免疫组织化学染色微波抗原修复的研究

免疫组织化学染色微波抗原修复的研究倪灿荣（上海第二军医大学病理学教研室，上海２００４３３）本实验室三年来对千余例各种肿瘤标本的石蜡切片进行抗原修复的研究．并选择部分标本分别作冰冻切片，常规石蜡切片进行抗原修复与不修复的对比研究，以观察经抗原修复后阳性...     

环氧树脂半薄切片肾小球基底膜六胺银染色法

环氧树脂半薄切片肾小球基底膜六胺银染色法肖莎陈浦辉郭琳琅在肾脏疾病的研究中，肾小球基底膜银染色技术具有重要意义。如若采用半薄切片染色，在光镜下观察则可获得比石蜡切片更为清晰的结果。但因树脂包埋块为非水溶性质，故其半薄切片的特殊染色就较为困难。我们运用...     

改良半薄切片多色性染色方法

半薄切片有助于电子显微镜超薄切片的准确定位。现有的半薄切片有各种不同的染色方法,但在观察时往往组织结构、细胞核及细胞浆分辨不够清楚。我们在半薄切片中改进染色液的配制和染色方法,并     

免疫金—银染色和S—P染色结果分析

免疫金－银染色和Ｓ－Ｐ染色结果分析李莲花林建树免疫金－银染色（ＩＧＳＳ）和链菌素亲生物蛋白－过氧化酶连结法（Ｓ－Ｐ）系近年来发展起来的两种新的免疫组化方法，两者均可用于石蜡切片、冰冻切片和细胞涂片等，文献报道其敏感性优于ＰＡＰ和ＡＢＣ等其它免疫组化方...     

改良的石蜡半薄切片制作方法

石蜡半薄切片,是介于常规石蜡切片与超薄切片两者之间的一种切片技术。它对于疾病状态下的细微组织结构、细胞内容和细胞排列层次等的分辨力,优于常规石蜡切片,逊于超薄切片。鉴于半薄切片机价格昂贵,电子显微镜又不能普及,因     

TUNEL法原位检测心肌细胞凋亡的改进

目的：脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）是检测细胞凋亡的常用方法,但以往仍有TUNEL假阳性率高的报道。本实验目的在于探讨应用TUNEL检测心肌细胞凋亡时增强其特异性的方法。方法：缺血再灌注心肌组织的石蜡切片（2 μm）和冰冻切片（3 μm）进行TUNEL染色。分为石蜡切片HE染色组,石蜡切片常规TUNEL组,冰冻切片改良TUNEL组。石蜡切片常规TUNEL组完全按照试剂盒说明书进行,光学显微镜下观察;冰冻切片改良TUNEL组使用荧光素（FITC）标记的dUTP及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI）双重荧光染色,在共聚焦显微镜下观察。结果：TUNEL改良法凋亡背景清晰,阳性细胞主要分布在缺血再灌注损伤区域,其凋亡检出率与石蜡切片HE染色相比无显著差异（P>0.05）;常规TUNEL组凋亡背景清晰度较差,非缺血再灌注损伤区域亦有大量阳性细胞出现,其凋亡率明显高于石蜡切片HE染色（P<0.01）。结论：冰冻切片改良TUNEL法可能是更适宜研究SD大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的方法。     

骨巨细胞瘤组织中端粒酶活性的原位检测及意义

目的:探讨骨巨细胞瘤(GCT)石蜡切片中端粒酶活性检测的可行性以及端粒酶在GCT生物学特性中的意义。方法:采用针对人端粒酶hTERT寡核苷酸探针序列, 对27例GCT石蜡标本进行原位杂交, 检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达情况。结果:27例GCT中8例hTERTmRNA表达阳性, 石蜡切片中基质细胞、部分多核巨细胞hTERTmRNA表达阳性。结论:采用原位杂交技术检测GCT石蜡切片中hTERT表达, 证实GCT中可能存在肿瘤性巨细胞。     

电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨

电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察 ,我们在定位观察时发现 ,由于切片薄 ,结构显示清晰 ,可用于光镜研究 ,其观察结果优于石蜡切片。多年来 ,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验。方法 :取材后将组织修为 1立方毫米左右 ,常规电镜样品处理 ,环氧树脂 6 18包埋 ,修块 ,L KBV型超薄切片机切片 ,切片厚度 1微米 ,脱树脂后 ,苏木精染色 ,H· E或甲苯胺兰染色 ,37℃温箱烤干 ,封片 ,观察。结果 :苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色 ,胞浆淡兰色 ;H·E染色显示 ,细胞核为紫兰色 ,细胞质淡粉红色 ,但伊红染色较石蜡…     

