他罗利姆对癫痫持续状态大鼠海马的影响及脑保护作用

目的研究免疫抑制剂他罗利姆（FK506）对癫痫持续状态（SE）大鼠海马组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶（NOS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的影响及其脑保护作用。方法随机将162只Wistar大鼠分为癫痫组、FK506干预组、对照组各54只。采用匹鲁卡品腹腔注射制作SE模型,FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24、1?h 2次腹腔注射FK506,对照组注射等体积生理盐水;采用比色法和羟胺法分别检测海马组织中NO、MDA含量、NOS、SOD活性;采用免疫组化法检测海马组织神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的表达;采用HE染色观察神经元形态变化。结果与癫痫组相比,FK506干预组NO、MDA含量、NOS活性明显降低（P均＜0.01）,SOD活性在癫痫发作后12?h以内降低（P＜0.05）,在3?d之后升高（P＜0.01）;海马nNOS的表达降低（P＜0.01）,存活神经元增加。结论FK506可能通过抑制NOS/NO途径发挥抗癫痫和脑保护作用。     

大鼠全脑缺血再灌注后脑组织一氧化氮合酶的变化

目的 观察全脑缺血再灌注后神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthese，nNOS)与诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的变化，从而探讨一氧化氮在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 实验分为正常组、假手术组、缺血组，采用大鼠4血管夹闭方法制作全脑缺血再灌注模型，观察nNOS、iNOS在缺血20min再灌注2h、6h、1d、3d、5d、7d时的变化及大脑皮层、海马、丘脑的组织病理学改变。结果 nNOS在缺血再灌注后2h开始升高，1d达高峰，3d开始下降，iNOS在再灌注2h开始表达，3d达高峰，5d开始下降，并持续至7d。结论 脑缺血再灌流时nNOS和iNOS表达增强，尤其是iNOS在灌注后期表达，提示N0生成增多可能与缺血后迟发性神经元死亡有关。     

大鼠脑创伤后一氧化氮合酶对学习和记忆功能的影响

目的:探讨神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)和诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)对大鼠创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后空间学习和记忆的影响及7-硝基吲哚(7-nitroindazole,7-NI)和氨基胍(aminoguanidine,AG)的治疗作用。方法:将250只Wistar大鼠随机分成5组,按照Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性TBI,免疫组化检测海马CA1区nNOS和iNOS表达情况,原位细胞DNA断裂检测(TUNEL)法检测海马CA1区凋亡细胞,采用Morris水迷宫测试各组大鼠的空间学习和记忆情况。结果:大鼠TBI后海马CA1区存在nNOS和iNOS明显表达,nNOS在伤后6h左右达高峰(P<0.05),iNOS在伤后3天左右达高峰(P<0.05)。TUNEL阳性细胞于伤后3天达高峰(P<0.05),伤后6h7-NI治疗组和联合治疗组与创伤组比较减少明显(P<0.05),伤后3天各治疗组均减少,且以联合治疗组减少最为明显(P<0.05)。结论:大鼠TBI后学习和记忆功能下降与NOS过表达引起的神经毒性作用有关。7-NI和AG通过抑制nNOS和iNOS的活性或表达起到神经保护作用,改善了大鼠的学习和记忆功能。     

颞叶癫痫大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅲ和Ⅳ表达的变化

目的:探讨癫痫对大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶（COX）的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅲ、Ⅳ表达的影响。方法:将成年雄性Wistar大鼠40只随机分为生理盐水对照组,癫痫持续状态（SE）后急性期（3h）、静止期（7d）、慢性期（45d）组和注射匹鲁卡品（PILO）但未出现SE组,每组8只。荧光实时定量PCR和Western blot分别检测海马线粒体COX Ⅲ、Ⅳ mRNA和蛋白的表达。结果: COX Ⅲ mRNA和蛋白在SE后3h表达明显升高(P<0.001, P<0.01),7d时降到对照水平,45d显著降低(P<0.001, P<0.01);COX Ⅳ mRNA和蛋白在3h时表达较对照组升高,但差异无统计学意义（P＞0.05),7d和45d时下降至对照水平。注射PILO但无SE组与对照组结果类似。结论: 颞叶癫痫海马cox功能紊乱与痫性发作相关,线粒体编码的基因更易受痫性发作的影响。     

