趋化因子受体5及其配体促进乳腺癌细胞的趋化和侵袭的研究

目的探讨趋化因子受体5（CCR5）及其配体（RANTES）对乳腺癌细胞趋化活性和侵袭活性的促进作用。方法用反转录聚合酶链反应、免疫组织化学法测定乳腺癌细胞株MCF-7的CCR5mRNA及蛋白水平,RANTES的作用下,以无血清RPMI1640培养液作为阴性对照组,含乳腺癌细胞的无血清RPMI1640培养液为对照组,加有CCRSmAb的乳腺癌细胞无血清RPMI1640为实验组,通过趋化小室法检测MCF-7细胞的趋化活性和侵袭活性,并与CCR5的封闭进行对照研究。结果迁移至多聚碳酸酯膜背面的乳腺癌细胞数明显多于相应的阴性对照组,实验组和对照组迁移至多聚碳酸酯膜背面的细胞分别为（73．0±9．8）、（7．6±1．5）个／HP,差异有统计学意义（t=11．85,P〈0．01）;穿透Matrigel基质胶到达多聚碳酸酯膜背面的乳腺癌细胞数明显多于相应的阴性对照组,实验组和对照组迁移至多聚碳酸酯膜背面的细胞分别为（19．7±4．0）、（2．3±-0．6）个／HP,差异有统计学意义（t=7．37,P〈0．01）。乳腺癌细胞株MCF-7有CCR5mRNA及蛋白质的表达,其配体RANTES对MCF-7细胞有明显的趋化活性和侵袭活性,CCR5的封闭也能抑制MCF-7细胞的这种趋化活性和侵袭活性。结论乳腺癌细胞株MCF-7有CCR5的表达,且其表达能够促进MCF-7细胞的趋化和侵袭。     

应用 RNA 干扰技术下调 ANXA3表达的 MDA-MB-231乳腺癌细胞株的建立

目的：建立针对膜联蛋白A3（Annexin A3, ANXA3）的shRNA稳定转染的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,为后续进一步研究奠定基础。方法荧光定量RT-PCR及western blot方法检测两种乳腺癌细胞株（ MDA-MB-231及MCF-7）中ANXA3 mRNA及蛋白表达水平。构建沉默ANXA3基因的shRNA质粒3个（ ANXA3-sh1-3）及阴性对照质粒,脂质体法转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231;选出ANXA3沉默效果最好的干扰质粒做后续实验。嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞;Western blot 方法检测转染后细胞中ANXA3蛋白表达水平。结果 MDA-MB-231细胞中 ANXA3 mRNA及蛋白表达水平显著高于MCF-7中的表达（ P ＜0 k．05）;成功构建3个针对ANXA3基因的shRNA质粒;转染ANXA3-sh1～3及阴性对照质粒后MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平分别为（0．0196±0．0002）、（0．0085±0．0002）、（0．0220±0．0035）、（0．0661±0．0057）,未转染的MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0692±0．0050）,脂质体组MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA表达水平为（0．0652±0．0118）,ANXA3-sh2对MDA-MB-231细胞中ANXA3 mRNA沉默效率最高,达87．72％,因此后续实验选择ANXA3-sh2;嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞分别命名为MDA-MB-231-Sh及MDA-MB-231-NC细胞。 Western blot检测结果显示,MDA-MB-231-Sh细胞中ANXA3蛋白显著低于MDA-MB-231及MDA-MB-231-NC细胞中的表达（ P ＜0．01）。结论 MDA-MB-231细胞较MCF-7细胞高表达ANXA3,成功的建立了稳定下调ANXA3表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,为后续进一步研究ANXA3的表达及特性打下基础。     

