Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增生的影响

在视网膜新生血管性疾病血管新生过程中,内皮细胞的增生和迁移直接影响眼内血管的消长,抑制内皮细胞增生和迁移是抑制视网膜新生血管形成的关键[1].Tumstatin是人类Ⅳ型胶原的α3链的非胶原结构域1(NC1)功能区,是最新发现的来源于人基底膜胶原的肿瘤血管形成抑制因子,具有有效的抗新生血管活性,而T8肽是指Tumstatin接近N端的69～95位氨基酸大约25个氨基酸的一个活性片段[2].我们使用Muller细胞在高糖条件下培养的上清液作为条件培养基,培养视网膜微血管内皮细胞,模拟糖尿病视网膜病变的体内环境,观察了T8肽对高糖条件培养基下视网膜微血管内皮细胞增生的影响,现将结果报道如下.     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞迁移及P38MAPK蛋白表达的影响

目的:观察tumstatin肽对体外培养的视网膜微血管内皮细胞迁移及P38MAPK蛋白表达的影响,初步探讨tumstatin肽抗视网膜内皮细胞迁移的机制。方法:采用细胞划痕实验测定tumstatin肽(T8肽)对血管内皮生长因子(VEGF)诱导下RF/6A细胞(恒河猴视网膜微血管内皮细胞)迁移的影响;Western blotting检测T8肽对VEGF刺激后15,30,45,60min的RF/6A细胞P38MAPK蛋白水平的变化。结果:Tumstatin肽对RF/6A细胞迁移具有抑制作用,且可抑制VEGF对RF/6A细胞的促迁移作用,呈剂量依赖性。正常情况下,RF/6A细胞无P38MAPK蛋白的表达,但VEGF可诱导其表达P38MAPK蛋白,而tumstatin可抑制VEGF诱导的RF/6A细胞P38MAPK蛋白的表达(加入20mg/LT8肽30,45,60min时蛋白表达受到显著抑制,差异有显著性意义,P<0.01)。结论:Tumstatin抑制视网膜微血管内皮细胞的迁移,其作用可能与P38MAPK通路有关。     

Müller细胞对大鼠视网膜微血管内皮细胞增生和迁移的影响

目的:用免疫磁珠法原代培养大鼠视网膜微血管内皮细胞(RMEC),观察共培养Müller细胞对视网膜微血管内皮细胞增生和迁移的影响。方法:采用免疫磁珠的细胞分选法分离大鼠视网膜微血管内皮细胞,在条件培养基中培养生长,采用第Ⅷ因子抗体免疫组化染色方法鉴定细胞,采用流式细胞术和台盼兰染色分析传代中的微血管内皮细胞纯度以及细胞活性。传统的方法培养并鉴定Müller细胞。采用不同孔径微孔滤膜培养小室,进行大鼠视网膜微血管内皮细胞与Müller细胞分离共培养,对照组培养环境中无Müller细胞。以细胞曲线描绘反映细胞增生,并用流式细胞仪测定细胞周期。相差显微镜下计算穿过微孔滤膜迁移贴附于背面的内皮细胞数量。结果:通过磁珠分离方法获得了纯度为97.13%大鼠视网膜微血管内皮细胞,细胞活力达92%,第Ⅷ因子抗体染色呈阳性。与Müller细胞共培养的RMEC可早于正常培养2～3d进入生长平台期。RMEC中S期和G2期比例增加,G1期比例相对减少。S、G2和G1期百分比,在共培养组24h分别为44.0%,11.2%和44.8%,48h分别为42.3%,10.9%和46.8%;对照培养组24h分别为41.3%,4.9%和53.8%,48h分别为40.1%,4.7%和55.2%。迁移的细胞数增加,共培养6h移行至膜下的内皮细胞数12.2±2.5个,12h为51.7±23.4个,对照培养6h移行至膜下的内皮细胞3.3±2.5个,12h为14.7±7.0个,6h和12h两组内皮细胞数差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:免疫磁珠细胞分选方法可以获得高纯度的大鼠视网膜微血管内皮细胞,且对细胞活力无影响。Müller细胞可以促进视网膜内皮细胞的迁移,促进该细胞的增生。     

