生长激素对梗阻性黄疸时肿瘤坏死因子-α及内毒素血症的影响

我们通过建立梗阻性黄疸 (ＯＪ)大鼠动物模型 ,探讨重组人生长激素 (ｒｈＧＨ)对肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)的影响及机制。一、材料和方法成年雄性大鼠 60只 ,体重 2 90～ 350ｇ。随机分为假手术 (ＳＯ)组、ＯＪ组、ＯＪ +ｒｈＧＨ组 ,每组 2 0只。标准内毒素和鲎试剂检测盒购自广西医科大学生物制品有限公司。ＴＮＦ α酶联免疫吸附(ＥＬＩＳＡ )试剂盒购自法国ＢｅｓａｎｃｏｎＣｅｄｅｘ公司。ｒｈＧＨ为瑞士雪兰诺大药厂生产 ,商品名Ｓａｉｚｅｎ。法国Ｐ50 0紫外可见光分光光度仪 ,奥地利产ＨＴ3型酶标仪。动物模型建立 :ＳＯ组仅分离…     

肿瘤坏死因子在梗阻性黄疸肝损伤中的实验研究

目的 研究梗阻性黄疸鼠内毒素（ＬＰＳ）血平时肝组织液中ＴＮＦ－α活性与肝细胞损伤的关系。方法 将３２只大白鼠均作胆总管结扎，切断，复制梗阻性黄胆模型，随机分为三于术后第五天处死。ＢＤＬ＋ＬＰＳ组于下死前１２小时经腹腔注射０．７５ｍｇ／ｋｇ的ＬＰＳ。ＰＴＸ组术后第二天以０．５％ＰＴＸ，以１ｍｌ／１００ｇ管饲，一次／日，于处列腹腔注射０．７５％／ｋｇ的ＬＰＳ，动物处死后取心血作肝功能测定，部分肝组织作     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导膀胱癌细胞凋亡的效应。方法 10～100μg／L梯度浓度的TRAIL与培养的EJ细胞共孵育4～24h。采用Annexin V染色，DNA云梯实验和流式细胞技术检测诱导后EJ细胞凋亡发生的时期和程度。结果 TRAIL诱导4h即后可观察到早期细胞凋亡发生，8h后即可检测DNA片段化，24h后凋亡细胞最多达到66．29％。结论 TRAIL能够迅速诱导EJ细胞凋亡，可能成为膀胱癌治疗的新方法。     

梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡分析及硒的保护作用

目的 研究梗阻性黄疸（梗黄）大鼠肝脏细胞凋亡的发生发展规律及其机制，以及硒的抗凋亡作用。方法 使用生化和末端脱氧核甘酸介导生物素标记（TUNEL）技术测量不同组别，不同梗黄时间大鼠肝脏的谷胱甘肽过氧化物酶（GPx)活性，活性氧（ROS）水平及凋亡指数（AI），并进行多元分析，结果 胆总管结扎3d后，凋亡细胞开始出现，7d时显著增多，均11d达高峰，14d时有所减少。单纯梗黄组（OJ）ROS水平随时间延长而持续升高，GPx活性则进行性下降，AI与ROS水平变化呈正相关（r=0.95)，于11d时达高峰。硒治疗组呈现相似变化，但各时相点上GPx活性均高于OJ组（P＜0．05）。ROS水平和AI则相反（P＜0．05）。结果表明，ROS促进凋亡的作用最为明显，胆红素和胆汁酸次之。GPx 则表现出显著的凋亡拮抗作用。结论 ROS是梗黄大鼠肝脏细胞凋恨的重要因素。硒对肝细胞凋亡有明显保护作用。     

