不同生物碱对小鼠S180肉瘤细胞获得性多药耐药相关生物因子表达的干预

目的:探讨中药生物碱口服给药对化疗诱导肿瘤MDR干预的分子生物学基础,以指导临床应用中药干预化疗所致MDR的产生。方法:以亚于治疗剂量的联合化疗,同时给予苦参碱、粉防己碱、氧化苦参碱和盐酸小檗碱4周,流式细胞仪荧光检测MDR肿瘤细胞P170、LRP、FOPOⅡ、Fas、CD54和细胞凋亡率。结果:苦参碱、粉防己碱明显降低化疗诱导后耐药细胞P170、LRP的表达率和TOPOⅡ活性,增加凋亡基因Fas表达率,减少细胞黏附因子CD54的表达,促进耐药肿瘤细胞的凋亡;而氧化苦参碱和盐酸小檗碱作用不明显。结论:苦参碱、粉防己碱可通过对MDR相关生物活性物质的调节,干预化疗诱发MDR的产生,并且其作用程度与生物碱的结构相关。     

四种生物碱逆转肿瘤获得性多药耐药与调控细胞凋亡的相关性研究

目的:观察四种中药生物碱对模拟临床化疗PFC方案诱导的小鼠S180细胞多药耐药基因mdr1表达蛋白P170过度表达的逆转与调控细胞凋亡相关性,探讨不同中药生物碱对肿瘤多药耐药逆转的差异,以指导临床应用,提高化疗疗效。方法:给予模拟临床PFC方案以亚于治疗剂量的联合化疗诱导四周的腹水型S180小鼠,苦参碱、粉防己碱、氧化苦参碱和盐酸小檗碱2周,流式细胞仪免疫荧光检测S180肿瘤细胞P170、TOPOⅡ、Fas、Trail和细胞凋亡率。结果:苦参碱、粉防己碱明显降低化疗诱导后耐药细胞P170表达率和TOPOⅡ活性,增加凋亡基因Fas表达率,促进耐药肿瘤细胞的凋亡;盐酸小檗碱明显降低化疗诱导后耐药细胞TOPOⅡ的表达率。结论:苦参碱、粉防己碱逆转肿瘤细胞获得性多药耐药P170过度表达与调控细胞凋亡有关。     

粉防己碱对获得性多药耐药小鼠S180肿瘤细胞P170,LRP,TOPO Ⅱ表达的调控

目的:观察粉防己碱口服给药对化疗诱导的多药耐药基因表达产物P₁₇₀、肺耐药蛋白LRP和拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)的影响。方法:以亚于治疗剂量的联合化疗PFC方案,化疗诱导建立小鼠S180肿瘤细胞多药耐药模型,同时给予粉防己碱4周,流式细胞仪荧光检测P₁₇₀,LRP,TOPOⅡ。结果:粉防己碱明显降低化疗诱导后耐药细胞P₁₇₀,LRP的表达率和ROPOⅡ活性。结论:粉防己碱可通过抑制耐药基因表达和DNA拓扑异构酶活性,干预化疗诱发的肿瘤细胞多药耐药的产生。     

粉防己碱逆转获得性多药耐药小鼠S180肿瘤细胞P170过度表达与调控细胞凋亡相关性研究

目的:观察粉防己碱对模拟临床化疗PFC方案诱导的小鼠S180细胞多药耐药的逆转作用,明确其对多药耐药逆转的作用及其作用的分子机制,以指导粉防己碱临床逆转肿瘤患者多药耐药,提高化疗疗效。方法:模拟临床PFC方案,分别给予小鼠顺铂3 mg·kg^-1,ip,每周 1 次;环磷酰胺和 5 FU各 3 mg·kg^-1,ig,每日 1 次,连续 4周,流式细胞术荧光检测观察其对肿瘤细胞膜糖黏蛋白P₁₇₀、细胞凋亡、细胞凋亡因子Fas,Trail、细胞黏附因子CD₅₄的影响。结果:粉防己碱降低肿瘤细胞耐药基因表达产物P₁₇₀的过度表达,增加对细胞凋亡因子Fas,Trail表达率,增加耐药S180细胞的凋亡,降低细胞黏附因子CD₅₄的表达。结论:说明粉防己碱逆转肿瘤多药耐药与其对肿瘤多种相关生物分子因子的调节有关。     

苦参碱干预获得性多药耐药小鼠S180肿瘤细胞相关生物因子P170过度表达与细胞凋亡的相关性

目的:实验观察苦参碱口服给药对化疗诱导的MDR模型小鼠细胞膜糖粘蛋白P170、细胞凋亡率、凋亡因子Fas和细胞粘附因子CD54的影响,进一步探讨其干预MDR的分子生物学机制,以指导临床应用干预化疗多药耐药的产生.方法:以亚于治疗剂量的联合化疗,同时给予苦参碱4周,流式细胞荧光检测P170、Fas、CD54和细胞凋亡.结果:苦参碱明显降低细胞膜糖粘蛋白P170的表达,增加细胞凋亡因子Fas表达率、耐药肿瘤细胞凋亡率并降低细胞粘附因子CD54的表达.说明苦参碱可通过对相关生物活性物质的调节,干预化疗诱导的肿瘤细胞MDR的产生.     