捕食应激致大鼠海马NO释放增多及nNOS表达增强

目的：探讨一氧化氮（NO）在创伤后应激障碍（PTSD）样行为异常大鼠的变化规律，以进一步揭示PTSD的神经生物学机制。方法：在大鼠捕食应激PTSD动物模型基础上，动态检测了大鼠海马、额叶皮层组织匀浆NO、一氧化氮合酶（NOS）含量及神经元型NOS（nNOS)表达。结果：PTSD样行为异常大鼠海马NO含量于捕食应激后即刻明显升高，12h达高峰，24h时仍明显增多；海马nNOS表达亦同步增高，而额叶皮层则无明显改变。结论：严重心理生理应激所致海马nNOS持续性高表达与NO释放明显增多，在实验大鼠持续性PTSD样行为异常中可能有重要作用。     

红藻氨酸致癫痫大鼠脑内一氧化氮合酶的动态表达研究

目的探讨一氧化氮合酶（NOS）的三种不同亚型nNOS、iNOS、eNOS在红藻氨酸（KA）了致癫痫SD大鼠模型中不同部位和不同时间的变化情况。方法KA点燃癫痫SD大鼠,随机分为对照组、KA组,在致痫1、7、14、21和28d各个时间点,观察大鼠癫痫发作后的行为学变化,脑电图描记,采用免疫组化的方法研究三种不同NOS（nNOS、iNOS和eNOS）的表达。结果注射KA后大鼠出现癫痫发作,7～28d可见癫痫慢性自发发作。EEG表现为尖、棘波节律,7～28d仍可见痫性活动。KA致痫后1d,nNOS在CA1、CA2、CA3区表达较对照组明显增多,7d时开始出现下降,在cA2、CA3区14d后又出现增多,在颞叶从1d开始就持续高水平的表达,而在齿状回和丘脑不同时间点nNOS阳性细胞表达都很低。iNOS在1d时各区表达均较对照组增高,之后在CA1、CA2、CA3区及颞叶阳性细胞出现减少,而在齿状回及丘脑7、14d有所下降,之后又出现高表达。eNOS在KA致痫后1d在CA1、CA2及齿状回区表达较对照组增高,7d时出现下降,之后叉出现增多,但eNOS阳性细胞在CA3区却表现为癫痫发作后1、7d时出现少,在14d以后才大量出现,并逐渐增加,在颞叶及丘脑,1d时与对照组无明显差异,7d时才开始表达增高,并持续高表达至28d。结论KA诱导癫痫发作大鼠脑内不同类型NOS在不同的时间和部位表达不同。     

黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响

目的探讨黄芩茎叶黄酮(flavonoids from stem and leaf ofscutellaria baicalensis georgi,SSF)对大鼠永久性慢性脑缺血引起记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响。方法雌性sprague-dawley(SD)大鼠双侧颈总动脉永久结扎2个月制备慢性脑缺血记忆障碍模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫组化测定海马细胞中胆碱乙酰转移酶(chloine acetyltransferase,ChAT)、神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达来探讨黄芩茎叶黄酮对大鼠缺血性记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰转移酶和一氧化氮合酶蛋白表达的影响。结果与假手术组相比,脑缺血模型组大鼠的学习记忆能力显著降低,找到平台的游泳路程显著延长;海马细胞中ChAT和eNOS蛋白表达显著降低;nNOS和iNOS蛋白表达显著增加。然而,17.5、35.0和70.0 mg/kg SSF灌胃给脑缺血大鼠38 d均能不同程度地改善学习记忆能力障碍,明显缩短大鼠找到平台的游泳路程;增加海马细胞中ChAT和eNOS蛋白的表达;抑制海马细胞中nNOS和iNOS蛋白的表达。结论 SSF对大鼠脑缺血性记忆障碍具有明显的改善作用,其作用机制可能与调节脑内ChAT和一氧化氮合酶的异常变化有关。     