槐耳颗粒逆转人乳腺癌细胞MCF-7耐药的初步机制

目的研究槐耳颗粒逆转乳腺癌细胞株MCF-7耐药的初步机制。方法使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定敏感／耐药乳腺癌细胞MCF-7-S／A对单药阿霉素（ADM）和槐耳颗粒的药物毒性,耐药倍数和槐耳颗粒对MCF-7／A的耐药逆转倍数,分别采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和免疫组化SP法测定多药耐药基因mdr1、多药耐药相关蛋白基因MRP的mRNA和其相应的表达产物P-gp、MRP蛋白,在MCF-7／S及非细胞毒性剂量的槐耳颗粒处理前后MCF-7／A上的表达。结果非细胞毒性剂量（0．01mg／ml）的槐耳颗粒能显著降低ADM对MCF-7／A的IC50（5．06μm）,与逆转前MCF-7／A的IC50（25．8μm）,相比差异有统计学意义（P〈0．01）,其逆转倍数为5．1倍;0．01mg／ml的槐耳颗粒使MCF-7／A细胞的耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平均下调,与未加槐耳颗粒处理的对照组MCF-7／A相比有显著性差异（P〈0．01）。结论非细胞毒性剂量槐耳颗粒具有逆转MCF-7／A细胞耐药性的作用,逆转机制和其耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平下调相关,暗示槐耳颗粒是一种有潜力的耐药逆转剂。     

支气管哮喘患者外周血单个核细胞Toll样受体2基因表达与血清白细胞介素4和白细胞介素12的相关性分析

目的：观察支气管哮喘（简称哮喘）控制期、未控制期患者及正常对照人群中外周血单个核细胞Toll样受体2（TLR2）mRNA表达及血清白细胞介素4（IL-4）、IL-12水平,并探讨上述指标间有无相关性。方法根据全球哮喘防治创议（GINA）2006哮喘控制水平分级标准,选取门诊急诊哮喘控制期及未控制期患者各20例,选取体检健康者20名作为正常对照组。采用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）法检测各组对象外周血单个核细胞TLR2 mRNA表达。用酶联免疫吸附测定（ ELISA）双抗体夹心法检测各组对象血清IL-4、IL-12水平。结果哮喘患者外周血单个核细胞 TLR2 mRNA 的表达水平高于正常对照组[（0．963±0．132）比（0．632±0．172）],差异有统计学意义（P＜0．01）。哮喘控制期与未控制期患者外周血单个核细胞TLR2 mRNA的表达水平差异无统计学意义[（0．936±0．117）比（0．991±0．147）]（ P＞0．05）。哮喘患者外周血IL-4水平高于正常对照组[（34．0±8．2）ng/L比（9．8±2．7）ng/L],差异有统计学意义（t＝13．87,P＜0．01）,未控制组患者外周血IL-4水平高于哮喘控制组[（42．5±5．4）ng/L比（29．4±4．2）ng/L]（t ＝8．53,P＜0．01）。哮喘患者外周血 IL-12水平低于正常对照组[（29．4±3．9）ng/L 比（55．8±6．1）ng/L]（t＝20．54,P＜0．01）,哮喘控制组与未控制组患者外周血IL-12水平差异无统计学意义[（28．7±4．5）ng/L比（30．1±3．0）ng/L]（t＝-1．16,P＞0．05）。哮喘患者外周血单个核细胞TLR2 mRNA表达与外周血IL-4水平呈正相关（r＝0．532,P＜0．01）,与外周血IL-12无明显相关（r＝-0．05,P＞0．05）。结论哮喘患者外周血单核细胞TLR2 mRNA的表达水平高于正常对照,外周血IL-4水平高于正常对照,未控制期外周血IL-4水平高于控制期,外周血IL-12水平低于正常对照。哮喘患者外周?     

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对乳腺癌细胞转移能力的影响

目的探讨TROP-2基因小干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA—MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者。采用TROP-2基因小干扰RNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝（MTT）比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力。结果7株乳腺癌细胞中,TROP-2均有不同程度的表达,以MCF-7细胞最高;以TROP-2siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附试验结果显示,5、10、20nMsiRNA组黏附率分别为（52．9±2．5）％、（25．6±2．3）％、（12．8±2．2）％（P〈0．01）;Transwell试验结果显示,5、10和20nMsiRNA组穿过滤膜的细胞分别为（78±17）、（39±15）、（19±16）,而对照组分别为（136±25）、（139±21）（P〈0．01）。结论TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力。     

