细胞增殖抑制基因调控慢性阻塞性肺疾病大鼠 Wnt/PCP通路抑制气道成纤维细胞增殖

目的探讨细胞增殖抑制基因(HSG)在大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重建中Wnt/PCP通路的作用及其机制。方法将大鼠分为对照组和COPD模型组;采用烟熏+气道内注射脂多糖建立;取气管做小气道成纤维细胞原代培养,第3代细胞系用于实验。HE染色鉴定肺组织是否造模成功。ELISA检测培养上清液中MMP-9、PDGF和TGF-β1的表达;real-time PCR检测成纤维细胞中HSG、PDGF、TGF-β1和RhoA的mRNA的表达;Western blot法检测成纤维细胞HSG和RhoA蛋白表达。结果模型组成纤维细胞上清液中PDGF、TGF-β1和MMP-9表达显著高于对照组(P0.01);模型组成纤维细胞中HSG mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P0.01);RhoA蛋白及PDGF、TGF-β1和RhoA mRNA表达显著高于对照组(P0.01)。HSG表达与MMP-9、PDGF、TGF-β1和RhoA表达呈负相关(P0.01)。结论 HSG可能通过调控Wnt/PCP通路,抑制大鼠气道成纤维细胞的增殖从而参与气道重建。     

IL-22经Wnt/β-catenin通路抑制肝星状细胞致纤维化作用

目的:研究IL-22抑制HSC致肝纤维化的作用和机制,探索Wnt/β-catenin通路在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法:采用TGF-β1激活HSC,荧光定量PCR和Western blot检测细胞激活过程中β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达变化情况。应用不同浓度和不同时间的重组大鼠IL-22刺激大鼠HSC,CCK8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用TGF-β1预处理HSC,再用最适浓度IL-22干预,对比干预前后HSC增殖情况,并检测β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达变化情况。结果:TGF-β1激活HSC后,β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05)。IL-22以浓度依赖性和时间依赖性抑制HSC增殖(P0.05),并降低β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平(P0.05),但对HSC凋亡率无显著影响(P0.05)。IL-22可以显著抑制TGF-β1诱导的HSC激活,并显著降低β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。结论:Wnt/β-catenin参与了HSC激活和分泌α-SMA过程,IL-22以浓度依赖性和时间依赖性抑制HSC活性,这种作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路实现的。     

Wnt/β-catenin信号通路对哮喘大鼠气道平滑肌细胞迁移能力的影响

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响。方法建立哮喘大鼠模型,原代培养大鼠气道平滑肌细胞(ASMC),采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法分别检测正常大鼠平滑肌细胞和ASMC中β-catenin信号通路mRNA和蛋白表达水平;采用Transwell迁移实验检测ASMCs的迁移能力,并分析应用β-catenin siRNA对其迁移能力的干预作用。结果 RT-PCR和Western blot结果显示哮喘大鼠ASMCs中β-catenin的mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高;β-catenin特异性siRNA能够降低ASMCs中β-catenin mRNA和蛋白表达水平;沉默β-catenin能够显著降低ASMCs的迁移能力。结论哮喘大鼠模型ASMCs的迁移能力显著增强,β-catenin信号通路的异常激活可能参与了这一生物学事件。     

rHSG对COPD大鼠小气道阻力及成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的 检测正常COPD大鼠小气道成纤维细胞中rHSG的表达,寻找其与小气道阻力、TGF-β1的相关性,探索rHSG调控气道重塑的机制.方法 将大鼠随机分为对照组及模型组,分别检测肺功能和肺泡灌洗液中TGF-β1含量.用组织块贴壁法培养气道成纤维细胞,用RT-PCR和Western blot检测rHSG mRNA和蛋白的表达.分析rHSG基因量与小气道阻力以及TGF-β1的相关性.结果 模型组大鼠先后出现咳嗽、气急、喘鸣和痰多等症状并伴有精神萎靡、纳少和毛发枯黄等,之后出现体质量减轻,肺体积略增大,肺顺应性明显下降,而气道阻力明显高于对照组(P＜0.01);肺泡灌洗液中TGF-β1含量均明显高于对照组(P ＜0.01);rHSG基因在对照组中表达高于模型组(P＜0.05);rHSG mRNA和蛋白与气道阻力(RI)、TGF-β1呈负相关,与肺顺应性(cydn)呈正相关.结论 rHSG可能通过调控TGF-β1水平干预气道重塑过程.     

