同型半胱氨酸抑制培养的大鼠血管平滑肌细胞牛磺酸转运

为了研究同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞牛磺酸转运的影响 ,采用培养的大鼠血管平滑肌细胞和3 H标记的牛磺酸 ,并测定血管平滑肌细胞牛磺酸转运。实验发现 ,同型半胱氨酸呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞转运牛磺酸 ,1 0 0 μmol L和 50 0 μmol L同型半胱氨酸组血管平滑肌细胞牛磺酸转运的最大速率 (Vmax)较对照组分别降低 31 % (P <0 .0 5)和 51 % (P <0 .0 1 ) ,但组间Km值无显著差异 ;5mmol LH2 O2 亦抑制血管平滑肌细胞牛磺酸摄入 ,Vmax较对照组降低 48% (P <0 .0 1 ) ,但Km值增加 45 % (P <0 .0 1 ) ,其转运效率 (Vmax Km)较 50 0 μmol L同型半胱氨酸组更低 (3 .72± 0 .32比 5 .33± 0 .69,P <0 .0 1 )。 2 0mmol L牛磺酸和 50 0 μmol L同型半胱氨酸同时孵育 ,血管平滑肌细胞牛磺酸转运较 50 0 μmol L同型半胱氨酸组增加 ,Vmax增加 35 % (P <0 .0 5) ,两组间Km值亦无显著差异 ,转运效率增加 40 % (P <0 .0 5)。结果提示 ,同型半胱氨酸抑制血管平滑肌细胞牛磺酸转运 ,其机制不能用同型半胱氨酸产生过氧化物来解释 ,外源性给予牛磺酸可拮抗同型半胱氨酸抑制血管平滑肌细胞牛磺酸转运障碍     

牛磺酸对重度颅脑创伤大鼠脑组织AQP4/牛磺酸转运体基因的影响

目的研究牛磺酸（Tau）对重度颅脑创伤（TBI）大鼠脑组织的脑组织含水量、水通道蛋白-4（AQP-4）/Tau转运体（TAUT）基因表达的影响。方法按随机数字表法将84只雄性SD大鼠分为7组：假手术组（Sham组）、脑外伤组（TBI组）、Tau治疗组（Tau组）,Tau预防组（Pre-Tau组）、β-丙氨酸组（β-Ala组）、维生素C组（Vc组）、叶酸组（Fa组）,每组12只。后6组均采用液压打击制作重度TBI模型。造模成功后即刻尾静脉给药200 mg/kg。Sham组和TBI组给予相同量等渗盐水,24 h后取脑。采用HE染色法观察TBI后各组脑组织形态学变化、测定脑组织含水量,用荧光定量RT-PCR方法检测AQP-4/TAUT基因表达。结果形态学检查：TBI 24 h后,神经细胞肿胀,细胞丢失,细胞核固缩,突起短小消失,坏死灶边缘可见炎性细胞浸润,β-Ala组同TBI组。但与TBI组比较,Tau组、Vc组、Fa组、Pre-Tau组形态上无显著改善;脑组织含水量：与Sham组相比,TBI组、β-Ala组伤后24 h显著升高（P〈0.05）。而Tau组、Vc组、Fa组明显降低,与Sham组无统计学差异;Pre-Tau组显著低于Sham组（P〈0.05）。基因表达：与Sham组相比,TBI组脑组织AQP-4 mRNA表达量显著升高（P〈0.05）,Fa组TAUT mRNA表达量显著升高（P〈0.05）。结论 Tau、Vc、Fa及Tau预防性治疗均可以显著降低脑水肿和AQP-4基因表达,对TBI后脑水肿有较好的治疗作用,但Tau、Vc对TBI早期的TAUT无调节作用,其对脑组织含水量的有效性并不是通过调节TAUT实现的。     

牛磺酸治疗对陈旧性心肌梗死患者心功能的影响

牛磺酸是机体内含量极为丰富的氨基酸，在心肌细胞内约占游离氨基酸总含量的５０％，具有调节细胞钙稳定［１］、抑制细胞脂质过氧化［２］、维持细胞内的渗透压和稳定细胞膜等多种细胞保护效应。牛磺酸缺乏常和许多心血管疾病相联系，外源性牛磺酸可改善心肌缺血［３］、...     

