CD69+/NKG2D+比值在保健食品评价中应用

目的研究小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD 69+/NKG2D+检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用.方法以左旋咪唑25mg(kg·bw)连续灌胃3 d设立左旋咪唑阳性对照;进行小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+检测和脾NK细胞活性测定试验,观察0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉对小鼠NK细胞免疫功能的影响.结果与阴性对照组比较,左旋咪唑对照组和0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉剂量组外周血NK细胞CD69-/NKG2D+、CD69+/NKG2D+比值以及脾NK细胞活性均明显升高.结论外周血NK细胞CD69+/NKG2D+检测与传统的NK细胞免疫检测结果有较好一致性,且方法敏感性较好,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值.     

流式细胞术在保健食品功能评价中的应用

目的 建立保健食品增强免疫力功能评价指标的流式细胞术检测方法,并初步评价其应用价值。方法 3种受试物蛋白粉、参茸膏和灵芝虫草菌丝体小鼠实验模型的实验剂量组均按人体推荐量的5、10、30倍进行灌胃,阴性及阳性对照组均给予等量纯净水,阳性对照组为给药结束前3d开始每天灌胃给予25mg／kg左旋咪唑,并于给药结束当天用2％绵羊红细胞进行免疫;大鼠实验模型采用拌饲法按人体推荐量的25、50倍给予受试物;实验结束后同步检测以下指标：（1）传统指标：包括刀豆素A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠脾自然杀伤（NK）细胞活性测定、绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。（2）流式细胞仪检测指标：小鼠外周血淋巴细胞计数,大、小鼠T、NK细胞表面活化抗原检测以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能。结果 给予受试物蛋白粉后,0．83、1．67、5．01g／kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞的相对比例和绝对数量与阴性对照组间差异无统计学意义;给予受试物参茸膏后,3．75、7．50和15．0ml／kg剂量组的小鼠外周血T淋巴细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,与其他传统检测指标有良好一致性;蛋白粉0．83、1．67g／kg剂量组小鼠外周血NK细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,且与NK细胞活性测定结果有良好一致性;给予1．50g／kg剂量灵芝虫草菌丝体的大鼠外周血NK细胞CD25表达阳性比例较阴性对照组升高;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验：传统检测方法未发现对照组与剂量组有明显差别,而流式细胞术检测结果显示：灵芝虫草菌丝体0．15、0．30和0．90g／kg剂量组总吞噬比例增加,0．30、0．90g／kg剂量组吞噬指数均提高。结论 应用流式细胞术检测保健食品增强免疫力功能指标,与传统方法检测结果具有良好一致性,且具有更高的敏感性,在检测和评价保健食品增强免疫力功能方面具有良好的应用价值,值得进一步研究和推广。     

灵芝孢子粉增强免疫力模型的建立及流式细胞术检测的研究

目的:探讨环磷酰胺建立的免疫低下动物模型应用于保健食品增强免疫力检验的研究,并试图应用流式细胞术研究小鼠自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD69+/NKG2D+和T淋巴细胞分化抗原CD69+/CD3+检测在免疫低下动物模型评价中的应用。方法:以环磷酰胺一次较大剂量造模、适时强化建立免疫低下模型,灌胃给予灵芝孢子粉,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+和外周血T淋巴细胞CD69+/CD3+亚群,同时进行脾NK细胞活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果:灵芝孢子粉可使环磷酰胺降低的小鼠外周血和脾的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性增强。结论:灵芝孢子粉可有效增强小鼠细胞免疫功能,流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值。     

环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的 建立环磷酰胺致免疫低下模型,应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)细咆分化抗原CD69 /自然杀伤细胞G2D受体(NKG2D )和T淋巴细胞分化抗原CD69 /CD3 评价其免疫低下动物模型中的应用.方法 以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69 /NKG2D 和外周血T淋巴细胞CD69 /CD3 亚群,同时进行脾NK细胞活性测定,ConA诱导的小鼠脾淋巴细咆转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响.结果 环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和牌的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细咆转化增殖能力、脾NK细胞活性降低.结论 环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立长期免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值.     