周细胞对缺氧诱导下视网膜微血管内皮细胞增生的影响

目的探讨视网膜微血管内皮细胞（RMECs）与共培养的周细胞（PCs）及PCs条件培养液（PCM）对常氧和缺氧条件下RMECs增生的影响。方法传代培养大鼠RMECs和PCs,采用兔抗鼠Ⅷ因子多克隆抗体和小鼠抗大鼠CD31单克隆抗体免疫组织化学法鉴定RMECs,PCs采用小鼠抗大鼠desmin多克隆抗体和兔抗鼠抗血小板衍生生长因子受体-β（PDGFR-β）进行免疫荧光双标鉴定。Millicell小室建立PCs和RMECs共培养系统,PCs培养近融合期后制备PCM,向共培养系统或PCM中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2诱导形成细胞化学缺氧模型,观察常氧和缺氧条件下PCs和PCM对RMECs增生的影响。使用MTT法、3H-TdR掺入法检测RMECs在不同培养条件下的增生数量,并用流式细胞仪检测RMECs在不同细胞周期的细胞率。结果近融合期的RMECs呈类纺锤状、单层生长,可见明显的接触抑制,Ⅷ因子和CD31均阳性表达。PCs形状不规则,细胞重叠生长无接触抑制,PDGFR-β和desmin抗体双标阳性。缺氧3～9d缺氧RMECs单独培养组较常氧RMECs单独培养组各时间点的RMECs均明显增生,缺氧6d时增生达高峰（P〈0.01）,细胞生长抑制率（GIR）为-24.9%。缺氧共培养组较缺氧RMECs单独培养组RMECs增生下降（P〈0.05）。缺氧3、6、9d时常氧共培养组较常氧RMECs单独培养组RMECs数目均明显下降（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）。缺氧6d时S期RMECs数量明显增加,占各期细胞总数的（43.9±0.8）%;常氧或缺氧共培养组,PCs均可抑制RMECs的增生,S期细胞分别占各期细胞总数的（3.6±0.1）%、（15.1±0.9）%（P〈0.05,P〈0.01）。常氧PCM组RMECs的吸光度（A）值和3H-TdR掺入量4～24h均低于对照组（P〈0.05）。结论缺氧和常氧条件下RMECs和PCs共培养时PCs均可抑制RMECs的增生,常氧条件下PCM可抑制RMECs的增生。     

Sunitinib对视网膜微血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨苹果酸舒尼替尼(Sunitinib)对体外培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)增殖和迁移及KDRmRNA表达的影响.方法 选取不同浓度的Sunitinib作用于RF/6A,分别于培养24h和48h后采用SRB染色法观察不同浓度的Sunitinib对RF/6A增殖的影响;采用细胞划痕修复实验观察不同浓度的Sunitinib对RF/6A迁移的影响;同时利用RT-PCR法检测不同浓度的Sunitinib处理前后RF/6A KDR mRNA表达水平的变化.结果 Sunitinib对RF/6A的增殖有抑制作用且呈时间-剂量依赖性,0.00125 mg·L-1、0.002 5 mg·L-1、0.005 mg·L-1、0.01 mg·L-1、0.02 mg·L-1和0.04 mg·L-1浓度的Sunitinib作用24 h,对RF/6A增殖的抑制率分别为(12.009±0.038)%、(21.440 4±0.007)%、(35.434±0.015)%、(43.125±0.002)%、(53.700±0.001)%、(60.971±0.003)%,各组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.01);而48h后,其抑制率则分别为(36.872±0.006)%、(40.673±0.013)%、(47.313±0.004)%、(55.910±0.003)%、(63.120±0.003)%、(69.975±0.014)%.各组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.01).培养基中加入0 mg·L-1、0.0025mg·L-1、0.005 mg·L-1、0.01 mg.L-1、0.02 mg·L-1浓度的Sunitinib 24 h后RF/6A的迁移距离分别为(203.3±2.2)μm、(145.4±4.4)μm、(123.9±2.6)μm、(96.1±3.1)μm、(46.6±2.9)μm.而48h后则为(313.1±4.1)μm、(213.9±2.8)μm、(193.9±4.2)μm、(134.5±3.2)μm、(109.9±5.7)μm.在同一时段,各组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.01).0mg·L-1、0.0025 mg·L-1、0.005 mg.L-1、0.01 mg·L-1、0.02 mg·L-1浓度的Sunitinib作用24 h后,RF/6A KDR mRNA的相对表达量分别为0.583±0.004、0.570±0.008、0.553±0.007、0.531±0.003、0.513±0.005.而48 h后则分别为0.628±0.005、0.610±0.002、0.588 4±0.002、0.564±0.005、0.525±0.004.在同一时段,各组两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Sunitinib能够抑制视网膜微血管内皮细胞的增殖和迁移,其机制可能是通过下调VEGFR mRNA的表达来实现的.     