牛磺酸对兔动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨牛磺酸对兔动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3蛋白表达的影响.方法:将24只日本大耳白兔随机分为正常对照组、高脂模型组和牛磺酸组,14周后观察各组主动脉组织病理形态学改变,透射电镜观察斑块内平滑肌细胞超微结构变化,流式细胞术检测动脉粥样斑块内平滑肌细胞凋亡率,免疫组化染色法检测凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达,Western blot蛋白印记法检测caspase-3蛋白表达.结果:高脂模型组与正常对照组比较,动脉内膜出现典型的斑块,管腔极度狭窄,典型的凋亡平滑肌细胞明显增多,平滑肌细胞凋亡率、bax及caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),bcl-2蛋白表达降低(P<0.05).牛磺酸组与高脂模型组比较,主动脉斑块缩小,动脉管腔狭窄减轻,凋亡平滑肌细胞不典型且较少,平滑肌细胞凋亡率、bax蛋白表达及caspase-3蛋白表达降低(P<0.01),bcl-2蛋白表达升高(P<0.05).结论:牛磺酸可能通过对bcl-2、bax及caspase-3蛋白表达的调控而降低动脉斑块内过度凋亡的平滑肌细胞,从而抑制粥样斑块的形成.     

反义凝血酶受体基因序列对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

为了研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增埴中的作用 ,探讨反义凝血酶受体基因序列对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ;用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ;用Western blot检测反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 ;用3 H 肌醇掺入率检测反义凝血酶受体序列抑制血管平滑肌细胞磷酸肌醇代谢的影响。结果发现 ,反义凝血酶受体基因序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 .0 5 ) ;明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 ;明显抑制了血管平滑肌细胞磷酸肌醇代谢。提示反义凝血酶受体基因序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ;凝血酶受体反义序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 (特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达 ) ,抑制细胞内信号传递来完成     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞增殖及小凹蛋白1表达的影响

目的观察降钙素基因相关肽在抑制血管平滑肌细胞增殖或肥大过程中是否伴有诱导其凋亡的作用,并探讨其作用机制是否涉及到血管平滑肌细胞内小凹蛋白1和caspase-3的变化。方法采用贴块法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,增殖或肥大型血管平滑肌细胞通过血管紧张素Ⅱ刺激静止期血管平滑肌细胞24 h建立。用噻唑蓝比色法和流式细胞仪分析血管平滑肌细胞增殖、凋亡及细胞周期变化,吖啶橙/溴化乙啶染色观察细胞及细胞核形态改变,Western blotting法测定不同状态下血管平滑肌细胞内小凹蛋白1和caspase-3的表达。结果降钙素基因相关肽能降低血管紧张素Ⅱ诱导的增殖型血管平滑肌细胞的代谢活性、细胞周期增殖指数(P<0.05);形态学及流式细胞仪分析表明降钙素基因相关肽对增殖型血管平滑肌细胞无明显的诱导凋亡作用。同时发现降钙素基因相关肽使血管平滑肌细胞内小凹蛋白1的表达增加,而对caspase-3的表达无明显影响。结论降钙素基因相关肽能显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖,但诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用较小;其抑制增殖的细胞内信号传导途径可能与增强小凹蛋白1表达有关。     

成骨细胞表达2-氨基乙磺酸转运体

通过RT-PER、蛋白免疫印迹和免疫细胞化学方法检测2-氨基乙磺酸转运体(taurine transporter,TAUT)在成骨细胞的表达.采用[3H]-2-氨基乙磺酸摄取评价成骨细胞TAUT的功能.结果 发现TAUT mRNA和蛋白均在成骨细胞表达,在成骨细胞分化过程中,TAUT的功能逐渐增强.     

牛磺酸对大鼠被动型Heymann肾炎的疗效观察

牛磺酸 (Ｔａｕｒｉｎｅ ,Ｔａｕ)是广泛分布于动物组织细胞内的含硫 β 氨基酸。近年研究发现其具有膜稳定作用、抗脂质过氧化损伤和免疫调节等广泛生物效应。至于牛磺酸对肾小球疾病的保护作用 ,目前国内尚未见报道。本研究以大鼠被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎 (ｐａｓｓｉｖｅＨｅｙｍａｎｎｎｅｐｈｒｉｔｉｓ ,ＰＨＮ)为对象 ,初步观察了牛磺酸的治疗效果。一、材料与方法1.ＰＨＮ模型制备 :参照Ｌｏｔｏｎ等[1] 方法提取鉴定致Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎的大鼠近曲小管刷状缘微绒毛 (ｂｒｕｓｈｂｏｒｄｅｒｍｅｍｂｒａｎｅ,ＢＢＭ) ,免疫新西兰…     

γ干扰素对鼠源性平滑肌细胞内源性CXC配体16表达及细胞内脂质蓄积的影响

目的观察重组大鼠细胞因子γ干扰素对鼠源性平滑肌细胞内源性CXC配体16的表达及对细胞内脂质蓄积的影响。探讨重组大鼠γ干扰素对CXC配体16的改变与细胞内脂质蓄积是否有关。方法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用重组大鼠γ干扰素作用于平滑肌细胞,通过逆转录聚合酶链反应检测细胞内CXC配体16mRNA的表达;用重组大鼠γ干扰素和氧化型低密度脂蛋白先后作用于平滑肌细胞,高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇蓄积情况。结果γ干扰素可诱导鼠源性平滑肌细胞内源性CXC配体16 mRNA的表达增加;与仅有氧化型低密度脂蛋白孵育组相比,经γ干扰素和氧化型低密度脂蛋白共同孵育组的细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值显著增高。结论γ干扰素可能通过上调鼠源性平滑肌细胞内CXC配体16的表达,从而进一步促进细胞内脂质蓄积。     

