137Cs γ射线对体外培养成骨细胞形态与几种细胞因子基因表达的影响

目的　观察1 37Csγ射线照射对体外培养成骨细胞的形态、核浆比与几种细胞因子基因表达的影响。方法　取第 1代新生SD大鼠头盖骨成骨细胞传代后 2 4h一次接受1 37Csγ射线照射 ,吸收剂量分别为 10 ,2 5 ,5 0cGy和 1,3,6 ,9,12Gy。观察各组成骨细胞形态与超微结构改变 ;Giemsa染色后进行显微形态计量 ,计算核浆比 ;细胞培养至 14d抽提细胞内总RNA ,RT PCR方法半定量检测各组细胞IGF 1,OPG ,ODF基因mRNA表达量。结果　 3Gy以上γ射线照射的细胞 ,胞体变大、变薄 ,细胞数减少 ,细胞内细胞器减少 ,溶酶体增多 ,核浆比降低 ,其改变随吸收剂量增加而突出。基因IGF 1、OPG、ODF与OPG ODFmRNA表达量在 1Gy以上组随吸收剂量增加逐渐降低 ,与吸收剂量呈明显相关 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　1 37Csγ射线照射引起成骨细胞形态明显改变 ,增殖能力降低 ,核浆比降低 ,基因IGF 1、OPG、ODF与OPG ODFmRNA表达量降低。     

胚胎期受辐射对子鼠造血基质细胞功能的影响

目的　研究胚胎期 2 0Gy137Csγ射线照射后对子鼠造血基质细胞的远期影响。方法　建立胚胎期受辐射小鼠模型 ;以细胞计数检测股骨骨髓有核细胞 (BMNCs)数 ;用免疫组化ABC法检测基质细胞粒单系集落刺激因子 (GM CSF)和干细胞因子 (SCF)的表达 ;用体外小鼠骨髓细胞培养法以粒单细胞系祖细胞集落形成单位 (CFU GM )为指标观察基质细胞对正常骨髓造血的支持功能。结果　胚胎期受辐射小鼠BMNCs数明显低于正常小鼠 (P <0 0 1) ,其骨髓基质细胞生长因子GM CSF和SCF的表达均高于正常小鼠 (P <0 0 5 ) ,同时 ,胚胎期受辐射小鼠骨髓基质细胞对正常骨髓造血的支持能力也高于正常小鼠 (P <0 0 5 )。结论　 2 0Gy137Csγ射线对发育中的小鼠胚胎的造血基质细胞产生了明显影响。     

^60Co-γ辐射对大鼠巨噬细胞一氧化氮产生的影响

目的 本主要研究8Gy的^60Co-γ辐射对大鼠体内及体外MФ西中NO的产生、iNOS表达、iNOS mRNA转录等的影响。方法 用电子自旋共振(ESR)技术观察对8Gy的^60Co-γ辐射MФ西中NO产生变化，免疫组化法研究MФ中一氧化氮合酶(iNOS)表达．原位杂交(ISH)检测研究MФ中iNOS mRNA的转录。结果 ^60Co-γ辐射大鼠不仅可使体内MФ的诱导产生大量减少，而且，诱导MФ中NO的产生也相对有所减弱。体外诱导MФ受辐射后产生的NO有所减少，MФ中iNOS表达减弱，iNOS mRNA转录降低，但LPS和IFN可在一定程度上扭转辐射的这种效应。结论 8Gy的^60 Co-γ辐射可引起大鼠体外MФ中NO的产生、iNOS表达、iNOS mRNA转录等的变化。     

化学药物对辐射诱发雄性哺乳动物生殖细胞染色体易位影响的研究

电离辐和化学药物都可以诱发哺乳动物生殖细胞染色体损伤，本文述了化学物质（辐射增敏剂和辐射防护剂）和电离辐协同作用的机制及增敏剂、防护剂对辐射诱发雄性生殖细胞染色体易位的影响。     