粉防己碱干预小鼠S180肿瘤细胞产生多药耐药的研究

目的:观察粉防己碱对化疗诱导的小鼠MDRS180肿瘤细胞mdr1表达产物P170、细胞凋亡因子Fas和细胞凋亡的影响,以探讨其干预多药耐药的分子生物学机制。方法:采用低于治疗剂量的联合化疗药造模,同时给予粉防己碱4周,流式细胞荧光检测P170、Fas和细胞凋亡表达率。结果:粉防己碱明显减少耐药肿瘤细胞的mdr1表达产物P170,增加凋亡基因Fas表达率和细胞凋亡率。结论:粉防己碱可通过对肿瘤细胞凋亡的调节干预化疗诱发的肿瘤细胞多药耐药的产生。     

适合中药研究的小鼠S180肿瘤获得性多药耐药模型的建立及稳定性研究

目的模拟临床化疗PFC(顺铂、环磷酰胺、5-氟脲嘧啶)方案,诱导小鼠S180肿瘤细胞多药耐药(MDR)相关生物因子的异常表达,建立获得性多药耐药基因表达产物P170(P糖蛋白)、LRP(肺耐药相关蛋白)及拓扑异构酶(TOPO)表达小鼠载体模型,并观察模型稳定性,为探讨药物干预MDR的有效途径提供实验模型,同时为临床提供全面定量检测肿瘤耐药程度的方法。方法应用流式细胞术动态检测MDR表达产物P170、LRP、TOPO表达情况及S180细胞凋亡指标(Fas因子,CD95),同法检测同期外周血淋巴细胞上述指标,模型小鼠传代后ig给予苦参碱100mg/kg,再次检测上述指标。结果实验组小鼠自化疗后1周P170、LRP、TOPO表达逐渐增高,自第4周后显著性增加(P<0.05);而S180细胞凋亡率、细胞杀伤率及Fas因子表达率则随化疗时间的延长而逐渐下降。MDR相关基因表达显著性增加时,S180细胞凋亡率等则显著性降低(P<0.05)。第5周时实验组MDR阳性表达小鼠占61.4%。实验组外周血淋巴细胞、凋亡率与S180细胞有显著相关性。结论传代后模型小鼠MDR相关基因表达稳定,给予钙离子拮抗剂苦参碱可逆转上述指标的表达。     

姜黄素乳剂对联合化疗诱导的小鼠S_(180)肿瘤细胞多药耐药相关耐药蛋白表达的影响

目的:探讨姜黄素对化疗诱导的肿瘤多药耐药干预的分子生物学基础。方法:对S180荷瘤小鼠以亚于治疗剂量的联合化疗,同时给予姜黄素乳剂4周,流式细胞仪荧光检测肿瘤细胞耐药蛋白P170、LRP和TOPOII。结果:姜黄素乳剂明显降低化疗诱导后耐药细胞P170、LRP的表达率和TOPOII活性。结论:姜黄素是通过对于相关耐药蛋白的调节,干预化疗诱发的肿瘤细胞多药耐药的产生。     

黄连解毒汤醇提物预防给药对MDR模型小鼠相关基因表达产物的影响

目的：观察黄连解毒汤70%醇提物预防给药对小鼠多药耐药(MDR)基因表达产物P170、肺耐药蛋白(LRP)和拓扑异构酶II(TOPO II)的影响,探讨其干预MDR的分子生物学基础,指导临床应用以预防MDR的产生。方法：小鼠随机分为非耐药模型组、耐药模型组、黄连解毒汤70%醇提物100,50 mg·kg^-1组,模拟临床PFC方案,建立小鼠S180肿瘤细胞多药耐药在体模型,同时给予黄连解毒汤70%醇提物4周,流式细胞仪荧光检测P170,LRP,TOPOII。结果：黄连解毒汤70%醇提物明显降低化疗诱导后耐药细胞P170,LRP的表达率和ROPOII活性。结论：黄连解毒汤70%醇提物可通过对相关生物活性物质的调节,干预和逆转化疗诱发的肿瘤MDR的产生。     

