骨形态发生蛋白-2对兔骨髓基质细胞生物行为的影响

目的 采用不同剂量骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic proteins-2．BMP-2)刺激体外培养的兔骨髓基质细胞(marrows tromal cells，MSC)，观察促血管内皮细胞增生的重要递质血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在骨髓基质细胞中的表达及分布情况，预测MSC经BMP-2刺激后成骨效能与成血管效能的变化以及剂效关系。方法 取兔双侧股骨MSC，采用MSC体外培养技术，分别以不同剂量BMP-2刺激细胞，并设立空白对照组。培养5d后，进行细胞形态(苏木精-伊红染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(改良钙钴法染色)，成骨结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测。结果 不同剂量组间在碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率3项观测指标上，值分别为29．87，65．75及54．05，P&;lt;0．Ol，差别具有显著意义，结合各组均值来看，BMP-2剂量为100μg／L左右时效果最佳；在细胞记数与MTT检测上各组差别不显著，F值分别为1．73和0．17，P&;gt;0．05，差别不具有显著意义。结论 应用BMP-2在促进基质细胞成骨潜能的同时，还可促进促血管内皮细胞增生的重要递质VEGF的表达，其应用剂量与效果之间存在明显相关关系。BMP-2应用剂量为100μg／L左右时，其促进骨髓基质细胞表达VEGF及促进成骨潜能作用同时达到最佳效果，超过此应用剂量，两者则有下降趋势.     

碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓基质细胞生物行为的影响

目的:观察兔骨髓基质细胞(MSC)经不同剂量碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激后,促血管内皮细胞增生的重要递质血管内皮细胞生长因子(VEGF)在MSC中的表达及分布情况,并与相应成骨情况做一对比,借以预测MSC经bFGF刺激后成骨效能与成血管效能的变化,探讨其对剂效关系。方法:取兔双侧股骨MSC,采用MSC体外培养技术,分别以不同剂量bFGF刺激细胞,并设立空白对照组。培养5d后,进行细胞形态(HE染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(改良钙钴法染色)、钙化结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测。结果:不同剂量组间在细胞记数法、MTT法检测、碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率5项观测指标上F值分别为65.50,22.47,11.12,8.33和224.37,P<0.01,差别具有显著意义,结合各组均值来看,bFGF剂量为1200U/mL左右时效果最佳。结论:应用bFGF在促进MSC增殖的同时,还可促进促血管内皮细胞增生的重要递质-VEGF的表达,其应用剂量与效果之间存在明显相关关系。bFGF应用剂量为1200U/mL左右时,其促进MSC表达VEGF及促进细胞增殖作用同时达到最佳效果,超过此应用剂量,两者则有下降趋势。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓基质细胞生物行为的影响

目的：观察兔骨髓基质细胞(MSC)经不同剂量碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激后，促血管内皮细胞增生的重要递质血管内皮细胞生长因子(VEGF)在MSC中的表达及分布情况，并与相应成骨情况做一对比，借以预测MSC经bFGF刺激后成骨效能与成血管效能的变化，探讨其对剂效关系。方法：取兔双侧股骨MSC，采用MSC体外培养技术，分别以不同剂量bFGF刺激细胞，并设立空白对照组。培养5d后，进行细胞形态(HE染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(改良钙钴法染色)、钙化结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测。结果：不同剂量组间在细胞记数法、M1T法检测、碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率5项观测指标上F值分别为65．50，22．47，11．12，8．33和224．37，P&;lt;0．0l，差别具有显著意义，结合各组均值来看，bFGF剂量为l200u／mL左右时效果最佳。结论：应用bFGF在促进MSC增殖的同时，还可促进促血管内皮细胞增生的重要递质-VEGF的表达，其应用剂量与效果之间存在明显相关关系。bFGF应用剂量为l200u／mL左右时，其促进MSC表达VEGF及促进细胞增殖作用同时达到最佳效果，超过此应用剂量，两者则有下降趋势。     

重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子联合促进兔骨髓基质细胞血管内皮细胞生长因子表达及其成骨潜能

背景：了解在体外或体内环境下,应用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,能否达到既加强成骨又促进血管内皮细胞生长因子表达的双重作用。目的：观察兔骨髓基质细胞经重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子刺激后,其血管内皮细胞生长因子表达及成骨潜能的变化。方法：取兔双侧股骨骨髓基质细胞,采用骨髓基质细胞体外培养技术,单独或联合以重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞。细胞培养5d后,进行细胞形态、增殖情况、碱性磷酸酶活性、成骨结节、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率等项目的检测。结果与结论：联合先后应用重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子在细胞计数、碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率4个检测项目上优于同时应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子以及单独应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子。结果表明合理的联合使用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,不仅可促进骨髓基质细胞的快速增殖及向成骨细胞转化,还可促进促血管内皮细胞增生的重要介质血管内皮细胞生长因子的表达。     

