空肠弯曲菌HSP60家庭成员的鉴定

用针对ＨＳＰ６０保守区的二株单抗ＩＬＨ９和ＭＬ－３０进行了Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ试验，发现空肠弯曲菌ＣＪ－Ｓ１３１株４３ｋＤ通道蛋白属ＨＳＰ６０家庭成员，命名其为空弯菌ＨＳＰ４３。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描显示ＨＳＰ４３是主要菌体蛋白。虽然ＨＳＰ极端保守，但用ＣＪ－Ｓ１３１ｌｙｓａｔｅ免疫小鼠事，发现最早诱导的抗体是针对ＨＳＰ４３的，并且这种抗体活性在随后８０ｄ的观察期间一直     

空肠弯曲菌HSP60家族成员的鉴定

用针对ＨＳＰ６０保守区的二株单抗ⅡＨ９和ＭＬ－３０进行了Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ试验，发现空肠弯曲菌ＣＪ－Ｓ１３１株４３ｋＤ通道蛋白属ＨＳＰ６０家族成员，命名其为空弯菌ＨＳＰ４３。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描显示ＨＳＰ４３是主要菌体蛋白。虽然ＨＳＰ极端保守，但用ＣＪ－Ｓ１３ｌｌｙｓａｔｅ免疫小鼠后，发现最早诱导的抗体是针对ＨＳＰ４３的，并且这种抗体活性在随后８０ｄ的观察期间一直维持较高活性。此结果为研究感染诱致自身免疫病分子机理提供了新的线索。     

单克隆抗体2A7亲和层析法纯化红细胞膜表面的CD59分子

用抗ＣＤ５９单抗２Ａ７与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备亲和层析柱，从正常人红细胞膜蛋白抽提物中分离纯化出ＣＤ５９分子。本法纯化的ＣＤ５９分子量为１８－２０ＫＤａ对还原剂敏感，与ＭｃＡｂｓｓＭＥＭ４３和１Ｆ５有高亲和性，再掺入豚鼠红细胞后，能够抑制人体补体的反应性溶血，本文还对三株抗ＣＤ５９单抗２Ａ７，ＭＥＭ４３及１Ｆ５的抗原特异性进行了初步分析。     

空肠弯曲菌热休克蛋白43对T细胞的活化作用

本文用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验发现空肠弯曲菌４３ＫＤ热休克蛋白（ＨＳＰ４３）能显著促进小鼠脾淋巴细胞活化，并呈剂量依赖关系，这种活化作用不但能被特异性针对ＨＳＰ４３的二株单抗明显抑制，而且也能针对ＨＳＰ６０家族保守区序列的二株单抗所抑制，去除巨噬细胞同样也能抑制ＨＳＰ４３活化作用。用单抗和补体的特异性杀伤所致Ｔ细胞亚群缺失试验发现ＨＳＰ４３主要活化ＣＤ４＾＋Ｔ细胞，本文结果提示空肠弯曲菌ＨＳＰ４３可     

中国登革2型病毒分离株乳鼠致病性差异与基因变化关系的研究

本文报道１９８７年从广西病人血清中分离的登革２型（Ｄ２）病毒Ｄ２－４３株和１９８５年从海南病人血清中分离的Ｄ２－０４株乳鼠致病性的差异与基因变化的关系。结果表明Ｄ２－４３株对乳鼠致病，Ｄ２－０４株不致病。Ｄ２－４３株和Ｄ２－０４株Ｃ到ＮＳ１基因的读码框架基本相同，均由３３８１核苷酸组成，编码氨基酸总数１１２７。包含三个结构蛋白Ｃ．ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和一个非结构蛋白ＮＳ１。该两株病毒核苷酸序列同源性为９３．８％，氨基酸序列的类似性为９１．３％。Ｃ和Ｅ基因同源性为９５．０％～９５．８％，ＮＳ１基因为９２．２％，Ｍ基因为８６．７％，两株之间核苷酸序列的主要差异是在Ｍ基因。两株病毒的Ｃ－ＮＳ１基因与国际参考毒株比较，４３株与ＪＡＭ株类侧性最高，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。而０４株只有Ｃ、Ｅ和ＮＳ１与ＪＡＭ株最高，ＰｒＭ（Ｍ）都与ＮＧＣ株最高。４３株与０４株的Ｍ基因相比较，０４株的ＰｒＭ（Ｍ）基因的同源性低于４３株，说明两株与国际参考毒株比较，主要差异也在Ｍ基因，乳鼠致病性差异可能与Ｍ基因变化有关。     