Wnt/β-catenin信号通路调控哮喘气道重塑的机制研究

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路调控哮喘气道平滑肌细胞(ASMC)的功能和参与哮喘气道重塑的机制。方法:建立大鼠哮喘模型,提取大鼠ASMC。Western blot法检测哮喘组和正常组大鼠ASMC中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、原癌基因c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达。抑制哮喘组和对照组ASMC中β-catenin和转录辅助因子p300/CBP间的相互作用后,采用CCK-8法和流式细胞术检测ASMC的细胞活力和周期变化。抑制P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性后,采用Western blot法检测c-Myc和cyclin D1的蛋白表达变化。结果:Western blot法显示哮喘组ASMC中β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白表达水平均明显高于对照组(P0.05),同时GSK-3β的蛋白表达水平则低于对照组(P0.05)。抑制β-catenin和p300/CBP间相互作用后,哮喘组ASMC的细胞活力下降幅度和细胞周期改变程度均较对照组更为明显(P0.05)。抑制P38 MAPK活性后,哮喘模型大鼠及对照大鼠ASMC中Wnt/β-catenin信号通路的靶蛋白c-Myc和cyclin D1的表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路可能通过上调c-Myc和cyclin D1的表达、与P38 MAPK信号通路相互作用以及调控ASMC的生长和分化等途径,影响ASMC的功能,参与哮喘气道重塑。     

Wnt/β⁃catenin信号通路参与马蹄内翻足畸形形成的研究

目的　探讨Sox9（sex determining region Y-box9）和β-catenin对先天性马蹄内翻足（congenital talipes equinovarus，CTE）的影响以及Wnt/β-catenin信号通路作用机制。 方法　将孕10 d的SD大鼠随机均分为实验组及对照组，以135 mg/kg全反式维甲酸溶于矿物油对实验组大鼠进行灌胃制作胎鼠CTE模型，对照组予以等量矿物油灌胃处理，取大鼠足踝部组织，通过免疫组化、RT-PCR、Western blot检测β-catenin、Sox9以及磷酸化β-catenin-S552的表达水平。 结果　与对照组相比，HE染色可见CTE模型组织中有较多的胶原组织沉积，免疫组化结果显示实验组标本Sox9与β-catenin表达增高，RT-qPCR表明实验组Sox9与β-catenin的mRNA水平显著增高，Western blot结果显示实验组Sox9与β-catenin的表达增高而磷酸化β-catenin-S552表达降低。 结论　CTE大鼠的足踝部组织中Sox9高表达受Wnt/β-catenin信号通路调控，该通路参与先天性马蹄内翻足畸形的形成。     

Wnt/β-catenin通路参与脂肪间充质干细胞对大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSC)经Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法以大鼠ADSC的条件培养基作用于HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞,通过流式细胞术分析细胞周期、RNA干扰、实时定量PCR和Western blot等技术分析HBZY-1细胞增殖能力、Wnt信号通路中相关基因和蛋白表达水平的变化。结果在ADSC条件培养基作用下,HBZY-1细胞增殖受到明显抑制,dickkopf WNT信号通路抑制物1(DKK1)mRNA表达水平明显升高,而纤连蛋白(fibronectin)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达显著降低,同时系膜细胞的β-catenin和Bcl-2蛋白的表达受到明显抑制。ADSC中DKK1 mRNA表达水平显著高于HBZY-1细胞,利用小干涉RNA敲低ADSC的DKK1表达后,其β-catenin蛋白的表达水平显著升高。将干扰后的ADSC条件培养基作用于HBZY-1细胞,可重新增加HBZY-1细胞Wnt信号通路中β-catenin和Bcl-2的蛋白水平。结论 Wnt/β-catenin信号通路可能参与ADSC对HBZY-1肾小球系膜细胞增殖的调控。     

