吡格列酮对胰岛素抵抗骨骼肌细胞PTEN表达及细胞凋亡的影响

目的 观察吡格列酮对胰岛素抵抗骨骼肌细胞第10号染色体缺失及与张力蛋白同源的磷酸酶(PTEN)及其磷酸化、蛋白激酶B(Akt)磷酸化蛋白表达、细胞凋亡的影响.方法 传代培养大鼠骨骼肌细胞,棕榈酸作用制备胰岛素抵抗模型.分以下3组:正常细胞组、胰岛素抵抗组、胰岛素抵抗+吡格列酮组.3组细胞各经胰岛素刺激15 min.Western blotting检测各组PTEN、PTEN磷酸化及Akt磷酸化的表达.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果 胰岛素抵抗组大鼠骨骼肌细胞PTEN及PTEN磷酸化蛋白表达较正常细胞组增加,差异有统计学意义(P＜0.01);胰岛素抵抗组Akt磷酸化蛋白表达较正常细胞组下降,差异有统计学意义(P＜0.01);胰岛素抵抗+吡格列酮组PTEN、PTEN磷酸化及Akt磷酸化蛋白表达较胰岛素抵抗组均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).胰岛素抵抗组与正常细胞组比较凋亡细胞明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01);胰岛素抵抗+吡格列酮组与胰岛素抵抗组比较凋亡细胞明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 胰岛素抵抗时PTEN及其磷酸化表达增加,影响细胞凋亡.吡格列酮通过增加PTEN基因的表达,进一步增加骨骼肌细胞凋亡.     

吡格列酮对非肥胖性糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡的影响

目的观察吡格列酮对早期糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡的影响。方法非肥胖性糖尿病(NOD)雌性小鼠20只随机分为对照组(n=10)和吡格列酮干预组(n=10)。对照组给予普通饲料,干预组用加入0.02%吡格列酮的饲料喂养。2组分别在4周时和12周处死小鼠,摘除眼球并制作组织切片,用TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡。电镜观察视网膜超微结构改变。结果干预组小鼠视网膜神经节细胞和内皮细胞凋亡数目明显较对照组减少(P<0.01)。结论吡格列酮可抑制NOD雌鼠视网膜细胞凋亡,对视网膜的神经元病变和微血管病变有治疗作用。     

吡格列酮对糖尿病大鼠足细胞的保护作用

目的 研究不同剂量盐酸吡格列酮(PIO)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏足细胞的保护作用.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组),糖尿病组(DM组),糖尿病低剂量PIO组(DR1组),糖尿病中剂量PIO组(DR2组)和糖尿病高剂量PIO组(DR3组).于0、8周末测尿白蛋白、尿nephrin、尿转化生长因子-β1(TGF-β1)和尿肌酐(UCr),并计算尿白蛋白/肌酐(UACR)、nephrin/肌酐(UNER)和TGF-β1/肌酐(UTGR).每周监测血糖(BG),8周末取血测糖化血红蛋白(HbA1c),免疫组化检测肾组织nephrin及TGF-β1蛋白表达.结果 ①糖尿病大鼠各时间点BG及8周末HbA1c显著高于NC组(P＜0.05),糖尿病大鼠组间差异无统计学意义.②8周末,各PIO组UACR、UNER和UTGR均显著低于DM组(P＜0.05),且DR2、DR3组UACR和UNER低于DR1组(P＜0.05);肾脏nephrin蛋白表达:NC组＞各PIO组＞DM组(P＜0.05),DR1、DR2和DR3组间差异无统计学意义;肾脏TGF-β1蛋白表达:DM组＞各PIO组＞NC组(P＜0.05),DR1、DR2和DR3组间差异无统计学意义.③UNER与UTGR呈显著正相关(r=0.787,P＜0.01),肾脏nephrin蛋白与TGF-β1蛋白呈显著负相关(r=-0.669,P＜0.01).结论 PIO对糖尿病大鼠足细胞有一定的保护作用,该作用可能与其上调足细胞nephrin表达和抑制肾组织局部TGF-β1表达有关.     