人视网膜星形胶质细胞发育及与血管前体细胞的关系

目的：研究人视网星菜胶质细胞的发育及与血管前体细胞的关系。材料和方法：收集１３４例发育各期胎儿视网膜和４例成人视网膜、石蜡包埋切片整装铺片，四种抗体免疫组分染色，光镜观察，结果：星形胶质细胞分为三种：（１）Ｓ－１００（＋）／胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）（＋）的双极形星形胶质细胞，视盘进入视网膜，与跟随其后的纤连蛋白（Ｆｎ）（＋）的血管前体细胞接触并相伴向锯齿缘迁移，足月后和成人此类星形胶质细胞主要     

微波骨髓活组织快速半薄石蜡切片的制备

骨髓穿刺活组织检查（骨髓活检）是确诊血液疾病的主要技术之一。微波骨髓活检组织快速半薄石蜡切片的制备，把微波辐射应用到骨髓活检组织的固定、脱水、透明、浸蜡及其切片染色等主要步骤中，结果仅需２～３ｈ即可完成切片制作，而且制片质量近似骨髓组织塑料包埋切片技...     

琼脂石蜡双包埋切片在胸水细胞学诊断中的应用

目的探讨胸水琼脂石蜡双包埋切片在肿瘤细胞学诊断中的意义。方法对44例胸水沉淀物分别进行常规涂片和琼脂石蜡双包埋切片,并对琼脂石蜡双包埋切片进行免疫组织化学染色。结果在确诊的21例恶性胸水中,琼脂石蜡双包埋切片法检测癌细胞的阳性率为90.48%,显著高于涂片法52.38%。11例涂片法阳性的标本中,只有5例做出了病理分类诊断,而19例琼脂石蜡双包埋切片阳性的标本均做出了病理分类诊断。琼脂石蜡双包埋切片的免疫组织化学染色阳性结果定位准确,图象背景清晰。结论琼脂石蜡双包埋切片细胞集中,可以提高恶性胸水癌细胞的检出率和做出分型的病理诊断,利于以及进行免疫组织化学检测。     

大鼠下颌下腺颗粒曲管细胞属性的研究

用免疫组织化学ABC染色和镀银染色法研究大鼠下颌下腺颗粒曲管（GCT）细胞的属性,发现大鼠下颌下腺GCT细胞呈嗜铬粒素A和神经元特异性烯醇化酶免疫反应阳性,但镀银染色呈阴性,因此认为大鼠下颌下腺GCT细胞可归属于消化道弥散神经内分泌系统。     

球旁细胞光学显微镜下4种染色法结果观察

目的 探讨显示小鼠球旁细胞的适宜染色方法,更好地为教学和科研服务。 方法 取 20 只小鼠肾组织做石蜡切片,随机分为 4 组,分别用HE染色、高碘酸-Schiff 氏反应染色、改良结晶紫染色和免疫组织化学染色。 结果 HE染色和高碘酸-Schiff 氏反应染色不能显示肾球旁细胞;改良结晶紫染色和免疫组织化学均能较好地显示肾球旁细胞（胞质内有特征性的被染色的分泌颗粒）。 结论 改良结晶紫染色和免疫组织化学染色对球旁细胞有较好的染色效果,但改良的结晶紫染色更为简便、经济、稳定。     

半薄切片中免疫金银染色与石蜡切片中免疫组化染色的比较

免疫金 -银染色 ( Immuno-gold- silver,IGS)是 1 983年 Holgate等用免疫金染色加银显影液增强的一种染色方法 ,可在光镜下观察到阳性反应结果。此法一经推出就受到了广大生物、医学研究人员的认可 ,给科学研究带来很大的方便。它特异性强 ,操作简便 ,而且经济 ,特别是近十几年来 ,经过不断改进 ,应用到半薄切片中 ,为免疫电镜的研究提供了基础。我们将其与石蜡切片中免疫组化的染色进行了比较研究。1、材料和方法　 1 .1材料　 2 0例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为 Ig A肾病的肾活检组织环氧树脂包埋块。 1 .2方法　 1 )用Na OH无水乙…     

