BRD7、NGX6基因在急性白血病中的表达

 目的探讨急性白血病患者骨髓单个核细胞BRD7、NGX6基因的表达水平。方法采用RT-PCR对52例急性白血病(acute leukemia,AL)患者及30例正常骨髓对照进行NGX6、BRD7基因mR-NA水平的检测,对其中7例AL患者用免疫组化法检测BRD7蛋白表达水平。结果在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中BRD7、NGX6基因均存在明确表达。NGX6 mRNA的相对表达量在AL组与正常对照中差异无统计学意义(t=-1.014,P=0.982)。而BRD7 mRNA的表达水平AL组高于正常对照组,差异有统计学意义(t=3.672,P=0.001),但在AL各亚型之间BRD7 mRNA的表达差异无统计学意义(t=1.076,P=0.287),且BRD7 mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关。其中,对部分样品检测了BRD7蛋白的表达,结果发现AL患者BRD7阳性表达细胞百分率均值高于正常骨髓对照。结论AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞均表达BRD7和NGX6,且BRD7基因在急性白血病细胞中表达上调,但BRD7 mRNA表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。     

SEMA3B、SEMA3F基因在鼻咽癌细胞中突变和表达的研究

背景与目的：鼻咽癌（naopharyngeal carcinoma,NPC）致病的分子机理至今仍不清楚,但高频的杂合性缺失和功能学证据均表明染色体3p21.3区段中存在着与鼻咽癌相关的抑癌基因。SEMA3B和SEMA3F基因是定位于3p21.3的两个semaphorin家族成员,最近被鉴定为抑癌基因。本研究通过对SEMA3B和SEMA3F基因在鼻咽癌中的突变和表达检测,探讨SEMA3B和SEMA3F基因与鼻咽癌发病的关系。方法：采用PCR-直接测序方法,在21例散发性NPC组织和2例NPC细胞株（CNE2,SUNE1）中对SEMA3B和SEMA3F基因的编码区、拼接位点和部分调控区进行突变检测;利用半定量RT-PCR方法,检测SEMA3B和SEMA3F基因在鼻咽癌中的表达。结果：在鼻咽癌中示发现SEMA3B或SEMA3F基因具有体细胞突变,但在SEMA3B基因中发现两个导致氨基酸改变的单核苷酸多态性Thr415lle和Ile242Met。在Thr415Ile多态位点中,可导致SEMA3B基因功能缺陷的Ile等位基因频率在鼻咽癌患者中占有较高比例（64％,27/42）。SEMA3BmRNA在6例鼻咽非癌组织中正常表达,但在76％（16/21）的鼻咽癌组织中表达下调或缺失;SEMA3FmRNA的表达水平在鼻咽癌和非癌组织中无明显差异。结论：SEMA3BmRNA在鼻咽癌中发生高频表达缺失说明该基因失活与鼻咽癌密切相关,SEMA3B基因可能是定位于染色体3p21.3区域的与鼻咽癌发生相关的抑癌基因。     

鼻咽癌患者HER-2/neu基因扩增和表达及其临床意义

目的：研究鼻咽癌HER-2／neu基因扩增、表达及其临床意义。方法：采用原位荧光杂交、逆转录多聚链式反应和免疫组化技术检测鼻咽癌组织HER-2／neu基因扩增、表达。结果：HER-2／neu基因在鼻咽癌中无扩增，但有过表达，其原因是由于mRNA高表达所致；这种过表达与鼻咽癌预后之间未显示有相关性。结论：HER-2／neu基因在鼻咽癌无扩增，有过表达，这种过表达未显示预后意义。     

联合检测nm23—H1、E—cadherin基因蛋白在鼻咽癌中的表达

目的探讨nm23-H1基因和粘附分子E-cadherin在鼻咽癌中的表达情况及其与转移的关系.方法用免疫组化SP法检测nm23-H1和E-cadherin基因产物在42例鼻咽癌中的表达.结果42例鼻咽癌活检标本中,nm23-H1蛋白表达阳性率54.7%,E-cadherin表达阳性率57.1%,nm23-H1蛋白在有颈淋巴结转移患者中表达阳性率为40.7%,在无颈淋巴结转移患者中表达阳性率为80.0%,两者差异有显著意义(P<0.05).E-cadherin在颈淋巴结转移阳性患者中表达阳性率为44.4%,颈淋巴结转移阴性患者中表达阳性率为80.8%,两者差异有显著意义,(P<0.05).两种基因产物表达在鼻咽癌中呈正相关(P<0.01).结论nm23-H1和E-cadherin基因与鼻咽癌的转移密切相关,对临床判断鼻咽癌预后有一定指导意义.     

