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1.
目的比较两种荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测乳腺癌组织中微小RNA(miR)-21的表达,选择更适用于临床的检测方法。方法选取遵义医学院附属医院普外科2010年度住院的手术治疗的乳腺癌患者,手术切除的乳腺组织标本,包括乳腺癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘>5 cm)14对。分别用SYBR GreenⅠ染料和Taq-Man探针作为荧光指示剂,FQ-PCR法检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-21的相对表达水平,应用SPSS 15.0统计软件分析两种检测模式的差异。最后用Northern Blot法进行实验验证。结果 SYBR GreenⅠ染料法检测乳腺癌组织与癌旁组织中miR-21的表达,差异有统计学意义(t=6.704,P=0.000);TaqMan探针法检测乳腺癌组织与癌旁组中miR-21的表达,差异有统计学意义(t=7.238,P=0.000)。SYBR GreenⅠ染料法与TaqMan探针法检测乳腺癌组织中miR-21的表达,差异无统计学意义(t=2.33,P=0.053);SYBR GreenⅠ染料法与TaqMan探针法检测癌旁组织中miR-21的表达,差异无统计学意义(t=0.07,P=0.95)。Northern Blot法检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-21的表达,探针分别为miR-21和U6的反义链,由32P标记。用Image Quant软件测定灰度值评定信号表达强弱,结果表明,乳腺癌组织中miR-21高表达,而癌旁组织中miR-21低表达。结论 SYBR GreenⅠ染料法和TaqMan探针法检测乳腺癌组织miR-21表达均较癌旁组织中明显升高,与Northern Blot法检测结果一致,但SYBR GreenⅠ染料法简单、有效、成本较低,更适用于临床miR-21的检测。  相似文献   

2.
[摘要]目的 比较癌组织与正常组织中miR-10b及其前体和Dicer表达的差异,了解乳腺癌与其表达的关系.方法 通过SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中miR-10b及其前体的含量. 结果 (1)miR-10b和Dicer在乳腺癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织中的表达(P<0.05);(2)正常组织中的miR-10b的表达与C-erbB-2成负相关相关 (rs=-0.42 ,P<0.05),正常组织中的Dicer与C-erbB-2的表达与成正相关 ( rs=0.60,P<0.05).结论 miR-10b和Dicer在乳腺癌组织中处于低表达状态,可能在乳腺癌的发生发展中起到抑制作用.  相似文献   

3.
目的:探索SYBR GreenⅠ和TaqMan探针双标记荧光定量PCR(dFQ-PCR)检测乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的意义。方法:选择浓度为1011.70,108.70,106.70和<1×106.00copies/L的4种血清各1份,进行dFQ-PCR,同时以TaqMan探针和SYBR GreenⅠ单荧光标记PCR(sFQ-PCR)为对照,设置同一扩增和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其熔解温度(Tm),每种方法一次检测每份血清5次。结果:dFQ-PCR检测的HBV-DNA阳性血的平均含量为1011.55±0.32,108.79±0.29,106.81±0.30,与TaqMan探针sFQ-PCR的1011.49±0.31,108.69±0.30,106.72±0.25copies/L对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31,0.54和0.27,均为P>0.05);与SYBRGreenⅠ染料sFQ-PCR的1011.41±0.35,108.21±0.34和106.26±0.26copies/L(不含未检出的两次血清)比较,中低浓度有统计学意义(t=2.90和2.62,P<0.05)。dFQ-PCR和SYBR GreenⅠ染料sFQ-PCR均出现明显熔解曲线,HBV-DNA含量为1011.70,108.70和106.70copies/L的Tm分别为79.8,71.8和72℃。结论:dFQ-PCR能同时检测HBV-DNA含量和Tm,为HBV含量及其基因分型的同步检测提供了新思路。  相似文献   

4.
目的 探讨三阴性乳腺癌组织中长链非编码RNA-P21 (LncRNA-P21)、microRNA-17-3p(miR-17-3p)的表达,分析其与三阴性乳腺癌患者的临床病理特征及预后的关系。方法 选取2016年1月—2017年5月南通大学附属医院收治的106例三阴性乳腺癌患者经手术切除的癌组织和癌旁组织(距离癌组织至少5 cm)标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中LncRNA-P21和miR-17-3p的表达;收集患者的临床病理特征资料,分析LncRNA-P21、miR-17-3p表达与临床病理特征的关系;术后随访5年,采用Kaplan-Meier法绘制不同LncRNA-P21、miR-17-3p表达三阴性乳腺癌患者的生存曲线;Cox回归分析影响三阴性乳腺癌患者预后的因素。结果 癌组织LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P <0.05);癌组织miR-17-3p mRNA相对表达量高于癌旁组织(P <0.05)。临床Ⅲ期、腋窝淋巴结转移、Ki-67≥30%三阴性乳腺癌组织中LncRNA-P21 mRNA相对表达量低于临床Ⅰ、Ⅱ期,无腋窝...  相似文献   

