局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑NG2和O4表达变化

目的:探讨脑缺血再灌注大鼠早期大脑少突胶质祖细胞及未成熟少突胶质细胞变化及意义。方法:以线栓法制作SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(阻塞90min再灌注1d、3d和7d);用免疫荧光组织化学法检测脑缺血再灌注后早期大鼠大脑梗死中心区、梗塞周边区和缺血对侧NG2和O4阳性细胞数量。结果:脑缺血再灌注后各时间点梗死中心区NG2和O4阳性细胞数明显减少;梗塞周边区NG2和O4阳性细胞数随着再灌注时间延长而逐渐增加,再灌注3d和7d增加显著;脑梗死对侧区NG2和O4阳性细胞数无明显变化。结论:成年SD大鼠脑缺血再灌注后梗塞周边区少突胶质祖细胞及未成熟少突胶质细胞增多,可能参与缺血损伤的修复过程。     

氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马髓鞘及少突胶质细胞系变化初步研究

目的 研究氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠不同时期海马髓鞘损伤及少突胶质细胞系变化.方法 健康成年雄性SD大鼠建立氯化锂-毛果芸香碱慢性癫(痫)模型,分为对照组、急性期组(致(痫)后24 h内)、潜伏期组(致(痫)后2周内)、慢性期组(致(痫)后2个月),各组(均n=4).采用伊文思蓝法检测各组大鼠海马血脑屏障(BBB)通透性改变;免疫荧光染色法检测海马神经元数目、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平、2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)阳性成熟少突胶质细胞数目、未成熟少突胶质细胞标记物(04)表达水平、硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)阳性少突胶质祖细胞数目.结果 大鼠致(痫)后,急性期组、潜伏期组和慢性期组大鼠海马各区域BBB通透性均较对照组增加(P＜0.05),以急性期组增加最为显著.各组大鼠海马不同区域NeuN阳性神经元数目均较对照组显著下降(P＜0.05).潜伏期组和慢性期组海马各区域MBP表达水平及CNPase阳性细胞数目均显著低于对照组(P＜0.05);各组海马CA1、Hilus区O4表达水平及NG2阳性细胞数目均较对照组显著增加(P＜0.05),以潜伏期组增加最为明显.结论 氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马区BBB通透性增加,未成熟少突胶质细胞和少突胶质祖细胞免疫荧光表达上调,髓鞘及成熟少突胶质细胞存在一定程度损伤.     

局灶脑缺血再灌注后成年大鼠大脑MyT1表达变化

目的 探讨脑缺血再灌注后成年大鼠大脑MyT1表达变化及其意义.方法 以线栓法制作成年SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(阻塞90min再灌注1,7,14d);用免疫荧光组织化学法检测脑缺血再灌注成年大鼠早期大脑梗死中心区、梗死周边区和缺血对侧区MyT1阳性细胞数量.结果 (1)脑缺血再灌注后各时间点梗死中心区MyT1阳性细胞数明显减少;(2)脑缺血再灌注后梗死周边区MyT1阳性细胞数从脑缺血后第1天开始增加;脑缺血后7d和14d时,各组大鼠MyT1阳性细胞增加数较之对照组大鼠有显著的差别.结论 成年SD大鼠脑缺血再灌注后梗死周边区MyT1表达显著增加,可能参与了少突胶质前体细胞的发育过程,调节髓鞘蛋白基因的转录,参与缺血性脑损伤的修复过程.     

Semaphorin-3A与苔藓纤维出芽在毛果芸香碱致痫大鼠中的改变及意义

目的探讨海马Semaphorin-3A(Sema3A)与苔藓纤维出芽(MFS)在癫痫发病机制中的作用。方法通过小剂量多次腹腔注射氯化锂-毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型,随机将大鼠分为生理盐水对照组和痫性发作组。痫性发作组分别于药物注射后1、5、7d及3、4周时间点,应用Western blotting法检测大鼠海马Sema3A的表达,同时采用neo-Timm银染观察海马MFS情况。结果生理盐水对照组Sema3A仅有少量表达,痫性发作组1、5d无表达,7d表达明显,3周后亦无表达;痫性发作组1、5d未见MFS,7d可见MFS至齿状回内分子层,3周后明显可见MFS至齿状回分子层。痫性发作组Timm评分与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马区Sema3A表达变化伴有MFS可能是癫痫发病机制的重要因素之一。     