TNFAIP3基因在放射治疗鼻咽癌中的表达及意义

背景与目的：鼻咽癌多对放射治疗敏感,研究鼻咽癌放疗抗拒具有重要意义。本研究旨在探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factor alpha induced protein 3,TNFAIP3)在经放射治疗的鼻咽癌中的表达,分析其在放疗敏感及放疗抗拒的鼻咽癌中表达的差异,与放疗抗拒发生、发展的关系。方法：采用TNFAIP3多点标记的地高辛探针原位杂交方法检测TNFAIP3 mRNA在放疗敏感及放疗抗拒的鼻咽癌中的表达。结果：TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率在放疗敏感及放疗抗拒的鼻咽癌中的表达率分别为15.00%和45.00%,差异有统计学意义(χ2=5.274,P=0.0216)。在放疗抗拒的鼻咽癌中,TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率与TNM分期呈正相关,Ⅲ~Ⅳ期TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率为48.28%,I~Ⅱ期表达率为36.36%,差异有统计学意义(χ2=33.240,P＜0.005);在有、无远处转移中的表达率分别为81.81%和31.03%,差异有统计学意义(χ2=6.385,P=0.011 5)。结论：TNFAIP3虽具有抗肿瘤效应,但参与了放疗抗拒的鼻咽癌的发生、发展。     

酵母双杂交诱饵表达载体pGBKT7-cide-3的构建、鉴定以及毒性、自激活效应的检测

目的:构建并转化酵母双杂交体系中“诱饵”载体pGBKT7-cide-3以便用于人肝cDNA文库的筛选.方法:用RT-PCR方法从人肝细胞株QZG中扩增cide-3基因全外显子片段,并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7中;用PEG/LiAC法将pGBKT7-cide-3转化感受态酵母菌AH109.提取转化酵母菌的质粒DNA和总蛋白进行鉴定.同时检测表达产物对报告基因的激活作用及对酵母株AH109的毒性.结果:成功扩增出人cide-3 cDNA片段,限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-cide-3;获得可在色氨酸缺陷培养基(SD/-Trp)上生长含pGBKT7-cide-3的酵母菌克隆.鉴定表明pG-BKT7-cide-3已转化入酵母菌AH109,无自主激活报告基因的能力及对酵母的生长无毒性.结论:酵母双杂交“诱饵”载体pGBKT7-cide-3构建获得成功,可应用于酵母双杂交体系.     

CD44V6 蛋白在鼻咽癌组织中的表达

目的：探讨CD44V6蛋白与鼻咽癌（NPC）的发生、转移及预后的关系。方法：采用S－P免疫组织化学方法检测116例鼻咽癌组织中CD44基因产物的表达情况。结果：CD44蛋白表达率为53．4％（62／116）。CD44蛋白在有颈部淋巴结转移者中的表达率为66．7％（40／60），高于无颈部淋巴结转移者（39．3％），两者有非常显著性差异（P＜0．01）。CD44V6蛋白的表达与NPC的病理组织学分型和预后无明显关系（P＞0．05）。结论：CD44V6蛋白的高表达与NPC颈部淋巴结转移的发生密切相关，提示CD44V6表达的上调可作为NPC患者预后判断的参考指标。     

癌基因Bcl—2蛋白在肺癌组织中的表达

目的：探讨癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在肺癌组织中的表达及意义。方法：采用鼠抗人Ｂｃｌ－２蛋白单克隆抗体，应用免疫组化方法检测肺癌组织抗凋亡基因Ｂｃｌ－２的表达产物。结果：６９例肺癌Ｂｃｌ－２阳性率为３０．４％，其中鳞癌３３．３％（９／２７），腺癌１４．８％（４／２７），大细胞癌０（０／２），小细胞癌６１．５％（８／１３）。小细胞肺癌阳性率明显高于非小细胞肺癌（ｐ〈０．０５），Ｂｃｌ－２表达与肿瘤大小、Ｔ     

联合检测nm23-H1、E-cadherin基因蛋白在鼻咽癌中的表达

目的　探讨 nm2 3- H1基因和粘附分子 E- cadherin在鼻咽癌中的表达情况及其与转移的关系。方法　用免疫组化 SP法检测 nm2 3- H1和 E- cadherin基因产物在 42例鼻咽癌中的表达。结果　 42例鼻咽癌活检标本中 ,nm2 3- H1蛋白表达阳性率 5 4 .7% ,E- cadherin表达阳性率 5 7.1 % ,nm2 3- H1蛋白在有颈淋巴结转移患者中表达阳性率为 40 .7% ,在无颈淋巴结转移患者中表达阳性率为 80 .0 % ,两者差异有显著意义 ( P<0 .0 5 )。E- cadherin在颈淋巴结转移阳性患者中表达阳性率为 44.4% ,颈淋巴结转移阴性患者中表达阳性率为 80 .8% ,两者差异有显著意义 ,( P<0 .0 5 )。两种基因产物表达在鼻咽癌中呈正相关 ( P<0 .0 1 )。结论　nm2 3- H1和 E- cadherin基因与鼻咽癌的转移密切相关 ,对临床判断鼻咽癌预后有一定指导意义     