梗阻性黄疸患者肿瘤坏死因子和过氧化脂质变化的临床研究

目的：为了解梗阻性黄疸患者围手术期外周血肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和脂质过氧化反应的终末产物丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化及其临床意义。方法：采用放射免疫法和比色法测定一组梗阻性黄疸患者手术前后血清ＴＮＦ和ＭＤＡ的水平，并与对照组比较。结果：（１）梗黄组术前血清ＴＮＦ和ＭＤＡ含量均明显高于对照组，且发现ＴＮＦ、ＭＤＡ随胆红素增高而升高。（２）梗黄术后短期内ＴＮＦ和ＭＤＡ仍维持较高水平，退黄后可恢复正常。（     

肿瘤坏死因子在梗阻性黄疸鼠肝中的免疫组化分析

通过利用组织免疫组化技术，研究ＴＮＦ在梗阻性黄疸中肝脏中的表达。结果表明ＴＮＦ主要分布于梗黄肝组织的ＫＣ及ＰＭＮ细胞中，ＢＤＬ组中有较少的表达，给予内毒素刺激后ＴＮＦ产生伴随组织病理改变的加重相应增多。ＫＣ及ＰＭＮ是ＴＮＦ产生的主要来源，是胆道术后并发症发生的部分原因之一，抑制其产生将有益于减少黄疸术后并发症的发生。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导结肠癌细胞凋亡的机制

目的探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌细胞发生凋亡的机制。方法流式细胞仪技术、酶联免疫吸附技术、荧光显色技术检测500μg／L TRAIL和／或Caspase抑制剂Z-VAD．fmk处理后,结肠癌细胞SW1116在不同时点(0、2、4、6、24 h)凋亡情况、Caspase-3酶活性及4 h线粒体△ψm、cardiolipin、细胞ROS变化。结果 TRAIL可引起结肠癌细胞凋亡,并于 4 h达凋亡高峰,凋亡指数为32．98％;并出现线粒体△ψm下降、cardiolipin丢失增加及Caspase-3酶活性增加,4 h达到最大峰值为(37．56±2．572)μmol／L·hr-1·mg-1蛋白。但TRAIL所诱导的细胞凋亡作用可被Caspase抑制剂Z-VAD．fmk所抑制。同时证实TRAIL所诱导的结肠癌细胞凋亡与细胞氧自由ROS的生成无关。结论 TRAIL通过Caspase依赖方式引起线粒体△ψm下降、cardi- olipin丢失增加导致线粒体内膜损伤,从而诱导细胞发生凋亡。     

异丙酚对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法3～4代人脐静脉内皮细胞于融合状态,随机分为5组:①TNF-α组(P0+TNF-α);②12.5μmol/L异丙酚和TNF-α组(P12.5+TNF-α);③25μmol/L异丙酚和TNF-α组(P25+TNF-α);④50μmol/L异内酚和TNF-α组(P50+TNF-α);⑤100μmol/L异丙酚和TNF-α组(P100+TNF-α);TNF-α终末浓度为2000U/ml,各组先加入不同浓度的异丙酚孵育30min后再加入TNF-α共同培养24h。用DNA原位缺口末端标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡指数(AI),并用透射电镜观察细胞形态学改变。结果 肿瘤坏死因子组(P0+TNF-α)可见较多凋亡细胞,不同浓度的异丙酚预处理后再加入肿瘤坏死因子的各组(P12。5+TNF-α、P25+TNF-α、P50+TNF-α、P100+TNF-α细胞凋亡指数与肿瘤坏死因子组(P0+TNF-α)比较,均有明显下降(P<0.05或P<0.01),且随异丙酚浓度的升高,AI逐渐减小,内皮细胞损伤明显减轻。结论 临床相关浓度的异丙酚可抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子在梗阻性黄疸鼠肝损伤中的作用