几种半薄切片染色法的比较与改进

半薄切片是超薄切片前的一个重要步骤。光镜检查半薄切片,可确定电镜观察部位,判断组织固定和包埋的质量。半薄切片染色法很多,我们对几种常用方法进行了一些比较和改进,现将实践中的体会介绍如下,供参考。一、方法及结果:用Epon812包埋的组织块切成1微米或1.5微米厚的半薄切片,捞到滴有蒸馏水的载片上,在烘箱内烤干,待染色。1.甲苯胺兰染色法:将染液滴于切片上,在酒精灯上加热数秒钟,勿煮沸,流水冲洗,自然干燥,树胶封固后观察。不必经酒精及二甲苯,免切片皱缩不平。如染色适度,组织染成兰色,结构清楚,而树脂无色。2.苏木精—伊红染色法:锇酸固定、树脂包埋的组织,用此法难于着色,一般须先用氢氧化钾溶液脱去树脂,然后染色.为避免氢氧化钾液对组织可能产生的损伤,我们参考Chang法改用2.5%高碘酸处理切片,并用滴     

细胞骨架在回肠上皮的表达

为探讨细胞骨架在回肠上皮和抗原呈递细胞的表达，用细胞骨架的单克隆抗体对日本正常雌性兔的回肠石蜡切片进行免疫组织化学ＡＢＣ法染色。结果表明，波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）表达于回肠淋巴滤泡上皮中的微皱褶细胞（Ｍ细胞）和血管内皮；微管蛋白（α－ｔｕｂｕｌｉｎ）表达于Ｍ细胞、柱状吸收细胞和血管内皮；肌动蛋白（ａｃｔｉｎ）表达于Ｍ细胞、柱状吸收细胞和血管内皮和平滑肌、结缔组织的一些细胞；细胞角蛋白－１８（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ－１８）表达于肠绒毛上皮的纹状缘。本文对细胞骨架的意义进行了讨论。     

八肽胆囊收缩素与甲—脑啡肽在EC细胞中的共存及含量的相互关系

用免疫组织化学相邻切片多重标记技术，观察了ＣＣＫ－８与Ｍ－ＥＮＫ在小肠ＥＣ细胞中的共存，并结合图像分析技术研究同一细胞中共存物质含量的关系。实验取猪十二指肠，Ｂｏｕｉｎ液固定，制备１μｍ厚连续石蜡切片。在相切片上分别用兔抗５－ＨＴ，ＣＣＫ－８和Ｍ－ＥＮＫ抗体进行ＰＡＰ法免疫组织化学染色。     

免疫组化热修复应用于TUNEL染色

检测细胞凋亡的方法较多,目前TUNEL染色较多应用于石蜡切片.作者在实验中发现,用蛋白酶K消化切片的染色方法不易操作和控制,为此对免疫组化热修复法进行改进,染色效果满意,且简便易行,现介绍如下.     

用荧光原位杂交在石蜡切片上检测t(11;18)和涉及bcl-10基因染色体易位的方法

荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridisation,FISH）是在石蜡包埋组织中检测细胞染色体变化及基因异常的一种敏感性强、特异性高的分子生物学方法。对石蜡包埋组织进行FISH染色所采用的方法有两种,在提取的细胞核上进行和直接在石蜡包埋组织切片上进行。然而,从石蜡包埋组织中提取细胞核进行FISH的方法复杂、耗时,而且所需组织较多,     

一种优化的琼脂糖包埋细胞微阵列的制备方法

在原有琼脂糖包埋细胞微阵列制备技术基础上,建立一种高可靠性和稳定性的细胞微阵列制备方法。方法是收集培养细胞,采用优化的低熔点琼脂糖包埋技术包埋目的细胞,再对细胞包埋块进行脱水和石蜡包埋,最后将细胞石蜡包埋块用组织微阵列仪制备成细胞微阵列。结果显示细胞微阵列切片HE染色细胞结构清晰,免疫组化实验后观察阳性信号着色明显,定位准确,无背景干扰,细胞微阵列在4℃存放3个月后进行免疫组织化学实验,信号无明显衰减。本方法制备的细胞微阵列具有较好的稳定性和可靠性,且细胞形态和抗原保存良好,可应用于生物科技和医学研究领域各种实验研究。