RNA干扰对乳腺癌细胞骨桥蛋白基因表达抑制的研究

目的应用RNA干扰术靶向降低乳腺癌MCF-7细胞中骨桥蛋白基因（OPN）的表达水平,研究OPN基因对乳腺癌细胞增殖和侵袭性等生物学行为的影响。方法将设计合成的骨桥蛋白OPN序列特异性小分子干扰RNA（siRNA）,转染乳腺癌细胞株MCF-7,用逆转录PCR和蛋白印记杂交测OPN mRNA及蛋白水平的表达,通过生长曲线、克隆形成实验来检测细胞增殖及侵袭性情况的变化。结果OPN特异性siRNA转染后,骨桥蛋白mRNA及蛋白水平均明显下降,比色法显示转染组72h吸光度值为（0．21±0．06）与空白对照组（1．18土0．05）相比较明显受到抑制。转染组细胞克隆形成数为3．8个,较空白对照组（7．3个）及阴性对照组（7．1个）明显下降（P〈0．05）。结论乳腺癌MCF-7细胞中,针对OPN合成的siRNA能够有效地抑制骨桥蛋白的表达,从而显著抑制细胞的增殖和侵袭能力。     

茯苓多糖对高糖诱导乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及JAK1/STAT3通路影响

摘要：目的:探讨茯苓多糖对高糖诱导下乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及Janus激酶1/信号转导和转录激活因子3（JAK1/STAT3）通路的影响。方法:0,10,20,30,40,50,60 mmol·L-1的葡萄糖分别作用MCF-7细胞48h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各浓度葡萄糖对MCF-7细胞增殖的影响,筛选最佳的葡萄糖浓度。将MCF-7细胞随机分为5组:空白对照组（常规培养）、高糖作用组(40 mmol·L-1的葡萄糖作用48 h)、不同浓度茯苓多糖作用组(40 mmol·L-1的葡萄糖及60,120,240μg·ml-1茯苓多糖作用48 h),MTT法检测MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡率,RT-PCR检测各组MCF-7细胞JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5 mRNA表达,Western blot检测磷酸化酪氨酸蛋白激酶1（pJAK1）和磷酸化信号转导与转录激活因子3（p-STAT3）蛋白表达。结果:各浓度葡萄糖均可促进MCF-7细胞增殖,一定浓度范围内呈现一定的剂量依赖效应,40 mmol·L-1的葡萄糖作用MCF-7细胞48h后,细胞增殖率显著增加,因此选择40 mmol·L-1的葡萄糖作用MCF-7细胞48 h作为诱导MCF-7细胞的最佳条件。与空白对照组相比,高糖作用组MCF-7细胞增殖抑制率显著降低（P<0.05）,JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3 mRNA表达、p-JAK1和p-STAT3蛋白表达均显著增加（P<0.05）。与高糖作用组相比,60、120、240μg·ml-1茯苓多糖作用组MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.05）,JAK1和STAT3 mRNA、p-JAK1和p-STAT3蛋白表达显著降低（P<0.05）,且呈现一定的剂量依赖效应,其中240μg·ml-1的茯苓多糖作用效果较好。结论:茯苓多糖可能通过JAK1/STAT3途径抑制高糖诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖并促进其凋亡。     

miR-130a-3p下调CYLD表达对乳腺癌MCF-7细胞功能的影响

目的：探讨miR-130a-3p对人乳腺癌MCF-7细胞功能的影响及其可能的靶向基因。方法：应用脂质体介导方法将miR-130a-3p模拟物（实验组）或对照模拟物（对照组）转染MCF-7细胞,分别采用MTT方法和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力变化,印迹法检测细胞中miR-130a-3p靶基因圆柱瘤基因（CYLD）的表达。结果：与对照组比较,实验组MCF-7细胞的增殖和迁移能力增强（P＜0.05）,细胞中CYLD蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）。结论：miR-130a-3p可能通过靶向调节CYLD蛋白表达增强人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及血管生成相关基因表达的影响

目的研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,并研究对血管生成相关基因mRNA表达的影响,探讨姜黄素抑癌可能的分子机理。方法体外培养人MCF-7细胞,细胞分为姜黄素高、中、低剂量组、空白对照组、溶剂对照组。采用MTT法检测姜黄素对人MCF7细胞增殖的抑制作用;应用RT-PCR检测各组细胞血管生成相关基因ANGPTL3、VEGF mRNA的表达。结果①姜黄素对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用。②经姜黄素处理后MCF-7细胞的ANGPTL3、VEGF的mRNA表达水平下调。结论①姜黄素在体外对MCF7细胞生长具有抑制作用。②姜黄素能显著下调MCF-7细胞血管生成相关基因ANGPTL3、VEGF mRNA的表达。③姜黄素对人MCF-7细胞增殖的抑制效应可能与ANGPTL3、VEGF下调有关。     