化疗对乳腺癌患者外周血CD4~+CD25~+CD127~-调节性T细胞的影响

目的观察化疗对乳腺癌患者外周血免疫指标的变化并探讨其影响。方法采用流式细胞术分析129例乳腺癌患者化疗前后CD4+CD25+CD127-调节性T细胞占CD4+T细胞的比率及T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8;B淋巴细胞CD19;NK细胞(CD16+CD56)和CD4/CD8比值的动态变化。结果化疗后的乳腺癌患者CD4+CD25+CD127-调节性T细胞占CD4+细胞比率较化疗前降低,T淋巴细胞亚群中CD3、CD4、CD4/CD8增高,CD8、NK和CD19降低;乳腺癌患者外周血调节性T细胞的数量与临床分期和组织分化程度相关。结论乳腺癌患者化疗后调节性T细胞的数量降低,免疫调节抑制功能下降,免疫功能得到提高,但体液免疫及NK功能未见提高。     

鳗鱼油胶丸增强免疫功能的实验研究

通过小鼠迟发型变态反应试验,ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验、小鼠血清溶血素滴度测定、小鼠脾细胞抗体生成试验、小鼠碳廓清试验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及NK细胞活性测定试验观察鳗鱼油胶丸对小鼠免疫功能的影响。经口给予0.5、1.0、3.0 g/kg剂量的受试物4周,结果显示：绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应试验、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化增殖试验结果均为阳性,鳗鱼油胶丸具有增强细胞免疫功能作用;绵羊红细胞免疫受试动物后血清溶血素检测、脾细胞抗体生成试验结果阳性,鳗鱼油胶丸具有增强体液免疫功能作用。     

肺癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞检测及其临床意义

目的了解肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的比例和其临床意义,探讨CD4+CD25+调节性T细胞与临床分期的相关性。方法流式细胞分析仪检测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例。结果肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比为(15.7±1.6)%,明显高于健康对照者(7.1±1.5)(p<0.05),且外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平与患者病情分期呈显著正相关。结论肺癌患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+CD25+调节性T细胞比例较高,对肺癌患者具有免疫抑制功能。     

CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞抑制耐药肺结核患者机体细胞免疫研究

目的了解耐药肺结核患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞及其分泌的细胞因子转化生长因子β1（TGF β1）、白细胞介素-10（IL 10）的表达水平与非耐药肺结核患者和健康对照者的差异,并探讨其在抑制特异细胞免疫反应中的作用。方法应用流式细胞技术分别对30例健康成人（健康对照组）、39例非耐药肺结核患者（普通肺结核组）及35例耐药肺结核患者（耐药肺结核组）的外周血CD4+CD25+T淋巴细胞和CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞表达水平进行检测;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同组别人群外周血血清中TGF β1、IL 10水平。结果健康对照组成人外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞和CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞分别占CD4+细胞总数的(17.09±5.43)%和(0.78±0.88)%;普通肺结核组外周血中上述两种细胞分别占CD4+细胞总数的(22.12±3.43)%和(2.79±1.65)%;耐药肺结核组外周血上述两种细胞分别占CD4+细胞总数的(24.01±5.65)%和(4.51±1.47)%。耐药肺结核组外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞所占CD4+T淋巴细胞的比例较普通肺结核组高,但差异无统计学意义(P＞0.05);耐药肺结核组CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞的比例明显高于健康对照组及普通肺结核组 (P＜0.05),并且耐药肺结核组TGF β1［（4.15±1.39）ρ/ng·L-1］、IL 10［（872.17±269.75）μg/L］明显高于普通肺结核组［分别为（3.03±1.42）ρ/ng·L-1、（266.83±57.09）μg/L］和健康对照组［分别为（2.12±0.77）ρ/ng·L-1、（105.21±23.56）μg/L］ (P＜0.05)。结论CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞可能削弱结核病患者机体免疫系统对感染结核分枝杆菌的清除作用,是导致结核病感染慢性化且出现耐药的原因之一; TGF β1、IL 10可能参与抑制机体细胞免疫,与耐药结核病的形成和严重程度有一定相关性。     

