29细胞增殖、细胞周期分布情况、mRNA表达水平及E2F1蛋白表达的影响。结果:盐酸小檗碱和吴茱萸碱可以抑制转染的HT29细胞增殖,具有时间依赖性;并且盐酸小檗碱和吴茱萸碱分别以浓度5.0、3.75μM作用转染HT29细胞72h后抑制率超过50%,因此盐酸小檗碱取2.5、10.0μM,吴茱萸碱取1.8、7.5μM用于后续实验,二者能够将细胞阻滞在S期,抑制miR-17-5p和miR-20a的表达水平及E2F1的蛋白表达。结论:盐酸小檗碱和吴茱萸碱通过靶向miR-17-92抑制E2F1蛋白的表达,将细胞阻滞在S期,进而抑制大肠癌HT29细胞的增殖,为中医药防治大肠癌提供新的靶点及实验依据。     

RP-HPLC法测定小儿肺炎散中盐酸小檗碱的含量

目的：建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定小儿肺炎散中盐酸小檗碱的含量。方法：采用RP-HPLC法进行测定,以Angilent C18,5μm,4.6μm×250.0 mm为色谱柱,以乙腈：水（11）（每1 000 mL中加磷酸二氢钾3.4 g和十二烷基硫酸钠1.6 g）为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为265 nm。结果：盐酸小檗碱在0.334 8-0.781 2μg范围内线性良好,分离度大于1.5。结论：本方法可有效地控制小儿肺炎散中盐酸小檗碱的含量。     

大蒜素与盐酸小檗碱联用体外抗菌试验

目的研究大蒜素联合盐酸小檗碱对临床常见菌及耐药菌的抗菌效果。方法采用微量肉汤稀释法测定供试药物对4个常见菌,2个标准菌,和2个耐药菌的最小抑菌浓度(MIC),微量棋盘稀释法和时间—杀菌曲线法评价两药对各试验菌株的联合作用。结果当两药单独应用时,其MIC值范围分别为大蒜素156.25(敏感株)~1250(耐药株)μg/m L,盐酸小檗碱78.125(敏感株)~312.5(耐药株)μg/m L。当两药联合应用时,部分抑菌浓度指数(FICI)值为0.75~1,为相加作用。从24 h时间—杀菌曲线可以发现,当两药单独应用时,即使在4×MIC下,也未能显示杀菌效应,而联用时在相对较低质量浓度下显示出杀菌作用;还显示出在低于MIC下具有弱协同(敏感株)或者相加作用(耐药株)。结论大蒜素和盐酸小檗碱联合应用,具有良好的抗菌作用。     

8-辛基小檗碱盐酸盐的抑菌作用

目的：为深入研究8-辛基小檗碱盐的抗菌活性，对小檗碱和8-辛基小檗碱盐进行了实验研究。方法：采用抑菌圈实验法，在2000ug&#183;ml-1药液浓度下对常见的10种微生物进行了药物敏感性试验，并通过比浊法对敏感菌的最小抑菌浓度（MIC）进行了检测。结果：8-辛基小檗碱盐的抗菌活性很好，从稀释梯度来看其抗菌活性比小檗碱高64—128倍。     

小檗碱对AGS细胞增殖和IL-8含量的影响

目的:观察小檗碱对胃癌AGS细胞增殖的影响及其对IL-8含量的影响。方法:采用MTT法测定小檗碱及信号通路抑制剂对AGS细胞生长的影响;ELISA法测定小檗碱及抑制剂对AGS细胞IL-8含量的影响。结果:小檗碱对AGS细胞的生长具有良好的抑制作用,该作用呈剂量和时间依赖性,作用AGS细胞48h的IC50值为83μM。进一步研究发现,SB203580、JAK inhibitor和LY2940002能显著抑制AGS细胞的增殖,经SB203580、JAK inhibitor和LY2940002预处理AGS细胞能显著增加小檗碱抑制AGS细胞的增殖作用,而醋竹桃霉素及预处理后加小檗碱干预对AGS细胞的增殖无明显影响。ELISA结果表明,小檗碱(60μM)能够显著降低AGS细胞IL-8含量,而SB203580、JAK inhibitor、姜黄素对AGS细胞IL-8的表达无明显影响;而LY294002能显著降低AGS细胞IL-8含量,经LY294002预孵育0.5 h后小檗碱干预96 h后,AGS细胞中IL-8的含量较两药单用低。结论:小檗碱(60μM)能显著抑制AGS细胞的增殖和IL-8的表达,其作用机制可能与PI3K信号通路的抑制密切相关,而p38 MAPK和JAK信号通路在小檗碱抑制AGS细胞增殖和IL-8表达的作用机制中担当的作用尚待进一步研究和证实。此外,AGS细胞中IL-8的表达与AGS细胞的增殖之间无直接必然的联系。     

