Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用。方法将食管癌细胞株Eca-109分为6组，A：对照组，B：化疗组，C：化疗＋高剂量光敏剂治疗组，D：化疗＋低剂量光敏剂治疗组，E：高剂量光敏剂治疗组，F：低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24h后，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率；于化疗组加入化疗药（5-Fu＋DDP）作用12h，再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物（HPD）低剂量或高剂量，4h后行630nm激光照射，光能量密度30J／cm^2，照光后继续培育24h，开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率。结果除了低剂量光敏剂＋化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外．其余相互间差异均有统计学意义，高剂量光敏剂＋化疗组细胞抑制率较高，低剂量光敏剂组抑制率较低。结论在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间，光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素。两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异。相同光照能量密度及孵育时间下，孵育浓度越高，其杀伤效应越强。光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高，光动力与化疗有协同作用。     

人食管癌细胞体外光动力效应主要影响因素的实验研究

目的探讨光动力作用（PDT）对体外培养的人食管癌细胞Eca-109的杀伤效应．初步揭示影响Eca-109细胞光动力疗法杀伤效应的主要影响因素。方法以两种光敏剂血卟啉衍生物（HpD）和光敏素（Photofrin）不同浓度于特定光照剂量（15J／cm^2）下和不同浓度的HpD在三种不同光照能量密度（10J／cm2,30J／cm^2,50J／cm^2）下作用于食管癌Eca-109细胞,光源采用DIOMED630PDT系统,24h后通过MTT法检测细胞生存率,并应用荧光分光光度计RT-5000检测不同浓度HpD作用于Eca．109细胞4h后胞内光敏剂荧光值。结果两种光敏剂不同浓度间细胞生存率均有明显差异,三种不同光照能量密度下不同HpD浓度细胞生存率间亦存在明显差异（P〈0．05）。同一浓度不同光照能量密度的细胞生存率间,前4个低浓度生存率间未见明显差异（P〉0．05）,后4个高浓度生存率间则差异有统计学意义（P〈0．05）。根据荧光分光光度计RT-5000测得的胞内荧光值及标准曲线取得胞内光敏剂浓度,并与孵育浓度进行回归分析,得相关系数r=0．997,即胞内光敏剂浓度与孵育浓度呈正相关。结论特定光源下,光照能量密度、光敏剂的种类及其光敏剂的孵育浓度是影响Eca-109 PDT效应的主要因素。     

山豆根对Eca-109细胞株细胞周期的作用

应用流式细胞术(FCM)和Feulgen-DNA法显示分裂指数,分析不同浓度山豆根对Eca-109细胞的作用。流式细胞光度术分析结果表明,实验组细胞DNA指数(DI=2)显著低于对照组(DI=2.5),两者相比差异均有极其显著性意义(P<0.01)。细胞DNA组方图G_0/G_1期细胞呈增高趋势,S期细胞均减少,G_2M期细胞均增高,与对照组比差异均有显著性(P<0.01,P<0.05)。Feulgen-DNA染色显示细胞分裂指数与小剂量药物作用时间呈负相关,大剂量药物作用下分裂指数明显下降。这说明山豆根对Eca-109细胞DNA合成有显著的抑制作用。     

山奈酚诱导人食管鳞癌Eca-109细胞凋亡及其机制

目的研究山奈酚对人食管鳞癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法山奈酚体外作用于Eca-109细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制作用;TUNEL染色测定细胞凋亡率;RT-PCR检测Bax、Bcl-2基因表达变化情况;分光光度法测定Caspase-3和Caspase-9活性。结果山奈酚显著抑制Eca-109细胞增殖(P<0.01),呈剂量依赖关系。TUNEL染色结果表明山奈酚诱导Eca-109细胞发生凋亡,RT-PCR结果显示山奈酚作用后,肿瘤细胞Bax基因表达上调,Bcl-2基因表达下调,同时,Caspase-3和Caspase-9活性明显升高(P<0.01)。结论山奈酚能抑制Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡。山奈酚可能通过线粒体途径诱导Eca-109细胞凋亡。     

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞增殖与分化的效应

在人食管癌Ｅｃａ１０９细胞中加以终浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ的８ＢｒｃＡＭＰ体外培育２４ｈ后，应用酸解ＤＮＡ及甲绿派洛宁染色技术在同一标本上鉴别增殖型细胞和分化型细胞。结果：８ＢｒｃＡＭＰ处理组增殖型细胞占６３％，分化型细胞占３７％；而对照组增殖型细胞占８３％，分化型细胞占１７％。结果提示：８ＢｒｃＡＭＰ对Ｅｃａ１０９细胞有抑制增殖和促进分化效应     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