GDF-5和Dex通过Wnt/β-catenin信号通路促进rBMSCs体外成软骨分化

目的利用生长分化因子(GDF-5)联合地塞米松(Dex)诱导大鼠BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用。方法用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞随机分成6组:BMSCs组、BMSCs+Dex组、BMSCs+GDF-5组、BMSCs+GDF-5+Dex组、BMSCs+GDF-5+Dex+SB216763组和BMSCs+GDF-5+Dex+XAV-939组。连续诱导培养14 d,倒置相差显微镜观察细胞形态,Alcian blue染色检测细胞的蛋白聚糖,RT-PCR检测成软骨分化相关基因aggrecan、Col2、Sox9、Col1,Wnt/β-catenin信号通路相关基因Dvl1、Gsk3β、β-catenin mRNA表达,Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达。结果与BMSCs组相比,BMSCs+GDF-5+Dex组能够使诱导的细胞蛋白聚糖分泌明显增加;Aggrecan、Col2、Sox9基因表达明显增加(P0.05);Ⅱ型胶原蛋白表达增加(P0.05);β-catenin mRNA及蛋白表达水平也增加(P0.05)。与BMSCs+GDF-5+Dex组相比,添加SB216763组蛋白聚糖,Ⅱ型胶原基因和蛋白表达增加(P0.05);相反,添加XAV-939组相应的成软骨分化基因及蛋白表达下降(P0.05)。结论 GDF-5联合地塞米松(Dex)可诱导大鼠BMSCs成软骨分化,Wnt/β-catenin信号通路可能在其中发挥促进作用。     

葛根素干预激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号途径

背景:国内外学者研究证明,激素性股骨头缺血性坏死的发病机制与体内脂质代谢紊乱,尤其是大剂量激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。目前葛根素抑制激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号转导途径还未经证实。目的:观察葛根素干预激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化过程中Wnt信号途径相关基因及关键蛋白β-catenin表达的变化。方法:第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞随机分为空白组、激素组、葛根素低、中、高剂量组,5组干预6 d后RT-PCR法检测Wnt/β-catenin信号通路主要成员Wnt10b mRNA、GSK3βmRNA、β-catenin mRNA的表达,Western blot法对β-catenin蛋白的表达进行检测分析。结果与结论:与激素组比较,葛根素各干预组Wnt10b mRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达水平均显著升高;GSK3βmRNA的表达水平显著降低。提示葛根素对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的抑制作用可能是通过调节信号通路的Wnt10b mRNA、GSK3βmRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达来实现的。葛根素防治激素性股骨头缺血坏死的机制不仅是改善股骨头局部的微循环,同时还与其抑制激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1介导的心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1表达的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β_1(TGF-β_1)介导的大鼠心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1的调节作用。方法:差速贴壁法分离与获取新生大鼠心成纤维细胞。分别采用免疫细胞化学法和Western印迹法检测心成纤维细胞MMP-1、TIMP-1蛋白表达。结果:TGF-β_1可使心成纤维细胞MMP-1蛋白表达水平下降,而促进TIMP-1蛋白表达,MMP-1/TIMP-1比值下降。AcSDKP可以抑制TGF-β_1对心成纤维细胞MMP-1表达的下调作用,使MMP-1蛋白表达增加,而对TGF-β_1介导的TIMP-1蛋白表达无明显影响,MMP-1/ TIMP-1比值增加。结论:AcSDKP可以通过上调TGF-β_1介导的心成纤维细胞MMP-1蛋白表达并增加MMP-1/ TIMP-1比值,以加速细胞外基质降解,这可能与AcSDKP抗心纤维化的作用有关。     

RBMS3抑制宫颈癌细胞增殖和转移的作用机制研究

目的 研究RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RBMS3)对宫颈癌细胞增殖和转移的影响,并探讨其发挥作用的可能机制.方法 采用GEPIA网站分析RBMS3在宫颈癌组织中的表达情况.qRT-PCR和Western blotting检测RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌组织和细胞系中的表达水平.构建RBMS3过表达慢病毒,感染宫颈癌细胞系Caski,分为NC组和oe-RBMS3组,采用MTS检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力,移植瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力.Western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白wnt3a、β-catenin及其下游靶蛋白cMYC、cyclinD1、MMP-2的表达.结果 GEPIA网站分析结果显示RBMS3 mRNA在宫颈癌组织中的表达显著低于在正常宫颈组织中的表达.qRT-PCR和Western blotting结果均显示RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌组织中的表达显著低于其在癌旁组织中的表达,RBMS3 mRNA和蛋白在宫颈癌细胞系中的表达显著低于其在人鳞状上皮永生化细胞H8中的表达.与NC组相比,oe-RBMS3组Caski细胞增殖、转移和体内成瘤能力均降低,细胞中wnt3a、β-catenin、cMYC、cyclinD1、MMP-2蛋白表达均降低.结论 RBMS3可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞增殖和转移能力.     

