中药复方搏癌丸对人肝癌细胞周期及bax、bcl-2、p53基因表达调控的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌细胞HepG2周期及相关调控基因表达的影响.方法:采用药物血清和细胞药理学方法:①用流式细胞仪观察搏癌丸对人肝癌HepG2细胞凋亡及周期的影响.②用免疫组织化学染色(SABC)法检测搏癌丸3个有效药物血清浓度对bax、bcl-2、p53基因表达的调控.结果:①10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,FCA检测的细胞凋亡率为25.34%,均显著高于相应无药血清对照组的3.54%,P＜0.05.②能上调HeG2细胞凋亡调控基因bax、p53的表达,与无药血清对照组比较,差异有显著性意义,P＜0.05,且呈剂量依赖关系.结论:搏癌丸诱导HepG2细胞凋亡的作用机制之一可能是上调促凋亡基因bax和p53的表达.     

膈下逐瘀汤加减方对人肝癌细胞bax、bcl-2、P53基因表达调控的影响

目的：探讨膈下逐瘀汤加减方（GXZY）时人肝癌细胞bax、bcl-2、P53基因表达调控的影响。方法：制备5组试验血清：不合药物血清（无药血清组），阳性对照药物复方斑蝥胶囊含药血清（阳性血清组）和GXZY低、中、高浓度含药血清（5％血清组、10％血清组、15％血清组）。检测各组药物血清及对照血清对sMMC-7721细胞增殖、细胞周期、肝癌相关基因（bax、bcl-2、P53）表达的影响。结果：GXZY各血清组与阳性血清组抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖、调控癌基因与抑癌基因、促进癌细胞凋亡均具有显著统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），其中GXZY高浓度血清组的作用优于阳性血清组。结论：膈下逐瘀汤加减方能够抑制人肝癌细胞增殖，促进细胞凋亡。     

肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨肺癌平治疗肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法孵育A549人肺癌细胞，通过电镜、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测肺癌平药物血清作用后对细胞凋亡及相关基因bcl-2、p53表达的影响。结果肺癌平药物血清作用后电镜下可见凋亡小体形成，流式细胞仪检测可见亚二倍体核型峰的特征，免疫细胞化学法显示抑癌基因p53主要定位在细胞核，部分细胞浆也有淡染。癌基因bcl-2主要表现为胞浆着色，流式细胞仪分析药物血清作用后，p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，两种基因表达明显增强。结论肺癌平治疗肺癌的作用机制是通过诱导肺癌细胞凋亡及影响相关基因bcl-2、p53表达实现的。     

复方苦参碱注射液联合健脾理气方治疗晚期原发性肝癌33例

[目的]观察复方苦参碱（商品名：岩舒）注射液联合健脾理气方治疗晚期原发性肝癌患者的疗效。[方法]将66例晚期原发性肝癌患者随机分成2组，各33例。对照组采用一般护肝、支持、对症治疗；治疗组在上述治疗基础上加用复方苦参碱注射液静脉滴注及口服健脾理气方加减治疗。[结果]治疗组病情稳定率、疼痛缓解率、肝功能改善率、生活质量评分均高于对照组（P〈0．05），两组肿瘤缓解率、生存期差异无统计学意义（P〉0．05）。[结论]复方苦参碱注射液联合健脾理气方加减治疗中晚期原发性肝癌可进一步改善患者疼痛症状、肝功能，稳定病情，提高患者生活质量。     

胸腺肽α1对肝癌细胞株HepG2相关基因表达的影响

将对数生长期的人肝癌细胞株HepG2（3×10^4／ml）随机分为1、2、3、4组,1、2、3组分别加入胸腺肽使终浓度为400、200、100μg／ml,4组用相同体积RPMI-1640培养液处理。RT—PCR法检测各组HepG2中N—ras、c—myc、p53、nm23-H1mRNA的相对表达,用Westernblot方法检测N—ras、c—myc、p53、nm23-H1蛋白表达。结果1组N—rasmRNA及蛋白表达均显著低于4组（P均〈0．05）,p53、nm23-H1mRNA及蛋白表达均显著高于4组（P均〈0．05）。认为大剂量胸腺肽α1对肝癌的发生和转移有-定抑制作用,可能机制为增强p53、nm23-H1mRNA及蛋白表达．减弱N—rasmRNA及蛋白表达。     

健脾理气方药物血清对肝癌细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的 观察健脾理气方药物血清对肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响以及诱导肿瘤细胞凋亡的作用,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制.方法 采用端粒重复序列扩增(TRAP)结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,利用健脾理气方中药灌服新西兰兔后制备含药血清,观察健脾理气方药物血清对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721端粒酶活性的影响,同时利用流式细胞仪检测和荧光显微镜观察对细胞凋亡的影响.结果 健脾理气药物血清在d 4开始对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用,电泳条带光密度明显降低;并能诱导肿瘤细胞的凋亡,凋亡的比例随作用时间的延长而升高,流式细胞术检测d2,d4,d 6的凋亡比例分别为0.81%,5.16%,8.45%.结论 对肿瘤细胞端粒酶活性的抑制和诱导肿瘤细胞凋亡是健脾理气中药抗肿瘤治疗作用机制的一部分.     