血管平滑肌细胞增殖及其调控

血管壁受损是导致血管平滑肌细胞增殖的起始原因,损伤刺激通过细胞内的信号转导可引起许多原瘤基因的表达和细胞的因子生成,从而使血管平滑肌细胞增殖和凋亡的平衡被打破,导致血管平滑肌细胞过分增殖,通过干预细胞内信号转导通路或／和调节相关基因的表达以阻断血管平滑肌细胞增殖可望成为治疗此类心血管疾病的有效途径。     

有机阴离子转运蛋白3在人血管平滑肌细胞的表达

目的检测有机阴离子转运蛋白3（OAT3）及其mRNA在人血管平滑肌细胞的表达,并观察尿酸刺激对其表达的影响。方法分离培养人脐动脉血管平滑肌细胞,随机分为正常对照组及尿酸处理组,提取细胞总RNA,RT-PCR方法扩增特异性OAT3 cDNA片段,制备探针,用Northern blot方法检测各组OAT3 mRNA的表达。提取细胞膜蛋白,用Westernblot方法检测各组OAT3的蛋白表达。结果在正常对照组人血管平滑肌细胞可检测到OAT3mRNA和蛋白的表达。与对照组相比,尿酸处理组血管平滑肌细胞OAT3的表达在mRNA及蛋白水平均显著上调（P<0.05,n=3）。结论人血管平滑肌细胞表达OAT3,尿酸处理可以使其表达上调。提示OAT3可能部分介导血管平滑肌细胞对尿酸的摄取过程。     

牛磺酸抗动脉粥样硬化作用研究进展

牛磺酸生物学作用广泛,具有保护血管内皮,抑制血管平滑肌细胞增殖,抗氧化,促进高脂血症动物模型的胆固醇代谢和排泄,抑制血管钙化,抗凝血等多种作用。现就最近的研究对其抗动脉粥样硬化的作用机制作一综述。     

血小板源生长因子B及其受体β与支气管哮喘血管再生与重塑

目的进一步明确支气管哮喘时血管相关因子血小板源生长因子B（PDGFB）和血小板源生长因子受体β（PDGFRβ）在支气管哮喘小鼠模型气管及肺组织中的变化和作用。方法在建立小鼠支气管哮喘模型的基础上,应用免疫荧光染色和HE染色计数血管平滑肌细胞数量变化,应用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）方法检测气管和肺组织PDGFB及其受体（PDGFB／PDGFRβ）mRNA表达情况,应用Westernblot方法检测PDGFB／PDGFRβ蛋白水平。结果①血管平滑肌细胞数量在支气管哮喘急性期减少,在慢性期又恢复正常;②应用RT—PCR技术及琼脂糖凝胶电泳,PDGFBmRNA及PDGFRβmRNA在正常气管未检测到,而在慢性延长期哮喘小鼠气管组织PDGFBmRNA显示出清晰的条带。周围肺组织在正常小鼠也表达PDGFBmRNA,哮喘小鼠肺组织表达增强,在慢性延长期表达明显增加。应用Westernblot蛋白检测技术,哮喘小鼠气管及肺组织PDGFB及PDGFRβ蛋白表达情况与基因检测结果相一致。结论PDGFB和PDGFRβ基因与蛋白表达水平在支气管哮喘气管及肺组织均增加,特别在慢性延长期,PDGFB和PDGFRβ表达改变是血管平滑肌细胞数量变化的重要因素。PDGFB和PDGFRβ系统在支气管哮喘气道血管再生和重塑过程中可能起着重要的作用。     

阿托伐他汀对ox—LDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞妊娠相关血浆蛋白-A的影响

目的观察阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）妊娠相关血浆蛋白-A（PAPP—A）的影响,探讨阿托伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）的机制。方法SD大鼠VSMCs体外原代培养,用不同浓度ox-LDL（75、150、300μg／ml）处理不同时问（2,12 and 24h）构建VSMC损伤模型。使用RT—PCR及Western Blotting测定VSMCs PAPP-A mRNA和蛋白的表达。观察阿托伐他汀干预后,VSMC PAPP—A mRNA和蛋白表达的变化。结果ox—LDL干预后,VSMCs PAPP—A mRNA和蛋向的表达呈剂量和时间依赖性升高;300μg／ml ox—LDL处理12h和24h后,PAPP—A mRNA和蛋白表达水平较对照组明显升高（P〈0．01）;而阿托伐他汀干预后,PAPP—A mRNA和蛋白表达明显下降（P〈0．01）。结论阿托伐他汀可以调控ox—LDL诱导的PAPP-A mRNA和蛋白表达,提示其抗AS的机制与PAPP—A有关。     