碱性成纤维细胞生长因子对辐射诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的抑制作用

碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)作为一种多肽类生长因子 ,有着广泛的生理功能。对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有促有丝分裂的作用 ,在胚胎发育和组织分化中 ,是形态形成、促细胞分裂和诱导细胞分化不可缺少的因子[1 ] 。近年来 ,许多实验结果表明体外许多因素 ,如化学药物、细胞因子、辐射等都可诱导细胞凋亡[2 ] 。本研究ｂＦＧＦ对辐射诱导的免疫系统胸腺细胞凋亡的调节作用 ,旨在从一个侧面探讨ｂＦＧＦ作用于免疫系统的机理及其在辐射防护中的意义。一、材料和方法1 ｂＦＧＦ :由暨南大学生物工程研究所提供。2 动物照射 :昆明…     

^60Co0γ辐射诱导下IL—6对人多发性骨髓瘤细胞株凋亡效应的实验研究

目的：研究白介素－6（IL－6）在^60Coγ辐射诱导人多发性骨髓瘤细胞株XG－6,XG－7调亡效应中的作用及其可能的分子生物学机理,方法：运用流式细胞仪技术（FACS）,DNA片段释放法和RT－PCR,观察了IL－6对细胞株XG－6,XG－7中Bcl-xl,Bax,mRNA相对表达的影响及其与辐射诱导的细胞凋亡率的相关性,结果：IL－6存在时,XG－6,XG－7细胞的Bcl-cL,mRNA表达在辐射后迅速上升,4h达最高峰后逐渐下降,24－48h恢复到照射前水平,不加IL－6的XG－6,XG－7细胞的Bcl-xL的表达在同样实验条件下降,24－48h恢复到照射前不平,不加IL－6的XG－6,XG－7细胞的Bcl-xL的表达在同样实验条件未检测到,而这2株细胞Bax mRNA的表达在照射后不同时间均低于相应的加IL－6组,但尚有明显的表达,对不加IL－6的细胞组,辐照后不同时间的凋率明显高于相应的加IL－6组（P＜0．05）,结论：IL－6可通过调节B cl-xL,Bax的表达及改变Bcl-xL/Bax二者比率,保护辐照诱导XG－6,XG－7的细胞凋亡。     

松多酚及其炭黑曲霉转化产物对γ-辐射诱导小鼠免疫损伤的防护研究

目的揭示松多酚(pine polyphenols,PPs)及其炭黑曲霉转化产物(Aspergillus carbonarius,ACPP)对γ-辐射诱导小鼠免疫损伤的防护机制。方法以ACPP和PPs为研究对象,比较对ABTS,DPPH,超氧阴离子和羟基自由基的清除活性。采用60Coγ-射线诱导的小鼠模型,MTT和生化分析法对外周血象、吞噬指数、脾B淋巴细胞转化增殖及脾组织的生化指标进行分析,蛋白质印迹法分析脾Bax,Bcl-2和Caspase-3表达水平。结果 ACPP显示更强的抗氧化活性。ACPP和PPs主要通过提高体内抗氧化物质含量来促进酶(SOD,CAT,GSH-Px)和非酶抗氧化剂(GSH)、脾B淋巴细胞转化增殖和单核细胞的吞噬作用,降低脂质过氧化水平;降低Bax和Caspase-3表达,增加Bcl-2表达起到辐射防护作用。ACPP防护效果明显优于PPs。结论 ACPP具有抗氧化活性和辐射防护作用,是一种可靠的抗辐射基料。     