目的： 研究梗阻性黄疸鼠内毒素（ＬＰＳ）血症时肝组织液中ＴＮＦ－ ａ 活性与肝细胞损伤的关系。方法： 将３２ 只大白鼠随机分为三组， 均作胆总管结扎、切断， 复制梗阻性黄胆模型， 于术后第五天处死。ＢＤＬ＋ ＬＰＳ组于处死前１２ 小时经腹腔注射０．７５ｍ ｇ／ｋｇ 的ＬＰＳ。ＰＴＸ组术后第二天以０．５％ ＰＴＸ以１ｍ ｌ／１００ｇ 管饲， 每日一次， 连用３ 日， 于处死前１２ 小时经腹腔注射０．７５％ ／ｋｇ的ＬＰＳ。动物处死后取心血作肝功能测定。部分肝组织作病理切片， 其余大部分肝组织作提取组织液。Ｌ９２９ 细胞杀伤法测定ＴＮＦ－ ａ 活性。结果： 血清中总胆红素三组均明显升高， 以可溶性的直接胆红素为主， 证实为梗阻性黄疸。ＡＬＴ、ＡＳＴ及肝组织液中ＴＮＦ活性浓度明显升高， 以ＢＤＬ＋ ＬＰＳ组明显， 与ＢＤＬ组和ＰＴＸ组比较， 差异显著。三组肝脏肿大瘀胆， 胆总管近端扩张明显， 充满胆汁。ＢＤＬ＋ ＬＰＳ组肝脏肿大更加明显。光镜下显示： ＢＤＬ组和ＰＴＸ组示鼠肝血窦扩张，胆管细胞增生伴炎性细胞（ＰＭＮ）浸润， 肝细胞浊肿。ＢＤＬ＋ ＬＰＳ组肝血窦扩张及ＰＭＮ浸润更加明显。肝小叶结构破坏伴肝细胞片状坏死。结论： 内毒素诱导产生的肝组织内活性     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合阿霉素治疗骨肉瘤

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与阿霉素（ADM）联用对骨肉瘤细胞株HOS是否具有协同杀伤作用，并对其机制进行初步研究。方法 MTT法检测细胞的抑制率和存活率，流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TRAIL受体（receptor，R）的表达水平。结果 单用0．5mg／LTRAIL及1．0、10．0、100．0mg／LADM对HOS8603的抑制率分别为13．18％、5．56％、23．02％和76．72％，联合用药的抑制率分别为42．98％、53．12％、81．91％。0．5mg／LTRAIL和1．0mg／LADM有协同作用．TRAIL和ADM联用时TRAIL R2 mRNA表达较TRAIL单用时明显增强。结论 TRAIL与ADM联用对骨肉瘤细胞有明显的协同作用，其机制可能与ADM上调TRAILR2的表达有关。     

受体作用蛋白在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡耐受中的作用

目的 观察受体作用蛋白(RIP)基因的表达变化在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡耐受中的作用.方法 以肝癌细胞HepG2、Hep3B为研究对象,制备RIP siRNA的细胞模型,应用流式细胞仪分析两种细胞模型对TRAIL作用后细胞周期的变化,Western blot检测其在RIP基因沉默前后凋亡信号传导蛋白Caspase-8、Caspase-3、DFF-45的表达变化.结果 转染RIP siRNA后,细胞恢复了对TRAIL诱导凋亡的敏感性,当TRAIL浓度为100 μg/L时,HepG2及Hep3B转染组的细胞生存率为(60.02±5.23)％和(50.78±3.76)％,显著低于对照组的(96.44±5.43)％和(101.85±6.41)％(P＜0.01);细胞生存周期SubG1期为(76.89±6.68)％和(72.45±7.31)％,显著高于对照组的(0.78±0.07)％和(3.62±0.38)％(P＜0.01).转染组TRAIL单独作用,可以引起HepG2 siRNA及Hep3B siRNA凋亡传导通路上传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解.结论 肝癌细胞对TRAI诱导凋亡的耐受可能与其传导通路上RIP蛋白的表达相关,抑制其表达可以导致凋亡传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解,促使凋亡的发生,恢复肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.     