透骨草提取物通过Bcl-2和Bax蛋白诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡

目的探讨Bax和Bcl-2蛋白在透骨草提取物诱导人乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡过程中的作用,为透骨草提取物治疗乳腺癌提供实验依据。方法采用吖啶橙染色方法透骨草提取物对MCF-7细胞形态的影响;采用流式细胞术检测透骨草提取物对MCF-7细胞凋亡率的影响;采用蛋白印迹法检测MCF-7细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 30.5μg/ml透骨草提取物可诱导MCF-7细胞胞体皱缩,胞核固缩、呈新月状且边集,出现凋亡小体。30.5μg/ml透骨草提取物处理的MCF-7细胞凋亡率（22.3±1.2）%明显高于对照组（3.2±1.0）%（P〈0.05）。30.5μg/ml透骨草提取物可使MCF-7细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组（P〈0.05）,而Bax蛋白表达明显高于对照组（P〈0.05）。结论透骨草提取物对MCF-7细胞有诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

瘦素对HepG2细胞端粒酶及端粒酶反转录酶的调控作用研究

目的 探讨瘦素(leptin)对人肝癌细胞株HepG2的增殖机制及对端粒酶(telomerase,TA)与端粒酶反转录酶(hTERT)活性表达的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度leptin作用不同时间对HepG2细胞的增殖影响;流式细胞仪分析其细胞周期;TRAP-PCR银染法检测不同浓度leptin作用HepG2细胞后端粒酶的活性;实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹(Western-blot)分析leptin作用24 h后hTERT mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 leptin可以促进HepG2细胞增殖,具有浓度-时间依赖性;流式细胞仪结果显示leptin可以改变HepG2的细胞周期,使S期比例升高;leptin可以活化HepG2细胞端粒酶,上调HepG2 hTERT mRNA及蛋白水平的表达.结论 leptin可能通过上调HepG2 hTERT表达,增强端粒酶活性,改变肝癌细胞株HepG2的生物学行为.     

以角质形成细胞异常增生为特点的皮肤病hTR、hTERT mRNA表达

目的：探讨端粒酶RNA（hTR）／和端粒酶反转录酶（hTERT）在几种以角质形成细胞异常增生为特点的皮肤病中的表达及其与角质形成细胞增殖的关系。方法：应用原位杂交方法检测银屑病、基底细胞癌（BCC）、鳞癌（SCC）、脂溢性角化（SK）组织标本中hTR、hTERT mRNA的表达。应用免疫组织化学方法检测Ki-67抗原的表达，并对hTR、hTERT mRNA的表达与Ki-67抗原的表达行相关性分析。结果：hTR表达在基底细胞、棘细胞、颗粒层细胞层和所有有核细胞的胞浆。与细胞的增殖情况无关；其阳性细胞百分率在各组差异无统计学意义（P〉0．05）。而hTERT主要表达在癌巢和生长活跃的组织和细胞。与细胞的增殖状态有关。阳性细胞百分率高于正常皮肤（P〈0．05）。Ki-67抗原主要表达在细胞生发层和分裂旺盛的组织；其表达与hTERT的表达呈正相关（r=0．674。P〈0．01）：而与hTR（r=0．295，P〉0．05）无关。结论：hTERT mRNA与细胞增殖活性有关，在银屑病、基底细胞癌、鳞癌、脂溢性角化中的表达明显升高．可作为细胞增殖活性的分子生物学标志。     