苦参碱对获得性多药耐药小鼠S180肿瘤细胞基因表达产物P170、LRP及TOPOⅡ表达的影响

目的:实验观察苦参碱口服给药对化疗诱导的多药耐药基因表达产物P170、肺耐药蛋白LRP和拓扑异构酶Ⅱ的影响,探讨其干预多药耐药的分子生物学基础,以指导临床应用苦参碱干预化疗多药耐药的产生.方法:以亚于治疗剂量的联合化疗PFC方案,建立小鼠S180肿瘤细胞多药耐药模型,同时给予苦参碱4周,流式细胞仪荧光检测P170、LRP、TOPOⅡ.结果:苦参碱明显降低化疗诱导后耐药细胞P170、LRP的表达率和ROPOⅡ活性.说明苦参碱可通过对相关生物活性物质的调节,干预化疗诱发的肿瘤细胞多药耐药的产生.     

苦参碱逆转小鼠S180肿瘤细胞获得性多药耐药基因相关表达产物过度表达的研究

目的:观察苦参碱对模拟临床化疗顺铂 5-氟尿嘧啶 环磷酰胺(PFC)方案诱导的小鼠S180细胞多药耐药相关基因表达产物过度表达的逆转作用,明确其对多药耐药逆转的作用及其作用的分子机制。方法:模拟临床PFC方案,分别给小鼠顺铂3 mg/kg.ip,环磷酰胺和5-氟尿嘧啶(5-FU)各3 mg/kg.ip,获得耐药S180小鼠模型。腹腔接种传代后24 h随机分组,对照组给予纯净水0.2 m l/10 g灌胃,苦参碱100 mg/kg和50 mg/kg组给分别给予0.5%、0.25%的苦参碱溶液0.2 m l/10 g灌胃,连续10天,流式细胞术免疫荧光检测肿瘤细胞多药耐药基因表达产物细胞膜糖粘蛋白(P170)、肺耐药蛋白(Lung resistance prote in,LRP)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(DNA,Topoisom eraseⅡ,TOPOⅡ)的影响。结果:苦参碱降低耐药S180肿瘤多药耐药相关基因表达产物P170、LRP、TOPOⅡ表达率。结论:苦参碱逆转肿瘤多药耐药作用与其对肿瘤多种相关生物分子因子的调节有关。临床可以根据肿瘤多药耐药的性质,通过调节多药耐药相关因子逆转肿瘤化疗耐药性,提高临床化疗疗效。     

黄连解毒汤70%醇提物对MDR模型小鼠S180肿瘤细胞凋亡因子表达的影响

目的:观察黄连解毒汤70%醇提物对MDR模型小鼠S180肉瘤细胞凋亡因子的影响,探讨其逆转多药耐药作用的分子机制。方法:模拟临床PFC方案,建立小鼠S180肉瘤细胞多药耐药在体模型,同时给予黄连解毒汤70%醇提物灌胃10d,流式细胞仪荧光检测观察细胞凋亡因子Fas、Trail、细胞黏附因子CD54等指标。结果:黄连解毒汤70%醇提物增加耐药细胞凋亡因子Fas、Trail表达率,促进耐药S180细胞的凋亡,降低细胞黏附因子CD54的表达。结论:黄连解毒汤70%醇提物促进耐药细胞凋亡因子的高表达,是其逆转肿瘤多药耐药的途径之一。     

苦参碱与粉防己碱逆转人MCF-7细胞耐药性的作用与机制

目的:探讨中药有效成分苦参碱与粉防己碱合用能否逆转人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性.方法:使用人乳腺癌MCF-7和耐多柔比星的MCF-7/DOX细胞进行研究.采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;流式细胞术检测罗丹明123荧光强度的变化;Western blot方法检测P-糖蛋白的表达变化.结果:苦参碱作用耐药和敏感细胞的IC50相近,耐药细胞对苦参碱没有明显的交叉耐药性;流式细胞术分析发现苦参碱单独处理MCF-7/DOX耐药细胞,可以微弱地降低其耐药性,并且与粉防己碱有协同作用;苦参碱与多柔比星合用,可以增加多柔比星对MCF-7/DOX耐药细胞的生长抑制作用,且与粉防己碱有协同作用;苦参碱和粉防己碱、多柔比星合用处理细胞,MCF-7/DOX耐药细胞株P-糖蛋白表达水平下降.结论:苦参碱与粉防己碱合用具有协同作用,能逆转人乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性,降低P-糖蛋白的表达.     