辐射对恶性脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响及其机制

目的 观察辐射对人脑恶性胶质瘤细胞株SHG-44辐射敏感性的影响,并探讨辐射抗性产生的机制.方法 使用胶质瘤细胞株SHG-44及经单次照射10 Gy后连续培养15代的辐射后细胞株SHG-4410 Gy,采用集落形成实验评估辐射对两种细胞株辐射敏感性的影响,流式细胞仪检测两种细胞株的辐射前后细胞周期时相分布及凋亡率,并用RT-PCR法检测cyclin B1 mRNA和miR-21的表达水平,Western blot法检测信号转导子和转录激活子3(Stat3)蛋白表达水平.结果 比较D0、SF2,SHG-44细胞(D0 =2.35、SF2=0.62),低于SHG-4410 Gy细胞(D0=3.22,SF2=0.74).与SHG-44细胞相比,SHG-4410 Gy细胞G2/M期比例减少,S期比例增多(F =22.21,P＜0.05).照射前后SHG-4410 Gy cyclinB1 mRNA相对量大于SHG-44细胞株(t=3.1、4.1,P＜0.05).照射前后的早期凋亡率分别为SHG-44 (17.60±0.26)％和(28.00±0.36)％,SHG-4410 Gy(4.20±0.30)％和(5.17±0.65)％,SHG-4410 Gy细胞与SHG-44细胞相比,早期凋亡率明显下降(t=58.0,P＜0.01).qRT-PCR及Western blot法检测SHG-4410 Gy细胞的miR-21表达及Stat3蛋白表达均较SHG-44升高.结论 照射后SHG-44细胞辐射抗性增加,可能与辐射上调细胞周期信号传导通路中的靶基因cyclinB1导致的G2/M期细胞比例减少有关;同时,辐射导致细胞miR-21表达增高,降低细胞的凋亡.     

SKP2表达对受照食管癌细胞诱导辐射旁效应的影响

目的：探究SKP2表达水平对受照食管癌细胞所诱导辐射旁效应的影响。方法：Western blot法筛选出SKP2高表达和低表达的食管癌细胞系,微核检测法探讨SKP2对受照食管癌细胞所诱导辐射旁效应的影响。建立SKP2高表达和低表达的转染细胞系,Western blot法验证转染效率,微核检测法进一步验证SKP2对受照食管癌细胞所诱导辐射旁效应的影响。通过γ-H2AX聚集点检测法探究SKP2影响受照食管癌细胞所诱导辐射旁效应的作用机制。结果：微核检测结果表明,SKP2高表达的受照细胞诱导的辐射旁效应显著低于SKP2低表达的受照细胞诱导的辐射旁效应（t=8.06,P<0.01）。SKP2转染细胞系的微核检测结果进一步验证了SKP2的表达对受照食管癌细胞诱导的辐射旁效应的抑制作用,SKP2表达升高,辐射旁效应减弱（t=11.12、10.16,P<0.01）;SKP2表达降低,辐射旁效应增强（t=8.39、8.83,P<0.01）。γ-H2AX聚集点检测结果表明,受照细胞SKP2表达升高可提高旁效应细胞的DNA损伤修复能力（t=6.85、7.10,P<0.01）。反之,会抑制旁效应细胞的DNA损伤修复能力（t=7.66、8.47,P<0.01）。结论：SKP2的表达抑制受照食管癌细胞诱导的辐射旁效应,并且这一机制至少部分是通过SKP2对DNA损伤修复能力的调节来实现的。     

维生素E对N2O4中毒性肺水肿的保护作用

目的旨在观察维生素Ｅ（ＶｉｔＥ）对四氧化二氮（Ｎ２Ｏ４）致急性肺水肿的保护作用。方法２４只ｗｉｓｔａｒ大鼠被分成３组：对照组（第一组），Ｎ２Ｏ４中毒组（第二组）及Ｎ２Ｏ４中毒＋ＶｉｔＥ组（第三组）。使第二组大鼠吸入Ｎ２Ｏ４（浓度为３５２±２１ｍｇ／ｍ３，时间０．５ｈ）复制出急性肺水肿模型。第三组大鼠吸入Ｎ２Ｏ４前１４天每日按２００ｍｇ／ｋｇ体重灌胃给予ＶｉｔＥ。中毒后３ｈ处死大鼠，测量肺系数、血浆丙二醛（ＭＤＡ），红细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及血浆及肺内心钠素（ＡＮＰ）等指标。结果急性肺水肿时，第二组大鼠肺系数、血浆ＭＤＡ及ＡＮＰ显著升高，红细胞ＳＯＤ活性、肺内ＡＮＰ显著降低，而补充维生素Ｅ的大鼠，上述指标的改变较第二组大鼠显著减轻。结论维生素Ｅ对Ｎ２Ｏ４致急性肺水肿有保护作用。     

辐射诱发的旁效应研究

辐射能使受照细胞产生基因突变、基因表达水平改变、细胞生长改变等多种生物学效应,但研究发现,类似的反应在与受照细胞共同培养的未受照细胞中也能发生,即产生了旁效应。目前对于旁效应发生机制的了解还很少,可能与细胞间通讯及细胞外的一些因子有关。     