KA致痫大鼠海马神经元凋亡和一氧化氮合成酶关系的研究

目的：探讨红藻氨酸（kainicacid，KA）诱导的癫痫大鼠海马神经元凋亡和一氧化氮合成酶在不同部位和致痫后不同时间的变化情况。方法：50只SD大鼠随机分为对照组、KA组，KA组再按癫痫发作后1d、1周、2周、3周和4周不同时点分为5个亚组。注射KA后，观察大鼠癫痫发作后的行为学变化，采用原位细胞凋亡检测法观察海马神经元凋亡情况；采用免疫组化的方法观察3种不同一氧化氮合成酶（iNOS、nNOS和eNOS）的表达。结果：KA注射后，大鼠出现严重的惊厥，癫痫发作后1d、1周即有大量的凋亡细胞出现在海马齿状回、CA1，CA2和CA3区，2、3周时下降，第4周出现另一个高峰，凋亡在齿状回和cA3区最明显。癫痫发作后早期即有大量的eNOS，iNOS和nNOS出现，另一方面，nNOS在齿状回表现为低表达，eNOS阳性细胞在齿状回、CA1、CA2区的表达也与凋亡的出现基本同步，而在CA3区却表现为癫痫发作后1d和1周出现少，在2周后才随时间的推移有逐渐增加，结论：凋亡参与KA致病大鼠癫痫发作后神经元死亡过程，eNOS，iNOS和nNOS与癫痫发作后早期的神经原凋亡相关，iNOS与齿状回癫痫后迟发的神经原凋亡可能有关；nNOS与CA2和CA3区的癫痫后迟发的神经原凋亡可能有关；eNOS对KA致痫大鼠癫痫发作后CA3区神经元凋亡可能有神经保护作用。     

HIF-1对大鼠心肌iNOS、VEGF蛋白表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1(HIF-1)对大鼠心肌诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法应用HIF-1活性诱导剂氯化钴预处理大鼠,观察大鼠心肌iNOS、VEGF蛋白表达的变化。结果HIF-1α、iNOS、VEGF蛋白表达在预处理前分别为0.57±0.04、1.39±0.07、5.87±0.58。HIF-1α在预处理后3h(3.88±0.62)显著增加(t=3.04,P<0.01),6h(12.82±0.58)达高峰(F=3.87,P<0.01);iNOS蛋白表达在预处理后3h(8.10±0.40)显著增加(t=2.95,P<0.01),24h(13.74±0.58)达高峰(F=3.92,P<0.01);VEGF蛋白表达在处理后1h(9.18±0.75)即显著增加(t=3.08,P<0.01),之后在预处理后3h(21.72±0.53)和12h(23.97±0.73)分别形成两个表达高峰(均F=3.58,P<0.01)。结论氯化钴预处理大鼠后,HIF-1可促进心肌内iNOS、VEGF蛋白的表达,同时VEGF表达增高可能还存在其他的作用机制。     

Effect of dexamethasone on nitric oxide synthase and Caspase-3 gene expressions in endotoxemia in neonate rat brain

INTRODUCTION Fifty percent to seventy percent of the patientsare complicated with brain damage at various degreesduring endotoxemia, which is characterized bydamage to the neurons, microvascular injury,increased endothelial permeability, and neutrophilinfiltration and accumulation in the brain. It has beenrecognized that bacterial endotoxin (lipopolysaccharideLPS) plays important roles in this pathophysiologicalprocess, but the mechanism and approach toprevention of brain damage during en…     