参芪健胃汤对胃癌多药耐药基因及肺耐药蛋白逆转作用的临床观察

目的：观察参芪健胃汤对胃癌患者MDR1-mRNA（多药耐药基因）、LRP（肺耐药蛋白）的逆转作用。方法：（1）建立数学模型分别分析患者MDR1-mRNA、LRP在胃癌组织与外周血中表达水平的相关性;（2）采用PT—PCR法及流式细胞仪定量检测治疗组与对照组治疗前后MDR1-mRNA、LRP在外周血中的表达水平,并分析其在治疗前后变化的差异性;（3）探讨参芪健胃汤对患者胃癌组织多药耐药的逆转作用及其主要靶点;（4）综合评价以参芪健胃汤辅助胃癌化疗患者的血常规、肝功能、免疫功能、肿瘤标志物水平、临床症状及生活质量的改善情况。结果：参芪健胃汤能抑制胃癌MDR1-mRNA基因的表达水平,从而可逆转胃癌患者的多药耐药。结论：参芪健胃汤能改善化疗患者的生活质量、临床症状,减轻化疗药物的血液学毒性及肝功能损害。     

Matrine induces apoptosis in gastric carcinoma cells via alteration of Fas/FasL and activation of caspase-3

Aim of the study

Matrine, an alkaloid purified from the chinese herb Sophora flavescens Ait, is well known to possess activities including anti-inflammation, anti-fibrotic and anticancer. In this study, the mechanism of matrine inducing the apoptosis of gastric carcinoma cells was investigated.

Materials and Methods

Proliferation of SGC-7901 cells was examined by MTT assay. Cellular morphology was observed under transmission electron microscope. Flow cytometry (FCM) was used to observe the apoptosis of SGC-7901 cells by staining with annexinV-FITC/PI. The expression levels of Fas/FasL in SGC-7901 cells were monitored by FCM analysis using an indirect immunoflurenscence method. Activity of caspase-3 enzyme was measured by spectrofluorometry.

Results

MTT assay showed that matrine inhibited SGC-7901 cells proliferation in a dose-dependent and time-dependent manner. Apoptosis induction was demonstrated by morphological changes under electron microscope and FCM analysis. Florescence intensity levels of Fas and FasL were found to be equally up-regulated after matrine treatment, which were both correlated with apoptosis rate. The activity of caspase-3 enzyme increased in matrine groups, positively correlated with apoptosis rate.

Conclusions

Matrine could inhibit cell proliferation and induce apoptosis of SGC-7901 cells in vitro. The apoptosis induction appears to proceed by up-regulating Fas/FasL expression and activating caspase-3 enzyme.     

苦参碱对腺嘌呤致大鼠肾小管-间质纤维化的影响

 目的采用腺嘌呤诱导大鼠肾间质纤维化的模型,进一步了解苦参碱在肾小管-间质纤维化中的防治作用及其机制方法60只雄性大鼠随机分为3组:①正常对照组8只;②病理组28只;③治疗组24只按250 mg·kg^-1·d^-1给大鼠灌服腺嘌呤,连续21 d灌暇腺嘌呤1周后,治疗组每天还按20 mg·kg^-1·d^-1的剂量用苦参碱腹腔注射,分别观察治疗2,3,4周,3个不同时间点,正常对照、病理组和治疗组的血清肌酐、尿素氯、血清IL-6和肾小管间质的TGF-β₁表达和肾组织病理改变等指标的变化,用放射免疫法检测血清IL-6的水平,免疫组化SABC法检测肾小管间质中的TGF-β₁蛋白的表达和分布,采用HPIAS- 1000型全自动彩色图像分析系统,对免疫组化染色阳性信号进行扫描,半定量分析各组阳性表达面积百分比,肾组织HE染色丰定量分析各组肾小管-间质损伤指数结果苦参碱治疗组大鼠的血清肌酐、尿素氮与同期病理组比较,有明显的改善(P<0.05);血清IL-6水卓、肾小管间质的TGF-β₁蛋白表达显著低于同期病理组(P<0.05),但均高于正常对照组(P<0.01) 苦参碱治疗的各组肾小管间质损伤指数低于病理组(P<0.05)。结论在腺嘌呤诱导的大鼠肾间质纤维化过程中,苦参碱能降低其血清BUN,Scr,IL-6水平和TGF-β₁蛋白在肾小管间质中的表达,阻抑肾间质纤维化的进展,并有相应的时效关系。说明苦参碱对腺嘌呤导致肾间质纤维化大鼠模型的肾功能有一定保护作用,并可减轻肾间质纤维化的改变,其作用机制可能与降低IL-6水平和抑制TGF-β₁的蛋白表达有关