PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究

目的：针对当前国内外传统检测方法都存在时间长、检测结果假阳性突出等问题，建立阪崎肠杆菌快速检测法。方法：根据阪崎肠杆菌中寡-1，6-葡萄糖苷酶基因设计引物建立PCR方法，并进行PCR反应的灵敏度、特异性实验以及模拟实际样品的最低检出限测定。结果：纯菌检测灵敏度达10^2 cfu／ml，阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均为阳性，阴性对照菌株未扩增出特异性条带；单独接种阪崎肠杆菌（3．5—4．5 cfu／100g）和混合接种大肠杆菌或沙门菌的人工模拟污染奶粉样品中分别在增菌26h和28h时，阪崎肠杆菌均可以检出。结论：该方法灵敏度高、快速、特异性强，可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。     

应用VITEK 32检验奶粉中阪崎肠杆菌的探讨

目的阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是乳制品中新发现的引起广泛关注的一种致病菌，加强对该菌的检验，对预防与控制由该菌所致的感染流行十分重要。方法采用中华人民共和国出入境检验检疫行业标准：SN／T1632．1—2005《奶粉中阪崎肠杆菌检验方法》第1部分：奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数方法，应用VITEK32（全自动微生物鉴定和药敏分析仪）进行检验。结果从原产法国的婴幼儿营养配方奶粉中检出阪崎肠杆菌。结论检出菌株与质控菌株的生化特征基本一致，该方法可使样品中极少量的阪崎肠杆菌被检测和定量。     

市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的了解成都市市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况,为制定婴幼儿配方奶粉阪崎肠杆菌的限量标准提供科学依据。方法对2006-09/2007-03采集的80份市售婴幼儿配方奶粉进行菌落总数、大肠菌群及阪崎肠杆菌的检测,并对分离的阪崎肠杆菌进行药敏试验。结果所有检测样品中,有5份样品检出阪崎肠杆菌,阳性率为6.25%,且其中4份样品的菌落总数、大肠菌群均合格。分离的阪崎肠杆菌对常用抗生素普遍敏感。结论市售国产婴幼儿配方奶粉中存在少量阪崎肠杆菌污染,应尽快制定婴幼儿配方奶粉中适宜的阪崎肠杆菌微生物限量标准和相应检验方法。     

奶粉中阪崎肠杆菌分离株表型特征分类

阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)属于肠杆菌属的1个新种^[1].本文采用目前应用最广、在微生物鉴定方面得到公认的肠杆菌科细菌生化鉴定试剂(API20E)分析了阪崎肠杆菌的生化反应特性,并利用阴沟肠杆菌噬菌体进行裂解试验测定了阪崎肠杆菌的易感性,对奶粉中18株阪崎肠杆菌分离株和4株美国典型菌种保藏中心(ATCC)参考菌株进行了表型分类.旨在对奶粉中阪崎肠杆菌分离株的表型特征进行分类,以便准确地对其鉴别.现报告如下.     

深圳市售进口婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌污染状况调查

目的了解深圳市进口婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌的污染情况。方法对抽取的79份进口婴幼儿配方奶粉和米粉进行阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测,同时参照GB/T4789.40-2008进行分离培养、鉴定。结果共6份样品经荧光定量PCR检测出阪崎肠杆菌阳性;其中一份分离出菌株。结论深圳市进口婴幼儿配方粉中存在阪崎肠杆菌污染隐患。     

批发市场销售国产配方奶粉及婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的了解批发市场销售的国产配方奶粉及婴幼儿食品中阪崎肠杜菌污染情况。方法参照GB/T4789.40-2008规定的阪崎肠杆菌的检验方法对69份样品进行检测。对检出的阪崎肠杆菌进行药敏检测。结果 69份国产配方奶粉及婴幼儿食品中共检出16株阪崎肠杆菌。16株菌均对临床常用的针对G-菌的抗生素普遍敏感。结论批发市场销售的国产配方奶粉及婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染严重,应引起有关部门的重视。     

从酱腌菜中检出一株阪崎肠杆菌

目的 了解我市酱腌菜中阪崎肠杆菌的污染状况.方法 按照GB 4789.40-2010《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》对30份酱腌菜进行阪崎肠杆菌分离培养.结果 检出1株阪崎肠杆菌,检出率为3.3％.结论 说明阪崎肠杆菌不仅存在于婴幼儿奶粉中,其他食品中也存在,对人体存在较大的安全隐患.     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法的建立

[目的]建立奶粉中阪崎肠杆菌的PCR检测方法。[方法]根据阪崎肠杆菌zpx基因设计引物建立PCR检测方法,进行方法的特异性验证和灵敏度检测,并对模拟样品和实际奶粉样品进行检测。[结果]所建立的阪崎肠杆菌PCR检测方法的纯菌检测灵敏度达102cfu/ml,6株阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均可扩增出180bp的目的条带,而31株非阪崎肠杆菌则无目的条带出现;模拟阪崎肠杆菌污染样品经前增菌后均可检出;对实际样品的检测显示该方法与传统的分离培养方法具有较好的一致性。[结论]该方法灵敏度高,特异性强,快速、简便,易于推广,可很好地应用于奶粉中阪崎肠杆菌的检测和鉴定。     