Tumstatin肽对条件培养基下视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移的影响

目的 模拟糖尿病视网膜病变(DR)的体内环境,观察血管形成抑制因子Tumstatin肽(T8肽)对高糖视网膜Müller细胞条件培养基(HGMCM)诱导的视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移的影响.方法 采用细胞划痕实验,观察不同质量浓度的T8肽对HGMCM诱导的RF/6A细胞迁移的抑制作用.结果 加入不同质量浓度的T8肽后,RF/6A细咆24 h、48 h迁移的距离显著降低,迁移距离随着T8肽质量浓度的增大而逐渐降低(P＜0.01).结论 Tumstatin肽能够抑制HGMCM诱导的视网膜脉络膜血管内皮细胞迁移,可能是Tumstatin肽抗血管生成的机制之一.     

大鼠视网膜微血管内皮细胞的分离和培养

目的探讨大鼠视网膜毛细血管内皮细胞(rat retinal capillary endothelial cells,RRCEC)的体外分离和选择性培养方法。方法采用单纯视网膜剪碎法获得的视网膜微血管碎片,结合0.25%胶原酶消化,经细胞筛网过滤,原代细胞悬液接种于纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)包被的培养皿中,培养液为含20%胎牛血清(FBS)、100×103U·L-1肝素钠、10mg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的DMEM液。原代培养5～6d细胞较少时,采用机械除杂法进行细胞分离,而在传代时利用进行选择性消化和贴壁法除杂分离以获得较纯RRCEC。应用Ⅷ因子相关抗体通过免疫组化方法对所培养的RRCEC进行鉴定。结果大鼠视网膜组织经过胶原酶适当消化后,产生大量具有良好生长能力的微血管碎片,贴壁后可见RRCEC自微血管碎片中游出,融合后呈铺路石样单层生长。传代培养时5～6d可融合生长。选择性培养获得的RRCEC纯度高,能连续传代,保持性状不变。对Ⅷ因子相关抗体染色阳性。结论视网膜剪碎、胶原酶、FBS、bFGF、培养皿处理及机械除杂法分离,选择性消化和贴壁等应用可获得较纯的RRCEC,方便简单,具有良好的重复性。     

牛及猪视网膜微血管内皮细胞的培养方法

牛及猪视网膜微血管内皮细胞的培养方法杜红俊郭守一张作明骆阁大艹勾琳为了研究眼底新生血管的形成机制，建立一种视网膜微血管内皮细胞的培养方法。作者综合了国内外几种方法［１～４］，在此基础上建立了一种简便的培养方法。现报告如下。１材料及方法１．１材料Ｍ１９...     

视网膜色素上皮细胞对培养视网膜微血管内皮细胞的抑制作用

新生血管的形成是许多眼底疾病的一个重要环节，是致盲的常见原因．但在临床上尚无满意的治疗措施．人们发现：在眼底新生血管周围，往往有视网膜色素上皮细胞（RPE）的存在，而且当增生的RPE包裹新生血管时，新生血管便停止．[1]但RPE对于新生血管的确切作用仍不清楚，有的研究甚至截然相反。[2-3]因此，为了进一步研究RPE对新生血管的作用，我们采用细胞培养的方法，观察了正常及缺氧条件下，RPE对视网膜微血管内皮细胞（RCEC）的影响。1、材料与方法1．1材料M199培养基（GIBCO），新生小牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所…     

