异种胸腺移植：受者细胞免疫力重建

胎猪或新出生猪胸腺移植物可以在T细胞剔除的去胸腺小鼠中长期存活，并支持小鼠T细胞的正常发育分化，可使受者外周重新建立受者T细胞池。在异种猪胸腺成熟的小鼠T细胞具有正常的细胞免疫力，且受小鼠自身MHC的限制性。因此，异种胸腺移植可能为AIDS晚期患者或其他由于胸腺功能障碍引起的免疫缺陷性疾病等提供新的治疗手段或具有一定的辅助治疗作用。     

猪-人-鼠嵌合体动物模型的建立及介导人T细胞对猪异种抗原的耐受

目的： 通过共移植人胎胸腺、胎肝组织及猪骨髓细胞于SCID鼠体内,建立猪-人-鼠嵌合体模型,介导人T细胞对猪异种抗原的免疫耐受。方法:实验鼠分成3组：A组为猪骨髓细胞移植组,B组为人胎胸腺、肝脏组织移植组,C组为猪骨髓细胞＋人胎胸腺+肝脏组织移植组;在移植后每3周,用流式细胞仪测定猪和人嵌合体的水平,直至20周;通过混和淋巴细胞反应确定人T细胞的功能及对猪异种抗原的耐受情况。 结果:猪嵌合体在所有实验鼠（包括共移植人组织的实验鼠）中持续时间均超过20周;在移植人胎组织20周时,T细胞的数量为0.7×106/L,在外周血细胞中所占的百分比为0.14%±0.01%;人嵌合体在所有实验鼠（包括共移植猪骨髓细胞的实验鼠）中持续时间亦超过20周。结论: 通过共移植人胎胸腺、胎肝组织及猪造血干细胞于SCID鼠体内,可以建立猪-人-鼠嵌合体模型,并能诱导人T细胞对猪异种抗原的免疫耐受。     

T－B细胞协作研究的重大突破——滤泡辅助性T细胞的发现，一个新的CD^4＋效应T细胞亚群

二十世纪60年代,Claman和Miller等[1,2]分别采用照射或胸腺切除的小鼠模型,同时过继转移正常小鼠骨髓细胞和胸腺细胞,或过继转移胸腺细胞或胸导管淋巴细胞,才能产生针对羊红细胞抗体,发现了B细胞对某些抗原(后称为T细胞依赖抗原)刺激产生抗体必须要有T细胞的辅助.     

不同生长期小鼠胸腺T细胞不同亚群的变化及ROCK抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的促进作用

目的研究各发育阶段小鼠胸腺细胞、胸腺上皮细胞(TEC)和脾脏中T细胞的变化,探索Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)抑制剂对衰老小鼠胸腺再生的作用。方法取幼年、青年、中年及老年期C57BL/6雌鼠的胸腺和脾脏,流式细胞术分析小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群;ROCK抑制剂体外处理衰老进程中小鼠TEC,荧光酶联斑点分析仪观察细胞增殖情况;ROCK抑制剂处理20月龄衰老小鼠,流式细胞术检测小鼠胸腺细胞、TEC及脾脏中T细胞亚群的变化。结果随月龄增加,胸腺细胞、TEC总数及各细胞亚群数量均显著降低;脾脏中总CD4⁺T细胞及CD8⁺T细胞比例无显著性改变,但CD4+初始T细胞、CD8+初始T细胞和CD4+近期胸腺迁出细胞(RTE)在脾脏中所占比例呈下降趋势;ROCK抑制剂在体外促进衰老进程中小鼠TEC增殖,ROCK抑制剂在体内使衰老小鼠胸腺细胞、TEC以及外周脾脏中T淋巴细胞各亚群数量明显增加。结论随着小鼠月龄增加,胸腺呈进行性退化。ROCK抑制剂可以显著缓解衰老小鼠胸腺的萎缩,促进衰老小鼠胸腺再生。     