小鼠胸腺基质细胞系（MTEC1）对裸鼠骨髓细胞的诱…

在体外建立的小鼠胸腺基质细胞系（ＭＴＥＣ１）及其培养上清（ＭＴＥＣ１－ＳＮ）与裸鼠骨髓（ＢＭ）细胞共同培养，通过直接荧光素标记抗体，ＦＡＣＳ分析其细胞表面标志表明，ＭＴＥＣ１及ＭＴＥＣ１－ＳＮ均有诱导促进Ｔｈｙ·１＾－ＣＤ＾－４ＣＤ＾－８的ＢＭ细胞表达Ｔｈｙ·１，ＣＤ４及ＣＤ８分子的作用。在培养或共育三天时，ＭＴＥＣ１－ＳＮ可促进ＢＭ细胞分化形成ＣＤ＾＋４Ｔｈｙ·１＾－，ＣＤ＾－４Ｔｈｙ·１＾＋细     

大肠癌患者围手术期免疫状态变化的临床意义

目的 研究大肠癌患者围手术期的免疫状态。方法 应用ＡＰＡＡＰ夹心法ＥＬＩＳＡ和比色法分别测定大肠癌患者手术前后Ｔ细胞亚群变化,血浆可溶性白介２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）及一氧化氮（ＮＯ）和癌组织的ＳＩＬ－２Ｒ,ＮＯ含量。结果 大谫ＣＤ３,ＣＤ４细胞、ＣＤ４／ＣＤ８比值和血浆ＮＯ水平明显低于正常,血浆ＳＩＬ－２Ｒ、ＣＤ８细胞较正常显著增高,肿瘤切除后３周左右ＣＤ３、ＣＤ４细胞、ＣＤ４／ＣＤ８和血浆术前有明     

胸腺基质细胞的抗原提呈作用

目的 研究胸腺基质细胞的抗原提呈能力。方法 应用ＯＶＡ－特异的、受Ｉ－Ａ＾ｄ分子识别限制的辅助Ｔ细胞杂交瘤（３ＤＯ．１８．３）识别提呈的ＯＶＡ的ＣＮＢｒ水解片段而被活化后产生ＩＬ－２,测定ＩＬ－２活性来分析胸腺基质细胞的抗原提呈作用。结果ＩＦＮ－γ能促进ＭＴＥＣＩ和ＭＴＳＣ４表达Ｉ－Ａ＾ｄ分子,并促进ＭＴＳＣ４表达Ｂ７－１分子。经ＩＦＮ－γ作用后,ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４均有抗原提呈能力,ＭＴＳＣ     

丙型肝炎病毒结构蛋白在痘苗病毒中的表达

为研究中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的抗原性及在细胞内的加工，将丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（ＮＴＲ）和结构基因（Ｃｏｒｅ＋Ｅ１＋Ｅ２／ＮＳ１）插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５中，转染ＴＫ－１４３细胞，经纯化得到丙型肝炎（ＨＣＶ）重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交表明，ＨＣＶ结构基因存在于痘苗病毒之中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ表达蛋白带位于９０ｋＤａ，为一多聚蛋白；此蛋白为分泌型，分泌量与细胞裂解物内量大致相同     

ＥＡＮ中神经抗原Ｐ２蛋白有效表位的鉴定及其与空肠弯曲菌ＬＰＳ抗原性比较

目的：ＥＡＮ中神经抗原（Ｐ２蛋白）的有效表位的鉴定以及将其与空肠弯曲菌（Ｃampylobacter jejuni,Cj）ＬＰＳ抗原性比较，方法：采用噬菌体呈现技术对８个ＥＡＮ模型血清抗体进行肽库筛选，并将获得的克隆用ＥＬＩＳＡ方法进行阳性鉴定，以及将阳性克隆与空肠弯曲菌ＬＰＳ相惟进行比较，结果：３３个阳必隆的亲和性均显著高于阴性对照（Ｐ＜０．０１），说明它们是具有特异性的克隆；Ｃ．Ｊ．ＬＰＳ与血沮的亲和力显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），与阳性克隆的ＯＤ值相关不显著，Ｃ．Ｊ．ＬＰＳ与阳性克隆之间存在相似性，结论：噬菌体呈现技术可筛选出与Ｐ２蛋白具有相同表位的噬菌体克隆，空肠弯曲菌ＬＰＳ与Ｐ２蛋白之间存在表位模拟，Ｃ．Ｊ．ＬＰＳ可能是启动ＧＢＳ自身反应性免疫应答的重要因素。     