槲皮素对人肝癌HepG2细胞的作用与机制

目的：探讨槲皮素（Qu)对人肝癌HepG2细胞的作用及其对人肝癌HepG2细胞化疗效果的影响。方法：体外培养传代人肝癌细胞系HepG2细胞，以甲基噻唑基四唑（MTT）法和荧光染色法检测不同浓度Qu及联合阿霉素（ADM）对HepG2细胞抑制率和细胞凋亡率的影响，并进行比较，结果：Qu能抑制人肝癌HepG2细胞生长，诱发细胞凋亡，能提高抗HepG2细胞化疗效果。结论：Qu具有抗肝癌HepG2细胞和化疗增敏作用。     

热化疗诱导多药耐药细胞系HepG2/ADM凋亡的实验研究

目的探讨联合应用热化疗诱导HepG2/ADM凋亡的机制。方法比较ADM诱导HepG2/ADM及HepG2凋亡的作用,分别用ADM(0.03mg.L-1)处理HepG2/ADM及HepG2,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;比较热化疗、单纯化疗、单纯热疗的诱导凋亡作用,将HepG2/ADM分为6组,对照组、单纯化疗、单纯热疗(2组,40℃及43℃)及热化疗(2组40℃,43℃)组,分别用ADM(0.03mg.L-1)处理,比较各组诱导凋亡的作用;应用RT-PCR法检测各组HepG2/ADM细胞p53、bcl-2和bax的表达。结果ADM诱导HepG2/ADM及HepG2凋亡率分别为HepG2/ADM组(3.5±0.5)%;HepG2组(17.5±2.8)%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。经处理因素作用后,组1~组6 HepG2/ADM细胞凋亡率分别为(2.8±0.3)%,(7.4±1.1)%,(11.3±1.9)%,(5.2±0.5)%,(18.1±1.8)%,(30.7±3.5)%。热化疗与单纯化疗相比诱导HepG2/ADM凋亡比率明显增高(P<0.05)。RT-PCR检测组1~组6 p53表达分别为:0.21、0.29、0.34、0.25、0.43及0.48;bcl-2表达分别为:0.31、0.16、0.21、0.13、0.24及0.11;bax表达分别为:0.23、0.27、0.29、0.25、0.31和0.35。结论热化疗能够显著增加耐药细胞HepG2/ADM凋亡率,这种作用可能与p53、bax、bcl-2表达调节有关。     

抗纤灵对HepG2细胞端粒酶抑制作用的影响

[目的]观察抗纤灵对人肝癌细胞株（HepG2）端粒酶活性和端粒酶RNA的影响,探讨中药抗纤灵防止肝细胞癌变的作用机制。[方法]将10×半抑制浓度（IC50）,1.0×IC50,0.1×IC50抗纤灵药液加入到细胞培养液中,以0.85%氯化钠和环磷酰胺分别作阴性和阳性对照,在12、24、48、72、96 h收集细胞,并检测端粒酶的活性和端粒酶RNA的表达。[结果]抗纤灵杀伤HepG2的IC50为1 mg/ml,10×IC50为10 mg/ml,0.1×IC50为0.1 mg/ml;10×IC50浓度作用后,靶细胞端粒酶活性显示阴性,10×IC50及环磷酰胺对HepG2细胞端粒酶RNA有明显抑制作用;1.0×IC50和0.1×IC50则没有抑制作用。[结论]通过抑制端粒酶活性,抗纤灵能明显抑制HepG2生长。     

豆楮方对人肝癌细胞株抑制作用的体外实验研究

目的:研究豆楮方对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的生长增殖抑制作用.方法:按文献方法制备豆楮方含药血清,用MTT法观察细胞增殖情况.结果:豆楮方含药血清在体外对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721均有抑制作用,对HepG2的最高抑制率为91.48%,对SMMC-7721的最高抑制率为89.42%,抑制肝癌细胞的效果优于含5-Fu血清.结论:豆楮方具有抗肝癌作用.     