重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子联合促进兔骨髓基质细胞血管内皮细胞生长因子表达及其成骨潜能

背景:了解在体外或体内环境下,应用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,能否达到既加强成骨又促进血管内皮细胞生长因子表达的双重作用。目的:观察兔骨髓基质细胞经重组人骨形态发生蛋白2与碱性成纤维细胞生长因子刺激后,其血管内皮细胞生长因子表达及成骨潜能的变化。方法:取兔双侧股骨骨髓基质细胞,采用骨髓基质细胞体外培养技术,单独或联合以重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞。细胞培养5d后,进行细胞形态、增殖情况、碱性磷酸酶活性、成骨结节、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率等项目的检测。结果与结论:联合先后应用重组人骨形态发生蛋白2、碱性成纤维细胞生长因子在细胞计数、碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率4个检测项目上优于同时应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子以及单独应用重组人骨形态发生蛋白2或碱性成纤维细胞生长因子。结果表明合理的联合使用重组人骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,不仅可促进骨髓基质细胞的快速增殖及向成骨细胞转化,还可促进促血管内皮细胞增生的重要介质血管内皮细胞生长因子的表达。     

兔骨髓间充质干细胞向成骨分化对血管内皮细胞形成的可能影响

背景种子细胞的成骨功能及局部血管形成是骨组织工程修复重要影响因素.目的体外研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)诱导培养分化为成骨细胞的功能表现及血管内皮生长因子(vascular endothelia growthfactor,VEGF)的表达.探讨MSCs向成骨分化及对血管内皮细胞形成的可能影响.设计以细胞为研究对象,单一样本研究,重复观察测量.单位一所大学组织胚胎学教研室.材料本实验于2002-03/12在广东医学院组织胚胎学教研室完成.对象为兔骨髓间充质干细胞.方法分离、培养新生兔骨髓间充质干细胞,用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养液诱导MSCs向成骨细胞分化,观察诱导细胞碱性磷酸酶(ALP)染色、钙化结节形成以及VEGF的表达.主要观察指标①细胞形态学观察.②培养细胞的成骨分化鉴定.③诱导培养的成骨细胞VEGF表达.结果MSCs诱导培养后,细胞ALP呈强阳性染色,形成矿化结节,且VEGF表达增强,其灰度值为132.3±4.6,与MSCs的VEGF表达灰度值(148.5±5.3)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).结论兔MSCs经诱导可分化为成骨细胞,且VEGF表达增强,可能参与内皮细胞的形成.     

兔骨髓间充质干细胞向成骨分化对血管内皮细胞形成的可能影响

背景：种子细胞的成骨功能及局部血管形成是骨组织工程修复重要影响因素。目的：体外研究兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)诱导培养分化为成骨细胞的功能表现及血管内皮生长因子(vascular endothelia gmwth factor，VEGF)的表达。探讨MSCs向成骨分化及对血管内皮细胞形成的可能影响。设计：以细胞为研究对象，单一样本研究，重复观察测量。单位：一所大学组织胚胎学教研室。材料：本实验于2002-03／12在广东医学院组织胚胎学教研室完成。对象为兔骨髓间充质干细胞。方法：分离、培养新生兔骨髓间充质干细胞，用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养液诱导MSCs向成骨细胞分化，观察诱导细胞碱性磷酸酶(ALP)染色、钙化结节形成以及VEGF的表达。主要观察指标：①细胞形态学观察。②培养细胞的成骨分化鉴定。③诱导培养的成骨细胞VEGF表达。结果：MSCs诱导培养后，细胞ALP呈强阳性染色，形成矿化结节，且VEGF表达增强，其灰度值为132．3&;#177;4．6，与MSCs的VEGF表达灰度值(148．5&;#177;5．3)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：兔MSCs经诱导可分化为成骨细胞，且VEGF表达增强，可能参与内皮细胞的形成。     