目的：探讨8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法：采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8—Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果：8—Br—cAMP作用48h后可显著诱导Eca—109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl—2、c—myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas—IR减弱。结论：8—Br—cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca—109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。     

CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应

目的：探讨CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应。方法：培养Eca-109细胞,用酸洗法收集细胞膜表面小肽,再用去盐、浓缩、超滤法纯化这些小肽后,以此刺激人外周血树突状细胞（DC）作为人食管癌疫苗,不用小肽刺激的DC作为对照疫苗,并用这些疫苗加佐剂CpG基序激活纯化的T细胞。实验分组：①CpG基序加食管癌疫苗组（CpG—Ve）;②CpG基序加食管癌对照疫苗组（CpG—Vc）;③单纯食管癌疫苗组（Ve）;④单纯食管癌对照疫苗组（Vc）;⑤单纯CpG基序刺激组;⑥直接用纯化的T细胞加Eca-109细胞作效应对照组。用^3H渗入法对各组行T细胞增殖试验,用^51Cr释放试验测定各组细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的活性。结果：CpG-Ve组的T细胞增殖活性和CTL对Eca-109细胞杀伤率均高于其余各组（P〈0．01）。结论：CpG基序可能是人食管癌疫苗研究中的有效佐剂。     

乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 PG-PIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强。结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关。     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞iNOS基因拷贝及Caspase-3表达的影响

目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞iNOS基因拷贝及Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组细胞同时培养 4 8h。采用原位斑点印迹法显示iNOS基因拷贝和mRNA的表达 ,采用细胞免疫化学技术显示Caspase 3的表达。结果 :Br和Q组较C组iNOS基因拷贝和mRNA表达信号较强。Br和Q组细胞内Caspase 3免疫反应 (IR)性较强 ,Br和Q组与对照组相比 ,存在显著性差异 (P 0 .0 1) ;Br组的Caspase 3 IR强于槲皮素组 (P <0 .0 1)。结论 :8 Br cAMP和槲皮素皆可上调iNOS基因的扩增和表达 ,最终可都通过上调Caspase 3的表达 ,诱导Eca 10 9细胞凋亡。     

Eca109细胞光动力损伤效应的傅里叶变换红外光谱分析

目的:研究光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)对人食管癌细胞Eca109的光动力损伤效应.方法:将Eca109细胞分为光动力组和对照组(不加光敏剂、不照光).光动力组加入5 mg/L的HMME培养6 h后,用半导体激光器照射,光剂量为15 J/cm2.采集对照组和光动力组细胞的傅里叶变换红外光谱,比较2组的图谱.结果:与对照组相比,光动力组蛋白质的α螺旋、β折叠含量减少,无规卷曲和β转角含量上升.磷酸二酯基团的对称伸缩振动1 082 cm-1和反对称伸缩振动1 244 cm-1谱带均向高波数移动,强度减小,CH2、CH3基团的对称和反对称伸缩振动的4条谱带峰值明显减弱.结论:光动力损伤作用使蛋白质主链的有序结构减少,无序性增加,磷酸二酯键损伤,DNA单、双链发生断裂,膜上多种功能基团结构受损,从而导到癌细胞凋亡或坏死.     

光动力联合紫杉醇对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的 探讨血卟啉衍生物联合紫杉醇注射液对人食管癌细胞Eca-109体外光动力疗法效应的影响.方法 将食管癌细胞株Eca-109分为8组:对照组、化疗组、化疗+高剂量光敏剂治疗组、化疗+中剂量光敏剂治疗组、化疗+低剂量光敏剂治疗组、高剂量光敏剂治疗组、中剂量光敏剂治疗组和低剂量光敏剂治疗组.种板孵育24 h,检测肿瘤细胞的存活率:于化疗方案组加入紫杉醇作用12 h,再往含光敏剂实验组分别加入血卟啉衍生物高、中、低剂量,4h后行光动力照射,照光前后荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,照光后继续培育24 h,开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率:流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 血卟啉衍生物浓度越高食管癌细胞显示的荧光强度越强,荧光强弱与细胞的活性成正比,与紫杉醇联合组则可见到更多凋亡细胞.在肿瘤细胞的生长抑制率、细胞凋亡率方面.化疗+高剂量光敏剂光动力治疗组与空白对照组、单纯化疗组及低剂量光敏剂光动力治疗组相比,差异均有显著意义(P<0.01);含光敏剂大剂量组与小剂量组相比,差异有显著意义(P<0.05);化疗组及光动力组与空白对照组相比.差异有显著意义(,P<0.05).结论 光动力联合紫杉醇化疗对人食管癌细胞细胞株Eca-109增殖有协同抑制作用,二者可协同诱导人食管癌细胞株发生凋亡.     

