壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠肝脏PI3K、Akt表达的影响

目的:观察壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠肝脏PI3K/Akt信号传导通路的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:随机选取14只大鼠作为正常对照组,剩余24只大鼠采用CCL4复合因素大鼠肝纤维化模型造模方法[3]进行肝纤维化造模,于第4周末随机处死正常对照组及造模大鼠各4只,做病理检测证实造模组肝纤维化形成与否。其余造模大鼠随机分为病理模型组、壮肝逐瘀煎治疗组,每组10只。病理模型组、壮肝逐瘀煎治疗组于造模结束后即分别给药,每组给药6周。用药后处死所有大鼠,获取肝组织,HE染色光镜观察肝组织结构变化,免疫组化染色分析PI3K、Akt表达。结果:光镜观察,正常对照组肝小叶完整,结构清晰,细胞以静脉为中心呈条索状向四周放射状排列。病理模型组肝小叶结构紊乱,肝细胞水肿明显,较多脂肪变性,部分有坏死,纤维隔内炎性细胞浸润,较多粗大胶原纤维分割、包绕肝小叶。壮肝逐瘀煎治疗组与病理模型组比较肝小叶结构较清楚,肝细胞水肿及变性不明显,炎细胞浸润较少,胶原纤维增生较少,纤维疏松变窄。肝组织PI3K、Akt以胞浆内出现棕黄色颗粒或团块判断为阳性细胞。病理模型组、壮肝逐瘀煎治疗组PI3K、Akt的表达值较正常对照组增高,比较有统计学意义(P0.0.1);壮肝逐瘀煎治疗组肝组织PI3K、Akt的表达值较病理模型组下降,比较有统计学意义(P0.01)。结论:壮肝逐瘀煎能调控HSC中凋亡因子PI3K、Akt蛋白的表达,明显改善HF大鼠肝脏的病理变化,具有明显的抗HF作用。     

半枝莲提取物通过PI3K-Akt信号通路抑制胰腺癌模型大鼠肿瘤生长的机制研究

目的:基于PI3K-Akt信号通路探究半枝莲提取物对胰腺癌模型大鼠的干预效果。方法:选取40只SD健康雄性大鼠,10只为正常组,其余30只建立胰腺癌模型,分为模型组、低浓度半枝莲组、高浓度半枝莲组。检测各组大鼠肿瘤体积、重量、T淋巴细胞亚群水平、细胞凋亡及Wnt3α、β-catenin、PI3K、Akt、mTOR表达。结果:高浓度半枝莲组大鼠肿瘤体积、重量低于低浓度半枝莲组、模型组(均P<0.05)。高浓度半枝莲组大鼠CD8⁺水平低于低浓度半枝莲组、模型组,CD4⁺、CD3⁺水平高于低浓度半枝莲组、模型组(均P<0.05)。高浓度半枝莲组大鼠Wnt3α、β-catenin、PI3K、Akt、mTOR表达低于低浓度半枝莲组、模型组(均P<0.05)。结论:半枝莲提取物可抑制胰腺癌模型大鼠肿瘤组织,调控胰腺癌大鼠T淋巴细胞亚群水平,调控Wnt/β-catenin、PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达,促进胰腺癌细胞自噬、凋亡。     

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响

目的观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制。方法大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组。除对照组外,其余各组ig给予50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型。于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周。实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、p-p70S6K蛋白的表达。结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路有关。     

芪术颗粒对肝纤维化形成过程中磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸蛋白激酶信号传导通路的影响

目的观察芪术颗粒在肝纤维化形成过程中对磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号传导通路的影响,进一步阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、实验对照组和芪术颗粒组,采用四氯化碳复制肝纤维化模型,造模同日即给予相应治疗,芪术颗粒组2 g/(kg?d)灌胃,体积为1.0 mL/100 g体质量,实验对照组、模型组给予等体积无菌水,正常组正常喂养。分别于造模后第1、2、4周处理、取材,Western blot免疫印迹法检测p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、Bad(Ser136)、Caspase9蛋白表达。结果与正常组比较,模型组、芪术颗粒组各时间点p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、Bad(Ser136)、Caspase9蛋白表达均升高(P0.05)。与模型组比较,第1、2、4周时芪术颗粒组p-Akt(Ser473)表达显著降低,第1、4周Caspase9表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);p-Akt(Thr308)、Bad(Ser136)表达低于模型组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论芪术颗粒对PI3K/Akt信号传导通路的激活有调控作用,从而抑制肝纤维化的发生和发展。     