E838对小鼠辐射防护作用的研究

目的本研究对比观察E838、炔雌醇(EE2)、炔雌三醇(EB)、雌三醇(E3)对照射小鼠30d存活率及E838、炔雌醇雌活性对比测定。方法实验分E838、EE2、EB、E3、对照共5组，第1批小鼠照射前36h腹腔注射给药1次，对照组腹腔注射茶油，第2批小鼠在照射前3d连续腹腔注射给药、对照组注射茶油，每日1次，经^137c8 γ射线8．0GY全身一次性照射后，观察小鼠生存天数。出生18d雌性小鼠腹腔注射0．2ml，连续3d给药后取子宫称重。结果照射前3d连续注射E838药物效价最高，存活率提高33.9％，雌活性低。结论E838药物对造血组织有明显的放射防护作用，毒副作用小，能提高机体的防御能力。     

高LET辐射致细胞恶性转化相关基因的克隆

目的　克隆α粒子辐射致细胞恶性转化相关基因。方法　采用mRNA差异显示技术识别原代大鼠气管上皮细胞同α粒子辐射诱发恶转的大鼠气管上皮细胞之间的差异表达基因。结果　共克隆到 15个可能同α粒子辐射致细胞恶性转化相关的差异表达基因片段 (ESTs) ,共向Gen Bank登录 7条新基因序列。其中克隆ZG 3 5同大鼠AnnexinⅠ基因高度同源 ,AnnexinⅠ作为表皮生长因子受体激酶的底物被认为可能参与细胞增殖信号的转导 ;克隆ZC 5 2同大鼠羧酸酯酶前体物基因高度同源 ;克隆ZA 73为新基因片段 ;克隆ZC 66同肿瘤转移抑制基因nm 2 3高度同源 ,序列分析提示nm 2 3在此恶转细胞中存在突变 ;以克隆ZG 5 2为探针 ,通过筛选cDNA文库 ,克隆到一个长约 3 3 6kb的新基因 ,序列同源性分析提示该基因可能为一个同SR蛋白激酶Ⅱ相关的新型激酶基因 ,其可能的功能为参与前mRNA剪切加工的调控。Northern杂交证实了上述基因片段在恶转的大鼠气管上皮细胞中高表达。结论　上述结果为进一步深入研究辐射致癌、克隆辐射致癌相关基因提供了线索 ,并提示AnnexinⅠ、nm 2 3、羧酸酯酶前体物基因、ZG 5 2等可能参与α粒子辐射诱发大鼠气管上皮细胞恶性转化的过程     

电离辐射诱导细胞周期解偶联的实验研究

目的　观察电离辐射能否诱导细胞周期解偶联。方法　采用PI荧光标记及流式细胞术 (FCM)测定细胞周期并分析细胞倍体的变化。结果　 1 0、2 0、4 0和 6 0GyX射线照射后 2 4h ,SKOV 3的二倍体细胞数明显减少 (分别为P <0 0 1) ,且呈现明显的剂量依赖性 ;而四倍体细胞数明显增加 (分别为P <0 0 1) ,亦呈现明显的剂量依赖性 ;与此同时 ,八倍体细胞数显著增高 (分别为P <0 0 1)。结论　电离辐射可诱导人卵巢癌SKOV 3细胞周期解偶联。     

Comparison of direct and bystander effects induced by ionizing radiation in eight fish cell lines

PURPOSE: To determine bystander and direct effects of ionizing radiation on eight fish cell lines. MATERIALS AND METHODS: Fish cell lines were irradiated at a range of doses from 0.5 - 5 Gy. The Irradiated Cell Conditioned Medium (ICCM) was then harvested and placed onto a HPV-G, reporter cell line as well as onto autologous fish cell lines. Cloning efficiency (CE) was the end point used. The HPV-G reporter cell line was chosen because this cell line is capable of transmitting and producing the bystander effect. RESULTS: Four of the eight fish cell lines were clonogenic. These, with the exception of RTG-2 cells, showed increased CE when ICCM was tested on unirradiated autologous cells or on HPV-G cells. ICCM from RTG-2 cells reduced survival. The non-clonogenic cells ICCM tested on HPV-G all showed increased CE. CONCLUSIONS: The results show that both bystander signal production and cellular response varies depending on the cell line and that in general signals from established fish cells do not produce death inducing bystander effects. Thus, the comparison of the effect from fish cell ICCM on autologous cells or HPV-G human cells allowed us to separate signal production from response. In almost all cases, for both non-clonogenic and clonogenic fish cell lines, the HPV-G recipient cell line showed an increase in percent survival compared to controls while the clonogenic fish cell lines do not appear to respond.     