乳香提取物促进免疫低下小鼠模型胸腺前体T细胞分化机制的研究

采用环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型,探索乳香提取物提高免疫低下小鼠胸腺前体T细胞数量、增殖及上调Th1和Th2细胞因子产生的作用机制。采用灌胃给小鼠口服乳香提取物。灌胃后取小鼠外周血和胸腺细胞悬液,用特异性抗体染色并经FACS观测小鼠上述细胞数量变化。采用胸腺细胞培养法检测胸腺基质细胞对于前体T细胞分化成熟的支持作用;采用实时定量PCR方法分析乳香提取物促进Th1细胞分化的可能机制。结果表明,乳香提取物具有明显上调小鼠胸腺内未成熟T细胞数量;促进胸腺基质细胞生长及对T细胞分化成熟的支持作用;T细胞发育相关基因表达格局表明灌胃组小鼠胸腺中细胞因子IL-2、IL-6和IL-1基因表达量较对照组高,转录因子T-bet和gata3表达量也增高。进一步分析表明Notch1和其配体DLL1的基因表达量增加。结果提示乳香提取物上调小鼠Th1/Th2细胞亚群可能是通过介导North1/DLL1信号途径而促进胸腺内T细胞分化与成熟。     

胸腺修饰联合照射预处理受体在猪-猴心脏移植中对补体的影响及机理探讨

目的：探讨补体在异种大动物猪-猴心脏移植排斥反应中的作用。方法：选用猪-新生猴腹腔心脏异位模型，通过异种胸腺修饰加^60C o γ照射途径。结果：预处理组移植前补体水平较空白组无明显变化，但随着IgM、IgG水平的上升，排斥时C3、CD46水平显著降低。在照射＋胸腺注射组中，猕猴特异性抗猪抗体IgM及IgG的上升速度均较照射组和空白组明显延缓，且存活期较空白组明显延长。MLR检测在照射＋胸腺注射组接受脾细胞胸腺内注射后第3周，其刺激效应较空白组、照射组下降明显（P〈0．01）。结论：补体通过经典途径参与超急性及延迟性异种排异反应的发生，补体本身并不直接损伤内皮细胞，而需要有抗体的参与。通过异种胸腺注射联合照射预处理在抑制T细胞免疫及体液免疫方面有重要作用，但尚无法起到抑制异种排异反应中补体激活的作用。     

PLZF调控小鼠早期T细胞发育和自我更新的功能

目的：研究PLZF调控小鼠早期T细胞发育与自我更新的功能，以及PLZF对胸腺细胞发育和自我更新的影响。方法：利用新生小鼠进行胸腺移植，以Rag2/γc^-/-小鼠为受体。首先比较PLZF^-/-与野生型(PLZF^+/+)小鼠胸腺细胞总数的差异，再通过流式细胞术和细胞分选，筛选小鼠的骨髓造血干细胞和胸腺的DN2a细胞以及PLZF^-/-小鼠的早期T细胞系前体(ETP)，以及PLZF^-/-或野生型小鼠在新生小鼠胸腺移植模型的移植物DN1细胞中的表达情况。结果：PLZF^-/-小鼠的胸腺细胞总数和早期T细胞系前体数目与野生型小鼠相比显著下降，并且细胞总数的减少不是由细胞内源性引起的。通过研究PLZF-EGFP报告基因小鼠和新生小鼠胸腺的肾移植模型，发现PLZF在Rag2/γc^-/-受体小鼠胸腺移植物的DN1(Lineage^-CD44⁺CD25^-)细胞中高表达，且供体细胞的PLZF缺失...     