吡格列酮抑制体外高糖培养乳鼠心肌细胞凋亡作用的研究

目的探讨吡格列酮对体外高糖培养乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用。方法 W istar乳鼠进行原代心肌细胞培养致75%融合后,换无血清的DMEM培养基并转移到24孔板上,随机分为空白对照组、G lu组及PGZ组。48h后,分别测定各组心肌细胞乳酸脱氢酶含量、生长情况、增殖活性及凋亡情况。结果与空白对照组相比较,经过吡格列酮干预后,乳酸脱氢酶含量显著下降、细胞存活率增高、坏死细胞和凋亡细胞明显减少。结论吡格列酮能够抑制体外高糖培养的乳鼠心肌的细胞凋亡。     

吡格列酮作用研究进展

<正>胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类药物吡格列酮(PIO)自1999年8月在美国上市以来逐渐受到医疗工作者的重视。临床研究发现,PIO是一种过氧化体增殖物激活型受体-γ激动剂,其不仅能够改善胰岛素抵抗、降低血糖,还具有保护内皮细胞、抵抗动脉粥样硬化的发生﹑发展,降低尿酸含量,改善     

吡格列酮对家兔局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的探讨吡格列酮对脑缺血再灌注损伤家兔细胞凋亡的影响及其机制。方法40只雄性家兔随机分为5组：①假手术组（S组,n=8）;②模型组（M组,n=8）;③吡格列酮组（P组,n=8）;（4）GW9662＋吡格列酮组（GP组,n=8）;（5）DMSO组（D组,n=8）。除S组外,其余各组均通过线栓法建立家兔大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注损伤模型。于术前30min分别给予相应处理。缺血120min再灌注24h后,对家兔进行神经功能评分;HE染色观察病理形态学。TUNEL检测神经细胞凋亡。结果①与S组比较,M组神经功能评分明显增加（P〈0．05）;与M组比较,P组神经功能评分明显降低（P〈0．05）。②与S组比较,M组凋亡细胞明显增加（P〈0．05）;与M组比较,P组凋亡细胞明显降低（P〈0．05）。结论吡格列酮可通过减轻形态学改变、抗神经细胞凋亡,对神经细胞发挥保护作用。     

吡格列酮对离体缺血再灌注心肌细胞的保护作用

目的观察吡格列酮对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护作用,为吡格列酮治疗心肌缺血再灌注损伤提供理论基础和实验依据。方法体外培养Wistar大鼠乳鼠心室肌细胞,建立心肌细胞缺氧复氧模型。比色法检测各组培养基中SOD活力和MDA的含量;采用碘化丙啶标记流式细胞术和Hochest33258免疫荧光法检测心肌细胞凋亡率。结果吡格列酮使培养的缺血再灌注损伤心肌细胞培养基中的MDA含量降低;SOD活力升高(P<0.05);凋亡指数显著降低。结论吡格列酮减轻离体缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡,具有保护作用。     

吡格列酮对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的影响

目的:建立2型糖尿病（T2DM）的大鼠模型,观察吡格列酮（PIO）对胰岛素抵抗和胰岛功能的影响。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为对照组（10只）和高脂组（30只）。高脂组建立2型糖尿病大鼠模型,得到T2DM大鼠24只。将成模的24只T2DM大鼠随机分为糖尿病组（DM组）和PIO组,每组12只。监测DM组、PIO组和对照组大鼠体质量、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、超敏C反应蛋白以及血脂,计算胰岛素抵抗指数、胰岛β细胞功能指数（HOMA-β）以及胰岛素敏感指数。结果:DM组、PIO组大鼠的体质量、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、超敏C反应蛋白、胰岛素抵抗指数均高于对照组（P<0.05~P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇、胰岛素敏感指数和HOMA-β则均低于对照组（P<0.05~P<0.01）;PIO组的HOMA-β高于DM组（P<0.05）。结论:PIO发挥治疗T2DM大鼠糖尿病的作用可能与减轻T2DM大鼠的胰岛素抵抗和改善胰岛功能有关。     

吡格列酮在抗动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化是一种多因素参与缓慢发展的疾病。已知慢性炎症、免疫等因素在动脉粥样硬化的发生、发展中起着不可忽视的作用。吡格列酮是噻唑烷二酮类（thiazolidinedione,TZDs）胰岛素增敏剂,作用于过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）。近年研究发现TZDs不仅有改善胰岛素抵抗、降血糖的作用,还具有降低血压、调节血脂、保护血管内皮细胞、抑制血管平滑肌细胞增殖、促进新生血管形成等作用,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。本文就吡格列酮在上述方面的研究进展予以综述。     

