Mcl-1基因与血液恶性肿瘤

Mcl-1（myeloid cell leukemia-1）基因是Bcl-2家族的一个成员，在凋亡调控中具有重要作用，本文从Mcl-1的生物学特性、生物学功能、与血液恶性肿瘤以及潜在的医学应用进行讨论，表明Mcl-1表达和调节异常与血液恶性肿瘤的发生和发展有关，因此对Mcl-1的深入研究具有重要意义。     

三氧化二砷对淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响及其与Mcl-1基因表达关系的研究

本研究探讨不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡诱导的作用特点及其机制,并探讨其与mcl—1基因表达的关系。应用琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度As2O3作用于Raji细胞后的典型DNA—Ladder凋亡条带,激光共聚胶显微镜检测Raji细胞线粒体膜电位的变化,实时荧光定量PCR技术检测As2O3对mcl-1基因表达的影响。结果表明：1μmol／L As2O3作用于Raji细胞时其凋亡不明显,2—8μMol／L As2O3可以诱导Raji细胞凋亡。随着药物浓度的增加,Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位明显减低,同时mcl-1基因表达量明显下调。结论：As2O3降低Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位、下调mcl-1基因表达,而这些可能是导致细胞凋亡的机制。     

Mcl-1基因在肿瘤靶向治疗中的研究进展

凋亡是一种基因编码的程序性细胞死亡,在生物体发育、防御及保持稳态中起重要作用。细胞的凋亡受阻与肿瘤的发生密切相关。已发现多种基因编码的产物参与细胞凋亡的调控,目前对细胞死亡调节因子Bcl-2（Bcell leukelia-2）蛋白家族有较深入的研究,髓细胞白血病基因-1（myeloidcellleukemin-1,Mcl-1）是Bcl-2家族基因中的抗凋亡因子,在多种癌组织中呈高表达,而在癌旁组织中呈低表达状态,提示抑制Mcl-1基因的表达,或者阻断调节Mcl-1基因表达的信号途径能有效地诱导细胞凋亡,为临床肿瘤治疗提供了新的药物干预靶点。     

索拉非尼及其治疗血液肿瘤的研究进展

血液肿瘤的复发和耐药一直是其无法治愈的根本原因.多激酶抑制剂索拉非尼这一口服抗肿瘤新药,能够阻断Ras/Raf/MEK/ERK信号通路,抑制多种受体,已经在肾细胞癌和肝癌等治疗中取得突破性进展.笔者对索拉非尼治疗血液肿瘤的研究进行综述如下.     

RASSF1基因与肿瘤的关系

RASSF1基因位于染色体3p21．3，其转录本RASSF1A已被确认为一种候选肿瘤抑制基因，在多种实体肿瘤中表达异常，参与细胞周期和细胞凋亡的调控，并抑制细胞生长，但作用机理尚未阐明。     

B细胞非霍奇金淋巴瘤中Mcl-1和p63表达的临床意义

髓细胞白血病-1基因（Mcl-1）是Bcl-2基因家族的成员，是凋亡调控的重要基因。为此，我们对Mcl-1和p63在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）和B细胞淋巴瘤中表达的意义进行了研究。     

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法在血液肿瘤治疗中的研究进展

近年来,经过基因工程改造的自体T淋巴细胞疗法在肿瘤治疗的临床试验中取得了令人瞩目的成果,其中嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法已经在急性淋巴细胞白血病(ALL)中取得显著的疗效.嵌合抗原受体(CAR)是由抗原结合区与共刺激分子组成的融合分子.而CAR-T具有特异性结合肿瘤细胞的能力.与传统药物不同的是,CAR-T可以凭借免疫记忆效应在体内发挥长期的抗肿瘤作用.因此,CAR-T免疫疗法受到了越来越多的关注,已经成为治疗血液系统肿瘤,尤其是B淋巴细胞恶性肿瘤的极具前景治疗手段.笔者拟就CAR-T免疫疗法在血液系统肿瘤中的研究进展进行综述.     