Comparison of direct and bystander effects induced by ionizing radiation in eight fish cell lines

Purpose:?To determine bystander and direct effects of ionizing radiation on eight fish cell lines.

Materials and methods:?Fish cell lines were irradiated at a range of doses from 0.5 – 5 Gy. The Irradiated Cell Conditioned Medium (ICCM) was then harvested and placed onto a HPV-G, reporter cell line as well as onto autologous fish cell lines. Cloning efficiency (CE) was the end point used. The HPV-G reporter cell line was chosen because this cell line is capable of transmitting and producing the bystander effect.

Results:?Four of the eight fish cell lines were clonogenic. These, with the exception of RTG-2 cells, showed increased CE when ICCM was tested on unirradiated autologous cells or on HPV-G cells. ICCM from RTG-2 cells reduced survival. The non-clonogenic cells ICCM tested on HPV-G all showed increased CE.

Conclusions:?The results show that both bystander signal production and cellular response varies depending on the cell line and that in general signals from established fish cells do not produce death inducing bystander effects. Thus, the comparison of the effect from fish cell ICCM on autologous cells or HPV-G human cells allowed us to separate signal production from response. In almost all cases, for both non-clonogenic and clonogenic fish cell lines, the HPV-G recipient cell line showed an increase in percent survival compared to controls while the clonogenic fish cell lines do not appear to respond.     

α粒子诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中DNA甲基化的变化

目的 分析α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中DNA甲基化谱的变化.方法 分别提取α粒子诱发永生化人支气管上皮恶性转化细胞BERP35T4和对照细胞BEP2D的基因组DNA,用非甲基化敏感酶MseI对基因组DNA进行酶切,然后在酶解后的片段两端连接上连接臂,再用甲基化敏感内切酶进行消化,最终消化产物进行PCR扩增和荧光标记,最后与甲基化芯片进行杂交.杂交结果进行扫描,并对芯片图像进行分析,对芯片上的数据进行归一化处理,最后以差异倍数为1.5的标准来确定差异表达基因.结果 α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化后,有16个基因发生了甲基化的改变,其中,甲基化上调基因有9个,下调基因7个.鞘氨酸激酶SKIP,蛋白质磷酸酶PPP3CC,蛋白激酶MAP2K6,杀伤细胞免疫球蛋白受体KIR2DLI、KIR2DL4、KIR3DP1,锌指蛋白ZNF493、ZNF100,转录因子NKX2-5、TFAP2D、DR1,钾离子通道KCNJ16,肉瘤抗原CCDC18,以及甘油甲酸酯结合蛋白FNBP1L、同源异形蛋白IRX4、HSF蛋白片段EPB41L3、TCP10蛋白等都发生了甲基化改变.结论 证实了电离辐射能够通过改变细胞的表观遗传修饰而在肿瘤发生中发挥一定的作用.

Abstract：

Objective To identify the changes of DNA methylation profile in the process of malignant transformation of BEP2D cell induced by α particles.Methods The genomic DNAs were isolated from the malignant transformation BERP35T4 cells and immortalized human bronchial epithelial cell line BEP2D.Genomic DNAs were digested by MseI and ligated of PCR linkers.Methylated DNAs were digested by BstUI and amplified by PCR.The methylated DNA probes were prepared by labeling with Cy3 and Cy5 fluorescence dyes individually and hybridized to the methylation CpG-Island microarray.The hybridization results were scanned and analyzed.Intensity values were quality controlled and normalized.The normalized data were used to identify the differentially expressed genes based on a 1.5 fold difference of the expression level.Results There were 16 genes which showed changes of methylation level in malignant transformation BERP35T4 cells, 9 of them were hypermethylation and 7 were hypomethylation.These genes were including the SKIP gene, PPP3CC gene, MAP2K6 gene, KIR2DL1 gene, KIR2DL4 gene, KIR3DP1 gene, ZNF493 gene, ZNF100 gene, NKX2-5 gene, TFAP2D gene, DR1 gene, KCNJ16 gene, CCDC18 gene, FNBP1L gene, IRX4 gene, EPB41L3 gene, TCP10 gene and so on.Conclusions The DNA methylation might have effects on ionizing radiation drived tumorigenesis.     