清热解毒扶正颗粒对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响

目的探讨清热解毒扶正颗粒对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)的部分作用机制。方法采用烟熏及气管内注入脂多糖建立COPD大鼠模型,经清热解毒扶正颗粒治疗后,用ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor,TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(metallopeptidase inhibitor-1,TIMP-1)水平;用Western Blot检测肺组织磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-hydroxy kinase,PI3K)、蛋白激酶B (protein kinase B,Akt)、核因子-κB-1 (nuclear factor-κB-1,NF-κB-1)蛋白表达。结果造模后大鼠血清的TNF-α、TIMP-1、MMP-9均不同程度的升高,与空白对照组比较,TNF-α、MMP-9升高,有显著性差异(P0.05),TIMP-1升高无显著性差异(P0.05)。经清热解毒扶正颗粒灌胃治疗后,大鼠血清的TNF-α、TIMP-1、MMP-9均不同程度的降低。与模型组比较,清热解毒扶正颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α水平(P0.01);清热解毒扶正颗粒中剂量组显著降低TIMP-1水平(P0.01),清热解毒扶正颗粒高剂量组显著降低TIMP-1水平(P0.05),清热解毒扶正颗粒低剂量组降低TIMP-1水平,但差异不显著(P0.05);清热解毒扶正颗粒低、中、高剂量组降低MMP-9水平不显著(P0.05)。造模后磷酸化Akt、NF-κB-1、PI3K蛋白表达不同程度地增高,与空白组比较,模型组增高有显著性差异(P0.05)。经清热解毒扶正颗粒灌胃治疗后,与模型组比较,清热解毒扶正颗粒高剂量组显著降低磷酸化Akt、NF-κB-1、PI3K蛋白表达水平(P0.05);清热解毒扶正颗粒中剂量组显著降低磷酸化Akt蛋白表达水平(P0.05);清热解毒扶正颗粒中剂量组、低剂量组对磷酸化NF-κB-1、PI3K蛋白表达作用不显著(P0.05),清热解毒扶正颗粒低剂量组对磷酸化Akt作用不显著(P0.05)。结论清热解毒扶正颗粒可降低炎性因子水平,抑制Akt、NF-κB-1、PI3K蛋白表达,进而抑制炎症反应,对PI3K/Akt/NF-κB信号通路有一定的调节作用。     

丹参酮ⅡA调控PI3K/Akt/mTOR通路对高脂血症大鼠肝脏自噬的影响

目的:基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮Ⅱ改善高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的作用机制。方法:30只SPF级,健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组。正常组每日给予普通大鼠饲料喂饲;模型组、治疗组予高脂饲料喂饲。造模4周后,治疗组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射;正常组、模型组予等体积生理盐水腹腔注射。用药8周后,全自动生化分析仪检测大鼠血脂情况,HE、油红O染色观察肝脏组织形态学变化,Western blot技术检测PI3K、p-Akt、p-mTOR及Beclin1蛋白表达。Real time-PCR技术检测Beclin1 mRNA水平。结果:与正常相比,模型组TG、TC和LDL-C水平升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平降低(P<0.01);与模型组相比,治疗组TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均无明显改变(P>0.05)。形态学结果显示,与模型组相比,治疗组大鼠肝脏脂肪空泡与脂质沉积减少。Western blot结果显示,与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平上调,Beclin1蛋白表达水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组pAkt、p-mTOR蛋白表达水平下调,Beclin1蛋白表达水平上调(P<0.01),PI3K蛋白表达水平呈下调趋势。Real time-PCR结果显示:与正常组相比,模型组Beclin1 mRNA水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组Beclin1mRNA水平上调(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路,增强高脂血症大鼠肝脏自噬水平,减少肝脏脂质沉积。     