锂-匹罗卡品致痫大鼠海马胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的观察其海马经HE染色后组织病理学、胶质纤维酸性蛋白免疫反应阳性表达细胞在LPS中各观察时间点海马CA1、CA3、齿状回的表达,探讨其致机制。方法锂-匹罗卡品急性诱导SD癫痫持续状态模型鼠形成后,采用免疫组化和图像分析方法观察海马HE染色组织病理学、胶质纤维酸性蛋白免疫反应阳性表达细胞。结果模型组各时间点海马细胞形态出现病理性改变,部分细胞脱失,胞浆浓缩,胞核固缩深染;胶质纤维酸性蛋白免疫反应阳性表达细胞亦显著上调（P〈0.05）。结论Pilo诱导SD大鼠癫痫发作后存在显著的海马神经元结构和胶质细胞的损伤,以胶质细胞损伤更显著,胶质纤维酸性蛋白持续高表达可能是这种功能异常的胶质细胞增生的重要原因,也可能是锂-匹罗卡品致癫痫发作的重要因素之一。     

NG2在中枢神经系统中的作用及损伤后的反应

成年哺乳动物的中枢神经系统胶质细胞组成是复杂的，除了星形胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞外，还包括第四型的胶质细胞，后者曾被称为B星形胶质细胞、多能干细胞、突触细胞，最常用的名称是少突胶质前体细胞OPC。这种特殊细胞型号能够在脑片中应用几种标记物进行标记，包括硫酸软骨素糖蛋白NG2、血小板原性生长因子PDGF-α受体。本文主要综述了NG2在中枢神经系统中的作用以及在损伤后的反应和修复功能。     

重复经颅磁刺激预处理对毛果芸香碱致痫作用及海马GAD65表达的影响

目的：观察0．5Hz经颅磁刺激预处理对毛果芸香碱致大鼠癫痫作用的影响及可能机制。方法：将大鼠随机分为0．5Hz重复颅磁刺激（rTMS）组和对照组,分别进行连续2周的相应预处理后腹腔注射毛果芸香碱,观察注药后90min内痫性发作潜伏期和痫性发作行为表现。应用免疫组化学方法观察两组大鼠海马区谷氨酸脱羧酶65（GAD65）的表达。结果：①与对照组相比,rTMS组癫痫发作潜伏期明显延长,发作程度显著减轻（均P〈0．05）;②与对照组相比,rTMS组大鼠海马区表达GAD65神经元的数量明显增多（P〈0．05）。结论：0．5HzrTMS预处理有明显抗癫痫作用,而海马区GAD65阳性表达神经元的增加可能是其抗瘸机制之一。     

腺苷A2A受体拮抗剂对大鼠氯化锂-毛果芸香碱所致癫痫模型的影响

目的研究腺苷A2A受体阻断剂对大鼠氯化锂-毛果芸香碱癫痫持续状态(SE)模型的影响。方法选取50只WD大鼠随机分为对照组、模型组及A2A受体阻断剂组。模型组采用氯化锂-毛果芸香碱腹腔注射复制癫痫模型,A2 A受体阻断剂组在氯化锂-毛果芸香碱注射前15 min予腹腔给药(SCH58261 0.05 mg/kg),对照组给予同等剂量生理盐水。在成功诱导癫痫发作40 min后予地西泮及水合氯醛终止发作,并于发作终止后24 h留取标本。尼氏染色法检测三组中海马神经元损伤情况,Westernblot法检测MAPKs(JNK/p-JNK、P38/p-P38和ERK/p-ERK)表达变化。结果对照组、模型组及A2A受体阻断剂组双侧海马CA3区正常形态神经元计数分别为158.6±8.4、59.8±7.4和123.4±5.0,模型组神经元计数显著低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05),A2A受体阻断剂组神经元计数显著高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。Westernblot法检测显示p-JNK、p-P38和p-ERK在模型组中表达明显增多,在A2A受体阻断剂组中p-JNK和p-P38表达减少。结论氯化锂-毛果芸香碱模型中,腺苷A2A受体阻断剂可能通过抑制p-JNK他p-P38的表达对神经元损伤起到保护作用。     

低频重复经颅磁刺激预处理对毛果芸香碱致痫大鼠海马GAD65、NMDAR1表达的影响

目的探讨低频重复经颅磁刺激(rTMS)对毛果芸香碱致痫作用的影响及其机制。方法将大鼠随机分为rTMS刺激组、假刺激组和对照组,分别进行连续2周的相应预处理后,制作氯化锂-毛果芸香碱急性癫痫(EP)模型,观察造模后90min内痫性发作潜伏期和痫性发作行为表现。应用免疫组化方法观察各组大鼠海马区谷氨酸脱羧酶65(GAD65)、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)的表达。结果rTMS刺激组大鼠痫性发作潜伏期较假刺激组和对照组延长,发作程度减轻(均P<0.05);rTMS刺激组大鼠海马区神经元GAD65的表达量明显高于对照组,NMDAR1表达量明显低于对照组(均P<0.05),但假刺激组与对照组二者表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论低频rTMS预处理有明显抗痫作用,可能通过调节海马区GAD65和NMDAR1表达而起作用。     

