促进体外培养人鼻中隔软骨细胞增殖方法的研究

目的 :研究促进人鼻中隔软骨细胞在体外增殖的方法 ,为人鼻中隔软骨细胞在软骨组织工程的应用提供方法和理论依据。方法 :研究三种培养基 (DMEM、F- 12、16 4 0 )、胰岛素、琼脂和肌苷对正常成人鼻中隔软骨细胞体外培养的影响。结果 :16 4 0培养基和新生牛血清适合进行人鼻中隔软骨细胞培养 ,胰岛素可保持软骨细胞生长 ,琼脂可促进软骨细胞表型稳定 ;在 16 4 0培养基条件下 ,肌苷对软骨细胞的生长无明显的促进作用。     

促进体外培养人鼻中隔软骨细胞增殖方法的研究

目的：研究促进人鼻中隔软骨细胞在体外增殖的方法，为人鼻中隔软骨细胞在软骨组织工程的应用提供方法和理论依据。方法：研究三种培养期（ＤＭＥＭ、Ｆ－１２、１６４０）、胰岛素、琼脂和肌苷对正常成人鼻中隔软骨细胞体外培养的影响。结果：１６４０培养基和新生牛血清适合进行人鼻中隔软骨细胞培养，胰岛素可保持软骨细胞生长，琼脂可促进软骨细胞表型稳定；在１６４０培养基条件下，肌苷对软骨细胞的生长无明显的促进作用。     

琼脂胰岛素对体外培养人鼻中隔软骨细胞生长增殖的影响

观察琼脂包埋培养皿后鼻中隔软骨细胞体外单层培养的生长状况 ,将胰岛素作用于鼻中隔软骨细胞 ,了解其对软骨细胞生长的影响 ,为软骨组织工程提供理论参考。一、材料和方法1.软骨细胞的培养 :无菌条件下取10例鼻中隔偏曲手术患者鼻中隔软骨 ,ＰＢＳ液 (含青霉素 2 0 0Ｕ/ｍｌ,链霉素 2 0 0μｇ/ｍｌ)漂洗 3次 ,剪成 1ｍｍ× 1ｍｍ× 1ｍｍ大小软骨碎片 ,ＰＢＳ液漂洗 2次 ,加入 2倍体积的Ⅱ型胶原酶 (3ｍｇ/ｍｌ,ｓｉｇｍａ公司 ,美国 ) ,37℃恒温震荡消化 ,过滤 ,离心 ,ＰＢＳ液漂洗 2次 ,离心 ,弃上清 ,16 40培养基 (ｓｉｇｍａ ,美国。含…     

转化生长因子-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化影响的研究

目的 了解转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-beta 1,TGF-β1)和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化的影响。方法 体外培养人鼻中隔软骨细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)代谢和35S-Na2SO4掺入的检测比较不同浓度TGF-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞的增殖以及软骨基质蛋白多糖合成的影响,观察TGF-β1和胰岛素对软骨细胞表型的影响。结果在15％血清的培养条件下,TGF-β1和胰岛素均能显著促进软骨细胞增殖,且在各自一定的浓度范围内呈量效关系,联合作用效果累加;TGF-β1、TGF-β1和胰岛素联合作用促使软骨基质蛋白多糖的合成量明显提高;TGF-β1使传代软骨细胞去分化提前。结论一定浓度的TGF-β1、胰岛素和TGF-β1 胰岛素对体外培养的人鼻中隔软骨细胞具有显著的促增殖作用。     

转化生长因子-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化影响的研究

目的 了解转化生长因子-β1(transforming growth factor-betal，TGF—β1)和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化的影响。方法 体外培养人鼻中隔软骨细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)代谢和^35S-Na2SO4掺入的检测比较不同浓度TGF-β1和胰岛素对人鼻中隔软骨细胞的增殖以及软骨基质蛋白多糖合成的影响，观察TGF-β1和胰岛素对软骨细胞表型的影响。结果 在15％血清的培养条件下，TGF-β1和胰岛素均能显著促进软骨细胞增殖，且在各自一定的浓度范围内呈量效关系，联合作用效果累加；TGF—β1、TGF—β1和胰岛素联合作用促使软骨基质蛋白多糖的合成量明显提高；TGF-β1使传代软骨细胞去分化提前。结论 一定浓度的TGF—β1、胰岛素和TGF-β1 胰岛素对体外培养的人鼻中隔软骨细胞具有显著的促增殖作用。     