5.
目的:探讨乳腺癌患者血浆微RNA(microRNA,miRNA)的表达及其临床意义。方法:采用深度测序的方法,筛选8对乳腺浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织中差异表达的miRNA,选出在乳腺癌中高表达的miRNA;用实时荧光逆转录多聚酶链反应(realtime RT-PCR)方法对55例乳腺浸润性导管癌患者及30例作为对照的正常健康体检女性血浆中相应miRNA的表达水平进行检测。结果:深度测序发现miR-7、miR-21、miR-155、miR-182、miR-184、miR-196a在乳腺癌组织中表达上调;在乳腺癌患者及健康对照者血浆中用realtime RT-PCR方法进行检测发现其中miR-21、miR-155、miR-184、miR-196a在乳腺癌患者血浆中升高(P<0.001,P<0.001,P=0.002及P=0.028);其ROC曲线下面积及95%可信区间(95%CI)分别为:0.823(95%CI:0.730~0.916),0.780(95%CI:0.681~0.879),0.708(95%CI:0.591~0.826)和0.645(95%CI:0.527~0.763);miR-21和miR-155与乳腺癌淋巴结转移相关(P=0.001及P=0.024)。结论:miRNA在乳腺癌患者血浆中差异表达,与乳腺癌临床病理特征有关,有望成为乳腺癌新的血液肿瘤标志物。  相似文献   

6.
目的分析胰腺癌及其配对癌旁组织中miR-223的表达差异,评价miR-223对胰腺癌潜在的诊断价值。方法收集笔者医院28例胰腺癌患者手术标本的癌组织及配对的癌旁组织,3例正常胰腺组织作为对照。采用TaqMan Real-timePCR方法,以U6为内参,检测miR-223在胰腺癌及配对癌旁组织中的相对表达量,并分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。结果胰腺癌组织中miR-223的表达量显著高于癌旁组织(P=0.008),胰腺癌中miR-223的高表达和肿瘤临床特征无关(P>0.05)。结论 miR-223可能在胰腺癌的发生发展中发挥一定作用,并可能成为新的胰腺癌诊断标志物。  相似文献   

7.
目的分析淋巴瘤患者外周血中循环microRNA-21(miR-21)的表达,探讨循环miR-21在淋巴瘤早期诊断中的意义。方法收集60例临床确诊的淋巴瘤患者外周血,50名健康体检人群外周血作为正常对照组,用FQ-PCR方法检测miR-21的表达;同时检测对应的临床确诊淋巴瘤患者肿瘤组织及外周血中miR-21的表达,判断二者的相关性。结果 FQ-PCR检测结果显示,淋巴瘤患者外周血中循环miR-21的表达显著高于正常对照组,差异有统计学意义(t=6.9,P<0.000 1);且淋巴瘤患者外周血中循环miR-21的表达与肿瘤组织中miR-21的表达密切相关(r2=0.931,P<0.000 1)。结论外周血循环miR-21检测有望成为淋巴瘤早期诊断的新的分子标志。  相似文献   

8.
 【目的】 荧光染料Ⅰ(SYBR GreenⅠ)是一种较为常用的非探针类定量PCR的方法,其结果具有一定特异性&#65377;本研究的目的是建立检测野生型p53介导蛋白磷酸酶(Wip1)mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其远癌正常肺组织中Wip1的表达水平,研究肺癌组织中Wip1的表达水平与各种临床病理特征之间的关系&#65377; 【方法】 利用相对定量的方法检测44例肺癌及相应远癌正常肺组织中Wip1 mRNA相对于β-actin mRNA的表达量,进行相对定量分析&#65377; 【结果】 44例非小细胞肺癌(NSCLC)及相应远癌正常肺组织均有Wip1 mRNA的表达,其中17例非小细胞肺癌中Wip1 mRNA高表达,占38.6%,两者表达差异有统计学意义 (Ratio = 2.1644 ± 1.394,P < 0.05);分化程度低的肺癌组织中Wip1 mRNA表达量显著高于分化程度高者(F = 5.08,P = 0.013)&#65377; 【结论】 SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法可以成功地检测Wip1基因的表达量&#65377;初步检测结果显示Wip1可能是一种肺癌发生发展过程中的致癌因素&#65377;  相似文献   