促红细胞生成素及其受体在大鼠视网膜光损伤后的表达

目的 观察大鼠视网膜光损伤后促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPOR）的表达变化。方法 选用32只雄性SD大鼠,其中29只建立视网膜光损伤大鼠模型（光损伤组）,另3只作为正常对照组。取正常对照组大鼠视网膜组织以及光损伤组大鼠光损伤后0、6、12、24、48、72 h和7、14 d的视网膜组织,分别采用Western blotting和RT-PCR法检测EPO、EPOR蛋白和mRNA的表达,并采用免疫组织化学法定位观察EPO和EPOR蛋白表达。结果 Western blotting检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR蛋白表达增加,光损伤后48 h达到高峰;光损伤组EPO蛋白的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR蛋白的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。RT-PCR检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR mRNA表达增加,分别于光损伤后24 h和48 h达到高峰;光损伤组EPO mRNA的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR mRNA的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学定位观察显示：视网膜光损伤后24 h,光感受器内外段EPOR蛋白表达略增强,EPO蛋白表达相对较弱。结论 大鼠视网膜光损伤后EPO和EPOR蛋白及mRNA表达增加,有一定的时效性,提示内源性EPO和EPOR参与视网膜光损伤的修复机制。     

他罗利姆对氯化锂-匹鲁卡品癫痫持续状态炎性因子表达的影响

目的   探索氯化锂-匹鲁卡品癫痫持续状态模型中炎性因子胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达及他罗利姆（FK506）对其表达的影响。方法   随机将健康成年雄性Wistar大鼠168只分为癫痫组、 FK506预处理组、对照组。采用HE染色观察癫痫持续状态（SE）后海马神经元的损伤情况,应用实时定量PCR、免疫组织化学染色方法,检测大脑皮层ICAM 1、VCAM-1、TNF-α mRNA及蛋白的表达。结果   与对照组比较,癫痫组SE5h TNF-α mRNA表达达到高峰, ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平在SE1d出现高峰,SE7d仍增高,FK506预处理则降低其表达。ICAM-1、VCAM-1蛋白在SE1d表达明显升高,FK506预处理则使其表达明显降低,海马神经元损伤明显减轻。结论   炎性因子介导的炎症反应在癫痫中可能发挥重要作用,FK506可通过抑制炎症反应发挥抗癫痫和脑保护作用。     

黄芪对大鼠脑出血灶周围神经元Caspase-3表达的影响

目的观察与比较黄芪甲苷和黄芪注射液对大鼠脑出血灶周围神经元Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达的影响。方法将128只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、黄芪注射液组、黄芪甲苷组。用药组于造模型后0h腹腔注射用药,继之每隔24h注射一次;正常组和模型组注射相应量的生理盐水。分别在1、2、3、7d通过免疫组化和RT-PCR方法来观察Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达以及二者的相关性。结果与正常组相比,模型组、黄芪注射液组、黄芪甲苷组Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显增加(P<0.05);黄芪甲苷和黄芪注射液的2、3、7d组分别与同时间点模型组比较,Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显降低(P<0.05);黄芪甲苷和黄芪注射液的7d组分别与各自的3d组比较,Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与黄芪注射液3、7d组相比,黄芪甲苷同时间点组的Caspase-3阳性细胞数和Caspase-3 mRNA表达均明显升高(P<0.05);Caspase-3 mRNA与Caspase-3阳性细胞数呈正相关(r=0.97,P<0.05)。结论黄芪甲苷和黄芪注射液可能是通过降低Caspase-3 mRNA转录,减少Caspase-3蛋白表达,抑制大鼠脑出血灶周围神经元凋亡;随着用药时间的延长,对出血灶周围神经元凋亡的抑制作用更强;黄芪甲苷对大鼠脑出血灶周围神经元凋亡的抑制作用不如黄芪注射液。     