PD-1/PD-L1通路在血液系统疾病中的研究进展

免疫应答的有效激活需要双信号的作用。共刺激信号中B7家族在肿瘤免疫治疗中应用广泛,PD-L1是新发现的B7家族成员,其配体为PD-1。PD-1/PD-L1通路有负调控免疫反应的作用,是近年来研究的热点。本文对PD-1和PD-L1在正常组织及肿瘤组织中的表达情况,及PD-1/PD-L1通路在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、再生障碍性贫血等血液系统疾病中的研究现况作一综述,旨在为血液系统疾病的治疗提供新的思路。     

WT1基因转染增加白血病细胞凋亡的实验研究

为了探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4凋亡的影响及其分子机制,应用电穿孔的方法将携带WT1基因异构体WTA（-17AA/-KTS）全长cDNA的真核表达载体及其对照质粒pCB6^＋转导白血病细胞株NB4,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株;用MTT、形态学观察、DNA凝胶电泳、An-nexin V结合力测定等方法观察WT1基因异构体表达比例的转变对白血病细胞NB4诱导凋亡的影响;用RT-PCR方法检测细胞中p21、p53、bcl-2、bcl-XL、和c-myc等凋亡相关基因表达的改变.研究结果表明,MTT显示NB4/WTA细胞对As2O3的IC50值较对照组明显降低;经As2O3作用48小时,NB4/WTA细胞Annexin V结合力较对照组细胞升高,出现更为典型的凋亡形态学改变;在DNA凝胶电泳可见更为明显的DNA梯形条带,RT-PCR检测提示NB4/WTA细胞p21、c-myc基因的表达较对照组高,bcl-2表达下降,p53、bcl-XL基因表达无明显改变.结论：增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由＋17AA/＋KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型,能使NB4细胞对As2O3引起的凋亡更为敏感,这些改变可能与p21、c-myc等基因的表达上调和bcl-2基因的表达下调有关.     

Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用

本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（MDS）细胞凋亡的机制。用2一ME预处理MUTZ—1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因-髓细胞白血病基因-1（mcl-1）和bcl-2相关X蛋白（bax）mRNA的表达。结果表明：与对照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）;随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl—1mRNA表达下降（P〈0．05）,且mcl-1mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关（r=-0．992,P〈0．01）,而baxmRNA表达没有明显变化（P〉0．05）。结论：2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDs细胞凋亡。     

恶性血液病患者mdr1基因启动子区甲基化状态及其与表达的关系

为了探讨多药耐药 (mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系 ,采用甲基化敏感的HpaⅡ酶切结合竞争性定量PCR检测 5 4例急性白血病 (AL)和 9例多发性骨髓瘤 (MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游 - 110和 - 5 0bp处两个CCGG位点 (I区和Ⅱ区 )的甲基化率 ;半定量RT PCR检测mdr1基因的表达水平。结果显示I区、Ⅱ区及总甲基化率均与表达呈负相关 ,I区比Ⅱ区相关密切 (r分别为 - 0 .6 4和 - 0 .4 0 )。低甲基化组(n=36 )mdr1高表达率显著增高 (P <0 .0 0 1)。与化疗敏感组 (n =8)相比 ,耐药组 (n=16 )I区 (P =0 0 5 )、Ⅱ区 (P <0 .0 5 )和总甲基化率 (P <0 .0 5 )均减低。与未化疗组 (n =36 )相比 ,化疗后组 (n =14 )I区和总甲基化率均减低 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ区甲基化率也减低 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。化疗后组随甲基化率减低 ,mdr1表达升高 ,但尚无统计学意义 (P =0 .0 6 )。结论 :AL和MM患者骨髓mdr1基因表达水平与基因转录起始点上游 - 110和- 5 0处两个CCGG位点的甲基化程度呈负相关 ,且与 - 110处关系更密切。化疗后及耐药病人mdr1基因甲基化水平相对降低。化疗后mdr1基因表达增高与其甲基化水平降低有关。     

急性白血病患者bcl—2和bax基因表达的临床意义及其与mdr—1基因表达的关系

细胞凋亡受抑作为肿瘤细胞的耐药机制,是急性白血病(AL)预后不良的原因之一.bcl-2家族是目前最受重视的调控细胞凋亡的基因家族,本研究为探讨bcl-2和bax基因在急性白血病表达的意义,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定70例初治AL患者及20例正常人的bcl-2,bax,mdr-1基因mRNA水平的表达,用流式细胞术检测其蛋白表达.结果表明,bcl-2和bax基因在AL患者广泛表达,bcl-2 mRNA平均表达水平明显高于正常对照(1.46 vs 0.71,P＜0.05).bcl-2和bax基因表达及bax/bcl-2比值与AL患者的年龄、性别、血小板计数、血红蛋白水平、骨髓原始细胞百分率、FAB分型和S+G2M%均未发现相关.Bcl-2蛋白表达(34.6%vs 69.2%,P＜0.05),bax/bcl-2 mRNA比值(37.1%vs 82.9%,P＜0.01)决定AL对化疗的敏感性,与AL CR率密切相关.bax/bcl-2 mRNA比值还是影响总生存期的因素.bcl-2与bax基因表达和mdr-1表达两者无相关关系.     