人鼻中隔软骨细胞培养法的改良及其生物学特性观察

目的 对人鼻中隔软骨细胞培养法进行改良并观察改良法培养的人鼻中隔软骨细胞的生物学特性.方法 采用软骨细胞悬液和软骨块共同培养法体外培养人鼻中隔软骨细胞,对其进行倒置相差显微镜动态观察、甲苯胺蓝异染和Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色,并测定^35S-Na2SO4掺入量以观察软骨细胞蛋白多糖合成量,在细胞表型和功能方面进行鉴定并与单纯细胞悬液培养法比较.结果 改良法获得的人鼻中隔软骨细胞存活率高,量更多,且细胞的生长过程、特殊染色无明显差别,^35S-Na2SO4掺入量与常规法差异无显著性意义（P＞0.05）.结论 软骨细胞悬液和软骨块共同培养法是一种可行的细胞培养法,培养的人鼻中隔软骨细胞生物特性良好.     

一般问题

20021342定向诱导人骨髓间干细胞向软骨细胞分化的初步研究/江逊…//中华耳鼻咽喉科杂志一2002,37(2)一137一139 目的:采用组织工程方法,将人骨髓间质干细胞(MSC)在体外培养后,诱导为软骨细胞,为软骨的修复和重建提供条件。方法:根据5例的预实验经验,采用12例开胸手术所取正常肋骨分别实验。将肋骨剪开,用含双抗的不完全培养基反复冲洗骨髓腔得到骨髓液,经密度梯度离心获得单个核细胞,体外培养、分离获得人骨髓MSC,经无血清培养诱导液进行诱导培养,透射电镜观察细胞外基质形成及超微结构,免疫组化检测MSC亚型胶原表达。结果:12例的肋骨…     

不同年龄人鼻中隔软骨细胞生物学特性观察

目的观察年龄因素对体外培养的人鼻中隔软骨细胞生物学特性的影响。方法体外培养不同年龄组人鼻中隔软骨细胞,观察其生物学形态、细胞增殖周期、甲苯胺蓝异染和Ⅱ型胶原的免疫组化染色,并测定35S-Na2SO4掺入量以观察对软骨细胞蛋白多糖合成量的影响,在细胞特性和增殖特征方面进行比较。结果各组间软骨细胞的形态、传代特征及传代数、组织学检测无明显差异,细胞倍增时间随年龄增大而下降,软骨细胞蛋白多糖合成量随体外时间延长而上升,不依赖年龄。结论人鼻中隔软骨细胞生物学特性总体上不依赖年龄,其作为软骨组织工程的潜在种子细胞来源具有广泛的年龄段。     

喉科学

20050360组织工程化喉软骨的构建/孙安科…//中华耳鼻咽喉科杂志.2004,39(9).606～611目的:研究组织工程化喉支架软骨的构建方法。方法:酶消化法获取幼兔肋和关节软骨细胞并进行体外培养,传代时延长胰蛋白酶作用时间3～5min,收集第3代培养的软骨细胞用于实验;采用溶液浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉形态聚羟基烷酸酯类(PHBHH)生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞PHBHH复合物,体外共同培养1周后,分别在成兔体内用大网膜充填复合物中空部分与整体包裹、腹内成形(9只动物)和背部筋膜瓣与肌肉组织共同充填与包裹复合物、皮下成形(9只)…     

一般问题

20050309同种脱细胞软骨基质与软骨细胞体外培养的实验研究/杨彩荣…//中国耳鼻咽喉颅底外科杂志.2004,10(5).274～275目的:研究脱细胞软骨基质能否作为一种软骨细胞培养支架及其对软骨细胞的影响。方法:将脱细胞软骨基质与软骨细胞体外复合培养,通过相差显微镜和组织学分析,观察脱细胞软骨基质变化及软骨细胞的生长情况。结果:软骨细胞能在脱细胞软骨基质表面生长,脱细胞软骨基质经过培养无降解变形,结构与培养前基本相同。结论:脱细胞软骨基质对软骨细胞无毒性作用,作为一种天然软骨细胞培养支架,脱细胞软骨基质在细胞空穴之间的贯通方面…     