健脾理气化痰法针刺对高脂饲养胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运体4蛋白表达的影响

[目的]探讨健脾理气化痰法针刺对高脂饲养胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运体4（GLuT4）蛋白表达及胰岛素敏感性的影响。[方法]40只Wistar大鼠分别用高脂饲料、普通饲料喂养。经高胰岛素-正常葡萄糖钳夹术确定高脂饲养制备IR模型成功后,将模型大鼠随机分为模型组和电针组（取足三里、中脘、丰隆、关元穴）,普通饲料喂养组为正常组。治疗6周后,行腹腔糖耐量、腹腔胰岛素耐量实验测量各组大鼠血糖水平;治疗8周后,采用免疫组化法检测各组大鼠股四头肌GLUT4蛋白的表达。[结果]与模型组比较,电针组胰岛素降低血糖的效果显著增强（P〈o．01）;与模型组比较,电针组股四头肌GLUT4蛋白的表达水平增加（P〈o．05）。[结论]健脾理气化痰法针刺具有提高胰岛素敏感性的作用,并能显著提高股四头肌GLUT4蛋白的表达水平。     

健脾理气法对功能性消化不良大鼠的治疗作用及其机制的研究

[目的]观察健脾理气法对脾虚气滞型功能性消化不良(FD)大鼠的治疗作用及其分子生物学机制。[方法]60只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常组,治疗组,对照组,模型组。后3组采用夹尾刺激法制备FD模型,各组分别以0.85%氯化钠、健脾理气中药、0.85%氯化钠、安慰剂灌胃,1周后检测大鼠胃动力,胃窦及血清中钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的含量以及胃窦细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平。[结果]与正常组相比,模型组大鼠胃动力降低,血清及胃窦中CaMKⅡ含量降低,胃窦ERK1/2磷酸化水平降低;经健脾理气中药治疗后,大鼠胃动力明显改善,血清及胃窦中CaMKⅡ含量有所恢复。[结论]CaMKⅡ的表达及ERK1/2的活性与FD存在一定的关系,二者含量和活性的降低可能是FD发病的机制之一;健脾理气法不影响ERK1/2的活性,但可能通过增加CaMKⅡ表达,促进胃动力,达到治疗FD目的。     

消瘤汤含药血清对人肝癌细胞HepG2凋亡相关因子表达的影响

[目的]观察消瘤汤含药血清对人肝癌细胞HepG2凋亡相关因子表达的影响,进一步证实该方对肿瘤细胞的抑制作用,并初步探讨其诱导肝癌细胞凋亡的作用机制。[方法]给予昆明种小鼠中药煎剂灌胃3d后,制备消瘤汤鼠含药血清,将其作用于HepG2细胞,用四氮唑盐法（MTT法）检测含药血清对HepG2细胞增殖的抑制作用,通过流式细胞技术测定肿瘤细胞的凋亡情况,应用免疫组化法检测半胱氨酸蛋白酸3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）蛋白表达水平。[结果]消瘤汤鼠含药血清作用于HepG2细胞72h后,对肿瘤细胞生长有明显抑制作用。流式细胞仪检测可见含药血清组在细胞G1／G0期前出现明显的凋亡峰,即“亚二倍体峰”。凋亡率为22．3％,明显高于对照组的1．05％（P〈0．05）。免疫组化结果表明Caspase-3在含药血清干预后,表达明显增加,而Bcl-2在含药血清干预后,表达明显降低。[结论]消瘤汤可能通过激活Caspase-3及抑制Bcl-2的活性,从而诱导肝癌细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长,达到抗肿瘤的作用。     

重症肺炎时心肌bcl-2、bax基因表达及相关因素的实验研究

目的 研究重症肺炎的bcl-2基因和bax基因表达及其相关因素。方法 30只大鼠建立金葡菌肺炎模型、20只大鼠作对照，检测大鼠心肌细胞凋亡率、心肌病理积分、心肌细胞bcl-2、bax基因表达、心功能及血清脑钠肽，并分析其相互关系。结果 重症肺炎时心肌心功能降低者bcl-2基因及bax基因表达增加，bcl-2基因及bax基因表达与心肌病理积分、心肌细胞凋亡、脑钠肽呈正相关；bax基因表达与心功能呈负相关；bax基因与上述指标之间的相关性高于bcl-2基因。结论 重症肺炎可并发心衰，其发生机制与bcl-2基因及bax基因过度表达有关。     