y-氨基丁酸对炎性因子致胰岛细胞凋亡的保护作用

【目的】探讨1-氨基丁酸（gamma-aminobutyricacid,GABA）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用,初步研究其作用机制。【方法】将胶原酶v：通过总胆管灌注到大鼠内,分离纯化大鼠胰岛细胞,并通过DTZ染色鉴定胰岛纯度。将新鲜分离的胰岛分为3组：正常对照组、通过白介素-1B（IL-1B）-y干扰素（IFN-7）建立胰岛细胞炎症模型（IL-1β＋IFN-1诱导组）、GABA干预组（GABA＋IL-1β＋IFN-1）。观察（IL-1β＋IFN-1）与GABA预孵育胰岛细胞的凋亡;二醋酸酯荧光素,碘化丙啶染色、流式细胞术及糖刺激实验检测胰岛细胞活性。凋亡率和功能,免疫荧光检测凋亡细胞Caspase-3蛋白表达。【结果】（IL-18＋IFN-7）组作用24h对胰岛细胞活性、凋亡率和糖刺激指数分别为20％、（32．7±5.3）％和（1．62±0．13）,对照组3项指标分别为90％、（5．5±2．8）％和（2．37±0．11）,两组比较差异显著（P〈0．01）;（GABA＋IL-1β＋IFN-y）组3项指标分别为70％、（18．0±6．3）％和（1．97±0．12）,与（IL-1β＋IFN-1）组比较,均有明显差异（P〈0．01）。（IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显增加,而（GABA＋IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显受到抑制。【结论】联合IL-1β及IFN-y明显诱导胰岛细胞凋亡,GABA显著抑制IL-1β及IFN-1诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与降低Caspase-3蛋白的表达有关。     

促炎细胞因子对成人胰岛细胞的损伤作用

目的了解促炎细胞因子对成人胰岛细胞的损伤作用。方法将成人胰腺分离、纯化所得的胰岛细胞分为对照组、白介素(IL)-1β组、肿瘤坏死因子(TNF)-α组、联合组(联合应用IL-1β和TNF-α),予相应细胞因子刺激5 d后,分别用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷末端标记法(TUNEL法)、丫啶橙和碘丙啶(AO-PI)染色、胰岛素释放试验、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)比较其凋亡率、坏死率、胰岛素分泌功能和 Fas表达。结果联合组胰岛细胞死亡率明显增高,且以凋亡为主,Fas表达增加,胰岛素分泌功能下降,而IL-1β组和TNF-α组与对照组的差异无显著性。结论培养的成人胰岛细胞在IL-1β和TNF-α共同诱导下发生凋亡, 胰岛分泌功能受损。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞凋亡保护作用的实验研究

目的 探讨白藜芦醇对过氧化氢(H2O2)诱导鼠晶状体上皮细胞凋亡损伤的保护作用.方法 取健康SD大鼠透明晶状体60只,随机分为5组,每组12只,分别给予高、中、低剂量(5、10、20μmol/L)的白藜芦醇和100 μmol/L H2O2,利用透射电镜观察超微结构变化并测定凋亡因子caspase-3及caspase-9的表达.结果 伴随白藜芦醇给药浓度的增加,透射电镜下鼠晶状体上皮细胞损伤的程度减轻,此外,白藜芦醇对caspase-3及caspase-9的表达具有抑制作用.结论 白藜芦醇可以抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,对氧化损伤性白内障具有预防作用,为寻求有效防治白内障药物提供了可靠的实验依据.     

高糖经内质网应激途径诱导胰岛内皮细胞凋亡

目的:探讨高糖诱导胰岛微血管内皮细胞株MS-1凋亡及其可能机制?方法:体外培养MS-1细胞,用含有不同浓度葡萄糖(5.6?25.0和33.6 mmol/L)的培养液分组培养12?24 h?流式细胞术分析各组细胞凋亡率变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖率变化;RT-PCR分析GRP78?CHOP?caspase-3?caspase-12 mRNA表达变化情况;Western blot分析GRP78?CHOP蛋白表达变化情况?结果:与5.6 mmol/L组相比,培养12 h及24 h后,25.0和33.6 mmol/L组MS-1细胞凋亡率显著增加(P < 0.05);而细胞增殖率显著下降(P < 0.05),且呈浓度和时间依赖性?进一步研究表明,在高糖刺激12 h及24 h后,caspase-3?caspase-12 mRNA表达显著上调(P < 0.05),CHOP mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P < 0.05);而GRP78 mRNA和蛋白表达水平在刺激12 h后显著上调,24 h后却显著下降(P < 0.05)?结论:高糖可以促进胰岛内皮细胞凋亡增加,并呈浓度和时间依赖性升高,其机制可能与启动胰岛内皮细胞内质网应激有关?     