转基因技术在组织工程体外软骨组织培养中的应用

目的:研究骨形态发生蛋白-2重组腺病毒(Ad-BMP-2)转基因对骨髓基质细胞(mesenchymalstemcell,MSC)与纤维蛋白凝胶构成的复合物体外培养的影响。方法:Ad-BMP-2转染原代培养的MSC,通过细胞生长曲线、免疫组化、甲苯胺蓝染色透射电镜观察转基因MSC的BMP-2和CollagenⅡ及蛋白多糖表达。结果:转基因MSC经纤维蛋白体外三维培养后免疫组化和甲苯胺蓝染色呈阳性;电镜显示细胞生长良好,有基质合成。结论:Ad-BMP-2能够通过促进MSC分泌BMP-2诱导CollagenⅡ和蛋白多糖的表达,在纤维蛋白三维支架中形成软骨基质。     

血管内皮细胞生长因子在兔骨髓基质干细胞内的表达及影响

目的:构建血管内皮细胞生长因子pcDNA3/hVEGF165真核表达载体,并用脂质体法转染骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),观察血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)转染后对骨髓MSCs的生长、转化的影响。方法:采用贴壁法分离骨髓MSCs,脂质体法转染。100g/L胎牛血清DMEM培养MSCs,计数法绘制生长曲线,特殊染色观察MSCs的转化,免疫组织化学法观察转染后VEGF的表达。结果:转染了pcDNA3/hVEGF165的骨髓MSCs胞浆内出现VEGF阳性颗粒,而转染了pcDNA3组及未转染组中未出现阳性颗粒,生长曲线在3组中无明显差别。特殊染色出现的时间亦无明显差别。而且,注射有转染了pcDNA3/hVEGF165的MSCs的大白兔局部皮下血管数量增加,其他两组未发现。结论:本实验成功构建了pcDNA3/hVEGF165真核表达载体并能够在MSCs细胞内表达VEGF,其表达产物具有血管内皮增殖刺激活性。     

BMP-2基因修饰的骨髓基质干细胞种植纳米骨的实验研究

[目的]用携带BMP-2基因的腺病毒表达载体(Ad-BMP-2)转染兔骨髓基质干细胞(MSC),接种于胶原基纳米骨支架(nHAC)体外构建组织工程骨.[方法]将BMP-2基因修饰的MSC接种于nHAC支架,扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况;Western Blot分析BMP-2基因表达.[结果]BMP-2基因修饰的MSC在nHAC支架表面和孔隙内黏附、生长良好,仍可高水平表达BMP-2蛋白.[结论]BMP-2基因修饰的MSC在nHAC支架中黏附、生长良好,继续高水平表达并分泌BMP-2,组织工程骨构建成功.     

活性煅烧骨复合骨水泥修复骨缺损:修复后的血管化及结构变化

目的观察活性煅烧骨(TBC)复合骨水泥(BC)修复骨缺损后的血管化及结构变化。方法将活性TBC和BC复合后植入兔尺骨缺损部位,不同时间行印度墨汁动脉血管灌注及材料断面扫描电镜观察,观察血管生成情况及结构变化。结果墨汁灌注2周时见TBC周围血管形成密集,并向材料中长入,4、8和12周时新生血管逐渐增多,并深入材料中央。电镜观察4周时TBC周围及内部孔隙被胶原纤维束充填,部分胶原矿化。8～12周新生骨组织附于TBC颗粒及BC表面,原孔隙接近消失,TBC颗粒少量降解。结论活性TBC复合BC具有骨诱导作用,新生血管及新生骨组织生成良好,是理想的骨缺损修复材料。     

理想的骨缺损修复材料研究- - 首次将提取牛煅烧骨形态发生蛋白骨水泥复合材料的成骨诱导活性报告

目的探讨煅烧骨粒、骨形态发生蛋白(bBMP)及骨水泥复合材料的成骨诱导活性.方法小鼠股部肌袋内植入复合材料,不同时间取材HE染色观察复合材料的异位诱导成骨活性.结果7d时材料外即形成间充质组织包膜,并沿材料不规则裂隙向内部长入;14d间充质组织细胞向软骨细胞分化;21d软骨样组织生成量增多,煅烧骨颗粒部分被新生软骨样组织包裹,间有新骨生成;28d较多量的新骨生成,并可见类似哈佛氏系统样组织,有吸收现象.结论复合材料具有诱导成骨活性,其中的煅烧骨颗粒能降解.     