玻璃体液对培养人视网膜微血管内皮细胞和色素上皮细胞增生的影响

目的 探讨玻璃体液对培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelialcells,HRCECs)和色素上皮(retinal pigmental epithelial cells,RPE)细胞增生的影响.方法 原代培养HRCECs和RPE细胞,鉴定并传至第3代,再分别培养在1:8、1:4、1:2(玻璃体液在总培养液中的体积比)的人玻璃体条件培养液(vitreous-conditioned medium,VCM)中,其中VCM分为有无血清2组,在不同作用时间(24～72h),采用四唑盐(tetrazolium,MTT)比色法检测VCM对人HRCECs和RPE细胞增生的影响.结果 在有血清时.与对照组比较,1:4、1:2的VCM在培养的各时间段对HRCECs的抑增生作用差异有显著性意义(P<0.05),而对RPE细胞和混合细胞(HRCECs和RPE混合1:1)的促增生作用差异有统计学意义(P<0.01).在无血清时与对照组比较,1:4VCM组在培养60、72h时以及1:2VCM组在培养24h,RPE细胞的增生差异有统计学意义(P<0.05),而1:2VCM组在培养48、印、72h时RPE细胞的增生差异有非常统计学意义(P<0.01);1:2VCM组在培养各时间段混合细胞的增生差异有统计学意义(P<0.05),均表现为促增生效应.结论 一定体积分数的人VCM抑制HRCECs的增生,但明显促进人RPE细胞以及混合细胞的增生,提示玻璃体中RPE细胞浸润是加重外伤增生性玻璃体视网膜病变和眼内血管增生性疾病的高危因素.     

胰岛素对人视网膜微血管内皮细胞syndecan-1的表达及细胞通透性和增殖的影响

目的：观察胰岛素对人视网膜微血管内皮细胞syndecan-1的表达及细胞的增殖和通透性的影响。

方法：以低浓度(100nmol/L)和高浓度(1 000nmol/L)胰岛素分别刺激细胞48h后,采用蛋白印迹和实时定量聚合酶链反应观察syndecan-1蛋白和mRNA的表达变化。分别以四甲基偶氮唑蓝法和辣根过氧化物酶法观察细胞的增殖性和通透性。

结果：不同浓度的胰岛素刺激后,视网膜微血管内皮细胞syndecan-1蛋白和mRNA的表达均升高,且高浓度胰岛素的作用更显著。胰岛素刺激后,视网膜微血管内皮细胞的增殖水平和通透性均增高,且高浓度胰岛素的作用更强。

结论：胰岛素可上调人视网膜微血管内皮细胞syndecan-1的表达、增加细胞的通透性和促进细胞的增殖。     

大鼠视网膜微血管内皮细胞的原代培养及鉴定改进

【摘要】 目的 探讨大鼠视网膜微血管内皮细胞原代培养改进方法,为研究视网膜新生血管疾病的病理机制奠定基础。设计 实验研究。研究对象 大鼠视网膜微血管内皮细胞。方法 采用机械剪除大鼠视网膜血管联合酶消化分离,用含胎牛血清、内皮细胞培养特制添加剂等的条件培养基培养及纯化大鼠视网膜微血管内皮细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。应用因子VIII、血小板内皮细胞黏附分子-1（CD31）免疫鉴定细胞。主要指标 微血管内皮细胞形态,免疫荧光染色。结果 原代培养的大鼠视网膜微血管内皮细胞贴壁后散在分布,呈单层排列,多为梭形,边界清楚,少量呈铺路石样螺旋向外生长,3~5天后融合,呈簇状单层分布。免疫荧光细胞染色显示,因子VIII抗体染色核周出现黄绿色荧光反应,CD31因子抗体染色以胞浆着色为主。细胞纯度较高,荧光染色阳性细胞率为95%。结论 采用机械剪除大鼠视网膜血管、胰蛋白酶和胶原酶消化、含特制添加剂培养基的应用、明胶包被培养瓶等综合法可获得较纯的大鼠视网膜微血管内皮细胞。（眼科,2012,21：261-263）     