新生鼠T细胞胸腺内外凋亡动态分析

T细胞在发育过程中经历一系列分化与凋亡修饰,但其在正常生理状态下发生凋亡的部位及凋亡率尚待进一步阐明。我们采用流式细胞仪对出生后0~28d小鼠胸腺、脾脏和血液中CD3+T细胞的自然凋亡率以及巨噬细胞含量进行多时间点检测分析。结果表明,在自然状态下,小鼠脾脏、血液中CD3+T细胞凋亡率及巨噬细胞比率均显著高于胸腺。提示除胸腺外,脾脏及血液可能为T细胞完全成熟前的凋亡地点。     

人淋巴细胞亚群的异种抗血清

曾有过许多关于人的T、B细胞特异的异种抗血清的报告.T细胞抗血清主要是用胸腺细胞制备,再用B细胞(如慢性淋巴细胞性白血病细胞)来吸收,使之更具有特异     

猪胸腺中免疫抑制调节物的研究——Ⅰ.提取及提取物对小鼠体内免疫功能的影响

<正> 到目前为止人们已从胸腺中提取多种与机体免疫功能有关的活性物质。1966年Goldstein将小牛胸腺的无细胞抽提液经过初步纯化得到一制剂,命名为胸腺素(Thymosin)。它具有与胸腺相同的生物学作用,能促进T淋巴细胞的分化,并在T细胞的成熟中起着重要作用。同时在胸腺中也存在有T细胞分裂分化的负反馈性调节物质,有的学者称之为抑裂素(Chalone)。为了寻找对淋巴细胞具有抑制作用的内源性调节物,我们以猪胸腺为材料进行抑制性调节物质的提取,并观察提取物对小鼠体内免疫功能的影响。     

来氟米特对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的：评价新型免疫抑制剂来氟米特应用对CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞的影响。方法：以灌胃的方式给予正常BALB/c小鼠来氟米特或对照溶剂4周,流式细胞仪分析不同淋巴器官内T淋巴细胞亚群,包括CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量及比例的变化。结果：与对照溶剂组相比,LEF组小鼠脾、肠系膜淋巴结内CD4^＋T淋巴细胞和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例均明显下降,外周淋巴结和胸腺没有明显变化;但胸腺内CD4^＋CD25^＋调节性T细胞/CD4单阳性胸腺细胞的比例明显增加。结论：来氟米特对中枢和周围淋巴器官内CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响不同。胸腺内CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对来氟米特的作用与CD4单阳性胸腺细胞相比具有较强的抗性;而脾及淋巴结的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对来氟米特的反应与非调节性T细胞相似。     

NOD小鼠胸腺细胞TCR介导的信号通路缺陷

目的 进一步研究NOD小鼠T细胞应答改变机理。方法 用抗TCR抗体、ConA激活NOD小鼠胸腺细胞，分析TCR介导的信号通路的水平。结果 与Balb／c小鼠胸腺细胞相比，抗TCR抗体诱导的增殖应答较弱，与年龄及NOD胸腺CD4^ CD8^-和CD4^-CD8^ SP细胞有关；rIL-2能部分恢复对TCR抗体应答的缺乏。NOD小鼠对PMA IONO和PMA anti—TCR-mAb应答正常，但对anti-TCRmAb IONO应答缺乏。结论 与年龄有关的NOD小鼠胸腺细胞对TCR抗体应答的缺乏与T细胞激活时上游PKC信号通路的缺乏有关。     

猪到猴异种胸腺修饰对猪心脏移植物存活及与外周血IL-2水平的影响

选用猪 新生猴腹腔心脏异位模型 ,通过异种胸腺修饰加60 Coγ照射途径 ,来探讨此途径对异种器官移植中T细胞的作用及诱导异种T细胞中枢性耐受的可能性 ,并进一步研究外周血IL 2水平与排斥反应的关系。结果发现 :MLR检测在照射 +胸腺注射组接受脾细胞胸腺内注射后第 3周 ,其刺激效应较空白组、照射组下降明显 (P <0 0 1 )。照射 +胸注组存活期较空白组明显延长 (P <0 0 1 ) ,照射 +胸注组存活期较胸注组和照射组延长 (P <0 0 5 )。IL 2和IL 1 0检测的结果表明 ,各组在排斥时均表现为IL 2水平较移植前显著升高 (P <0 0 0 1 ) ,胸注 +照射组和胸注组 ,受体体内IL 2水平 ,在移植后早期与移植前比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,与同时期单纯照射和空白组术后比较有显著差异 (P <0 0 1 )。结果表明 :异种胸腺注射可诱导供体特异性的T细胞功能抑制 ,异种胸腺注射联合照射可有效地延长供心存活时间。IL 2水平与排斥反应的发生关系密切 ,可以作为监测晚期排斥反应发生的一个重要指标     