可卡因对性成熟期大鼠睾丸谷胱甘肽过氧化物酶基因表达的影响

目的：研究可卡因对大鼠睾丸谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase GSH-PX）基因表达的影响。方法：性成熟期健康SD雄性大鼠皮下注射可卡因制造吸毒动物模型。化学比色法检测睾丸氧化应激指标;半定量RT-PCR方法检测睾丸组织的GSH-PXmRNA表达。结果：可卡因处理第7天,实验组GSH-PX活性、MDA含量与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;而GSH-PXmRNA水平显著高于对照组（P〈0．05）。可卡因处理第14天,实验组GSH-PX活性显著低于对照组（P〈0．05）,MDA含量显著高于对照组（P〈0．05）,而GSH-PXmRNA水平显著高于对照组（P〈0．05）。可卡因处理第21天,实验组GSH-PX活性及mRNA表达水平显著低于对照组（P〈0．05）,MDA含量显著高于对照组（P〈0．05）。可卡因处理第28天,实验组GSH-PX活性及mRNA表达水平显著低于对照组（P〈0．05）,MDA含量显著高于对照组（P〈0．05）。     

miR-34a靶向调控Akt/Bcl-2对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响

目的：探讨miR-34a通过下调AKT/BCL2信号通路对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其分子机制?方法：通过实时定量PCR法检测miR-34a-3p在乳腺癌细胞（MCF-7）和乳腺耐药细胞株（MCF-7/ADR）中的表达,并成功构建miR-34a mimics/inhibitor调控其表达水平;通过CCK8法分别筛选多柔比星处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞的IC50值并处理细胞;使用CCK8,流式细胞技术以及免疫印迹实验验证在miR-34a过表达及干扰组中,乳腺癌细胞存活率,凋亡细胞百分比以及AKT/BCL2信号通路的改变。结果：miR-34a在MCF-7/ADR中的表达显著低MCF-7细胞,同时成功构建miR-34a过表达及敲减模型;多柔比星处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞的IC50分别为0.89 μg/mL、13.61 μg/mL。当MCF-7及MCF-7/ADR细胞中miR-34a表达水平降低时,经多柔比星处理后,细胞存活率显著升高（P<0.05）,凋亡细胞比例显著减少（P<0.01）,同时下游AKT/BCL2信号表达上调（P<0.01）。而当MCF-7/ADR细胞中miR-34a表达升高时相应的观察到相反的细胞表型。结论：miR-34a在乳腺癌细胞中的表达下调,可能通过减少对AKT/BCL2信号的负向调控,减少细胞凋亡,进而增强细胞对多柔比星的耐药性。     

糖尿病母亲和新生儿血清瘦素水平及胎盘瘦素表达的研究

目的：比较正常和糖尿病母儿血瘦素水平及胎盘瘦素的表达。方法：采用放射免疫法测定21例糖尿病母儿和32例正常母儿血瘦素及胰岛素水平,应用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）技术检测胎盘瘦素mRNA表达。结果：糖尿病组母亲血清瘦素和胰岛素水平与正常对照组。糖尿病母亲胎盘瘦素mRNA表达显著高于正常对照组（P＜0．001）。结论：糖尿病母亲所生新生儿有较高的脐血瘦素水平,且糖尿病母亲胎盘瘦素表达水平高于正常对照,提示糖尿病母胎胎盘瘦素表达上调可能与巨大儿有关。     

早期应用精制去纤酶治疗脑梗死38例

报告两组脑梗死患者（38例和34例）分别于发病早期应用精制去纤酶与仅用常规治疗进行疗效对比观察。结果：治疗组显效率79．0％，对照组显效率53．0％，X2＝4．35，P＜0．05，二者差异显著；治疗组治疗前后纤维蛋白原比较，t＝6．34，P＜0．01，差异极显著，表明精制去纤酶疗效肯定，副作用少，值得临床推广应用。     

组织蛋白酶V对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨组织蛋白酶V(CTSV)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。方法以人乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,分为正常对照组和SAHA(0.5、1、2、5、10、20和50μmol/L)组。MUSE自动细胞分析仪检测辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对MCF-7细胞活力的影响,实时荧光定量PCR技术检测MCF-7细胞中微管相关蛋白1轻链3 A(LC3A)和CTSV mRNA表达变化的情况,Western blot检测CTSV蛋白的表达水平。结果 MUSE自动细胞分析仪结果显示,与正常对照组比较,经过SAHA处理后MCF-7细胞活力明显下降(P0.01)。实时荧光定量PCR结果表明,LC3A和CTSV mRNA水平在SAHA的作用下增加(P0.01)。Western blot结果发现,SAHA可以促进CTSV蛋白表达增加(P0.05)。结论 CTSV在SAHA诱导的乳腺癌细胞增殖抑制过程中起到重要的调控作用。     