跨膜蛋白16A在原发性高血压患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞中的表达和意义

目的探讨跨膜蛋白16A（TMEM16A）在原发性高血压患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞中的表达和意义。方法运用westernblot技术对比检测高血压组和正常组的肠系膜动脉平滑肌细胞上TMEME16A的表达情况。结果①人的肠系膜动脉血管平滑肌细胞存在TMEM16A;②高血压组患者TMEM16A表达明显下降（IOD：1．228±0．108,P=0．009）。结论原发性高血压患者的肠系膜动脉血管平滑肌的TMEME16A表达下降,提示TMEME16A可能参与原发性高血压的发生过程。     

腹主动脉瘤血管平滑肌细胞凋亡和自噬研究

目的探讨血管平滑肌细胞(SMC)凋亡和自噬与腹主动脉瘤(AAA)发病的关系。方法采用原位末端DNA标记(TUNEL)技术观察AAA和人正常主动脉组织中SMC凋亡的情况,并用免疫组织化学分析其中LC3的蛋白表达。提取AAA和正常主动脉组织RNA,采用RT-PCR方法检测其中与自噬相关的基因Beclin1、Atg4b、Bnip3、Vps34的表达。结果 AAA组织中凋亡的SMC明显高于正常主动脉组织(P0.05);LC3蛋白在AAA中的表达高于正常主动脉组织(P0.05);AAA中Beclin1、Atg4b、Bnip3、Vps34表达水平明显高于正常主动脉组织(P0.05)。结论 SMC凋亡和自噬在AAA的发病中起重要作用。     

开胃进食汤超微配方颗粒对脾虚大鼠胃肠平滑肌钙调蛋白mRNA表达的调节作用

[目的]研究开胃进食汤超微配方颗粒对脾虚大鼠胃肠平滑肌细胞钙调蛋白（CAM）mRNA表达的影响,探求其对大鼠胃肠动力调节作用的可能机制。[方法]采用利血平致脾虚模型,大鼠随机分为正常组、模型组、开胃进食汤超微配方颗粒（超微）组、传统汤剂（传统）组和健胃消食片对照（健胃）组,用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）半定量分析,观察各组CaMmRNA表达情况。[结果]模型组大鼠胃窦平滑肌内CaMmRNA表达明显减少,空肠平滑肌内明显增强（P〈0．05）;健胃组、传统组和超微组胃窦平滑肌内CaMmRNA表达较模型组增强（P〈0．05）,传统组和超微组空肠平滑肌内CaMmRNA表达低于模型组（P〈0．05,〈0．01）。[结论]开胃进食汤超微配方颗粒能促进胃窦平滑肌收缩和空肠平滑肌舒张,可能与其能明显提高胃窦平滑肌组织内和降低空肠平滑肌组织内CaMmRNA水平表达有关。     

内质网应激PERK途径在高糖诱导血管平滑肌细胞向成骨样细胞转化中的作用

目的：研究高糖刺激SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）向成骨样细胞转分化中内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）途径的作用。方法原代培养VSMCs,分为正常对照组（5mmol/L D-葡萄糖）,甘露醇组（5mmol/L D-葡萄糖＋25mmol/L甘露醇）,高糖组（30mmol/L D-葡萄糖）,高糖＋PERK-小干扰RNA（siRNA）转染组（30mmol/L D-葡萄糖＋PERK-siRNA转染）,高糖＋RNA干扰阴性对照组（30mmol/L D-葡萄糖＋乱序RNA转染）。分别作用48和72h。逆转录-聚合酶链反应及Western blot分别从信使RNA（mRNA）和蛋白质水平检测不同时间点内质网应激相关分子GRP78、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4的改变,以及成骨样细胞标志性分子核心转录因子（Cbfα-1）、骨钙素以及平滑肌细胞标志性分子α-SMA的改变情况。应用碱性磷酸酶（ALP）活性检测试剂盒检测ALP的活性。结果与正常对照组和甘露醇组比较,在mRNA水平,高糖组和高糖＋RNA干扰阴性对照组PERK和eIF2α表达升高（P＜0.05）,PERK-siRNA转染后其表达水平均降低（P＜0.05）,在蛋白质水平,PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α表达升高（P＜0.05）,PERK-siRNA干预后其表达均降低（P＜0.05）。高糖刺激VSMCs后ALP活性升高（P＜0.05）,PERK-siRNA转染后其表达均降低（P＜0.05）。结论内质网应激PERK途径在高糖诱导VSMCs由收缩表型向成骨样细胞表型转化中发挥作用,抑制PERK途径可以部分阻止这一转化过程。