褪黑素对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的:研究褪黑素在抑制肿瘤过程中对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞表达变化的影响.方法:培养小鼠前胃癌细胞株(MFC),采用小鼠荷胃癌模型.用褪黑素干预1周后,测量小鼠胸腺、脾质量;并用流式细胞仪检测胸腺、脾Treg细胞;用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测胸腺、脾叉头型转录因子3 (Foxp3)的表达.结果:与正常对照组相比,小鼠胸腺、脾质量各组之间差异无统计学意义.在褪黑素抗肿瘤过程中,与正常对照组相比,荷瘤空白对照组小鼠胸腺与脾的Treg细胞均上升,褪黑素干预后降至正常水平;褪黑素还能使小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达下降,脾Foxp3 mRNA反而上调;而小鼠胸腺、脾scurfin蛋白均明显下降.结论:褪黑素能下调荷胃癌小鼠胸腺、脾的CD4+CD25+Treg细胞及特异性转录蛋白scurfin及胸腺Foxp3 mRNA,使脾Foxp3 mRNA反而上调.褪黑素抗胃癌作用与免疫器官中CD4+CD25+Treg细胞免疫调节有关.     

NF-κB诱导激酶基因突变对CD4+CD25+调节性T细胞产生的影响

目的：探讨NIK基因变异鼠—aly鼠自身免疫病的产生与CD4^ CD25^ 调节性T细胞的相关性。方法：利用NIK基因自然突变鼠—aly／aly鼠做为动物模型，aly／ 小鼠做为NIK基因正常对照鼠；CN4^ CD25^ T细胞亚群鉴定采用流式细胞分析仪(FACS)；用免疫组织化学方法观察胸腺结构。结果：aly小鼠的CD4 CD25^ CD8^-胸腺细胞数量和脾脏CD4^ CD25^ CD8^-T淋巴细胞的数量明显低于aly／ 小鼠；aly小鼠胸腺髓质缺少UEA—1阳性细胞。结论：NIK基因突变的aly小鼠CD4^ CD25^ 胸腺细胞和脾脏T淋巴细胞的数量明显降低可能是aly小鼠自身免疫病产生的原因；UEA—1阳性细胞很可能在CN4^ CD25^ 调节性T细胞选择中发挥作用。     

Foxn1在胸腺上皮细胞发育分化中的关键调控作用

胸腺是哺乳动物T细胞发育成熟的关键中枢免疫器官,并可分泌多种胸腺激素及激素类物质.胸腺上皮包括皮质和髓质,提供T细胞发育所必需的胸腺微环境.通常,造血干细胞首先在皮髓交界处进入胸腺,在皮质中增殖,表达TCR基因,产生具有功能的TCRαB链,然后迁出皮质,发育为CD4+CD8+T细胞后再迁入皮质进行阳性选择.随后T细胞经趋化因子CCR7介导进入髓质,剔除自身反应性T细胞,即进行阴性选择,成熟的T细胞移出胸腺至外周.TECs不仅提供肽段/MHC配体支持T细胞选择,还分泌支持T细胞扩增的各种可溶性因子如Wnt、IL-7和干细胞因子,表达各种趋化因子和促进T细胞定向和分化的Notch配体等.TECs的发育依赖于Foxn1的表达,人类和小鼠Foxn1基因突变或缺失可以引起胸腺发育严重障碍或缺失.现主要就Foxn1对TECs发育分化调控的研究进展进行简要综述.     

