一种快速分离纯化金葡萄球菌肠毒素C2的方法

目的 建立一种简单快捷的方法,用来从金黄色葡萄球菌的发酵液(以下简称金葡液)中纯化分离肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2).方法 金葡液首先经超滤浓缩,之后再分别经阳离子交换层析和阴离子交换层析进行选择性分离SEC2,用SDS-PAGE电泳、HPLC法检测纯度及相对分子质量,飞行质谱测定精确分子质量,对其进行N -端氨基酸序列分析.结果 分离得到的SEC2电泳纯及色谱分析纯度均达到质量分数98%以上,经各项理化指标检测均与文献一致,在等电点上表现出微不均匀性,等电点pI 为7.49和6.74,该蛋白的分子质量为27.58 ku,N -端氨基酸序列分析与文献报道的SEC2序列一致(ESQPDPTPDELHKSS),最大吸收波长为277.5 nm.结论 用该方法得到的SEC2纯度高,回收率质量分数高达50%,适宜于大批量制备SEC2.     

超抗原SE-金葡菌肠毒素的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素（SE）是一种外源性超级抗原,仅需微量即能能刺激非特性T细胞的大量增殖,促使产生大量和多种细胞因子及细胞毒,提高机体免疫力,使之获得抗肿瘤的能力,故是一种很有前途的新型肿瘤免疫治疗剂,目前已开始已用于肿瘤患者的辅助治疗。本文对葡萄球菌肠毒素的结构、抗肿瘤作用机理及其应用前景作了简要综述。     

金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准，但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测，本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔，制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验，检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20 ng·mL^-1，在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%，采用本法检测质量浓度分别为100 ng·mL^-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI)，均呈现阴性反应，说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测，发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。     

8种中草药对耐药金葡菌的最小抑菌浓度检测

目的检测对耐药金葡菌敏感的部分中草药的最小抑菌浓度,为临床配制治疗耐药金葡菌感染的中药制剂提供药物与剂量的依据.方法将经实验证明对MRSA有效的8种中草药,采用肉汤稀释法测定其对耐药金葡菌的最小抑菌浓度.结果 8种中草药对耐药金葡菌的最小抑菌浓度分别为:九节茶、白芍、黄芩:62.5 mg/ml,丹皮、黄连、厚朴:15.6 mg/ml,夏枯草:7.8 mg/ml,诃子:1.0 mg/ml.结论 8种中草药中对MRSA最敏感是诃子,使用剂量最小,其次是夏枯草、丹皮、黄连、厚朴,最次为九节茶、白芍、黄岑.对制备治疗MRSA感染的中药制剂,可供药物与剂量的参考.     

8种中草药对耐药金葡菌的最小抑菌浓度检测

目的检测对耐药金葡菌敏感的部分中草药的最小抑菌浓度,为临床配制治疗耐药金葡菌感染的中药制剂提供药物与剂量的依据。方法将经实验证明对MRSA有效的8种中草药,采用肉汤稀释法测定其对耐药金葡菌的最小抑菌浓度。结果8种中草药对耐药金葡菌的最小抑菌浓度分别为:九节茶、白芍、黄芩:62.5mg/ml,丹皮、黄连、厚朴:15.6mg/ml,夏枯草:7.8mg/ml,诃子:1.0mg/ml。结论8种中草药中对MRSA最敏感是诃子,使用剂量最小,其次是夏枯草、丹皮、黄连、厚朴,最次为九节茶、白芍、黄岑。对制备治疗MRSA感染的中药制剂,可供药物与剂量的参考。     

CYP2C19基因多态性与冠心病合并肾功能不全患者经皮冠状动脉介入术后1年预后的相关性

目的 探讨CYP2C19基因多态性与冠心病(冠状动脉粥样硬化性心脏病)合并肾功能不全患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后1年预后的相关性.方法 连续入选2016年1月至2017年12月于首都医科大学附属北京安贞医院行PCI治疗的冠心病合并肾功能不全患者182例.根据是否携带CYP2C19功能缺失等位基因分为携带组和未携带...     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定红药片中三七皂苷R_1及人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的含量

目的用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法测定红药片中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。方法色谱柱填料为氨基键合硅胶(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(体积比为80∶20),漂移管温度为90℃,载气流速为2.1 L.min-1。结果三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1质量分别在0.214~2.14μg、0.808~8.08μg、0.308 4~3.04μg及0.996~9.96μg内的对数值与相应峰面积的对数值呈良好线性关系;制剂中4种成分的平均回收率(n=6)分别为96.7%(RSD=2.1%)、96.0%(RSD=1.2%)、96.8%(RSD=2.4%)和96.6%(RSD=2.5%)。结论该方法准确、分离效果好、无干扰,可用于红药片的质量控制。     

基于AVP-cAMP-AQP_2探讨黄柏及其不同炮制品的滋阴作用

目的研究黄柏及其不同炮制品的滋阴作用。方法以黄柏及其不同炮制品的提取物灌胃,观察大鼠的尿量、尿渗透压的变化,检测大鼠血中皮质醇、cAMP和AVP含量,并对大鼠髓质水通道蛋白2免疫组化。结果黄柏及其不同炮制品均能提高阴虚模型大鼠的尿量,降低尿渗透压;降低阴虚模型大鼠血液中的皮质醇、cAMP和AVP含量;能提高肾阴虚模型大鼠肾脏的APQ2表达。结论黄柏及其炮制品均具有不同程度的滋阴作用。     