骨髓抽吸-活检双标本一步法取材在骨髓转移癌诊断中的应用

本研究旨在探讨骨髓抽吸-活检双标本一步法取材在骨髓转移癌诊断中的价值。对我院46例骨髓转移癌患者采用骨髓抽吸-活检双标本一步法取材,同步分析骨髓穿刺涂片及骨髓活检组织切片结果。结果表明,骨髓抽吸-活检双标本一步法取材成功率95.7%。46例患者中45例(97.8%)骨髓活检组织切片中可观察到多少不等的成团、成簇的转移癌细胞,且可见形态异常改变。骨髓涂片中可观察到癌细胞团者占54.3%。转移癌患者骨髓活检中有不同程度的骨髓纤维组织增生,以轻中度增生为主。除食管癌中骨髓活检诊断阳性率为83.3%外,其余转移癌骨髓活检诊断阳性率为100%。骨髓涂片在卵巢肿瘤、胸椎肿瘤、肺癌、胃癌、乙状结肠癌、食管癌及不明原发灶转移癌中诊断阳性率分别为33.3%、50%、72.2%、60%、50%、33.3%和25%。骨髓活检诊断阳性率高于骨髓涂片。结论:骨髓抽吸-活检双标本一步法取材成功率高;骨髓活检在骨髓转移癌诊断方面优于骨髓涂片,将两者结合同步分析能提高诊断准确率。     

Long-term pamidronate treatment of polyostotic fibrous dysplasia of bone: A case series in young adults

Background: Limited information is available about long-term pamidronate treatment in adults with fibrous dysplasia (FD) of bone.Objective: The aim of this case series was to report the clinical outcomes and the biochemical and densitometric findings in a group of young adult patients with polyostotic FD treated for ≥3 years with IV pamidronate.Methods: Pamidronate was administered every 6 months (60 mg/d for 3 days) for 2 years. Thereafter, treatment was individualized. Pamidronate was administered at shorter or longer intervals based on response. Bone pain, radiography, serum bone alkaline phosphatase (BALP) activity, and urinary C-terminal cross-linking telopep-tide of type I collagen (CTX-I) concentration were assessed for a mean of 7 years. Bone mineral density (BMD) of FD areas (FDas) and contralateral areas (CLas) were measured at baseline and at 12 and 24 months. Data were collected prospectively.Results: Seven patients (5 women, 2 men; mean [SD] age, 31.0 [7.2] years [range, 22-43 years]) were included in the study. Patients received IV pamidronate for a mean of 6.9 years (median, 7.1 years [range, 3.7-10.9 years]). Pamidronate was associated with a reduction in bone pain and a significant reduction in BALP in all patients at the end of follow-up (P < 0.02). The mean reduction from baseline in CTX-I concentration (measured in 3 patients) was 56%; this difference was not significant. Mean BMD values of FDas were significantly increased at 12 months (by 5.9%; P < 0.05) compared with baseline; but was not significantly increased at 24 months (7.3%), probably reflecting a higher dispersion of values due to individual responses to treatment. No significant changes were observed in CLa BMDs. Mean BMD of FDa had a numerically lower decrease of 15.3% compared with CLa at baseline; these decreases with pamidronate were 10.8% at 12 months (P = NS) and 9.3% at 24 months (P < 0.05). Refilling of osteolytic lesions was not observed.Conclusions: These patients with FD of bone treated with IV pamidronate long term had improvement in bone pain and BMD. The effectiveness of individualized pamidronate administration in the long-term treatment of FD in adult patients should be investigated in blinded controlled trials.     

煅烧骨的安全性

背景：经高温处理的煅烧骨具有类似自然骨的连续微孔结构,良好的生物相容性和降解性. 目的：观察牛煅烧骨的生物相容性、细胞相容性及毒性. 方法：①细胞相容性实验：将牛煅烧骨与第3代已诱导的Wistar大鼠骨髓间充质干细胞复合培养.②溶血实验：将煅烧骨浸提液、生理盐水与双蒸水加入兔血中.③凝血实验：将煅烧骨加入兔血浆中.④急性毒性实验：在昆明种小鼠尾静脉分别注射煅烧骨浸提液、生理盐水.⑤微核实验：在小鼠腹腔分别注射煅烧骨浸提液、生理盐水与环磷酰胺.⑥局部刺激性实验：将煅烧骨浸提液、生理盐水分别注射于兔两侧脊柱皮下.⑦热源检测实验：在兔耳静脉注射煅烧骨浸提液.⑧皮下植入实验：将煅烧骨材料植入Wistar大鼠背部皮下. 结果与结论：煅烧骨材料无细胞毒性,具有良好的细胞及血液相容性;对皮肤、肌肉无刺激作用;对心、肝、肾重要器官无毒性作用;皮下植入后对周围组织无刺激作用,能够部分降解吸收并被机体组织替代;无致热作用,对凝血功能无影响,对小鼠骨髓细胞无抑制及毒性作用.     