离心重力诱导脂肪间充质干细胞向软骨样细胞分化

目的探讨离心重力对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)向软骨样细胞分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过加载不同离心力(0、500、1000、2000、2500、3000×g)和持续时间(0、15、30、45、60 min)刺激脂肪干细胞分化为软骨样细胞,并利用荧光定量PCR和Western blot检测Sox 9基因的上调表达来筛选条件,将培养的P3代h ADSCs分3组,对照组(不干预处理)、离心重力组和TGF-β3组(加入TGF-β3成软骨诱导剂),持续培养21 d后,通过阿利辛蓝和苏木精-伊红染色进行软骨分化鉴定,DMMB法测定胞外基质中GAG含量,荧光定量PCR测定Ⅱ型胶原基因表达,Western blot进一步检测对照组和离心重力组中Sox 9、β-catenin、GSK3β和p-GSK3β蛋白的表达。结果加载最适的离心重力(2500×g,30 min)刺激h ADSCs后,培养24 h,Sox 9的m RNA和蛋白表达显著上调。阿利辛蓝和苏木精-伊红染色显示,离心重力组和TGF-β3组中软骨表达呈阳性。GAG实验结果显示,TGF-β3组促GAG分泌的能力优于离心重力组(P0.05),荧光定量PCR结果表明TGF-β3组其Ⅱ型胶原mRNA表达的能力高于离心重力组(P0.05),Western blot结果显示,相比对照组,离心重力组中β-catenin和p-GSK3β的蛋白表达水平降低,而GSK3β和Sox 9蛋白表达升高。结论离心重力和TGF-β3诱导脂肪干细胞成软骨分化中的表达具有相似的能力,离心重力对h ADSCs诱导成软骨作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

bFGF增强大鼠低氧/复氧损伤心脏成纤维细胞β-catenin表达

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对心脏成纤维细胞低氧/复氧损伤后β-catenin蛋白表达的影响。方法 制作体外培养第3代大鼠心脏成纤维细胞低氧/复氧（Hy/R)损伤模型, 分为6组：对照组,单纯低氧/复氧损伤（Hy/R）组,以及5、10、20、和40μg/L bFGF干预组, 采用MTT法、TUNEL法、免疫荧光法及激光共聚焦显微镜分析检测心脏成纤维细胞增值率、凋亡百分率、和β-catenin蛋白表达。结果 单纯Hy/R组较对照组细胞增值率降低（P<0.05）,β-catenin蛋白表达减少（P<0.05）, 凋亡细胞增多（P<0.05）。20和40μg/L bFGF干预组较单纯Hy/R组细胞增值率升高（P<0.05）,β-catenin蛋白增多（P<0.05）, 凋亡细胞减少（P<0.05）。20、40μg/LbFGF干预组较对照组细胞增值率、β-catenin蛋白表达、 凋亡百分率均有显著改变（P<0.05）。结论 bFGF提高Wnt通路中β-catenin蛋白的表达, 促进心脏成纤维细胞增殖并减少Hy/R损后心脏成纤维细胞凋亡。     

二肽基肽酶4抑制剂抑制Wnt/β-catenin信号通路改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化

目的探讨二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响及与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法将50只SPF级SD大鼠,体重(200±20)g,随机分为对照组(Control group)、模型组(Model group)、二肽基肽酶4抑制剂组(DPP-4 inhibitor group)、氯化锂组(LiCl group)及氯化锂+DPP-4组(LiCl+DPP-4 inhibitor group),每组10只。利用腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg)的方法构建慢性心力衰竭大鼠模型。利用超声检测各组大鼠心功能;HE及Masson染色检测各组大鼠心脏病理学改变;Western blot检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,α-SMA, GSK-3β,p-GSK-3β及β-catenin蛋白的表达。结果与模型组相比,DPP-4inhibitor组大鼠心功能显著改善,心脏组织病理损伤及心肌纤维化减轻,心脏组织中TGF-β1和α-SMA蛋白表达明显减少,p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达也显著降低(P0.05);LiCl加重慢性心力衰竭大鼠模型的心脏功能、病理损伤及心肌纤维化程度,增加TGF-β1和α-SMA蛋白表达,并显著增加p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达;但是DPP-4抑制剂能够减轻甚至部分逆转LiCl对慢性心力衰竭大鼠的影响。结论二肽基肽酶4抑制剂改善慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化,与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达相关。     