抗核抗体阳性人群外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋淋巴细胞、免疫球蛋白水平分析

目的分析抗核抗体（ANA）阳性人群外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋淋巴细胞、免疫球蛋白表达水平，了解Th、CTL细胞及体液免疫在自身免疫性疾病发病中的作用。方法检测215例（试验组）ANA阳性人群外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋淋巴细胞及免疫球蛋白，50例正常人群作为对照，ANA检测用荧光免疫组化技术，CD3＋、CD4＋、CD8＋淋巴细胞用流式细胞仪检测，免疫球蛋白用全自动生化分析仪检测。结果试验组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋淋巴细胞绝对值及CD4＋／CD8＋比值均明显低于对照组（P〈0．01），试验组免疫球蛋白明显高于对照组（P〈0．01）。结论①试验组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋淋巴细胞绝对值及CD4＋／CD8＋比值均明显低于对照组，表明Th、CTL细胞的量及组成比例改变可能是导致细胞免疫调节失常并最终引起自身免疫疾病的因素之一；②试验组免疫球蛋白水平明显高于对照组，表明体液免疫在自身免疫性疾病发病中起一定的作用。     

蛋白核小球藻对小鼠细胞免疫系统的影响

目的:探讨蛋白核小球藻对健康小鼠细胞免疫系统的影响.方法:选用BalB/c正常小鼠,随机分组,经口给予小鼠不同剂量的小球藻粉水溶液0,0.15,1.50,4.50 g/kg·bw,每日1次,30 d后测量小鼠迟发型变态反应,co.LA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力.结果:迟发型变态反应试验中4.50剂量组与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力试验中0.15剂量组与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:蛋白核小球藻能增强健康小鼠细胞免疫系统的功能.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+T细胞亚群变化及意义

[目的]探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化及意义。[方法]入选病例为我院从2006年6月到2008年12月共59例原发性胆汁性肝硬化患者(活动期36例、稳定期23例),同时以30例健康体检者为对照,借助双色荧光标记技术对外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+占CD4+T细胞比例进行流式细胞术测定。[结果]活动期PBC患者外周血CD4+CD25+细胞比例(1.66±0.83)%低于稳定期(2.53±1.06)%和正常组(4.06±2.36)%(P﹤0.05);而CD4+CD28-细胞比例(4.15±1.89)%则高于稳定组(3.66±0.7)%和正常组(1.54±0.99)%(P﹤0.05)。[结论]活动期PBC患者外周血CD4+CD25+T细胞比例减少而CD4+CD28-T细胞比例升高,CD4+CD25+比例降低可能使外周免疫耐受失去平衡,参与了PBC疾病的发生发展。     

自身免疫性糖尿病患者CD_4~+CD_(25)~+T细胞的变化

目的通过观察自身免疫性糖尿病患者外周血CD4+CD25+T细胞的变化,探讨其在发病中的可能作用。方法流式细胞仪检测20例LADA、20例T1DM、20例T2DM及21例正常对照外周血CD4+CD25+、CD3+CD8+T细胞。结果①LADA、T1DM组外周血CD4+CD25+T细胞低于T2DM、正常对照组(p均<0.05)。②LADA、T1DM患者外周血CD3+CD8+T细胞较T2DM、正常对照组增高(LADAvs正常对照p<0.01,其余p<0.05)。结论自身免疫性糖尿病患者免疫调节性CD4+CD25+T细胞减少,不能有效维持对胰岛自身抗原的耐受;外周细胞毒性CD3+CD8+T细胞增多进而破坏胰岛β细胞,导致自身免疫性糖尿病的发生和发展。     

CD4+CD25+T细胞研究新进展

CD4 CD25 T细胞是新近才被认识的一类免疫调节细胞,在胸腺中产生,主要发挥抑制性免疫调节功能,表达IL-10 mRNA,细胞表面表达IL-2受体a链(CD25),在维持机体内环境的稳定、抗感染免疫、抗肿瘤免疫、诱导移植耐受及自身免疫性疾病等方面发挥重要作用。     

Effects of occupational metallic mercury vapour exposure on suppressor-inducer (CD4+CD45RA+) T lymphocytes and CD57+CD16+ natural killer cells