静态压力对大鼠视网膜微血管内皮细胞内皮素-1和NO表达的影响

目的观察静态压力变化对大鼠视网膜微血管内皮细胞（RMECs）形态、增生活性及分泌血管活性物质内皮素-1（ET-1）和一氧化氮合酶（NOS）的影响。方法体外培养并鉴定大鼠RMECs,分为A（1．33kPa）、B（2．67kPa）、C（5．33kPa）和D（10,67kPa）组和未加压对照组。用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,常规方法进行细胞计数,锥虫蓝染色检测活细胞比例。用Griess硝酸还原酶法检测NO代谢产物NO2^-／NO3^-的含量,放射免疫法检测培养细胞的ET-1蛋白表达;用RT-PCR法半定量研究RMECs中ET-1、eNOS、iNOS mRNA的表达。结果B、C、D组RMECs细胞核膨大,胞体拉长,可见少量悬浮细胞;静态压力促进RMECs增生（F=12．205,P〈0．01）,C组和D组细胞数量高于对照组、A组和B组（P〈0．01）;静态压力升高造成各组细胞损伤,拒染率降低（F=11．180,P〈0．01）,B、C、D组细胞拒染率低于对照组（P〈0．05）。B、C、D组ET-1浓度较对照组增加（P〈0．01）。C组和D组RMECs培养液中NO2^-／NO3^-浓度高于对照组（P〈0．01）。B、C、D组RMECs中ET-1 mRNA表达较对照组升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;C组和D组RMECs中eNOS mRNA和iNOS mRNA表达较对照组升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论高静态压力可直接导致RMECs的结构损伤,高静态压力下RMECs合成ET-1、NO增多可能是高眼压眼底病变的机制之一。     

肝细胞生长因子对牛视网膜血管内皮细胞的促增生移行效应

目的 体外培养牛视网膜血管内皮细胞（BREC），观察肝细胞生长因子（HGF）对其促增生和移行效应。方法通过FⅧr-Ab免疫组织化学法鉴定培养的BREC；向BREC中加入不同质量浓度的HGF，4d后用MTT法测定细胞增生情况；向有正方形无细胞区的6孔培养板中加入不同质量浓度的HGF，24h后计数进入空白区的细胞，判定细胞移行效应；流式细胞仪测增生周期。结果HGF对BREC促增生成剂量一时间依赖关系，在不同质量浓度下增生率分别为8．5％，12．4％，33．8％，39．8％。25ng／ml HGF作用1～4d，增生率分别为4．5％，8．3％，10．4％，15．6％。HGF对BREC促移行呈质量浓度依赖关系，移行能力分别为10％，63％，239％，476％。流式细胞仪结果显示HGF促BREC增生主要作用于细胞周期的M期。结论HGF可显著促进BREC的增生和移行，是细胞的有丝分裂原和强有力的促移行因子。     

Autophagy activation and the mechanism of retinal microvascular endothelial cells in hypoxia

AIM: To explore the state of autophagy and related mechanisms in the murine retinal microvascular endothelial cells (RMECs) under hypoxia stimulation. METHODS: The murine RMECs were primarily cultured and randomly divided into three groups: hypoxia group (cultured in 1% O2 environment), hypoxia+autophagy inhibition group [pretreated with 5 mmol/L 3-methyladenine (3-MA) for 4h followed by incubation in 1% O2] and control group (cultured under normoxic condition). The state of autophagy in RMECs was examined by assaying the turnover of light chain 3B (LC3BB) and expression of Beclin-1, Atg3 and Atg5 proteins with Western blotting, by detecting formation of autophagosomes with transmission electron microscopy (TEM) and by counting the number of GFP+ puncta in RMECs. The protein levels of AMPK, P-AMPK, Akt, P-Akt, m-TOR and P-mTOR were also assayed by Western blotting. RESULTS: Primary murine RMECs were successfully cultured. Under hypoxic conditions, the ratio of LC3BB-II/I and the expression of Beclin-1, Atg3 and Atg5 proteins were increased when compared with the control group. In addition, the numbers of autophagosome and the GFP+ puncta were also increased under hypoxia. However, pre-treatment with 3-MA obviously attenuated these changes in autophagy in RMECs under hypoxia. Protein expression of P-Akt and P-AMPK was increased but P-mTOR level was decreased in cells exposed to hypoxia. CONCLUSION: In murine RMECs autophagy is activated under hypoxia possibly through activation of the AMPK/mTOR signaling pathway.     