种植早期大鼠种植体周围骨组织CXCR4蛋白的表达及意义

背景：CXCR4与SDF-1构成SDF-1/CXCR4轴,在组织损伤及骨损伤修复过程中发挥重要作用。目的：观察分析种植早期大鼠种植体周围骨组织CXCR4蛋白表达及其意义。方法：Wistar大鼠20只,随机分为4组。将阳极氧化种植体植入除空白对照组外所有大鼠左侧胫骨。种植体植入6,12,24 h组分别于对应时间点处死大鼠,旋出种植体,截取种植体周围直径约2 cm骨组织,空白对照组截取胫骨近骺端直径约2 cm骨组织,制备蛋白样品。结果与结论：从大鼠体内取出的各组阳极氧化种植体表面均可见大量的纤维成分附着。种植体植入6,12,24 h组CXCR4/β-actin灰度比值均明显高于空白对照组(P < 0.01)。种植体植24 h内种植体周围骨组织CXCR4表达量明显上调,提示CXCR4阳性细胞参与种植早期骨组织的修复。     

锂-匹罗卡品致癫大鼠早期大脑皮质MyT1 mRNA表达变化

目的 探讨氟化锂-匹罗卡品致癫大鼠脑髓鞘转录因子1基因表达变化及其意义。方法 以氯化锂、匹罗卡品对雄性成年SD大鼠先后腹腔注射,制成癫痫持续状态动物模型;采用5′末端标记地高辛的寡核苷酸探针荧光原位核酸分子杂交检测癫性发作后早期大鼠大脑皮质MyT1 mRNA阳性细胞数量。结果 与对照组相比,癫痫后1d组大鼠脑皮质MyT1 mRNA阳性细胞数减少（P＜0.05）;其他各组大鼠脑皮质MyT1 mRNA阳性细胞数都有明显的增加,其中癫痫后7d和14d组MyT1mRNA阳性细胞数都有非常显著的增加（P＜0.05,P＜0.01）。结论 氯化锂-匹罗卡品致癫大鼠早期大脑MyT1 mRNA表达增加,并有时程性变化,提示与早期脑损伤修复有关。     

Roles of NG2‐glia in ischemic stroke

Recent studies have shown that a widely distributed class of glial cells, termed NG2‐glia, engages in rapid signaling with surrounding neurons through direct synaptic contacts in the developing and mature central nervous system (CNS). This unique glial cell group has a typical function of proliferating and differentiating into oligodendrocytes during early development of the brain, which is crucial to axon myelin formation. Therefore, NG2‐glia are also called oligodendrocyte precursor cells (OPCs). In vitro and in vivo studies reveal that NG2‐glia expressing receptors and ion channels demonstrate functional significance for rapid signaling with neuronal synapses and modulation of neuronal activities in both physiological and pathological conditions. Although it is well known that NG2‐glia play an important role in demyelinating diseases such as multiple sclerosis, little is known about how NG2‐glia or OPCs impact neurons and brain function following ischemic injury. This review summarizes recent progress on the roles of NG2‐glia in ischemic stroke and illustrates new approaches for targeting NG2‐glia in the brain to treat this disease.     

NBQX对大鼠全脑照射后早期脑MyT1阳性细胞的保护作用

目的 探讨大鼠全脑照射后早期大脑皮质少突胶质前体细胞的放射性反应及MK-801和NBQX对其保护作用。方法 以10Gy的剂量时SD大鼠单次全脑照射后即刻分别向其大脑皮质定向注射5mmol／L的MK-801和50mmol／L的NBQX各1μl，然后用免疫荧光组织化学法分别检测各时间点大脑皮质MyT1阳性细胞数量。结果 和假照射组相比，照射组大鼠照射后7d和14d时大脑皮质MyT1阳性细胞数显增加(P＜0．01)；MK-801组大鼠照射后各时间点大脑皮质MyT1阳性细胞数与照射组大鼠无明显差异(P＞0．05)；而NBQX组大鼠照射后1d、7d和14d时的MyT1阳性细胞数明显多于照射组大鼠(P＜0．05)。结论 大鼠全脑照射后早期大脑少突胶质前体细胞反应性增多，并有时程性变化；NBQX对早期的少突胶质前体细胞放射性损伤可能有一定的保护作用。     