小檗碱与苦参总碱不同配比对DNCB致大鼠UC模型的影响

目的:探讨小檗碱与苦参总碱不同配比对溃疡性结肠炎大鼠模型的治疗作用。方法:采用2,4-二硝基氯苯复制大鼠溃疡性结肠炎模型,检测大鼠粪便常规、隐血试验、长度8cm病变结肠的粘连指数和重量,并进行结肠黏膜组织病理学检查,测定黏膜组织肿瘤坏死因子、环氧合酶-2的表达。结果:小檗碱180mg/kg、小檗碱120mg/kg+苦参总碱60mg/kg给药3天后能明显改善溃疡性结肠炎大鼠粪常规,隐血试验大部分呈阴性;给药7天后结肠腺体多数完整,改善结肠组织病理学检查;结肠黏膜肿瘤坏死因子及环氧合酶-2平均灰度较模型组有显著性差异。结论:小檗碱180mg/kg、小檗碱120mg/kg+苦参总碱60mg/kg对2,4-二硝基氯代苯致溃疡性结肠炎大鼠治疗效果显著。     

黄芩苷、小檗碱和葛根素体外胰岛素抵抗细胞差异化降糖作用研究

探讨中药成分黄芩苷、小檗碱、葛根素和甘草苷对肝胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞糖代谢的改善作用。采用胰岛素和地塞米松联合诱导建立IR-HepG2细胞模型,给药24 h测定不同剂量黄芩苷、小檗碱、葛根素和甘草苷对葡萄糖消耗量、糖原含量和细胞活性的影响。结果显示,与IR模型组相比,除甘草苷和1μmol·L-1黄芩苷组外,各给药组均显著升高葡萄糖消耗量;黄芩苷组(10,20,50μmol·L-1)、小檗碱组(5,10,20,50μmol·L-1)和葛根素组(40,80,160μmol·L-1)显著增加细胞内肝糖原含量;而甘草苷降糖作用不明显。在此基础上,重点研究黄芩苷、小檗碱和葛根素对IR-HepG2细胞葡萄糖转运蛋白(GLUTs)表达水平的影响。q PCR结果显示IR-HepG2细胞GLUT1和GLUT4基因mRNA表达比正常组低。5,20μmol·L-1小檗碱下调IR-HepG2细胞GLUT1基因mRNA水平;20,40,80μmol·L-1葛根素上调GLUT1基因mRNA水平。10,20,50μmol·L-1黄芩苷和20μmol·L-1小檗碱上调GLUT4基因mRNA水平,40,80μmol·L-1葛根素下调GLUT4基因mRNA水平。Western blot法检测结果显示,与正常组相比,IR-HepG2细胞GLUT1和GLUT4蛋白表达降低,GLUT2表达升高。10,20,50μmol·L-1黄芩苷上调GLUT2和GLUT4蛋白表达;20μmol·L-1小檗碱升高GLUT2蛋白表达,10,20μmol·L-1小檗碱增加GLUT4蛋白表达;20,40,80μmol·L-1葛根素上调GLUT1和GLUT2蛋白表达。以上成分体外差异化影响GLUT1/2/4表达,可以有效调节葡萄糖转运的瞬时响应和长期响应。降糖途径分析显示黄芩苷和葛根素与油酸诱导IR-HepG2细胞降糖作用途径环节及效应强弱存在一定程度差异,而小檗碱和甘草苷在2种不同诱因的IR-HepG2细胞中无明显差异。体外研究初步表明黄芩苷、小檗碱和葛根素具有体外差异化降糖作用,可加速糖转运增加糖原合成调节糖代谢改善肝IR。     