紫杉醇诱导人子宫内膜癌细胞增殖凋亡的实验研究

目的:探讨紫杉醇对体外培养的人子宫内膜癌细胞(HEC-1-B)凋亡的诱导作用. 方法:体外培养的HEC-1-B细胞,用终浓度2, 4, 8,16,20 nmol/L的紫杉醇作用48 h后,荧光染色检测细胞凋亡的发生情况、caspase-3及其抑制剂紫杉醇在诱导细胞凋亡中的作用. 结果:共聚焦检测活细胞内钙离子的动态变化与Caspase-3半胱氨酸蛋白酶中细胞凋亡,使HEC-1-B细胞在活化过程中起了关键性的因素. 结论:HEC-1-B对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对HEC-1-B细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的.     

一氧化氮在鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的研究一氧化氮在鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡中的作用.方法采用MTT法测定细胞增殖活力及鱼藤酮对PC12细胞的急性损伤效应,Greiss法测定NO2-含量,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.结果MTT实验表明PC12细胞传代后7 d达到增殖高峰,低剂量L-NAME对PC12细胞有保护作用,在四个不同剂量L-NAME的比较试验中,100μmol/L的L-NAME对PC12细胞的保护作用最强.鱼藤酮亦可诱导PC12细胞DNA梯带的形成.另外,一氧化氮合酶抑制剂L-NAME可以抑制鱼藤酮诱导的caspase-3蛋白酶的活力,L-NAME亦可抑制鱼藤酮诱导的NO的产生.结论一氧化氮和caspase-3共同参与了鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡.     

Caspase-3 and its inhibitor Ac-DEVD-CHO in rat lens epithelial cell apoptosis induced by hydrogen in vitro

Objective To investigate the role of caspase-3 and its inhibitor Ac-DEVD-CHO in rat lens epitheli alcell apoptosis induced by hydrogen peroxide (H2O2 ) in vitro.Methods Rat lenses were incubated in modified Eagle‘s medium containing 2 mmol/L H2O2 to induce apoptosis in vitro. Apoptosis in lens epithelial cells was assessed by transmission electron microscopy and annexin V-propidium iodide (PI) double staining flow cytometry after 12, 24 and 48 h of incubation. The activity of caspase-3 was analyzed by western blotting.Results Observations under transmission electron microscopy revealed that 2 mmol/L H2O2 could effectively induce lens epithelial cell apoptosis in vitro. Caspase-3 activity increased during cell apoptosis and the peak measurement occurred at 24 h after treatment with H2O2. Cell apoptosis was blocked by caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO.Conclusions The activation of caspase-3 plays an important role in executing apoptosis in H2O2-treated lens epithelial cells and in the formation of cataract. The caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO may effectively prevent lens epithelial cell apoptosis caused by oxidative injury.     

内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡及其意义的研究

目的：探讨内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡作用的意义。方法：采用单细胞凝胶电泳和DNA凝胶电泳技术,分析外源NO供体（硝普钠）和LPS对离体胰岛细胞的凋亡及胰岛素合成与分泌的影响。结果：体外试验显示,外源NO明显引起胰岛细胞DNA断裂,出现慧星尾和凋亡梯状带,并呈剂量依赖关系,高浓度NO（60mmol/L,SNP)可引起胰岛细胞DNA随机降解,外源NO强裂抑制葡萄糖刺激β－细胞的胰岛素合成与分泌,LPS离体条件下,对胰岛细胞凋亡作用不明显。结论：LIPS通过整体作用诱导炎症细胞和胰岛细胞iNOS表达,产生NO介导胰岛细胞凋亡,从而抑制胰岛素合成与分泌。     

力达霉素抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用及其机制

目的: 研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法: 选取处于对数生长期的人CMLK562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00nmol·L^-1)LDM处理48h,作为0.01、0.10和1.00nmol·L^-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组。台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量。结果: 台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.1±3.2)nmol·L^-1。AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状)。流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。Western blotting法检测,0.10和1.00nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。0.01nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡。     

原代人胎胰岛细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的探讨TGFβ、P21ras、cfos与原代人胎胰岛细胞凋亡的关系。方法半定量RTPCR和免疫组化染色(SABC法)检测不同生长时期原代人胎胰岛细胞TGFβ、P21ras、cfos的表达,设原代人成纤维细胞为对照。结果P21ras在原代人胎胰岛细胞各期均弱表达,其中潜伏期、指数生长期显著弱于原代人成纤维细胞(P<0.01);cfos仅在原代人成纤维细胞、原代人胎胰岛细胞停滞期可检出;TGFβ1在原代人胎胰岛细胞停滞期表达最强,潜伏期其次,指数生长期最弱,但均强于原代人成纤维细胞。结论原代人胎胰岛细胞的增殖和凋亡可能是非P21ras依赖的;cfos蛋白的表达对原代人胎胰岛细胞凋亡启动可能是必须的;TGFβ1在原代人胎胰岛细胞增殖中可能发挥负性调节作用。