脉络膜微血管内皮细胞的培养及相关研究

脉络膜新生血管与眼部多种疾病有关 ,而脉络膜微血管内皮细胞是研究脉络膜新生血管的重要工具。目前已有数种脉络膜微血管内皮细胞体外培养体系 ,为脉络膜新生血管发病机制的研究和防治提供了可靠的体外模型     

BAMBI过表达抑制缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和迁移

目的　探讨过表达激活素膜结合抑制剂（ｂｍｐａｎｄａｃｔｉｖｉｎｍｅｍｂｒａｎｅ-ｂｏｕｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＢＡＭＢＩ）对缺氧诱导的恒河猴视网膜血管内皮细胞（ＲＦ／６Ａ）增殖和迁移的影响。方法　将ＲＦ／６Ａ细胞分为四组:正常对照组、缺氧组、缺氧＋ｐＦＬＡＧ组和缺氧＋ＢＡＭＢＩ组。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＢＡＭＢＩ的表达,倒置显微镜观察各组细胞形态和密度,ＣＣＫ-８法和流式细胞仪分别检测各组细胞的增殖和周期情况,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞的迁移,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-β１,ＴＧＦ-β１）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达。结果　与对照组相比,缺氧组细胞数目明显增多,增殖增加,培养１２０ｈ后,对照组细胞增殖倍数为５．００±０．２８,缺氧组为７．６４±０．３２（Ｐ＜０．００１）;缺氧组Ｓ期进程显著加快,占（１０．４４±２．６１）％,对照组Ｓ期占（２０．７９±２．２３）％（Ｐ＜０．０５）;细胞迁移增加,缺氧组细胞数目为３３．８０±４．２０,对照组为８．３５±２．５０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显增加（Ｐ＜０．０５）。缺氧＋ＢＡＭＢＩ组:缺氧处理的细胞转染ｐＦＬＡＧ-ＢＡＭ-ＢＩ后,与缺氧组相比,ＢＡＭＢＩ蛋白表达显著上调,细胞数目明显减少,增殖显著降低,培养１２０ｈ后,增殖倍数为５．５３±０．２７（Ｐ＜０．００１）,细胞Ｓ期受到阻滞,占（１８．７５±２．９２）％,迁移显著下降,数目为１３．００±２．８０（Ｐ＜０．０５）,ＴＧＦ-β１和ＶＥＧＦ的表达明显下调（Ｐ＜０．０５）。结论　过表达ＢＡＭＢＩ可抑制缺氧诱导的ＲＦ／６Ａ细胞的增殖和迁移,进而有望抑制视网膜血管新生。     

苦参碱对大鼠视网膜微血管内皮细胞的增生及VEGF表达的影响

目的 探讨苦参碱(Ma)对体外培养的大鼠视网膜微血管内皮细胞的增生抑制及对血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 原代培养大鼠视网膜微血管内皮细胞,噻唑蓝比色法(MTT)检测不同质量浓度的Ma对其增生的抑制作用.将培养的细胞分为对照组、Ma(40 mg/L)组、高糖(25 mmol/L)组、Ma 高糖组4组.免疫细胞化学和Western blot法检测细胞VEGF的表达.结果 一定质量浓度范围内Ma可抑制视网膜微血管内皮细胞的增生(P＜0.05),48 h内呈质量浓度依赖性.与对照组和高糖组相比,Ma组48 h后,VEGF表达明显下降(P＜0.05),与对照组相比,高糖组VEGF的表达明显增加(P＜0.05).结论 Ma可抑制视网膜微血管内皮细胞的增生,抑制主要是通过下调VEGF表达而发生作用的,Ma对高糖引起的VEGF表达上调同样也有抑制作用.