MiR-150特异调控胸腺iNKT细胞的发育和成熟

目的:探讨miR-150在胸腺传统T细胞和恒定型自然杀伤性T细胞(iNKT)发育和成熟中的作用。方法:采用Real-time PCR检测miR-150在胸腺传统T细胞和iNKT细胞中的表达,流式细胞术检测miR-150基因敲除小鼠胸腺传统T细胞和iNKT细胞的发育和成熟。结果:miR-150在胸腺传统T细胞和iNKT细胞中均有表达,且在iNKT细胞发育成熟过程中表达逐渐增加,缺失miR-150不影响传统T细胞发育,但导致iNKT细胞发育和成熟障碍。结论:miR-150特异调控小鼠胸腺iNKT细胞的发育和成熟。     

肠上皮细胞系诱导骨髓前体细胞的T细胞分化

MaricD…CellImmunol．-1996，172-172～179胸腺细胞的发育依赖于T细胞前体与胸腺基质成分的相互作用。无胸腺裸鼠外周T细胞发育大大减弱。尽管胸腺对T细胞发育有强烈影响，但是T细胞仍能在胸腺外发育，例如小鼠肠上皮细胞内的T淋巴细胞群可能就是一个胸腺外细胞系。该文研究了肠上皮细胞系MODE－K对去除T细胞的骨髓细胞（BM）向T细胞发育和分化的促进作用，同时用成纤维细胞系LTA作对照。自C3H小鼠股鼠分离骨髓细胞，用抗-Thy12和抗-CD4单抗加免补体处理去除T细胞，然后将其与MODE－K细胞或LTA细胭松合培养．回层培养时，将…     

大鼠胚胎胸腺和后肾原基联合异种移植与诱导免疫耐受的初步研究

目的 将大鼠胚胎胸腺与后肾原基联合移植至无胸腺裸小鼠,探讨联合移植能否重建受体细胞免疫功能并诱导受者对异种供者器官的特异性免疫耐受的关系.方法 从受孕第15天(E15)的Lewis大鼠胚胎中提取胸腺、后肾原基,分别植入BALB/c裸小鼠腹腔右肾包膜下及大网膜内.移植后第10周,行胸腺、后肾移植物的形态学检查及移植后肾的功能检测;并进行外周血T淋巴细胞流式细胞学检测、单向混合淋巴细胞反应(MLR)及皮肤移植试验.结果 移植后第10周,移植胸腺及后肾形态发育良好.移植后肾显示一定的排泄功能,联合移植受体双肾切除后的生存时间明显延长(P＜0.05).联合移植受体的外周血T淋巴细胞重建良好;其淋巴细胞对胸腺供体来源的Lewis大鼠脾细胞的刺激呈特异性低反应(P＜0.01);且胸腺供体来源的大鼠移植皮片平均存活时间明显大于C57BL/6小鼠、BN大鼠移植皮片存活时间(P＜0.01).结论 E15 Lewis大鼠胚胎胸腺、后肾原基联合移植至细胞免疫缺陷的裸小鼠,移植物可生长分化形成器官并发挥功能,受体裸小鼠能重建免疫功能,并有可能诱导对同源供体器官的特异性异种移植免疫耐受.     

无胸腺小鼠体内的T淋巴细胞——胸腺外T细胞的发育途径

胸腺在T细胞发育方面的中枢作用,经廿多年的研究已经证实.研究T-系列细胞在胸腺内发育的细胞学及分子生物学机理,可以用正常有胸腺动物进行,另外也可用无胸腺纯系裸鼠(athymic nude mice,nu/nu)进行,以探讨在无胸腺条件下是否有T细胞存在,及引导发育的机理.裸鼠的突变表现为胚胎发育期颈囊(外胚层结构)不发育,在胚胎第12-13天时,胸腺只剩一厚纤维囊,而无淋巴样前体细胞存在.正常小鼠此时的胸腺内,则有淋巴样