组蛋白与空肠弯曲菌及ENA组份交叉反应性的研究

木文采用3株空弯菌与核抗原(ENA)交叉反应性单抗为材料,通过ELISA及竞争抑制试验证实:1株单抗可与组蛋白结合(酶指数EI=343,竞争抑制率35％),提示组蛋白与ENA及空弯菌之间存在分子空间结构模拟现象,可能是该菌诱发自身免疫综合征的一个重要原因。同时对动物模型的检测显示,抗组蛋白抗体的检测可能具有早期诊断意义。     

T细胞接种对SLE样小鼠防治作用的探讨

本文在空肠弯曲菌（CJ-S131）免疫诱导的小鬼SLE样综合征模型上,观察了T细胞接种（T CellVaccination,TCV）的预防和治疗作用。用于 TCV的细胞为 CJ-S131预致敏的同系小鼠 T细胞。结果显示TCV可明显地抑制CJ-S131诱导的特异性迟发型超敏反应,相反却显著地增强抗dsDNA抗体和抗外膜蛋白抗体生成。因此TCV对SLE样小鼠没有预防及治疗作用。本文对此现象进行了讨论。     

空弯菌抗原诱导的自身抗体产生动力学

用CJ-S131菌苗经口免疫小鼠16周,观察免疫小鼠体内的自身抗体(抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白和ENA抗体)产生动力学。在CJ-S131菌苗连续免疫的16周内,免疫小鼠有两个自身抗体产生峰。免疫后第6周,出现第一峰,抗组蛋白和ENA抗体的阳性率高于抗ds-DNA和ss-DNA抗体;在第16周,抗ds-DNA和ss-DNA抗体的阳性率高于抗组蛋白和ENA抗体。在正常小鼠体内,存在“自然”抗核酸抗体(抗ds-DNA和ss-DNA抗体),随年龄而增长,但个体差异较大;而抗核蛋白抗体(抗组蛋白和ENA抗体)始终测不出。上述结果提示,抗组蛋白抗体和抗ENA抗体在自身免疫病的发病机理和早期诊断中,具有潜在意义,值得进一步研究。     

空肠弯曲菌67KD 外膜蛋白的提取及其对淋巴细胞的多克隆激活作用

本室曾建立空肠弯曲菌诱导自身免疫综合征小鼠模型.本文用盐析法及离子交换层析法从空肠弯曲菌(CJ-S131)中提取了67KD 的外膜蛋白.免疫印迹法证实该蛋白为空肠弯曲菌的主要抗原成份之一,具有较强的免疫原性;体外对小鼠脾淋巴细胞具有明显的多克隆激活作用.本实验为从分子水平研究感染与自身免疫的关系提供了重要的物质基础和新的实验依据.     

甲醛化空肠弯曲菌(CJ-S_(131))与佐剂诱导的自身免疫动物模型

甲醛化CJ-S_(131)辅以佐剂免疫小鼠,可诱导自身免疫反应。模型鼠出现的T、B细胞功能改变,血清出现高水平的自身抗体,在肝、肾、肠等组织出现的炎症性病理损伤,均类似于CJ-S_(121)慢性感染的小鼠。本模型优点在于实验周期短,用菌体抗原免疫小鼠代替复杂的感染过程,而诱导自身免疫反应。本模型可用于诸如免疫调节剂的筛选,自身免疫的分子机理等自身免疫反应的实验研究。     

慢性粘膜免疫应答诱导的小鼠自身免疫综合征

空弯菌(CJ-S131)慢性感染小鼠具有SLE样自身免疫综合征。本文进一步用甲醛化空弯菌(CJ-S131菌苗)经口免疫BALB/c小鼠,每周两次,持续14周.模拟慢性感染时的慢性肠道粘膜免疫应答.发现免疫小鼠也具有SLE样自身免疫综合征,且较该菌慢性感染小鼠更显著。主要表现有:(1)全身免疫系统的淋巴组织显著增生;(2)B淋巴细胞多克隆激活;(3)多种自身抗体(包括抗ds-DNA.ss-DNA和组蛋白抗体)显著升高;(4)免疫复合物性肾小球肾炎;(5)多器官性(如肝、肠等组织)慢性炎症;(6)血管炎和血管周围炎。在体外自身免疫应答诱导实验中,免疫小鼠的脾细胞培养上清中,免疫球蛋白(总Ig)和抗DNA抗体显著高于非免疫小鼠。上述结果证实.空肠弯菌慢性感染所致的自身免疫综合征.和该菌抗原诱导的慢性肠道粘膜免疫应答有关。本实验为研究感染和自身免疫的关系提供了实用的动物模型。     