shRNA沉默eIF4E基因表达对人喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的构建靶向真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的shRNA表达载体，观察eIF4E表达抑制对喉癌细胞生物学行为的影响。方法根据人eIF4EmRNA序列设计并构建2个靶向人eIF4E基因的shRNA真核表达载体（pSilencer 4．1-sl和pSileneer4．1-s2）；然后以脂质体转染的方法将shRNA表达质粒转染至人喉癌细胞系Hep-2，经G418筛选出稳定转染的阳性细胞；分别通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blotting技术对构建成功的2个shRNA干扰质粒进行有效性筛选，分析其eIF4E mRNA及蛋白表达水平，并筛选出表达抑制最强的稳定转染喉癌细胞系（Hep-2-s2）。通过噻唑蓝（MTT）试验检测Hep-2-s2细胞的体外增殖活性，流式细胞仪技术（FCM）检测其细胞周期和凋亡变化情况。结果经双酶切证实转录shRNA的目的基因片段已成功克隆入pSileneer4.1-CMVneo真核表达载体中，经测序证明插入序列完全正确；eIF4E—shRNA2可以显著下调eIF4EmRNA及蛋白表达水平；eIF4E基因的表达下调明显抑制Hep-2细胞的体外增殖（P〈0．05）；Hep-2-s2细胞的G0／G1期细胞比例显著增加了（14．7±1、1）％，而S期细胞比例减少了（13.2±1．6）％（P〈0．05）；Hep-2-s2的细胞凋亡率显著增加到（18．3±1．7）％（P〈0．051。结论shRNA介导的eIF4E基因表达下调可显著降低喉癌细胞的增殖活性，同时诱导其细胞周期阻滞和凋亡率增加．为喉癌基因治疗筛选出了新的靶点。     

柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2mRNA及蛋白表达水平的影响

目的：研究中药柚皮苷对人卵巢癌SK—OV3细胞环氧化酶2（CoX-2）tuRNA及蛋白表达水平的影响。方法：常规培养人卵巢癌sK—OV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷10umol／L组、柚皮苷20tzmol／L组、柚皮苷40umol／L组、阳性对照组（塞来昔布80tLmol／L）。MTT法测定柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响,运用Real—timePCR和WesternBlot法测定培养48h后各组细胞中COX_2mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：MTT检测法显示,柚皮苷各浓度处理组,时间依赖性和剂量依赖性地抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长。经药物处理48h后,Real-timePCR结果显示,与空白对照组（1．094±0．053）比较,10、20umol／L柚皮苷即对SK—OV3细胞COX_2mRNA表达抑制作用（O．828±0．006,0．753±0．011,P〈0．05）,而40gmol／L柚皮苷则明显下调COX-2mRNA的表达（0．412±0．216,P〈0．01）,与塞来昔布组（0．321±0．017）的抑制程度相近。WesternBlot法检测结果显示,与空白对照组（1．7325±0．0826）相比,10umol／L柚皮苷组相对表达量（1．7925±0．0880）虽略有上调,但无统计学差异,20、40／umol／L柚皮苷组均可明显下调SKOV3细胞COX-2蛋白的表达（1．2225±0．0822,1．2725±0．0763,P〈0．05）,塞来昔布组也明显抑制CoX-2蛋白的表达。结论：柚皮苷可抑制人卵巢癌SKOV3细胞体外增殖并抑制COX-2mRNA和蛋白的表达。     

尼美舒利对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药逆转作用

目的：研究尼美舒利对人乳腺癌敏感细胞株MCF-7／S及多药耐药细胞株MCF-7／ADM的影响，初步探讨其逆转人乳腺癌耐药的机制。方法：用MTT比色法测定细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞内Rh123浓度和P-170、GST-π表达水平变化。结果：尼关舒利对MCS-7／S和MCF-7／ADM细胞的生长抑制呈明显时间剂量依赖关系。但尼关舒利对MCF-7／ADM细胞效应强度明显弱于MCF-7／S细胞。尼美舒利能提高MCF-7／ADM细胞内Rh123荧光强度，下调P-170和GST-π的水平（P〈0．05）。结论：尼美舒利对人乳腺癌MCF-7／ADM的耐药有一定逆转作用，作用机制可能与P-170和GST-π的水平下调有关。