梗阻性黄疸大鼠腹腔巨噬细胞凋亡和吞噬功能的改变

目的　探讨梗阻性黄疸大鼠腹腔巨噬细胞功能的改变。方法　将 66只成年Wistar大鼠随机分为正常 (A)组、假手术 (B)组和胆总管结扎 (CBDL ,C)组 ,每组术后又分为 1、3、7、10、14d五个时相点 ;应用流式细胞术检测两组腹腔巨噬细胞 (PMs)的凋亡、吞噬凋亡细胞及主要组织相容性复合物 (MHC)Ⅱ表达能力的变化。结果　C组大鼠术后各时相点PMs的凋亡指数 (AI)显著增高、吞噬能力和MHCⅡ (I A)类抗原表达能力下降 ,与A组和B组均有明显差异 (P <0 .0 1) ,且C组各时相点PMs的AI与吞噬能力和MHCⅡ类抗原表达能力改变有明显相关性。结论　CBDL大鼠PMs的AI明显增高 ,吞噬能力和MHCⅡ类抗原表达能力降低 ,可能导致梗阻性黄疸机体免疫机能的紊乱。     

阻塞性黄疸中肝细胞凋亡及机制的研究

目的：观察阻塞性黄疸中肝细胞凋亡，并进一步探讨其分子机制。方法：结扎Wistar大鼠胆总管建立阻塞性黄疸模型，应用普通组织学、原位末端标记方法检测阻塞性黄疸不同时期肝细胞凋亡，及解除梗阻后病理学和细胞凋亡的变化情况；采用ELISA、生物化学等方法检测血清胆红素、肿瘤坏死因子（TNF）－α、三酰甘油浓度；并应用免疫组化方法检测肝脏转化生长因子（TGF）－β1的表达。结果：大鼠胆总管结扎术后3天，即可见肝胆管扩张，细胞凋亡明显增多，早期随着胆红素升高，肝细胞凋亡数量与之呈正相关，后期纤维组织大量增生，肝细胞凋亡相对减少；解除梗阻后，细胞凋亡逐渐减少，直至正常。结扎胆总管后，其血清TNF－α和三酰甘油值相应增高，肝脏开始表达TGF－β1并逐日增多；解除梗阻后，又逐日减少直至正常。结论：细胞凋亡方式存在于阻塞性黄疸肝脏中，与胆红素、TNF－α、TGF－β1等密切相关。     

梗阻性黄疸致肝细胞凋亡的研究进展

梗阻性黄疸可以启动肝细胞的凋亡程序,且有多种因素参与了梗阻性黄疸时肝细胞凋亡的发生过程,研究其机制对于梗阻性黄疸肝损伤的防治有着重要的意义,笔者就梗阻性黄疸时肝细胞凋亡的发生机制作一综述。     

表皮生长因子对肿瘤坏死因子α致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的了解肿瘤坏死因子α（TNF-α）导致HaCaT细胞凋亡过程中过氧化物酶体增殖物激活受体B（PPAR[3）的表达情况，探讨表皮生长因子（EGF）对HaCaT细胞的保护机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常对照组（不作任何处理）、TNF—α小剂量组（10ng／ml TNF-α处理）、TNF—α大剂量组（20ng／mlTNF-α处理）、EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF—α大剂量组，后2组先用20ng／mlEGF培养4h后，再分别予以10、20ng／ml TNF—α处理。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（easpase．3）荧光检测试剂盒测定caspase-3的活性，噻唑蓝比色法检测细胞存活率。以5、10、20、40ng／ml的EGF处理HaCaT细胞，采用反转录．PCR和蛋白质印迹法检测PPAR[3mRNA及其蛋白的表达。结果与TNF-α小剂量组[（32±6）％]、TNF-ct大剂量组[（57±6）％]比较，EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF-α大剂量组细胞凋亡率[（20±3）％、（28±4）％]明显下降（P〈0．01），caspase-3活性降低、存活率上升（P〈0．01）。20ng／mlEGF处理细胞时，PPAR[3mRNA及其蛋白表达最强。结论EGF在抑制TNF-α导致的HaCaT细胞凋亡的同时，亦增强细胞中PPARβ的表达。     