EGFR和NRF2对电离辐射导致的DNA损伤修复的影响

目的 探讨表皮生长因子受体（EGFR）和核转录因子E2相关因子2（NRF2）对人宫颈癌HeLa细胞受到电离辐射损伤后的DNA损伤响应及修复作用。 方法 将人宫颈癌HeLa细胞按2种处理方式分组：（1）采用小干扰RNA敲降HeLa细胞中的EGFR,采用137Cs γ射线照射源照射细胞。将HeLa细胞分为对照组（HeLa siCtrl）、敲降EGFR组（HeLa siEGFR）、照射组（HeLa siCtrl+8 Gy）、敲降EGFR+照射组（HeLa siEGFR+8 Gy）。采用免疫荧光实验（8 Gy照射后6、12、24 h）检测细胞中磷酸化组蛋白H2A变异体（γ-H2AX）foci的数量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测NRF2下游靶基因;采用流式细胞术检测EGFR对HeLa细胞周期的影响;采用核质分离实验分离HeLa细胞的胞质蛋白和胞核蛋白;采用蛋白质免疫印迹法检测NRF2、EGFR、血红素氧合酶1（HO-1）、共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶（ATR）Thr1989位点的磷酸化水平、检查点激酶1（CHK1）在Ser345位点的磷酸化水平。（2）采用小干扰RNA敲降HeLa细胞中的NRF2,采用137Cs γ射线照射源照射细胞。将HeLa 细胞分为对照组（HeLa siCtrl）、敲降NRF2组（HeLa siNRF2）、照射组（HeLa siCtrl+8 Gy）、敲降NRF2+照射组（HeLa siNRF2+8 Gy）。采用免疫荧光实验检测细胞中γ-H2AX foci的数量。符合正态分布的计量资料的组间比较采用两独立样本t检验（方差齐）。 结果 （1）8 Gy照射6、12、24 h后,HeLa siEGFR+8 Gy组细胞中γ-H2AX foci的数量均多于HeLa siCtrl组[（94.00±1.00）% 对（89.67±2.03）%、（72.33±1.76）% 对（60.00±1.73）%、（43.00±2.31）% 对（26.33±1.20）%],且差异有统计学意义（t=3.919、4.919、6.402,均P<0.05）。与HeLa siCtrl组比较,HeLa siEGFR+8 Gy组的细胞G2/M期阻滞显著受损[（46.53±3.06）%对（37.90±4.61）%],且差异有统计学意义（t=4.384,P<0.05）。与HeLa siCtrl组比较,HeLa siEGFR+8 Gy组的HO-1表达下降66.66%（1.35±0.10对0.45±0.02）,且差异有统计学意义（t=8.782,P<0.05）。敲降EGFR后细胞核内的NRF2蛋白水平降低,辐射引起的NRF2下游ATR-CHK1信号通路活化水平及HO-1蛋白水平均降低。（2）8 Gy照射6、12、24 h后,与HeLa siCtrl组相比,HeLa siNRF2+8 Gy组细胞中γ-H2AX foci的数量均多于HeLa siCtrl组[（96.67±0.88）%对（89.67±2.03）%、（77.33±1.20）% 对（60.00±1.73）%、（54.33±2.19）% 对（26.33±1.20）%],且差异均有统计学意义（t=3.166、4.919、11.220,均P<0.05）。 结论 电离辐射条件下,敲降EGFR可以减少NRF2蛋白入核,抑制ATR-CHK1信号通路激活及下游基因HO-1的表达,降低人宫颈癌HeLa细胞的DNA损伤修复能力。