SCC在鼻咽癌患者血清中表达的临床意义

目的 探讨鼻咽癌患者血清中鳞状细胞癌抗原(SCC)的表达及临床意义.方法 用酶联免疫吸附法分析186例鼻咽癌患者检测血清SCC水平,并结合临床资料分析该指标的临床意义.结果 鼻咽癌患者SCC阳性率治疗前为29.03%,临床分期之间阳性率差别有统计学意义(P＜0.05),治疗后阳性率均表现下降,总的阳性率为7.0%.结论 SCC作为早诊手段,其敏感性较低,但在初诊鼻咽癌中的阳性率随病期增高,对病情预后监测有临床意义.     

BRD4抑制剂对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨溴结构域蛋白4（BRD4）抑制剂GSK525762A对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法 0、0.1、1、10、100 μmol／L GSK525762A 处理鼻咽癌CNE-2细胞 24、48、72和96 h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率变化,同时采用流式细胞术Annexin V-FITC／PI双染法检测不同浓度GSK525762A处理48、96 h后的CNE-2细胞凋亡情况,Transwell法检测不同浓度GSK525762A处理48、96 h后的CNE-2细胞侵袭能力,实时定量PCR检测不同浓度GSK525762A 处理48、96 h后凋亡相关基因的表达情况。结果 GSK525762A对CNE-2细胞增殖有抑制作用,增殖抑制率呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义（P＜0.05）;GSK525762A处理后的细胞早期、晚期及总凋亡率升高,均高于0 μmol／L,凋亡率随浓度升高而增加;穿膜细胞数均少于0 μmol／L,且随浓度升高而降低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;与0 μmol／L比较,其余各浓度的Bcl-2 mRNA水平降低,Bax mRNA、Bak mRNA水平均升高,且各浓度间差异均有统计学意义（P＜0.05）;GSK525762A各浓度处理96 h的凋亡率、穿膜细胞数及凋亡相关基因mRNA均优于48 h（P＜0.05）。结论 BRD4抑制剂GSK525762A对鼻咽癌CNE-2细胞增殖有毒性作用,可诱导CNE-2细胞凋亡,恢复凋亡相关基因的表达,并降低细胞的侵袭能力。     

E-cadherin和p16基因蛋白在鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨Ｅ－钙粘素（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）和p１６基因与鼻咽癌发生发展的关系。 方法：采用免疫组化方法检测７４例鼻咽癌组织和２０例炎性鼻咽部组织中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和p１６基因蛋白的表达。结果：炎性组织Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和p１６显著高于鼻咽癌组织（Ｐ〈０．０５）；Ｅ－ｃａｄｈｅｉｎ和p１６保留表达与临床分期、病灶大小 无关（Ｐ〉０．０５），但在颈淋巴结转移组显著低于无颈淋巴结转移组（Ｐ〈０．０５）     

鼻咽癌多药耐药相关蛋白表达与原发灶放疗敏感性关系的研究

目的:探讨多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)在鼻咽癌中的表达以及与原发灶放疗敏感性的关系。方法:回顾性分析我科1999年1月~2000年12月治疗的鼻咽癌共51例。采用免疫组化S-P法,检测鼻咽癌中MRP的表达,并评价其表达与鼻咽癌原发灶放疗敏感性的关系。结果:鼻咽癌中MRP的阳性表达率为68·63%(35/51),其表达在低T分期(T1-2)和高T分期(T3-4)间差异有显著性意义(P<0·05),MRP表达与原发灶放疗敏感性无关,差异无显著性意义(χ2=0·000,P>0·05)。结论:鼻咽癌中MRP呈高表达,其表达与原发灶放疗敏感性无关,不能作为鼻咽癌原发灶放疗敏感性的预测指标。     