空肠弯曲菌HSP43诱导自身免疫机理──分子模拟和抗原优势

我们曾发现空肠弯曲菌４３ｋＤ热休克蛋白（ＨＳＰ４３）能诱导小鼠产生自身免疫应答，本文则进一步分析了这种诱导作用的机理。二株针对ＨＳＰ６０保守区序列的单克隆抗体ＩＩＨ９和ＭＬ－３０不但能结合人及小鼠细胞中ＨＳＰ６０家族成员，而且也能结合ＨＳＰ４３，表明ＨＳＰ４３、人及小鼠ＨＳＰ６０三者均属同一家族成员，具有序列上的高度同源性。小鼠用空肠弯曲菌免疫后出现了针对１０种菌体蛋白的抗体，其中最早被诱导的抗体是针对ＨＳＰ４３的，并且该种抗体在随后８０ｄ观察期间内保持了较高活性，表明ＨＳＰ４３是优势抗原。本文结果提示，ＨＳＰ４３较易被免疫系统识别而产生应答，通过和宿主ＨＳＰ６０高度序列同源性而可能呈现分子模拟，从而诱导自身免疫损伤。     

影响空弯菌抗原诱导自身免疫应答的因素

利用慢性粘膜免疫应答小鼠模型,研究在空弯菌抗原(CJ-S131菌苗)诱导下,不同品系、性别的小鼠的自身免疫应答。经肠道,持续用CJ-S131菌苗免疫16周后,用ELISA或CELISA检测小鼠体内的抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白,ENA和胸腺细胞抗体。在五个品系小鼠中,四个品系小鼠(BALB/C,ICR,KM和SMMC/B)均有一种或多种被测的自身抗体升高。其中SMMC/B和KM小鼠的EI值较高,BALB/C和ICR小鼠次之。C57BL/6和对照组无显著性差异,提示对空弯菌抗原诱导的自身免疫应答不敏感。在遗传背景的制约下,性别也影响自身抗体的产生,有三种可能:(1)自身抗体升高主要见于雌性小鼠,如雌性KM小鼠被测的各种自身抗体均有升高;(2)雌性,雄性小鼠均有一种以上自身抗体升高,如SMMC/B和BALB/C小鼠;(3)雌、雄性小鼠的自身抗体均无升高,如C 57BL/6。本文结果表明,空弯菌苗诱导的自身抗体种类和水平,受小鼠的遗传背景和性别两个因素的相互制约和影响。     

甲醛化空肠弯曲菌菌苗诱导肠道免疫应答机理的初步研究

甲醛化空弯菌CJ-S131菌苗经口免疫小鼠,有效地诱导了肠道粘膜的特异性免疫应答。应用改良的免疫荧光技术,可检测到肠粘膜表面覆有一层空弯菌特异性的抗体及固有膜内的许多特异性抗体形成细胞(SACC)。此外,在空肠和回肠粘膜上皮细胞间有CJ-S131特异性荧光细胞;Peyer氏小结生发中心内可见大小不等,处于不同发育阶段的SACC;结肠固有层内SACC成群出现。用活菌攻击免疫小鼠,其各肠段的病理学检查可见以单核细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润为主的炎症反应。     

褪黑素对系统性红斑狼疮样小鼠的影响

为了观察褪黑素 (MT )对CJ S13 1所致的SLE样小鼠改变的影响并探讨其作用机制。采用空肠弯曲菌CJ S13 1和CFA混合免疫动物 ,诱导SLE样小鼠改变。结果表明MT 0 0 1、 0 10、 1 0mg/kg/d× 2 8d ,ig能部分或完全拮抗血清抗ssDNA和组蛋白IgG型自身抗体水平的升高 ,抑制ConA及LPS诱导的淋巴细胞增殖反应的增强 ,降低动物尿蛋白水平 ,减轻肾组织病变程度。提示一定剂量的MT对SLE样小鼠改变具有一定的保护作用。