戊四氮所致慢性癫癎大鼠海马神经元选择性凋亡的研究

目的 :探讨选择性凋亡在戊四氮所致慢性癫疒间形成中的作用。方法 :采用免疫组化及原位末端标记双标技术观察海马γ 氨基丁酸 (GABA)能神经元、谷氨酸 (Glu)能神经元各自凋亡情况。结果 :GABA能神经元凋亡数明显高于Glu能神经元凋亡数 ,两者比较有显著性差异。结论 :在癫形成期间脑内可能通过某种机制引发了细胞程序性死亡过程 ,选择性地引起GABA能神经元凋亡占优势 ,打破了兴奋与抑制性神经递质之间的平衡 ,从而促发癫     

托吡酯对戊四氮诱导的癫痫大鼠海马神经元bc1-2、bax基因表达的调控

目的探讨托吡酯对戊四氮癫癎模型大鼠大脑的神经保护作用及可能的机制.方法成年雄性Wistar大鼠54只,随机分为正常对照组(6只);戊四氮组(24只);托吡酯预处理组(24只).癫癎发作后分别于6、12、48 h后处死取脑,进行HE染色和bcl-2、bax免疫组化染色.结果癎性发作后海马HE染色显示;戊四氮组CA1、CA3和DC区神经元变性及坏死较托吡酯预处理组显著.免疫组化染色显示托吡酯预处理组bcl-2 12和48 h在CA1、CA3和DC的表达强于戊四氮组,而bax在上述时段的表达则较戊四氮组弱.结论托吡酯具有一定的神经保护作用,推测可能与其增强大鼠海马神经元bcl-2基因表达,降低bax基因表达有关.     

NG2细胞与中枢神经系统疾病(英文)

NG2细胞是新发现的一类广泛存在于成熟和发育期中枢神经系统的胶质细胞群体。这些细胞表面表达NG2硫酸软骨素蛋白多糖,因而常被称作NG2细胞。随着NG2细胞形态学研究的深入,NG2胶质细胞的功能也越来越受到关注。NG2细胞在人类多种中枢神经系统疾病中扮演重要角色。本文结合最新的研究报道,就其在一些常见的中枢神经系统疾病中的作用进行概括综述。     

Generation of reactive astrocytes from NG2 cells is regulated by sonic hedgehog

NG2 cells, a fourth glial cell type in the adult mammalian central nervous system, produce oligodendrocytes in the healthy nervous tissue, and display wide differentiation potential under pathological conditions, where they could give rise to reactive astrocytes. The factors that control the differentiation of NG2 cells after focal cerebral ischemia (FCI) are largely unknown. Here, we used transgenic Cspg4‐cre/Esr1/ROSA26Sortm14(CAG‐tdTomato) mice, in which tamoxifen administration triggers the expression of red fluorescent protein (tomato) specifically in NG2 cells and cells derived therefrom. Differentiation potential (in vitro and in vivo) of tomato‐positive NG2 cells from control or postischemic brains was determined using the immunohistochemistry, single cell RT‐qPCR and patch–clamp method. The ischemic injury was induced by middle cerebral artery occlusion, a model of FCI. Using genetic fate‐mapping method, we identified sonic hedgehog (Shh) as an important factor that influences differentiation of NG2 cells into astrocytes in vitro. We also manipulated Shh signaling in the adult mouse brain after FCI. Shh signaling activation significantly increased the number of astrocytes derived from NG2 cells in the glial scar around the ischemic lesion, while Shh signaling inhibition caused the opposite effect. Since Shh signaling modifications did not change the proliferation rate of NG2 cells, we can conclude that Shh has a direct influence on the differentiation of NG2 cells and therefore, on the formation and composition of a glial scar, which consequently affects the degree of the brain damage. GLIA 2016;64:1518–1531     

锂-匹罗卡品致癎幼鼠海马结构损伤的形态学及苔藓纤维发芽研究

目的 :观察幼鼠致后海马的组织病理学改变。方法 :采用氯化锂 匹罗卡品腹腔注射制成幼鼠癫持续状态模型 ,应用常规病理及电镜观察海马结构的形态学改变 ,同时应用Timm组织化学染色方法进行苔藓纤维发芽的研究。结果 :海马区神经元可见变性、坏死的改变 ,以CA1区、CA3区为重。Timm染色见齿状回内分子层和CA3区下锥体层苔藓纤维发芽增加。结论 :①氯化锂 匹罗卡品诱导的幼鼠癫持续状态可造成海马区神经元损伤 ;②幼鼠癫持续状态后海马CA1、CA3区神经元损伤较重 ;③幼鼠癫持续状态后可致苔藓纤维发芽增加。