白藜芦醇诱导K562/AO_2凋亡与mdr1基因表达的关系

目的研究白藜芦醇(Res)体外对K562/AO2增殖及凋亡的影响,并探讨与耐药基因mdr1表达的关系。方法用噻唑蓝比色法(MTT)检测对照组、不同剂量Res组(25~200μmol/L)作用48 h后K562/AO2增殖率,用流式细胞仪检测各组凋亡率,并用逆转录-聚合链反应(RT-PCR)法检测各组mdr1 mRNA的表达。结果Res体外对人K562/AO2细胞有显著增殖抑制及凋亡诱导作用,Res组(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)作用48 h后其凋亡率均显著高于对照组(P<0.05);mdr1 mRNA表达相对强度均显著低于对照组(P<0.05),且随浓度增加而表达减弱。结论Res体外能诱导K562/AO2细胞的凋亡,且呈一定的浓度依赖性,其作用机制可能与逆转mdr1 mRNA基因表达有关。     

Berberine inhibits SREBP‐1‐related clozapine and risperidone induced adipogenesis in 3T3‐L1 cells

Weight gain is a common and potentially serious complication associated with the treatment of second generation antipsychotics such as clozapine and risperidone. Increased peripheral adipogenesis via the SREBP‐1 pathway could be one critical mechanism responsible for antipsychotic drug‐induced weight gain. Berberine, a botanic alkaloid, has been shown in our previous studies to inhibit adipogenesis in cell and animal models. MTT was used to determine the cytotoxic effects of clozapine and risperidone in combination with berberine. Differentiation of 3T3‐L1 cells was monitored by Oil‐Red‐O staining and the expression of SREBP‐1 and related proteins was determined by real‐time RT‐PCR and western blotting. The results showed that neither clozapine nor risperidone, alone or in combination with berberine had significant effects on cell viability. Eight days treatment with 15 μm clozapine increased adipogenesis by 37.4% and 50 μm risperidone increased adipogenesis by 26.5% during 3T3‐L1 cell differentiation accompanied by increased SREBP‐1, PPARγ, C/EBPα, LDLR and Adiponectin gene expression. More importantly, the addition of 8 μm berberine diminished the induction of adipogenesis almost completely accompanied by down‐regulated mRNA and protein expression levels of SREBP‐1‐related proteins. These encouraging results may lead to the use of berberine as an adjuvant to prevent weight gain during second generation antipsychotic medication. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

小檗胺对多药耐药K562/Adr细胞作用的研究

目的研究小檗胺诱导人白血病K562／Adr细胞凋亡及逆转多药耐药的作用及机理。方法采用MTT法测IC50值,流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率,PI染色法检测凋亡峰及细胞周期,同时以FCM检测Caspase-3、P-GP蛋白表达及细胞内药物积聚能力,RT-PCR法检测mdr-1基因表达。结果小檗胺能抑制人白血病K562／Adr细胞生长且呈剂量依赖关系,并能诱导细胞凋亡,使Caspase-3蛋白表达及细胞药物外排能力增加,同时降低mdr-1基因mRNA和蛋白表达水平。结论小檗胺能激活Caspase-3以诱导人白血病K562／Adr细胞凋亡,同时能通过降低mdr-1表达逆转多药耐药。     

高效液相色谱法测定五味黄连丸中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量

目的：建立高效液相色谱法测定五味黄连丸中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量。方法：采用Diamosil C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g）;检测波长：345nm;流速：1.0mL/min;柱温：室温。结果：表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱分别在0.489~11.73、0.992~23.81、1.014~24.35、2.017~48.40μg/mL峰面积与浓度之间呈良好线性关系;平均加样回收率分别为100.1%、98.3%、99.4%、99.4%,RSD分别为1.3%、1.7%、1.3%、2.8%。结论：所建立的HPLC法准确、快速、专属性强、灵敏度高,可用于五味黄连丸中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量测定。     

绞股蓝总皂苷对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响.方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402 DNA损伤的影响;RT-PCR技术从分子水平上检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用机制.结果:100 ～400 μg· mL-1的Gyp对人肝癌细胞Bel-7402增殖生长有抑制作用,Gyp(182 μg·mL-1)作用4,8,12,16,24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤,12h时DNA损伤最大,达到(81.15±14.23)％,且有时间依赖性;Gyp组细胞caspase-8大量表达,对照组细胞无表达.结论:Gyp能抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖且促进其凋亡,其作用机制与DNA损伤以及caspase-8的大量表达有关.     

盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响

探讨盐酸小檗碱对菌丝相白念珠菌细胞壁完整性的影响。以微量液基稀释法检测盐酸小檗碱对白念珠菌标准株与临床株的最低抑菌浓度(MIC);spot assay检测白念珠菌落形成;XTT法检测白念珠菌丝代谢;荧光显微镜观察白念珠菌丝活力;扫描电镜观察白念珠菌丝形态;透射电镜观察白念珠菌丝细胞壁结构;流式细胞术检测白念珠菌细胞壁β-葡聚糖暴露程度;qRT-PCR法检测白念珠菌丝特异性基因ECE1及β-葡聚糖合酶调控基因FKS1和FKS2的表达。结果显示,盐酸小檗碱对白念珠菌临床株及标准株的MIC为64~128μg·mL^-1;512μg·mL^-1盐酸小檗碱干预下能抑制白念珠菌落生长,64~512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制菌丝代谢,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制白念珠菌丝活力,256~512μg·mL^-1盐酸小檗碱能抑制形态转化,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能明显损伤细胞壁结构,128~512μg·mL^-1盐酸小檗能促进细胞壁β-葡聚糖暴露,512μg·mL^-1盐酸小檗碱能下调白念珠菌丝特异性基因ECE12.72倍及β-葡聚糖合成酶调控基因FKS1与FKS2分别3.49,3.26倍。研究表明,一定浓度的盐酸小檗碱可能通过下调白念珠菌丝特异性基因及β-葡聚糖合成酶相关基因的表达,从而破坏白念珠菌细胞壁的结构并促使β-葡聚糖暴露,进而影响整个细胞壁的完整性。     

中药南蛇藤抗肿瘤作用的研究进展

目的：探讨南蛇藤抗肿瘤作用近近研究情况。方法：搜集近年来有关南蛇藤抗肿瘤的作用的文献并进行分析。结果：南蛇藤是常见中药之一,其含有丰富的萜类、生物碱、黄酮类化合物,能够抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤侵袭、转移和血管生成,并能逆转肿瘤多药耐药性。结论：中药南蛇藤应可用于临床治疗肿瘤     

白花丹醌对瘦素刺激的人肝星状细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的 研究白花丹醌对瘦素刺激的体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)细胞周期及周期相关蛋白表达的影响,探讨白花丹醌抗肝纤维化的作用机制.方法 ELISA法检测HSC-LX2细胞培养上清液中自分泌瘦素水平.将HSC-LX2细胞分成对照组,瘦素组,白花丹醌2、8 μmol/L组,秋水仙碱6.25 μg/mL阳性对照组.除对照组外,其余各组细胞用瘦素100 μg/mL刺激24 h、再与药物共同培养24 h后,流式细胞仪检测HSC-LX2细胞周期,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclinE1、p21的表达.结果 HSC-LX2细胞自分泌瘦素的浓度先随着培养时间的延长而递减,24h达到低谷值,48h后又升至6h水平,每个时间点分泌的瘦素量无显著差异(P＞0.05).与对照组相比,瘦素组HSC-LX2细胞增殖能力显著增强,S期和G2/M期细胞比例显著增加;白花丹醌2、8μmol/L干预HSC-LX2细胞后,G0/G1期细胞的比例明显提高,而S期和G2/M期细胞比例明显降低,且呈明显的浓度相关性.与对照组比较,瘦素组HSC-LX2细胞经瘦素刺激后细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E1的量显著增加,p21蛋白的表达受到抑制;白花丹醌2、8μmol/L和秋水仙碱明显降低cyclin Dl、cyclin E1蛋白水平,增强p21蛋白表达.结论 白花丹醌可明显抑制瘦素诱导的HSC-LX2细胞增殖,该作用主要是通过抑制细胞由G0/G1期向S期转变而产生的,作用机制可能与其降低cyclin D1、cyclin E1蛋白水平,增加p21蛋白表达相关.