维生素K1注射乳在小鼠体内的药物分布评价

目的 制备维生素K₁注射乳,并考察其在小鼠体内的分布情况。方法 采用微射流仪制备维生素K₁注射乳;维生素K₁注射乳剂和普通注射剂尾静脉注射至小鼠体内,采用HPLC法测定维生素K₁在小鼠体内各组织的浓度。结果 维生素K₁注射乳粒径为（172.2±63.0）nm,注射给药后,维生素K₁注射乳组的肝、脾中维生素K₁的AUC值分别为注射液组的2.34和2.70倍。结论 维生素K₁注射乳在小鼠体内具有显著肝、脾靶向性     

盐酸表阿霉素脂质体对S_(180)荷瘤小鼠生命质量的影响

目的对经盐酸表阿霉素脂质体治疗的S180荷瘤小鼠生命质量进行研究,为抗癌药物脂质体药效的评价提供一种新的方法。方法以小鼠摄水量、摄食量、体质量、自主活动次数和爬网时间为指标,评价经盐酸表阿霉素溶液及盐酸表阿霉素脂质体治疗的S180荷瘤小鼠生命质量。结果与盐酸表阿霉素溶液相比,经盐酸表阿霉素脂质体治疗后S180荷瘤小鼠生命质量得到改善。结论在以荷瘤小鼠为研究对象进行抗癌药物脂质体药效学研究时,生命质量是一种评价药物治疗效果的重要指标。     

RP-HPLC法测定白头翁汤中白头翁皂苷B4的含量

目的 建立白头翁汤中白头翁皂苷B₄含量测定的RP-HPLC法。方法 采用Hypersil C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈-水（体积比28∶72）为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长205 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL。结果 白头翁皂苷B4质量浓度在0.1～1.5 g·L^-1内线性关系良好（r=0.999 8）;平均加样回收率为103.1%,RSD为1.2%（n=9）;重复性RSD为1.6%（n=5）。结论 该方法简便、快速、准确、重现性好,为白头翁汤及其新剂型改进提供了一种质量控制方法。     

HPLC法同时测定强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素的含量

目的建立HPLC法同时测定强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素含量的方法。方法采用Phenomen kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-体积分数为0.05%的磷酸溶液(体积比为25∶75)进行等度洗脱,检测波长:270 nm,柱温:30℃,流速:1.0 mL.min-1。结果淫羊藿苷质量浓度在0.509~20.400 mg.L-1(r=1.000)内、补骨脂素质量浓度在0.416~16.600 mg.L-1(r=0.9999)内与峰面积呈良好的线性关系;淫羊藿苷、补骨脂素的回收率分别为99.0%、101.0%,RSD分别为1.5%、1.6%。结论所建立的定量方法适用于强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素的含量测定。     

荛花酚对H2O2和兴奋性神经递质诱导的大鼠皮层神经元细胞损伤的保护作用

目的从中药祖师麻中发现有效的神经保护成分,阐明其治疗神经退行性疾病的药效物质基础。方法使用体外培养的大鼠皮层神经元细胞作为筛选系统,综合运用各种色谱技术进行活性跟踪指导下的分离,对发现的活性成分在体外细胞水平研究其神经保护机制。结果我们发现中药祖师麻的甲醇提取物可显著地减轻由谷氨酸（L-glutamate）、海人藻酸（kainic acid,KA）和过氧化氢（H2O2）诱导的大鼠皮层神经元细胞损伤。从祖师麻中分离纯化了一系列化合物,其中活性最强的是荛花酚（wikstromol）。荛花酚在50μM的浓度下可显著地降低H2O2诱导的细胞损伤。荛花酚显著地减少了细胞内谷胱甘肽、超氧化物歧化酶等抗氧化物质的下降,并减轻由兴奋性神经递质（谷氨酸、海人藻酸）诱导的神经毒性损伤,但不能减轻由N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的神经毒性损伤。结论本研究确证了荛花酚可作为一种天然神经细胞保护剂,推测其神经保护机制可能是通过抗氧化作用实现的。     

二至丸水提物对体外肝细胞损伤的保护作用

目的研究二至丸水提物（aqueous extract of Erzhi Pill,AEEP）对体外肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法培养L-O2型肝细胞,采用H2O2和CCl4体外分别诱导肝细胞损伤,检测培养上清液中天门冬氨酸转换酶（AST）和丙氨酸氨基转换酶（ALT）水平,测定上清液中丙二醛（MDA）的含量和过氧化物岐化酶（SOD）活力,MTT法检测细胞存活和增殖活性。结果①AEEP（0.32~40μg/ml）剂量组可明显降低由H2O2升高的肝细胞培养上清液中AST和ALT水平及MDA含量,还可提高H2O2降低的肝细胞存活率和SOD活力;②AEEP（0.32~40μg/ml）剂量组可使CCl4升高的肝细胞培养上清液中ALT和ALT水平及MDA含量明显降低或恢复,还可提高CCl4降低的肝细胞存活率和SOD活力。结论提示AEEP对体外肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

荷叶中化学成分的分离与鉴定

目的研究荷叶中的化学成分。方法采用正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及PHPLC法进行分离纯化,并通过理化性质、光谱分析方法及与文献对比,鉴定化合物的化学结构。结果从荷叶体积分数为70%的乙醇提取物中分离鉴定了8个化合物,其中有4个木脂素类:(+)-松脂醇[(+)-pinoresinol,1]、(+)-表松脂醇[(+)-epipinoresinol,2]、sylvatesmin(3)、(+)-异落叶松树脂醇[(+)-isolariciresinol,4];4个降倍半萜类:(3S,5R,6S,7E)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-me-gastigmen-9-one(5)、4,5-dihydroblumenol A(6)、(E)-3-oxo-retro-α-ionol(7)、(3S,5R,6R,7E,9S)-megastigman-7-ene-3,5,6,9-tetraol(8)。结论化合物1-8均为首次从莲属植物中分离得到。