miR-363靶向调控E2F3表达影响HepG2细胞增殖和凋亡研究*

目的 探讨微小RNA-363（miR-363）靶向调控E2F转录因子3（E2F3）的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平。结果 对照组HepG2细胞增殖率为（96.4±9.7)%,显著高于抑制剂处理组【（72.3±6.5）%,P<0.05】,凋亡率为（8.2±1.4）%,显著低于抑制剂处理组【（9.7±0.8）%,P<0.05】;对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.2）,P<0.05】,E2F3蛋白表达量为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.1）,P<0.05】,而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为（0.4±0.0）和（0.5±0.1）,均显著低于抑制剂处理组【（0.6±0.1）和（0.7±0.0）,P均<0.05】。结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡。本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据。     

CIAPIN1对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察调控细胞因子诱导的凋亡抑制分子1（CIAPIN1）基因表达对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,并分析其作用机制。方法 分别构建重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体,感染HepG2细胞,获得稳定高表达和低表达CIAPIN1基因的细胞后,实验分为4组,即CIAPIN1高表达组、CIAPIN1低表达组、无关沉默RNA（siRNA）干扰组和空白对照组,检测各组细胞增殖及CIAPIN1基因和蛋白表达,使用流式细胞仪检测细胞周期,采用Western blotting法检测cyclinD1、CDK4、cyclin E、CDK2水平以及总蛋白中IKKβ、磷酸化IKBα、p65和磷酸化p65水平。结果 CIAPIN1低表达组细胞增殖受到明显抑制,G0/G1期细胞比例为（73.2±2.5）%,明显高于GIAPIN1高表达组【（58.8±2.2）%,P<0.05】、无关siRNA干扰组【（62.4±1.8）%,P<0.05】或空白对照组【（63.2±2.6）%,P<0.05】;CIAPIN1 高表达组cyclinD1、CDK4、CDK2、cyclinE相对表达量明显高于其它各组,差异有统计学意义（P<0.05）;CIAPIN1高表达组磷酸化IKBα、磷酸化P65相对表达量分别为（1.335±0.182）和（0.731±0.106）,明显高于GIAPIN1低表达组【（0.108±0.035）和（0.028±0.010）,P均<0.05】、无关siRNA干扰组【（0.251±0.082）和（0.318±0.058）,P均<0.05】或空白对照组【（0.238±0.067）和（0.322±0.061）,P均<0.05】。结论 CIAPIN1对肝癌细胞增殖有促进作用,可能与其对NF-кB信号通路的激活作用有关。     

术前热疗联合灌注化疗对肺癌细胞凋亡及相关基因的影响

目的 探讨术前热疗联合灌注化疗对非小细胞肺癌细胞凋亡及相关基因表达的影响. 方法 A组37例接受术前热疗联合灌注化疗,B组31例术前灌注化疗,C组15例直接手术治疗.检测手术前后癌细胞的凋亡指数(AI)、癌组织中PCNA、bcl-2和p53蛋白的表达和增殖指数(PI),比较3组上述指标治疗前后变化. 结果 A组术后癌细胞AI较治疗前增加,PI下降;bcl-2、p53蛋白阳性表达均较治疗前下调.B组癌细胞Al较治疗前增加;PI较治疗前下降;bcl-2、p53蛋白阳性表达均较治疗前下调.治疗后组间比较,A组的AI高于B组,PI低于B组; bcl-2、p53蛋白阳性表达A组较B组下降. 结论 术前热疗联合灌注化疗可使中晚期肺癌癌组织AI增加,P1下降,bcl-2、p53蛋白阳性表达下调.     

健脾清肠方对溃疡性结肠炎的临床疗效及对Fas／FasL的影响

[目的]观察健脾清肠方对溃疡性结肠炎（UC）患者的临床疗效及对免疫细胞载脂蛋白及其配体（Fas／FasL）的影响。[方法]将60例UC患者，随机分为健脾清肠方（中药）组和柳氮磺胺吡啶（SASP）组各30例。治疗8周后，观察临床症状、结肠镜下黏膜改变以及治疗前后Fas／FasL表达。[结果]中药组症状改善和结肠镜下黏膜炎症修复情况均优于SASP组（P〈0．05）。2组治疗前后肠上皮Fas的表达率均有不同程度下降，其中中药组下调Fas及FasL蛋白表达的作用更强，效果亦优于SASP组（P〈0．05）。[结论]健脾清肠方治疗UC疗效显著；Fas／FasL表达异常可能在UC发病中作为病理因子而导致患者肠上皮的损害，降低其表达可能是治疗UC的机制之一。