9.
目的 对健康女性血清及乳腺癌患者血清中miR-21和miR-155表达水平进行实时定量PCR检测,同肿瘤患者癌组织与对应癌旁组织的miR-21和miR-155表达水平的变化趋势相比较,以评价血清中miR-21和miR-155在乳腺癌早期诊断中的潜在价值.方法 收集健康女性血液和患者血液与患者癌组织和癌旁组织,利用实时荧光定量PCR对提取的RNA miR-21和miR-155进行相对定量检测,得到miR-21和miR-155在血清中变化趋势与在组织中变化趋势的相关性.结果 miR-21和miR-155在肿瘤组织的表达水平明显高于其在癌旁组织的表达水平,miR-21和miR-155在乳腺癌患者血清中的表达水平也要高于其在健康体检者血清中的表达水平.血清中miR-21和miR-155表达水平变化趋势与组织中miR-21和miR-155表达水平变化趋势一致.结论 血清中miR-21和miR-155能反映乳腺癌的发生,miR-21和miR-155有可能作为乳腺癌早期诊断的肿瘤标志物.  相似文献   

10.
《皖南医学院学报》2019,(5):414-418
目的:探讨miR-124对胃癌细胞增殖、凋亡与迁移的影响及其相关调控机制。方法:收集确诊为胃癌的癌组织和癌旁组织42组,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测癌和癌旁组织以及正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞株BGC-823、MGC-803、SGC-7901、AGS中miR-124的相对表达量;在胃癌细胞株BGC-823中过表达miR-124,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移,Western blot检测过表达miR-124前后磷酸化PI3K/AKT的变化。结果:胃癌组织中miR-124水平低于癌旁组织(0.70±0.15 vs. 1.14±0.27,t=10.14,P=0.000),胃癌细胞株中miR-124水平低于GES-1(F=38.012,P=0.000);过表达miR-124后细胞BGC-823的增殖与迁移能力均减低(0.94±0.09 vs. 0.62±0.06,t=6.615,P=0.000;152.33±14.05 vs. 53.67±12.58,t=9.061,P=0.001),而细胞凋亡率增加(2.10±0.56 vs. 8.30±0.31,t=16.777,P=0.000);过表达miR-124后p-AKT、p-PI3K蛋白表达均出现下调(118.90±10.51 vs. 34.87±4.23,t=12.847,P=0.000;158.53±10.94 vs. 71.07±4.51,t=12.802,P=0.000)。结论:miR-124在胃癌中低表达;miR-124抑制胃癌细胞的增殖、迁移,促进胃癌细胞凋亡,可能是靶向PI3K/AKT信号通路实现的。  相似文献   

11.
目的探讨miR-182在三阴性乳腺癌中的表达及意义。方法 收集30例石蜡包埋的三阴性乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织标本,并收集患者的基本资料。RT-PCR测定miR-182的相对表达,分析miR-182在TNBC中的表达与肿瘤的大小、分级、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、无疾病生存率、总生存率等的相关性。结果RT-PCR结果提示,癌组织中miR-182表达为癌旁组织的8.6倍,差异有统计学意义(P<0.001)。miR-182在淋巴结阳性及TNM分期Ⅲ期中表达高于淋巴结阴性(Z=-3.454,P=0.001)及TNM(Ⅰ+Ⅱ)期者(Z=-3.946,P=0.000),差异有统计学意义;COX回归多因素分析显示,miR-182高表达(HR=0.107,95%CI:0.018~0.643,P=0.015)、淋巴结阳性(HR=0.189,95%CI:0.020~1.757,P=0.016)、脉管瘤栓(HR=0.190,95%CI:0.020~1.826,P=0.008)、Ki67≥14%(HR=0.182,95%CI:0.041~0.801,P=0.024)、TNM分期(Ⅲ期)(HR=0.501,95%CI:0.044~5.741,P=0.001)是独立的预后因子。结论 miR-182在三阴性乳腺癌中表达上调,与淋巴结转移及临床分期相关,miR-182高表达是三阴性乳腺癌独立的预后因素之一,与预后差相关。  相似文献   