双歧杆菌培养上清对人食管癌109细胞的抑制作用

目的：探讨双歧杆菌培养上清对人食管瘤109细胞（Eca－109）的影响。方法：采用体外细胞培养、镜检及细胞排染试验,观察双歧杆菌培养上清对Eca－109细胞的形态学及细胞活度变化。结果：高浓度双歧杆菌培养上清可抑制Eca－109细胞贴壁生长,并使其活度明显下降,与生理盐水组相比有显著差异（P＜0．05）。结论：双歧杆菌培养上清对人食管癌109细胞有抑制生长作用。     

不同浓度山豆根对Eca-109细胞株生长的抑制和杀伤作用

目的：探讨山豆根对体培养人食管癌（Eca-109）细胞株的作用。方法：将Eca-109细胞株分为对照且和实验组两组，测定不同浓度山豆根对两组的杀伤效应，酶活性测定及Fulgen-DNA法显示分裂指数。结果：100mg/ml,200mg/ml浓度对细胞的杀伤能力随药物作用时间延长而增中，50mg/ml浓度维持在3％左右。100mg/ml,200mg/ml实验在加药第3天对细胞分裂指数抑制率接近或达到100％，50mg/ml实验作用呈负相关，山豆根使谷氨酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性下降，直至阴性反应，结论：山豆根对Eca-109细胞株生长有抑制和杀伤作用，对脱氢酶有影响作用。     

二甲基亚砜对人类食管癌细胞株作用机理的研究

探讨了2%二甲基亚砜(DMSO)对Eca-109细胞株作用的机理。实验结果表明:二甲基亚砜抑制了Eca-109细胞的增殖,使Eca-109细胞~3H-TdR掺入减少,对照组和实验组~3H-TdR掺入数分别为5250.3±87.2、2990.3±17.27,导致Eca-109细胞集落形成能力下降,对照组和实验组集落数分别为34.56±12.13、11.88±4.80。流式细胞术显示:对照组Eca-109细胞G0/G1,S和G2+M各期的百分比为:42.67±7.57,55.00±7.21,2.30±1.15;实验组细胞各期的百分比为71.00±9.85,20.67±15.04,8.00±5.29;(P<0.01)。实验结果提示:二甲基亚观能阻止Eca-109细胞从G0/G1期进入S期,从而可抑制细胞的生长。     

食管鳞癌的肿瘤干细胞标志

目的:探讨食管鳞癌组织和其细胞系的肿瘤干细胞(CSC)标志.方法:应用免疫酶或免疫荧光技术检测20例食管鳞癌组织和细胞(Eca-109和EC9706)中CD133、CD44以及多药耐药基因1(MDR1)的表达和定位.结果:食管鳞癌细胞中CD133和MDR1一致强阳性的细胞占30%-43%,CD133和CD44一致强阳性的细胞约占40%.CD133强阳性小细胞占癌细胞的8%,癌组织中约为4%.CD133强阳性小细胞位于鳞癌上皮的基底层、癌珠周缘或癌灶内;CD44强阳性细胞约占40%,其中包含2个亚群:少数较小CD44阳性的细胞亚群定位于鳞癌上皮的基底层、癌珠周缘或癌灶内;较大CD44强阳性细胞的亚群主要定位于鳞癌上皮棘细胞层及癌灶中.结论:CD133强阳性小细胞和CD44强阳性细胞可能是CSC的标志.     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc，wtp53，iNOS基因和EGFR表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc、wtp53、iNOS基因和EGFR表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分为2组①实验组加8-Br-cAMP至终浓度为2×10-5mol/L,培养24 h;②对照组不加8-Br-cAMP,培养24 h.对2组的细胞涂片和硝酸纤维素膜(NCM)标本进行c-myc、wtp53、iNOS基因和EGFR表达检测,并对扫描数值进行统计学处理.结果原位杂交及免疫组化反应信号皆定位于Eca-109细胞的胞质,扫描数值显示①c-myc mRNA实验组为3.38±0.99,对照组为5.18±1.39;②wtp53 mRNA实验组为2.74±0.83,对照组为0.38±0.27;③iNOSmRNA实验组为4.52±0.74,对照组为2.63±0.13;④EGFR-IR实验组为2.37±1.05,对照组为4.38±0.48.以上实验组与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05).结论c-myc、wtp53和NO均可参与8-Br-cAMP诱导癌细胞的分化效应.