成都市市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的了解成都市市售的国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染情况。方法对2006年9月至2007年3月采集的80份市售婴幼儿配方奶粉进行菌落总数、大肠菌群及阪崎肠杆菌的检测,并对分离的阪崎肠杆菌进行药敏试验。结果所有检测样品中,有5份样品检出阪崎肠杆菌,阳性率为6.25%,且其中4份样品的菌落总数、大肠菌群均合格。分离的阪崎肠杆菌对常用抗生素普遍敏感。结论中国市售的国产婴幼儿配方奶粉中存在少量的阪崎肠杆菌污染。     

进口奶制品阪崎肠杆菌检测情况与分析

目的：了解进口奶制品阪崎肠杆菌的污染分布情况，为奶制品进口把关提供科学依据。方法：采用SN/T1632.1-2005方法，对经汕头口岸进口的奶制品共220份样品进行阪崎肠杆菌检验，并对检验结果进行统计分析。结果：从220份的样品中检出阪崎肠杆菌7株，检出率为3.20%；受阪崎肠杆菌污染最严重的是产自新西兰的食用全脂工业奶粉，共检出6份，检出率为12.8%，而所有婴幼儿奶粉均未检出。结论：来自新西兰的食用全脂工业奶粉和来自澳大利亚的钙美健高钙奶粉中阪崎肠杆菌污染较严重，需加大抽样检测比例，并加强检验监管力度。     

被抑制的阪崎肠杆菌快速复苏的研究

目的:本实验旨在探索婴儿配方奶粉中被抑制的阪崎肠杆菌快速复苏的方法,提高奶粉中阪崎肠杆菌的阳性检出率.方法:通过冷热处理预知浓度的阪崎肠杆菌,人为造成菌细胞受损,生化反应特性改变,再用修复培养基使菌细胞复原.结果:通过热处理,阪崎肠杆菌死亡率为99.90%,细菌生化反应改变17.2%,细菌名称改变58.3%;通过冷处理,阪崎肠杆菌死亡率18.90%,细菌生化反应改变6.1%,细菌名称改变33%;变异的阪崎肠杆菌经丙酮酸盐修复后,细菌生化反应特性恢复69.7%,阪崎肠杆菌恢复63.6%.结论:推荐使用丙酮酸盐修复培养基作为奶粉预增菌液,能提高婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的阳性检出率.     

野生株阪崎肠杆菌的生化分型与耐药性研究

目的:对从婴儿奶粉中分离得到的23株野生株阪崎肠杆菌进行生化分型,对各型阪崎肠杆菌及非阪崎肠杆菌代表株进行耐药性分析.方法:阪崎肠杆菌生化分型使用APl20E鉴定条,定性耐药性分析采用WS/T125-1999标准中纸片法,定量耐药性分析采用细胞培养板梯度稀释法.结果:23株野生株阪崎肠杆菌根据生化实验结果分成了7型,通过耐药性分析筛选出的对阪崎肠杆菌耐药而对其他非阪崎肠杆菌敏感的抗生素有万古霉素、头孢噻吩.结论:通过对野生株阪崎肠杆菌的生化分型与耐药性研究,可对因阪崎肠杆菌引起的婴儿感染的治疗提供帮助,有利于研制新的阪崎肠杆菌选择性培养基,用于食品安全检测.     

深圳乳制品和环境中阪崎肠杆菌污染状况调查

目的 了解深圳市乳制品中阪崎肠杆菌的污染状况,分析其可能的污染途径.方法 对抽取的195份乳制品及41份环境样品进行阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测,同时参照GB/T4789.40-2008进行分离培养和鉴定.结果 共8份乳制品和12份环境样品经荧光PCR检测,为阪崎肠杆菌阳性;其中1份婴幼儿进口配方奶粉、2份新鲜挤出牛奶和4份环境样品分离出菌株.结论 深圳市售进口婴幼儿配方粉中存在阪崎肠杆菌污染隐患.医院婴儿养育环境中存在阪崎肠杆菌污染;生奶及奶场环境阪崎肠杆菌污染风险很高.     

婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌与阪崎肠杆菌分离株的药敏分析

目的研究中国婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌及阪崎肠杆菌分离株的药物敏感性。方法采用纸片扩散法测定15株细菌对氨苄西林、头孢唑林、环丙沙星、阿米卡星等8大类共24种抗生素的敏感性。结果 2009年自30份婴幼儿奶粉样品中共分离得到15株肠杆菌科细菌,经生化鉴定,其中肺炎克雷伯菌8株(53.3%),阪崎肠杆菌7株(46.7%)。药敏结果显示:所有菌株对β-内酰胺类抗生素均有不同程度的耐药性,对氟喹诺酮类和氨基糖甙类均敏感。分别有1株肺炎克雷伯菌和1株阪崎肠杆菌几乎对所有头孢类抗生素耐药。结论婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌和阪崎肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性较强,其多重耐药性不断的出现对婴幼儿构成了极大的危害。     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测

婴儿配方奶粉常因阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazak ii)污染而成为婴儿感染发病的主要原因^(1,2)。为快速、高效对奶粉中阪崎肠杆菌进行检测和监控,本实验针对阪崎肠杆菌外膜蛋白A(ompA)基因⁽³⁾设计引物,建立PCR检测方法,并对人工污染细菌的奶粉进行检测,为奶粉中阪崎肠杆菌检测提供新的手段。现将结果报告如下。     

温州市婴幼儿感染性腹泻疾病中阪崎肠杆菌的检测研究

目的了解温州市婴幼儿感染性腹泻疾病中阪崎肠杆菌的感染情况,为腹泻病的防治提供依据。方法收集某医院2013年2月-2013年11月儿科门诊5岁以下婴幼儿感染性腹泻肛拭标本256份,参考GB 4789.40-2010进行检测,采用纸片扩散法对检出菌株进行药敏试验、血清学分型和生化分型。结果从256份婴幼儿感染性腹泻中检出3株阪崎肠杆菌,检出率为1.17%。5株阪崎肠杆菌(其中2株为标准菌株)耐药性分析结果,对诺氟沙星、四环素、复方新诺明、阿米卡星、氨苄西林、壮观霉素、阿莫西林/克拉维酸等100%敏感,对红霉素、利福平、新生霉素、头孢噻吩等100%耐药。血清学结果 A1株为01型,A2和A3株为03型。生化分型结果 A1、A2、A3和标准菌株CICC21560全部为阪崎克罗诺杆菌,标准菌株ATCC51329为穆汀斯克罗诺杆菌。结论温州市5岁以下婴幼儿存在阪崎肠杆菌感染,应加强奶粉和腹泻婴幼儿的监测力度,预防和控制阪崎肠杆菌污染引起的婴幼儿腹泻。     

食品及环境分离的阪崎肠杆菌药敏分析

目的了解分离自配方奶粉和婴幼儿食品及奶粉生产环境的阪崎肠杆菌的药物敏感性和耐药性。方法采用纸片扩散法对19株分离自配方奶粉和婴幼儿食品及奶粉生产环境的阪崎肠杆菌进行11大类29种抗生素的药敏实验。结果 19株阪崎肠杆菌对青霉素G、苯唑西林、万古霉素等3种抗生素耐药,对临床常用针对肠杆菌科的抗生素敏感。结论临床中应加强该菌的监测,同时加强对预防用药和临床用药的重视,以减少阪崎肠杆菌多重耐药性的产生。     

阪崎肠杆菌生长特性及耐热耐酸碱性分析

目的 研究不同阪崎肠杆菌菌株的生长特性和耐热耐酸碱性.方法 采用光谱扫描仪培养22株阪崎肠杆菌,由扫描仪实时监测不同阪崎肠杆菌菌株生长特性;采用显色平板涂布方法观察高温和酸碱条件下阪崎肠杆菌存活情况.结果 传统平板计数法和微孔板光谱扫描仪建立的阪崎肠杆菌生长曲线具有良好相关性(R2=0.92);22株阪崎肠杆菌经75℃处理2 min后,尚有1株存活;经碱处理后(pH 12.55)立检测,所有菌株均已死亡;用酸处理1min后(pH 1.18)检测,尚有2株存活.结论 采用光谱扫描仪方法测定阪崎肠杆菌生长曲线方便快捷,不需要培养计数;不同的阪崎肠杆菌菌株具有不同的耐热、耐酸特性.     

1O类食品污染阪崎肠杆菌状况的调查研究

目的了解10类食品中阪崎肠杆菌的污染状况及污染数量,评估其风险性,为预防和控制阪崎肠杆菌的感染、传播、流行提供科学依据。方法按照GB4789．1—2010采抽样技术、GB4789．40—2010（食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》、实时荧光PCR法操作规程,对10类850份食品进行阪崎肠杆菌检验,标准菌株作对照。结果检出阪崎肠杆菌54株,总检出率为6．4％。该10类食品阪崎肠杆菌的检出率差异有统计学意义,由高至低排序为：冰淇淋〉巧克力坚果〉熟肉〉糖饼类〉面包糕点〉方便面〉奶类〉饮用水、生肉、调味品。染菌量〉30MPN／100g（ml）以上的有15份,占27．7％（15／54）。结论10类食品检出阪崎肠杆菌的有7类,应予必重视。     

阪崎肠杆菌的特征及分类研究进展

阪崎肠杆菌具有产生黄色素、α-葡萄糖苷酶阳性、吐温80酯酶阳性等特征,说明其具有分类学特异性。随着分子生物技术的应用,阪崎肠杆菌分类地位由早期的黄色阴沟肠杆菌演变为独立的阪崎肠杆菌种,而近期Iversen C等学者又提议建立一个新属阪崎肠杆菌。