大鼠肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与肿瘤坏死因子-α的关系

目的探讨大鼠肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系。方法建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型,将72只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组和缺血再灌注组,采用放射免疫法测定再灌注后不同时相中血清TNF-α含量,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和透射电镜观察肝细胞凋亡状态。结果再灌注后1、3、6h和24h血清TNF-α含量及肝细胞凋亡指数(HAI)明显高于正常组和假手术组,且均于6h达到高峰,再灌注后各时相TNF-α水平与HAI呈显著正相关。结论肝脏缺血再灌注损伤过程中,TNF-α表达水平异常上调并可能对肝实质细胞凋亡起介导作用。     

精氨酸对梗阻性黄疸大鼠肝损伤的保护作用及其对肝细胞凋亡的影响

目的 探讨梗阻性黄疸时精氨酸是否对肝脏具有保护作用及其对肝细胞凋亡的影响.方法 Wistar大鼠42只随机分为3组:A组为假手术组、B组为梗阻性黄疸组、C组为精氨酸治疗组;B组和C组采取双重结扎大鼠胆总管制作梗阻性黄疸模型,C组术后第1天开始每天腹腔注射精氨酸500 mg/(kg·d),分别于术后第7天和第14天取材,采集鼠血清检测TBIL、DBIL、ALT、AST;大鼠肝脏组织进行HE染色切片观察组织形态,电镜观察胞内形态并对组织切片应用Bax、Bcl-2试剂盒行免疫组化染色.结果 与A组大鼠相比,B组大鼠血清胆红素和转氨酶明显增高.肝细胞损伤不断加重并出现显著凋亡改变,随着胆总管结扎时间的延长而更加明显.应用精氨酸治疗的C组大鼠,其肝功能和肝脏组织病理学改变较B组轻.B组和C组大鼠肝组织中Bax、Bcl-2蛋白表达均随时间而增多,但B组Bax表达增多较明显,而C组Bcl-2蛋白表达增多较明显.结论 精氨酸对梗阻性黄疸大鼠肝脏有保护作用,可能是通过上调肝脏组织Bcl-2蛋白表达,下调肝脏组织Bax蛋白的表达减少细胞凋亡来实现的.     

肿瘤坏死因子受体/配体凋亡信息系统的研究现状

肿瘤坏死因子 (TNF)家族和肿瘤坏死因子受体家族 (TNFR)这种配体 -受体间相互作用在诱导肿瘤细胞凋亡中的作用及其应用价值有些已被证实。对肿瘤细胞的杀伤机制是由多种分别具有正调和负调作用的配体 /受体间相互作用所介导的。深入探讨这些凋亡诱导配体的生物学功能 ,对新型肿瘤生物治疗的形成具有重要意义 ,也是近期国际研究的一个重要方向     

肿瘤坏死因子-α诱导HaCaT角质细胞凋亡的研究

烧伤后由于坏死组织刺激,引起创面局部中性粒细胞和单巨噬细胞聚集、黏附和释放炎症介质,导致机体血中和痂下水肿液中肿瘤坏死因子(TNF)-α水平明显升高,而烧伤创面愈合的关键在     

阻塞性黄疸时血清内毒素和肿瘤坏死因子的变化及相互关系

目的 :观察阻塞性黄疸发生时血清内毒素和TNF α的变化及相互关系。方法 :将大鼠随机分成对照组和胆总管结扎组 ,分别在第 3天、第 7天和第 2 1天测定血清内毒素和TNF α。结果 :胆总管结扎组的血清内毒素和TNF α逐渐升高 (P >0 .0 5 ,P <0 .0 5以及P <0 .0 1) ,两者相关系数为 0 .6 349(P <0 .0 0 1)。结论 :阻塞性黄疸发生时血清内毒素和TNF α明显升高 ,两者呈正相关