WT1基因与白血病

ＷＴ１基因能抑制生长因子和生长因子受体的转录,因此被归类为肿瘤抑制基因,但在人类白血病细胞ＷＴ１基因呈高表达,基表达水平与预后呈负相关,ＷＴ１基因的反义核苷酸可抑制白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡,野生型的ＷＴ１转染组系祖细胞后,可使细胞失去受粒细胞集落刺激因子的诱导分化,而代之以持续增殖。这些现象揭示,在造血祖细胞ＷＴ１基因可能起癌基因的作用。     

白血病相关基因zo-1参与白血病发病过程及其机制的初步研究

本研究探讨新的白血病相关基因zo-1在白血病细胞中的作用及其初步机制。应用甲基化PCR方法验证THP-1等白血病细胞中基因zo-1甲基化与白血病的关系,用甲基化PCR及RT—PCR方法验证THP-1等白血病细胞系中基因zo-1甲基化与基因表达的关系。选择基因zo-1高表达的THP—1细胞,用脂质体Oligofectamine将针对基因zo-1的小干扰RNA转染THP-1细胞,RT—PCR方法验证抑制效率,Annexin V和PI观察细胞凋亡率,PI检测细胞周期,CCK-8检测细胞增殖。结果表明：急性白血病人中基因zo-1呈高甲基化状态,健康人群中基因zo-1不发生甲基化。基因zo-1未甲基化的THP-1细胞系高表达基因zo-1;基因zo-1高甲基化的Molt4及HL-60细胞系中不表达基因zo-1。脂质体Oligofectamine转染针对zo-1的小干扰RNA成功地抑制了THP-1细胞基因zo-1的表达,而不影响THP-1细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡。结论：基因zo-1为白血病相关基因,急性白血病中基因zo-1高甲基化,基因zo-1的甲基化状态调控基因zo-1表达。THP—1细胞中基因zo-1表达缺失不影响细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡。     

砷剂诱导多发性骨髓瘤细胞socs-1基因去甲基化作用的研究

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）对人多发性骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞内socs-基因甲基化状态的影响。用MTT法观察As2O3对骨髓瘤细胞增殖情况的影响，采用甲基特异性PCR法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226 socs-1基因的甲基化状态，以实时定量PCR技术定量检测细胞株给药前后socs-1基因mRNA的表达变化，流式细胞技术检测As2O3诱导的骨髓瘤细胞的凋亡情况。结果表明：人骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226均存在不同程度的socs-1基因CpG岛甲基化，socs-1基因不表达的现象。As2O3作用72小时后socs-1基因甲基化程度明显减弱或消失，socs—1基因在mRNA水平上表达明显增强，与各野生型细胞株相比，差异具有显著性P〈0．05），且细胞生长抑制明显，早期、晚期细胞凋亡比率明显升高，并呈现剂量依赖性。结论：As：03可诱导socs—1基因甲基化状态的改变，使基因表达上调，恢复其活性，这为进一步阐明As2O3诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制和As2O3治疗多发性骨髓瘤的可能机制提供新的思路和新的研究方向。     

Xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通过慢病毒载体PLL3.7介导的xbp-1 shRNA表达,能有效抑制H929细胞XBP-1蛋白表达,xbp-1 shRNA表达细胞的凋亡率显著高于对照组[(10.13±0.61)%vs(2.5±0.2)%,p0.05];经硼替佐米处理后,xbp-1基因功能缺陷的H929细胞的凋亡率显著高于空载体组[(45.07±1)%vs(2.73±0.25)%,p0.05]。结论:xbp-1基因沉默能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。     

中国甘肃人群髓过氧化物酶基因多态性与急性白血病易感性的关系

本研究旨在探讨甘肃汉族人群髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）基因多态性和急性白血病易感性的关系。用1∶1配对病例-对照方法及LDR-PCR方法,对100例急性白血病（AL）患者和100例非血液病、非肿瘤者作为对照进行mpo基因G463A突变分析。结果发现,AL病例组mpo基因a等位基因频率（19%）和ga/aa基因型频率（31%）均低于对照组（28%和54%）。携带ga/aa基因型的个体发生AL的相对风险度为其野生型（gg）的0.383倍（95%CI=0.215-0.682）。进一步分层分析显示,急性髓系白血病（AML）病例组ga/aa基因型频率（28.2%）低于对照组（54%）（p〈0.01）。携带ga/aa基因型的个体发生AML的相对风险度为其野生型（gg）的0.346倍（95%CI=0.157-0.546）。急性淋巴细胞白血病（ALL）病例组mpo基因a等位基因频率和ga/aa基因型频率均与对照组无统计学差异（p〉0.05）。结论：本研究人群mpo基因多态性与AML遗传易感性相关,等位基因a对AML易感性有保护作用,但与ALL易感性无关联。