BMSC-Exo通过Wnt/β-catenin途径参与股骨头坏死大鼠软骨细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)-外泌体(Exo)通过Wnt/β-catenin途径参与股骨头坏死(FHN)大鼠软骨细胞迁移、增殖和凋亡的机制。方法:通过注射地塞米松和强迫跑步的方法构建FHN大鼠模型。将收集到的FHN软骨细胞分为对照组、BMSCs-Exo 50组、BMSCs-Exo 100组,其培养基中BMSCs-Exo的浓度分别为0、50和100μg/ml。检测各组细胞增殖、迁移和凋亡情况。评估各组Wnt/β-catenin通路表达水平。结果:三组细胞上述各项指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs-Exo 50组的OD值为0.78±0.07,划痕前缘迁移距离百分比为(45.59±1.45)%,Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平显著高于对照组,凋亡率[(2.55±0.24)%]显著低于对照组(P<0.05)。BMSCs-Exo 100组的OD值为0.89±0.08,划痕前缘迁移距离百分比为(61.44±1.76)%,Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平显著高于对照组和BMSCs-Exo 50组,凋亡率[(1.03±0.01)%]显著低于对照组和BMSCs-Exo 50组(P<0.05)。结论:BMSCs-Exo可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进FHN大鼠软骨细胞的增殖和迁移,并抑制凋亡,从而促进软骨生成治疗FHN。     

糖尿病溃疡中Wnt/β-catenin信号通路表达的变化

目的:观察糖尿病(DM)溃疡中Wnt/β-catenin信号通路表达的变化,探讨该信号通路在糖尿病难愈性溃疡中的作用。方法:雌性Wistar大鼠采用高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素液腹腔注射法制备糖尿病模型。分别取正常对照组与DM组制作溃疡模型。观察创面造模后第3天、第7天和第14天对照组及DM组创面愈合情况的变化,并采用HE染色法检测创面组织形态结构的变化,采用ELISA法和RT-PCR法检测创面组织中β-catenin、GSK-3β和Rspo-3蛋白及mRNA的变化。结果:DM组大鼠的创面愈合率明显低于对照组(P0.05),且与对照组相比,其创面组织中含有较少的炎性细胞、纤维母细胞及新生毛细血管。DM组大鼠创面组织中β-catenin和Rspo-3蛋白及mRNA的表达水平均低于对照组,GSK-3β蛋白及mRNA的表达水平均高于对照组(P0.05)。结论:Wnt/β-catenin通路的下调有可能导致了糖尿病溃疡的难愈,而该通路的下调可能源自于Rspo-3蛋白表达的下降。     

Wnt/β-catenin信号通路在低氧促进骨肉瘤细胞体外增殖和侵袭中的作用

目的探讨缺氧条件下,Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤细胞增殖和侵袭中的作用和机制。方法分别在常氧(21%O_2)和缺氧(1%O_2)环境下培养骨肉瘤SaOS-2细胞系24 h,采用CCK-8法检测细胞在缺氧环境下的增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Real time-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt/β-catenin mRNA和蛋白的表达水平,进一步使用β-catenin特异性siRNA阻断其表达并检测。结果缺氧可明显促进骨肉瘤SaOS-2细胞的增殖以及体外侵袭能力的增强,同时上调Wnt/β-catenin mRNA和蛋白表达水平。靶向沉默Wnt/β-catenin之后,缺氧失去了对骨肉瘤SaOS-2细胞增殖和侵袭的诱导作用。结论缺氧条件下,骨肉瘤SaOS-2细胞系中的Wnt/β-catenin信号通路显著激活,从而促进细胞的异常增殖与侵袭能力增强。     