12.
目的 :探讨乳腺癌患者血浆miR221表达及其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测56例乳腺癌患者癌及癌旁组织miR-221的表达,并进一步检测56例乳腺癌患者和20例正常人血浆miR-221的表达;结合临床资料用t检验、多因素Logistic回归等方法分析血浆miR-221表达及其临床意义。结果:miR-221在乳腺癌患者治疗前血浆中的表达(8.19±2.97)高于正常人血浆(3.75±0.67),差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌患者癌组织miR-221表达与治疗前血浆中miR-221表达呈正相关(r=0.832,P<0.001);患者治疗前血浆miR-221表达与淋巴结转移和临床分期呈正相关;患者化疗后血浆miR-221表达与耐药性呈正相关。结论:miR-221在乳腺癌患者血浆中表达水平明显上调,能够反映乳腺癌组织miR-221的表达水平,其或可成为监测乳腺癌患者临床分期及耐药性的一个潜在指标。  相似文献   

13.
目的:探讨miR-125b在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与临床病理特征的相关性。方法:应用Realtime RT—PCR方法检测42例乳腺浸润性导管癌及癌旁非肿瘤乳腺组织中miR-125b的表达,分析miR-125b表达与乳腺癌常用的临床病理指标的关系。结果:miR-125b在癌组织中的表达低于非肿瘤组织,差异有显著性(P〈0.01);miR-125b的表达与乳腺癌的淋巴结转移状态及Her-2的表达相关(P=0.019和P=0.033),miR-125b的表达与年龄、肿块大小、临床病理分期及雌、孕激素状态未见显著相关性。结论:miR-125b在乳腺浸润性导管癌中的表达异常,可能和乳腺癌的侵袭转移等恶性生物学行为有关,有望成为判断乳腺癌预后的指标及治疗靶点。  相似文献   

14.
目的::研究 microRNA-106a(miR-106a)对低转移性人结直肠癌 SW480细胞增殖和侵袭等恶性生物学行为的影响。方法:采用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测20对结直肠癌组织及其癌旁组织中 miR-106a的表达,将 miR-106a mimics 转染到 SW480细胞中,用 qRT-PCR法检测 miR-106a的表达水平,并用CCK8实验、克隆形成实验和划痕法检测 SW480细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力。结果:与癌旁组织相比较,结直肠癌组织中 miR-106 a 的表达水平升高(t=2.05,P=0.047);与mimics control转染组相比,miR-106a mimcs转染组miR-106a的表达水平显著升高(t=13.25,P=0.000),且细胞活力(72 h,t=4.52,P=0.000;96 h,t=6.17,P=0.000)和细胞克隆数明显升高(t=5.69,P=0.005),以及伤口愈合能力升高(48 h,t=5.44,P=0.032)。结论:过表达 miR-106a可显著促进低转移的人结直肠癌SW480细胞增殖和迁移能力,为结直肠癌的治疗提供了潜在的策略。  相似文献   

15.
目的比较癌组织与正常组织中SOX4、BRMS-1、CYTB、P53表达的差异,了解乳腺癌与表达的关系.方法通过SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中SOX4、BRMS-1的含量.结果 (1)SOX4和CYTB在乳腺癌组织中表达升高(P<0.05),而BRMS-1在乳腺癌组织中表达降低(P<0.05);(2)在癌组织中SOX4和BRMS-1的表达存在正相关关系(r=0.57,P<0.05);在正常组织中SOX4和CYTB的表达存在负相关关系(r=-0.64,P<0.05).结论SOX4在乳腺癌组织中处于高表达状态,并与BRMS-1和CYTB基因表达有关.  相似文献   

16.
目的:探讨食管癌癌组织和癌旁组织中miR-9的表达差异,并对潜在的miR-9靶基因进行预测。 方法:采用SYBR Green I染色的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对50例食管癌及配对癌旁正常组织 标本中miR-9基因的表达水平进行定量分析,并运用生物信息学技术对miR-9的靶基因进行预测。结 果:miR-9在食管癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P〈0. 05),且与患者淋巴结转移有关(P〈0.05),与性别、年龄、组织学分型、TNM分期无关(P〉0. 05)。对miR-9预测得到GOLPH3、RAB34、 ALCAM靶基因。结论:miR-9在食管癌组织中低表达,而且与淋巴结转移有关,可能在食管癌的发病 中起重要作用。  相似文献   