脓毒症大鼠Fas-L、Caspase-3和NF-κB的表达与肝细胞凋亡的关系

目的　探讨脓毒症时Fas L、Caspase 3、NF κB在肝细胞凋亡信号转导中的作用。方法　Wistar大鼠 3 0只随机分为观察组和对照组 ,观察组 2 4只采用盲肠结扎穿孔术 (CLP)致脓毒症模型 ,以术后 2h、3h、4h、5h时限分为 4组 ,对照组 6只 ,不行CLP术。各组均测定肝脏组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达及肝细胞凋亡的情况 ,同时测定肝脏功能的变化。结果　CLP术后肝组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达升高与对照组相比有显著差异 ;3h组的Fas L、Caspase 3的含量达高峰 ,4h组的NF κB的含量达高峰 ;血浆中丙氨酸转氨酶 (ALT)、乳酸脱氢酶 (LDH)呈异常改变 ,CLP术后血浆中ALT、LDH增加 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 .0 1) ,ALT呈进行性增加 ,LDH以 4h组最显著。肝组织细胞凋亡指数呈进行性增加。结论　由CLP所致的脓毒症过程中 ,肝组织Fas L、Caspase 3蛋白表达升高 ,激活促细胞凋亡的程序 ;NF κB蛋白表达亦升高 ,NF κB活性增强 ,抑制细胞凋亡     

Calpain-1在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌中的表达及意义

目的：了解缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠心肌细胞凋亡和Calpain-1表达的变化。方法：采用改良的Rice法构建新生大鼠HIBD模型,64只大鼠随机分为对照组和HIBD后2、12、24 h及2、3、5、7 d组。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,并计数凋亡指数（AI）,RT-PCR法和Western blot法检测各组大鼠心肌中Calpain-1mRNA及蛋白活性的变化。结果：对照组偶见凋亡细胞,HIBD组凋亡细胞均明显增多（P〈0.01）,3 d达凋亡高峰（P〈0.001）,此后开始降低,7 d仍高于对照组（P〈0.001）。与对照组相比,Calpain-1mRNA于HIBD后12 h开始增高（P〈0.001）,2 d达到高峰,3～5 d表达量仍维持在较高水平（P〈0.001）;蛋白活性自HIBD后2 h增高（P〈0.05）,3 d达高峰（P〈0.001）后开始降低,7 d与对照组无统计学差异（P〉0.05）;Calpain-1 mRNA及蛋白活性均与AI呈直线正相关（r=0.786,P〈0.01;r=0.853,P〈0.01）。结论：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌中Calpain-1表达增强,且与细胞凋亡有关。     

牛磺酸对神经管畸形小鼠Caspase-3、Caspase-8表达的影响

目的探讨维甲酸（RA）致神经管畸形（NTDs）中牛磺酸对神经细胞凋亡的影响。方法建立NTDs模型并给予牛磺酸拮抗,观察神经细胞中Caspase-3、Caspase-8表达的变化。结果各组Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达在E11d达高峰,以后逐渐下降。RA组神经上皮细胞Caspase-3、Caspase-8蛋白在E9d～E13d的表达均高于对照组及牛磺酸组,差异有统计学意义（P〈0．05）。各组Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA在E10d达到高峰,以后逐渐下降。RA组Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA在E9d～E13d的表达均高于对照组及牛磺酸组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论牛磺酸可以拮抗RA引起的神经上皮细胞过度凋亡,其机理可能是通过下调Caspase-3、Caspase-8的表达实现的。     

外源性转化生长因子β1对大鼠癫痫持续状态后血脑屏障通透性的影响

目的:探讨经鼻腔给予外源性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus,SE)后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性的影响。方法:建立匹罗卡品(pilocarpine)SE模型。SD大鼠252只随机分成正常对照组、模型组和TGF组,各组设计7个观察时间点,即SE后3 h、6 h、24 h、2 d、3 d、4 d、7 d。各大鼠在相应的时间点处死取材,应用化学定量的方法检测大鼠脑组织内伊文思蓝(Evans blue,EB)的含量,应用免疫组织化学法检测相应时间点海马区的zonula occluden-1(ZO-1)蛋白的表达。结果:大鼠脑内的EB含量与正常对照组相比,模型组和TGF组都先增加,24 h达到峰值,后逐渐下降,7 d接近正常;TGF组与模型组比较,脑内EB含量均低于模型组,6 h至2 d增加均有统计学意义(P0.05～P0.01)。TGF组和模型组比较,海马区ZO-1蛋白的表达都是先降后升,以24 h为最低,其中6 h、24 h、2 d差异均有统计学意义(P0.05～P0.01),TGF组明显高于模型组,低于正常对照组。结论:经鼻腔给予外源性TGF-β1能降低大鼠SE后BBB的通透性。