定向诱导人骨髓间质干细胞向软骨细胞分化的初步研究

目的　采用组织工程方法 ,将人骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSC)在体外培养后 ,诱导为软骨细胞 ,为软骨的修复和重建提供条件。方法　根据 5例的预实验经验 ,采用 12例开胸手术所取正常肋骨分别实验。将肋骨剪开 ,用含双抗的不完全培养基反复冲洗骨髓腔得到骨髓液 ,经密度梯度离心获得单个核细胞 ,体外培养、分离获得人骨髓MSC ,经无血清培养诱导液进行诱导培养 ,透射电镜观察细胞外基质形成及超微结构 ,免疫组化检测MSCⅡ型胶原表达。结果　 12例的肋骨骨髓MSC分别体外培养 2周后见细胞融合 ,传代培养并进行诱导 ,部分细胞开始由梭形转变为圆形 ,并分泌基质 ,甲苯胺蓝染色呈阳性 ;MSCⅡ型胶原表达阳性。结论　人MSC在体外能诱导为软骨细胞 ,可用于组织工程软骨组织的构建 ,是一种有重要意义的“种子细胞”。     

鼻中隔软骨细胞组织工程法构建预定形态软骨

目的探讨利用人鼻中隔软骨细胞组织工程方法构建预定形态软骨的可能性。方法将人鼻中隔软骨细胞播种在聚乙醇酸（polyglycolicacid,PGA）无纺网支架材料上,制成片状和管状结构,埋入裸鼠体内,经4、6、8周后取材作大体及组织学观察。结果大体观察见裸鼠体内形成了预定的片状和管状软骨。组织学观察6周时软骨细胞基本成熟,Masson三色染色显示胶原形成,番红花-“O”染色证实其基质中存在糖氨多糖。对照组于6周时PGA纤维基本消失。结论人鼻中隔软骨细胞与PGA无纺网复合可在裸鼠体内形成预定形态软骨。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔甲状软骨细胞增殖的影响

1995年Ｃａｏ等[1] 将牛关节软骨细胞植入预先塑形的生物可降解材料 ,再移植到裸鼠背部皮下 ,成功地制造出了组织工程人耳廓软骨。本实验研究碱性成纤维细胞生长因子(ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ)对兔甲状软骨细胞体外扩增的影响 ,旨在探索软骨细胞体外扩增的方法。一、材料与方法1 主要试剂 :ｂＦＧＦ和ＤＭＥＭ (ＤｕｌｂｅｃｃｏｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅｍｅｄｉｕｍ)培养基 (Ｇｉｂｃｏ,美国 ) ,小牛血清 (成都哈里生物工程有限公司 ) ,Ⅱ型胶原酶 (Ｓｉｇｍａ,美国 ) ,3 Ｈ 胸腺嘧啶核苷 (3 …     

培养状态下成人鼻中隔软骨细胞生物学特性的研究

目的：研究体外２的正常成人鼻中隔软骨细胞的生物学特性。方法：体外培养成我鼻中隔软骨细胞，观察原代及传代培养的形态学变化；测定细胞数量的变化及其生长曲线，观察细胞的增殖；借助特殊染色、免疫组织化学的方法了解糖胺聚糖、碱性磷酸酶、Ⅱ型胶原的合成情况，测定冷冻复苏后的细胞存活。结果：初始接种细胞为圆形，细胞贴壁后４ｄ细胞逐渐变为放射延异状；从第５代开始绝大部分细胞转变成纤维样细胞。２代细胞体外培养至第５     

定向诱导人骨髓间质干细胞向软骨细胞分化的初步研究

目的 采用组织工程方法，将人骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）在体外培养后诱导后，诱导为软骨细胞，为软骨的修复和重建提供条件。方法 根据5例的项实验经验，采用12例开胸手术所取正常肋骨分别实验。将肋骨剪开，用含双抗的不完全培养基反复冲洗骨髓腔得到骨髓液，经密度梯度离心获得单个核细胞。体外培养、分离获得人内髓MSC，经无血清培养诱导液进行诱导培养，透射电镜观察细胞外基质形成及超微结构，免疫组化检测MSCⅡ型胶原表达。结果 12例的肋骨骨髓MSC体外培养2周后见细胞融合，传代培养并进行诱导。部分细胞开始由梭形转变为圆形，并分泌基质，甲苯胺蓝染色呈阳性；MSCⅡ型胶原表达阳性。结论 人MSC在体外能诱导为软骨细胞，可用于细胞工程软骨组织的构建，是一种有重要意义的“种子细胞”。     