Objectives: To examine the effects of metallic mercury vapour on the cellular and humoral immune system. Methods: We measured T lymphocyte and natural killer (NK) cell subpopulations, B lymphocytes, and serum immunoglobulins (i.e. IgG, IgA and IgM) together with total T (CD3+) lymphocytes and total lymphocytes in blood samples from 20 male, fluorescent-lamp makers (mercury workers) and the same number of gender-, age- and smoking-matched controls. Urinary concentrations of inorganic mercury (UHg) in the 20 workers ranged from 1.8 to 163.5 (mean 44.8) μg/l. They had been exposed to mercury vapour for 4 to 62 (mean 31) months. Results: Numbers of CD4+CD45RA+ (suppressor-inducer) T lymphocytes and total CD4+ T lymphocytes in the mercury workers were significantly smaller than those in the controls (paired-sample t-test, P < 0.01). The number of CD57+CD16+ NK cells was inversely correlated with UHg. Conclusion: It is suggested that numbers of CD4+CD45RA+ T lymphocytes and CD57+CD16+ NK cells are inversely affected by exposure to metallic mercury vapour in workers, with an average urinary inorganic mercury concentration of 45 μg/l being found. Received: 7 September 1999 / Accepted: 6 May 2000     

CD4+CD25+调节性T细胞与HIV感染关系的研究进展

CD4 CD25 调节性T细胞是一类具有特殊免疫调节功能的T细胞亚群。它能够抑制自身免疫病的发生,参与肿瘤免疫的调节,在感染和移植免疫中也发挥着重要作用。T细胞的这一亚群具有免疫无能和免疫抑制特性,新近发现它亦与艾滋病的发生、发展关系密切。文中就CD4 CD25 调节性T细胞与HIV感染的研究进展进行综述。     

脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其与预后的关系

目的 评价脓毒症患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化趋势及其与预后的相关性.方法 采用流式细胞仪检测36例脓毒症患者自诊断成立第1、3、5天的CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值,并与15例健康体检者(对照组)比较.按照预后分为生存组和死亡组,分析两组CD4+CD25+调节性T细胞随时间的变化.结果 脓毒症患者19例生存,17例死亡.生存组和死亡组第1天CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值均低于对照组[分别为(12.42±3.26)%、(12.96±3.00)%比(16.97±3.66)%.P＜0.05].生存组和死亡组第3天CD4+CD25+s细胞/CD4+细胞比值分别为(24.47±4.62)%和(26.61±3.85)%.均高于第1天,差异有统计学意义(P＜0.05).生存组第5天CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值为(18.28±4.28)%,较第3天显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);死亡组第5天CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值为(36.19±5.33)%,较第3天显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).第1、3天生存组和死亡组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);第5天生存组CD4+CD25+细胞/CD4+细胞比值显著低于死亡组(P＜0.05).结论 脓毒症患者血中CD4+CD25+调节性T细胞呈现先下降后上升的变化,而持续上升提示出现免疫功能麻痹,伴随病死率的升高.CD4+CD25+调节性T细胞可作为临床评价脓毒症患者炎性反应中免疫功能状态和预后的方便可靠的指标.     

急性髓性白血病患者CD7~+ CD56~+和CD7~- CD56~-免疫表型对比分析

目的:比较CD7+CD56+和CD7-CD56-急性髓性白血病患者免疫表型的差异。方法:采用多色流式细胞术检测患者免疫表型,对患者的其他资料和免疫表型进行比较。结果:CD7+CD56+在M0+M1分型中的分布比例、外周血血红蛋白、骨髓原始细胞比例、中枢系统浸润率、CD34平均荧光强度均高于CD7-CD56-;但胞浆髓过氧化物酶(CyMPO)MFI低于CD7-CD56-。结论:CD7+CD56+起源早,浸润性强,需加强巩固治疗和中枢系统微小残留病灶监测。     

卵巢癌细胞对CD8~+ T细胞活化分子CD69表达的影响

目的:探讨卵巢癌细胞对CD8+T细胞活化分子CD69表达的影响。方法:采用流式细胞术检测3株卵巢癌细胞(OVCAR3、CAOV3和SKOV3)培养上清液对CD8+T细胞表达早期活化分子CD69表达的百分率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ的水平。结果:与对照组比较,3株卵巢癌细胞培养上清液可对CD8+T细胞CD69的表达产生明显的抑制作用(F=29.90,P<0.01),CD8+T细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平显著降低(F=16.31,P<0.01)。结论:卵巢癌细胞早期就能抑制CD8+T细胞的活化,CD69可作为评价免疫效应细胞功能的指标。