骨形态发生蛋白复合材料修复兔皮质骨缺损

目的通过磷酸钙骨水泥(CPC)复合同种异体脱钙骨基质颗粒(DBM)及骨形态发生蛋白(bBMP)修复皮质骨缺损,探讨其对骨缺损的修复情况。方法在兔前肢桡骨制作长1cm的骨缺损,填充CPC与复合bBMP异体同种的DBM的复合物,应用大体标本观察、X线摄片、组织学观测、印度墨汁灌注等方法观察其对骨缺损的修复情况,对侧以单纯的CPC做对照。结果第2周开始复合材料组有血管长入,第4周X线片上显示可见、骨痂形成,12周后,复合材料与两端的骨质愈合良好,局部板层骨致密,哈夫氏系统排列整齐。结论磷酸钙骨水泥复合bBMP及同种异体脱钙骨颗粒修复、皮质骨缺损有较好的效果。     

运动负荷骤降对生长期大鼠长骨骨量和骨代谢生化指标的影响

目的观察运动负荷骤降对生长期大鼠长骨骨量(BMC)、骨密度(BMD)和骨代谢生化指标的影响。方法雄性3月龄SD大鼠48只,随机分成大强度运动组(T1)、大强度转低强度运动组(T2)、低强度运动组(T3)、对照组(Con),每组12只。前6周,T1、T2组进行大强度跑台运动,T3组进行低强度跑台运动。6周末,DEXA测定每组部分大鼠股骨BMC、BMD,酶标仪法测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)和抗酒石酸性磷酸酶(TRACP5b)。降低T2组运动负荷,与T3组一致,其余组运动强度不变,继续运动6周。同样方法测定上述指标。结果与运动负荷降低前比较,12周末T2组大鼠ALP、BGP降低(P<0.05),TRACP5b升高(P<0.05),股骨BMC、BMD无显著性差异(P>0.05)。结论运动负荷骤降使成长期大鼠长骨骨形成抑制,骨吸收增强。     

异体脱钙骨基质骨粒骨水泥骨形态发生蛋白复合材料成骨诱导活性

INTRODUCTIONTherecombinanthumanbonemorphogeneticprotein-2(rhBMP-2)hadbeenexpressedbytheeukaryoticcellsineightycentury犤1犦.TherhBMP-2combinedwiththedecalcifiedbonematrix(DBM)par-ticleswasimpregnatedwithbonecementtoproducethecompoundbonedefectrepairmaterialandtheboneinductivecapacityofitwasinvestigatedinourstudy.MATERIALSANDMETHODSDBMparticlesandthecompoundmaterialpreparationThe100-400μmgrainyDBMparticlesweremadeaccordingtotheUrist'smethods犤2犦.30mgDBMparticlescombinedwith…     

活性煅烧骨颗粒与骨水泥修复微波灭活后骨缺损

目的探讨活性煅烧骨颗粒和骨水泥复合修复微波灭活后骨缺损的效果.方法用复合材料修复兔右侧股骨中段微波灭活后的骨缺损,左侧单纯植入骨水泥做对照.分别于术后不同时间行X-射线照相、99mTc-MDP骨扫描、组织学观察.结果4周开始形成骨痂,12周骨痂最丰富,24周复合材料与宿主骨边缘模糊,边缘部分的煅烧骨颗粒被新生骨替代,并与宿主骨融合.结论活性煅烧骨颗粒和骨水泥复合易塑形,能修复骨肿瘤微波灭活后的骨缺损.     

Anatomical sector analysis of load-bearing tibial bone structure during 90-day bed rest and 1-year recovery

The aim of this study was to investigate whether the bone response to long bed rest-related immobility and during subsequent recovery differed at anatomically different sectors of tibial epiphysis and diaphysis. For this study, peripheral quantitative tomographic (pQCT) scans obtained from a previous 90-day 'Long Term Bed Rest' intervention were preprocessed with a new method based on statistical approach and re-analysed sector-wise. The pQCT was performed on 25 young healthy males twice before the bed rest, after the bed rest and after 1-year follow-up. All men underwent a strict bed rest intervention, and in addition, seven of them received pamidronate treatment and nine did flywheel exercises as countermeasures against disuse-related bone loss. Clearly, 3-9% sector-specific losses in trabecular density were observed at the tibial epiphysis on average. Similarly, cortical density decreased in a sector-specific way being the largest at the anterior sector of tibial diaphysis. During recovery, the bed rest-induced bone losses were practically restored and no consistent sector-specific modulation was observed in any subgroup. It is concluded that the sector-specific analysis of bone cross-sections has potential to reveal skeletal responses to various interventions that cannot be inferred from the average analysis of the whole bone cross-section. This approach is considered also useful for evaluating the bone responses from the biomechanical point of view.