和血柔肝方通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路调控自噬相关蛋白改善大鼠肝纤维化机制研究

目的:探讨和血柔肝方通过调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子-κB(NF-κB)信号通路调控自噬相关蛋白改善大鼠肝纤维化的作用机制。方法:将40只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组与和血柔肝方最佳剂量组,每组各10只。除空白对照组外,其余各组均以四氯化碳(CCl₄)构建肝纤维化大鼠模型。造模8周后,空白对照组、模型组采用0.9%氯化钠溶液灌胃;秋水仙碱组采用秋水仙碱灌胃;和血柔肝方最佳剂量组以和血柔肝方灌胃。灌胃结束后,取各组大鼠血清及肝脏组织。生化检测各组大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;HE及Masson染色评估大鼠肝纤维化情况。RT-qPCR法检测大鼠肝组织PI3K、Akt、NF-κB以及NF-κB下游自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1的mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测大鼠肝组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB P65、p-NF-κB P65、LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平。结...     

黄地安消胶囊改善自发性T2DM大鼠胰岛素抵抗机制研究

目的:观察黄地安消胶囊对2型糖尿病(T2DM)模型GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠肝脏组织中IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/GS信号通路关键基因表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的可能机制。方法:选取符合T2DM模型的GK大鼠纳入实验,随机分为模型组,黄地安消胶囊(12、6、3 g/kg)组,参芪降糖颗粒组(1.08 g/kg),以及正常Wistar大鼠为对照组。每组10只,每天1次灌胃给药,连续6周。试验结束后取肝脏组织进行PAS染色,观察其对糖原合成的影响。RT-q PCR技术检测肝脏组织INSR、IRS-1、PI3K、GS mRNA表达水平,Western bolt检测INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS蛋白的表达水平。免疫荧光组织化学染色法检测肝脏组织IRS-1、p-PI3K、p-Akt、GSK-3β蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄地安消胶囊组(12、6、3 g/kg)可以显著增加肝脏糖原合成,同时增加INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS的表达水平。结论:黄地安消胶囊可通过IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/GS信号通路,调控蛋白活性,促进糖原合成,降低血糖,改善胰岛素抵抗,治疗T2DM。     

敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察敦煌医学古方大补脾汤对放射性肺损伤大鼠PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、单次给药组、两次给药组,每组10只。各给药组每日予大补脾汤灌胃,空白对照组和模型组予等量生理盐水灌胃。2周后,模型组、单次给药组、两次给药组大鼠右肺予8 Gy X射线单次照射,空白对照组不予照射。照射后,两次给药组继续每日予大补脾汤灌胃,其余各组灌胃等量生理盐水。2周后处死所有大鼠,ELISA检测大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量,Western blot及免疫组化检测大鼠右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表达,qPCR检测大鼠右肺组织PI3K、Akt mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显增加(P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Aktm RNA表达明显升高(P0.01);与模型组比较,单次给药组和两次给药组大鼠血清PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt含量明显减少(P0.05,P0.01),右肺组织PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论大补脾汤对放射性肺损伤大鼠具有保护作用,其机制与抑制PI3K、Akt磷酸化,调控PI3K/Akt信号通路相关。     

大黄对内毒素性肠损伤大鼠PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的观察大黄对内毒素性肠损伤大鼠PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其作用机制。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和大黄低、高剂量组,每组6只。各给药组造模前给予相应药液灌胃,连续5 d,每日1次。第5日给药后2 h,除正常组外各组大鼠尾静脉注射脂多糖制备肠损伤模型。造模7h后取材,光镜下观察大鼠肠组织病理学改变,免疫组化检测PTEN、PI3K、Akt、mTOR蛋白的表达,Western blot检测PI3K、p-mTOR蛋白的表达。结果模型组大鼠肠壁黏膜层广泛变性坏死,大量肉芽组织增生;地塞米松组和大黄低、高剂量组病理学改变较模型组减轻。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肠组织PTEN蛋白表达显著降低(P0.001),PI3K、Akt蛋白表达显著升高(P0.001,P0.01);与模型组比较,大黄高剂量组大鼠肠组织PTEN蛋白表达显著升高(P0.01),大黄低、高剂量组PI3K、Akt蛋白表达显著降低(P0.001)。Western blot结果显示,与模型组比较,地塞米松组和大黄低、高剂量组大鼠肠组织PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低(P0.05)。结论大黄对内毒素性肠损伤大鼠具有保护作用,其机制可能与上调肠组织PTEN和下调PI3K、Akt、p-mTOR的表达,抑制PI3K/Akt信号通路有关。