肝细胞生长因子受体原癌基因c-met mRNA在鼻咽癌中的表达及意义

  目的 研究鼻咽癌组织中肝细胞生长因子（HGF）受体原癌基因c-met mRNA的表达及其与侵袭和转移的关系。方法 应用原位杂交检测慢性鼻咽黏膜炎症标本15例、鼻咽癌55例c-met mRNA的表达。结果 c-met mRNA在慢性鼻咽黏膜炎症、鼻咽癌组织中表达阳性率分别为13.3 %（2／15），61.8 %（34／55）。c-met mRNA的表达与淋巴结转移、肿瘤组织局部浸润破坏（颅底破坏）、临床分期（UICC）呈正相关（P＜0.05），而与颅神经损伤、年龄、性别、组织分型（WHO）无相关。结论 鼻咽癌中c-met mRNA的表达与其侵袭和转移有密切的关系，c-met mRNA的表达变化有助于判断鼻咽癌的预后，c-met可能为临床建立新的鼻咽癌预后因子和指导临床治疗提供依据。     

MicroRNAs in nasopharyngeal carcinoma

MicroRNAs（miRNAs） provide insight into both the biology and clinical behavior of many human cancers, including nasopharyngeal carcinoma（NPC）. The dysregulation of miRNAs in NPC results in a variety of tumor-promoting effects. Furthermore, several miRNAs are prognostic markers for NPC. In addition to cellular miRNAs, NPC samples also often contain miRNAs encoded by Epstein-Barr virus, and these miRNAs may impact NPC biology by targeting both cellular and viral genes. Given their numerous putative roles in NPC development and progression, a thorough understanding of the impact of miRNA dysregulation in NPC is expected to shed light on useful biomarkers and therapeutic targets for the clinical management of this disease. In this review, we describe the efforts to date to identify and characterize such miRNAs in the context of NPC.     

鼻咽癌相关基因NAG7对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

背景与目的NAG7基因是我室克隆的鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,其功能与作用机制目前尚不清楚.研究鼻咽癌相关的潜在抑瘤基因NAG7对鼻咽癌细胞系(HNE1)细胞周期和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用脂质体转染技术将NAG7基因导入HNE1细胞,建立稳定表达NAG7的细胞株,Northernblot分析转染细胞NAG7基因的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞周期素及细胞凋亡的改变,并用westernblot验证.结果NAG7基因重表达的HNE1细胞与空载体转染的HNE1和HNE1细胞相比G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞数减少;细胞凋亡数目增加(P<0.05);细胞周期素A、D1、E表达明显降低(P<0.05),细胞周期素B1表达降低,Westernblot检测亦证实cyclinD1和cyclinE表达明显下调.结论NAG7的重表达导致细胞周期素表达下调,从而延缓细胞经G1期进入S周期及诱导细胞凋亡增加进而抑制NPC细胞的过度增殖.     

EXPRESSION AND SUBCELLULAR LOCALIZATION OF DNA-PK IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA CELL LINES CNE1 AND CNE2 WITH DIFFERENT RADIOSENSITIVITY

Exploring mechanism of radioresistance and searching for some suitable radiosensitized approaches isone of the ways to improve the curative rate of nasopharyngeal carcinoma. As we know, radiosensitivity is highly correlated with the number of DNA double strand breaks (DSBs) and the extent of it’s repair[1], and the ability of DSBs repair is one of the important factors influencing radiosensitivity. In mammalian cells, the nonhomologous end joining (NHEJ) is the predominan pathway of DSB…     

不同敏感性鼻咽癌细胞株中Ku蛋白表达情况比较

目的　比较作为DNA双链断裂修复蛋白DNA依赖性蛋白激酶 (DNA PK)的调节亚基70 Ku、80 Ku在不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中的表达情况。方法　成克隆实验测定鼻咽癌高分化鳞癌细胞CNE1和低分化鳞癌细胞CNE2不同剂量照射后的存活分数 ,用线性二次模型拟合剂量存活曲线并求出放射生物学参数α、β、SF2、MID以评价两株细胞的放射敏感性。Westernblot检测照射前和后不同时间及不同剂量CNE1、CNE2细胞中Ku的表达 ,检测蛋白条带的吸光度值做半定量分析。结果　CNE1在各个剂量点的存活分数均比CNE2高 ,MID也大于CNE2 (2 .35∶1.11) ,SF2也大于CNE1(0 .5 4∶0 .37)。Westernblot显示两株细胞中70 Ku、80 Ku均有表达 ,蛋白条带的吸光度值测定显示70 Ku在CNE1、CNE2细胞中分别为 2 0 .0 3± 7.5 6和 19.36± 6 .0 4 ,80 Ku分别为 2 5 .98± 12 .87和 2 3.74±9.2 4 (P值均 >0 .0 5 )。蛋白表达的定量和定性分析同样显示 4Gy照射后不同时间点及 0～ 16Gy照射后 12hKu的表达无统计学差异。结论　实验验证了CNE2比CNE1对放射更敏感 ;照射前后两个细胞均有70 Ku、80 Ku蛋白表达且无差异 ;CNE1、CNE2放射敏感性的差异与Ku蛋白表达量无明显关系。