西红花苷-Ⅰ对阿尔茨海默病大鼠前额叶皮质Wnt/β-catenin信号通路的影响*

目的:观察西红花苷-Ⅰ对阿尔茨海默病(AD)大鼠Wnt/β-catenin信号通路主要蛋白Wnt3a、β-catenin表达的影响,探讨西红花苷-Ⅰ治疗AD的机制。方法:健康成年SD大鼠随机分为正常对照组,AD模型组,西红花苷-Ⅰ20 mg/kg、40mg/kg剂量组,每组18只。侧脑室微量注射5μl Aβ_(25-35)建立AD大鼠模型。利用Morris水迷宫实验检测大鼠的空间记忆能力,免疫组织化学、免疫荧光和免疫印迹检测不同组别大鼠前额叶皮质Wnt3a、β-catenin蛋白的表达。结果:Morris水迷宫实验中,从第2实验日开始,模型组大鼠逃避水下平台的潜伏期时间较正常对照组显著延长,目标象限的停留时间均明显降低,穿越原平台位置的次数也明显减少;经西红花苷-Ⅰ干预治疗后,大鼠的学习记忆能力得到明显改善;与正常对照组相比,AD模型组Wnt3a、β-catenin蛋白的表达显著性减少,经西红花苷-Ⅰ干预治疗后,能够明显逆转上述蛋白的表达。结论:西红花苷-Ⅰ可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路,增加Wnt3a、β-catenin的表达,对AD大鼠空间辨别性学习记忆能力有一定的改善作用。     

脉冲电磁场通过Wntβ-catenin信号通路改善膝骨关节炎大鼠炎症反应的机制

目的:探讨脉冲电磁场通过Wntβ-catenin信号转导机制改善膝骨关节炎大鼠炎症反应的机制。方法:选取90只SD大鼠,均分为正常组、模型组和脉冲电磁场组,除正常组,其余各组均构建膝骨关节炎模型。测定各组大鼠局部皮温、膝关节周径和Lequesne MG评分;采取甲苯胺蓝染色进行Mankins评分;Western Blot检测软骨细胞凋亡调控蛋白Caspase-3和Caspase-8水平;ELISA法测定滑膜IL-1β、MMP-13、TNF-α表达;并检测Wnt和β-catenin mRNA和蛋白表达差异;检测大鼠线粒体膜电位。结果:与正常组相比,模型组大鼠膝关节局部皮温、膝关节周径、Lequesne MG评分、Mankins评分、Wntβ-catenin表达以及滑膜IL-1β、MMP-13、TNF-α水平均上调（P<0.05）;与模型组比较,脉冲电磁场组膝关节周径、Lequesne MG评分,Mankins评分、Wntβ-catenin表达以及滑膜IL-1β、MMP-13、TNF-α水平均下调（P<0.05）。相较于正常组,其余2组的关节软骨线粒体膜电位均有所下调。与模型组相比,脉冲电磁场组线粒体膜电位有所上调,脉冲电磁场组优于模型组。结论:脉冲电磁场能抑制膝骨关节炎模型大鼠炎症反应,有效修复软骨损伤,降低炎症因子表达,抑制Wntβ-catenin信号转导。     

姜黄素调控Wnt信号通路抑制胃癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨姜黄素对人胃癌细胞株BGC-823上皮间质转化(EMT)的影响机制。方法将细胞分为姜黄素干预组、TGF-β组、BGC-823细胞对照组、GES-1细胞对照组。采用姜黄素(10μmol/L)干预人胃癌细胞株BGC-823,通过MTT试验检测胃癌细胞增殖能力;通过Transwell小室试验检测胃癌细胞侵袭功能改变;通过Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 TGF-β诱导能够促进人胃癌细胞株BGC-823增殖(P 0.05),胃癌细胞表现出更高的侵袭能力(P 0.01),而姜黄素干预后胃癌细胞的增殖及侵袭能力均明显受抑制。Western blot检测表明,TGF-β诱导干预后,BGC-823细胞E-cadherin、Vimentin蛋白水平升高,与此同时GSK3β、β-catenin及c-Myc的表达明显上调(P 0.01);姜黄素干预能有效抑制胃癌细胞EMT作用,Wnt信号通路蛋白水平显著下调(P 0.05)。结论姜黄素可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT作用,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、转移,实现抗肿瘤作用。