人类鼻中隔软骨生长活性:不同解剖部位与标记硫酸盐结合随年龄的变化

过去100多年,鼻中隔软骨部分切除已成为矫正中隔偏曲的常规手术,但对人类鼻中隔软骨出生后的生长情况知之甚少。现广泛应用在体外用~(35)S标记的NaSO_4与含存于人血清软骨结合的方法,认为它是观察软骨组织合成的一个合适指标。作者用本法研究取自人中隔软骨不同部位的小的活检材料,并得出不同年龄的生长活性。作者们作保守的鼻中隔成形术36例(男19、女17)。青春前期儿童9例,年龄6～10岁;青春期15例,年龄11～16岁;成年12例,年龄18～35岁。从中隔不同解剖部位切除小块软骨,包括中隔软骨前部游离缘、前上颌上部、中隔软骨与筛骨垂直板交界处的软骨后部和中隔软骨尾部的延伸部分。把取下的软骨放在生理盐水中,立即     

喉鳞状细胞癌癌细胞的原代培养

目的:探讨喉鳞状细胞癌组织原代培养的细胞特性、生长状况及生长条件,比较胶原酶消化培养与 胰蛋白酶消化培养对原代细胞的影响,为喉鳞状细胞癌细胞的原代培养研究提供实验基础。方法:应用细胞培养 技术,对21例人喉鳞状细胞癌组织分别用胶原酶消化和胰蛋白酶消化进行体外培养,其培养基加有5%(V/V) 低浓度胎牛血清的RPMI1640,观察人喉癌细胞生长情况。结果:胶原酶消化培养优于胰蛋白酶消化培养,胶原 酶消化培养细胞生长率为58%,胰蛋白酶消化培养细胞生长率为13%(χ2=7.048,P<0.05),低浓度血清培养 基可抑制成纤维细胞的生长。结论:胶原酶消化培养优于胰蛋白酶消化培养,喉癌细胞培养的关键是防止污染及 成纤维细胞的过度生长。     

组织工程化喉软骨的构建

目的 研究组织工程化喉支架软骨的构建方法。方法 酶消化法获取幼兔肋和关节软骨细胞并进行体外培养,传代时延长胰蛋白酶作用时间3-5 min,收集第3代培养的软骨细胞用于实验;采用溶液浇铸、模压成形和颗粒滤沥方法制备喉形态聚羟基烷酸酯类[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate,PHBHH)]生物材料塑形物,接种软骨细胞形成细胞-PHBHH复合物,体外共同培养1周后,分别在成兔体内用大网膜充填复合物中空部分与整体包裹、腹内成形(9只动物)和背部筋膜瓣与肌肉组织共同充填与包裹复合物、皮下成形(9只)的方法将负载软骨种子细胞的喉形态材料塑形物植入腹腔和背部,设空白对照组(每批3只)。术后一定时间取材,大体形态观察、组织学和免疫组织化学检测评估工程化喉软骨的成形与再生情况。结果 获取的软骨细胞活性为(93±2)％,传统方法为(94±2)％(P>0.05)。制备的喉形态生物材料塑形物呈中空半面喇叭状,液体(乙醇)静态容积测定孔隙率>90％。两种体内植入法均构建出喉形态组织工程化组织,大体形态维持良好,组织学和免疫组织化学均证实为软骨组织,且形态学和组织学表现两者基本一致。结论 改良培养细胞传代过程中胰酶作用程度未影响软骨细胞的成软骨性能;PHBHH可作为喉形态塑形物的塑形和构建组织工程化软骨的     

人软骨细胞的培养及冷冻保存

由于新鲜软骨来源有限,有必要建立异体移植软骨库。冷冻保存法能使软骨细胞长期存活并维持其正常的代谢和生物学特性。鼻中隔软骨取自重建手术中或尸体材料,共15例,年龄5～80岁。经消化酶消化、孵育、过滤。从标本中的软骨中分离软骨细胞,进行细胞的计数,用台盼蓝染料测定细胞活性。以不同培养基孵育分离出的软骨细胞,倒置显微镜观察不同孵育期软骨细胞增殖情况。上述细胞经冷冻     

鼻中隔软骨细胞细胞组织工程法构建预定形态软骨

目的 探讨利用人算中隔软骨细胞组织工程方法构建预定形态软骨的可能性。方法 将人鼻中隔软骨细胞播种在聚乙醇酸（polyglycoli acid,PGA)无纺网支架材料上，制成片状和管状结构，埋入裸裸鼠体内，经4、6、8周后取材作大体及组织学观察。结果 大体观察见裸 本内形成了预定的片状和管状软骨。组织学观察：6周时软骨细胞基本成熟，Masson三色染色显示胶原形成，番红花－“O”染色证实其基质中存在糖多糖。对照组于6周时PGA纤维基本消失。结论 人鼻中软骨细胞与PGA无纺网复合可在裸鼠体内形成预定形态软骨。