17.
目的:探讨 SYBR Greens 实时荧光定量 PCR 法在乳腺癌诊断中的应用价值。方法以β-actin 为内对照,采用荧光定量 PCR(FQ-PCR)法检测45例健康女性体检者、91例良性乳腺疾病、193例乳腺癌以及87例其他肿瘤患者外周血中人乳腺球蛋白(human mammaglobin,HMAM)的表达量,分析其在不同临床病理因素情况下基因表达量的差异,并与 RT-PCR 法及其他乳腺癌标志物(CEA、CA125和 TSGF)进行灵敏度和特异性的比较。结果乳腺癌患者 HMAM 阳性率明显高于健康体检者、良性乳腺疾病和其他肿瘤患者(P <0.05);良性乳腺疾病和其他肿瘤患者 HMAM 阳性率高于健康体检者(P <0.05);良性乳腺疾病和其他肿瘤患者 HMAM 阳性率比较,差异无统计学意义(P >0.05)。乳腺癌患者 HMAM 表达与年龄、肿瘤大小、乳腺癌类型及雌激素受体、孕激素受体表达无关(P >0.05),与乳腺癌临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移及 HER2/neu 表达呈正相关(P <0.05)。HMAM 对乳腺癌诊断的灵敏度高于 TSGF 和 CEA(P <0.05),特异性高于 CA153、TSGF 和 CEA(P <0.05)。SYBR Green FQ-PCR 对乳腺癌检测的灵敏度和特异性均高于 RT-PCR(P <0.05)。结论SYBR Green FQ-PCR法检测 HMAM 灵敏度高、特异性强,可有效辅助乳腺癌的诊断。  相似文献   

18.
目的 探讨miR-23a和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人肝细胞癌(HCC)中的表达、相互关系及临床病理意义.方法 建立组织微阵列,采用原位分子杂交方法分别检测150例人HCC和136例相对应的癌旁组织中miR-23a的变化;利用免疫组化两步法检测XIAP蛋白和Ki-67蛋白的表达水平.结果 HCC组织和癌旁组织中miR-23a的高表达率分别为48.7%(73/150)和77.2%(105/136),两者差异有统计学意义(P=0.001),XIAP蛋白在HCC和癌旁组织中的高表达率分别为25.3%(38/150)和22.1%(30/136),两者差异无统计学意义;miR-23a高表达率在患者中男性高于女性(P=0.037)、HBsAg阳性高于HBsAg阴性患者(P=0.022)、大肝癌高于小肝癌(P=0.021)、Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期(P=0.002);而XIAP蛋白高表达在患者中小肝癌高于大肝癌(P=0.001)、Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期(P=0.009).此外两者均与患者年龄、是否合并肝硬化、组织学分级无关.经Pearson相关检验,miR-23a和XIAP蛋白在HCC中的表达呈显著负相关性(rs=-0.308,P<0.01).结论 miR-23a和XIAP可能参与HCC的发生与发展.  相似文献   

19.
目的 探讨乳腺癌组织中miRNA-92a、KLF4 mRNA的表达及与临床病理参数、预后的关系。方法选取2014年1月—2016年9月长沙市第一医院乳甲外科收治的124例乳腺癌患者。qRT-PCR检测癌组织和距离> 5 cm的癌旁组织中miR-92a、KLF4 m RNA表达;Pearson相关性分析乳腺癌组织中miR-92amRNA表达与KLF4 m RNA表达的相关性;绘制不同miR-92a、KLF4 mRNA表达乳腺癌患者的生存曲线;多因素Cox回归分析乳腺癌患者预后不良影响因素。结果 癌组织miR-92a、KLF4 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P <0.05)。Pearson相关性分析显示,乳腺癌组织中miR-92a与KLF4 mRNA表达呈正相关(r=0.612,P <0.05)。临床分期Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴结转移患者的miR-92a、KLF4 mRNA表达水平高于临床分期Ⅰ、Ⅱ期和无淋巴结转移患者(P <0.05)。不同年龄、肿瘤直径、分化程度、雌激素受体、孕激素受体患者miR-92a、KLF4 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0...  相似文献   

20.
目的:检测MicroRNA-21(miR-21)在结肠癌及其相应癌旁正常组织中的表达,探讨其与结肠癌临床病理指标的关系。方法: 应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测50例结肠癌组织标本和癌旁组织标本中miR-21的相对表达量,分析其在2种组织中的表达变化,探讨miR-21表达水平与结肠癌发病位置、临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移的关联性。结果:miR-21在结肠癌组织中相对表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),右半结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于左半结肠癌组织 (P<0.05);Ⅲ期和Ⅳ期结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期结肠癌(P<0.05);miR-21表达水平在不同浸润深度结肠癌之间比较差异无统计学意义(P>0.05);有淋巴结转移结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论:相对于癌旁组织,miR-21在结肠癌组织中表达明显上调,且表达水平与发病位置、临床分期及是否有淋巴结转移有关。  相似文献   

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