CPNE7通过上皮间质转化影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CPNE7在胃癌组织和细胞中的表达及影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:基于生物信息学数据库GEPIA 从转录水平分析CPNE7在胃癌及癌旁正常组织中的表达差异。qRT-PCR法检测CPNE7在3种胃癌细胞系(AGS、MKN-45、HGC-27)和胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中的表达,选择表达量相对较高的AGS细胞作为后续实验细胞。通过慢病毒转染AGS细胞敲减CPNE7的表达,根据不同处理分为RNAi-vector组、RNAi-1组、RNAi-2组、RNAi-3组,qRT-PCR、Western blot验证细胞转染效率,选择敲减效率最有效的RNAi-1(实验组)和RNAi-vector(对照组)进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞活力,EdU和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax、Bcl-2)及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果:CPNE7在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P＜0.05)。与正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)相比较,CPNE7在胃癌细胞中明显高表达(P＜0.05),在AGS胃癌细胞中CPNE7相对表达量最高（P＜0.001)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax的表达,下调Bcl-2的表达（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可增加上皮标志物蛋白(E-cadherin)的表达水平(P＜0.01),降低间质标志物蛋白(N-cadherin、Vimentin)的表达水平（P＜0.01)。结论:CPNE7在胃癌组织和细胞中表达上调,敲减CPNE7可通过影响EMT进程抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其可能成为胃癌的潜在分子标志物。     

BMP4 通过诱导EMT 促进肝癌迁移侵袭*

目的:检测BMP 4 在肝癌中的表达并探讨BMP 4 在诱导肝癌EMT 中的作用,进而研究其对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测肝癌组织中BMP 4 的表达,分析其与肝癌临床病理资料之间的关系。将BMP 4 表达质粒转染至肝癌细胞系HepG2 中,诱导BMP 4 外源性过表达。观察BMP 4 转染前、后HepG2 的细胞形态学改变;Westernblot检测转染前、后HepG2 中BMP 4、EMT 相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）表达变化情况;划痕和侵袭实验检测BMP 4 对细胞迁移侵袭能力的影响。结果:BMP 4 与患者的年龄、病理分级、临床分期、不良预后密切相关。BMP 4 过表达后HepG2 呈现典型的EMT 形态学改变,E-cadherin 表达下调、Vimentin 表达上调、细胞的迁移侵袭能力显著增强。结论:BMP 4 与肝癌临床病理资料密切相关,并可能通过诱导EMT 促进肝癌细胞的迁移侵袭能力。      

PAK5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭

目的:探讨p21活化激酶-5（p21-activated kinase 5,PAK5）蛋白对乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制。方法:观察PAK5过表达对乳腺癌细胞形态的影响,人乳腺肿瘤细胞MCF-7通过慢病毒感染稳定表达Flag-PAK5。然后提取感染细胞的总蛋白进行蛋白免疫印迹检测上皮-间质转化（EMT）标志物上皮-钙黏蛋白（E-cadherin）,纤维连接蛋白（Fibronectin）和波形蛋白（vimentin）的表达。最后通过Transwell实验检测过表达PAK5对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:过表达PAK5蛋白能够使细胞形态由鹅卵石样像梭形变化,下调E-cadherin蛋白,促进乳腺癌细胞迁移和侵袭。结论:PAK5可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生上皮－间质转化,促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生。     

宫颈癌上皮-间质转化的研究进展

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,严重威胁着妇女的健康,且发病率近几年来趋于年轻化。尽管使用了先进的筛查方法和预防性疫苗,但在治疗方案极为有限和副作用严重的情况下,超过一半的宫颈癌病例被诊断为晚期。如何解决上述问题,需从分子生物学层面来更好的认识宫颈癌。其中上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是近年来研究的热点,EMT是由上皮细胞表型向间质细胞表型转变的可逆的生物学过程,EMT可促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭,进而促进肿瘤的转移,影响患者的预后。本文综合目前的研究进展,将对近年来宫颈癌的EMT相关研究进展作一综述。     

miR-944靶向调控 S100PBP基因促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨微小RNA-944（microRNA-944,miR-944）对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:收集90例宫颈癌组织和40例正常宫颈组织,采用实时定量荧光PCR（Real-time PCR）试验检测宫颈组织样本和宫颈癌细胞中miR-944表达水平;在CaSki和HeLa细胞中,采用脂质体转染技术,抑制或者增加miR-944表达后,利用细胞增殖试验、细胞划痕试验和细胞侵袭试验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化情况;采用双荧光素酶报告基因试验检测miR-944对S100PBP基因的调控作用。结果:在宫颈癌组织中,miR-944表达水平显著高于正常宫颈组织（P<0.05）;miR-944在不同宫颈癌细胞中的表达水平,存在显著差异（P<0.05）。在CaSki细胞中,降低miR-944表达显著抑制了细胞迁移和侵袭能力（P均<0.05）;在HeLa细胞中,增加miR-944表达显著增强了细胞迁移和侵袭能力（P均<0.05）;miR-944表达对宫颈癌细胞增殖无影响（P>0.05）。抑制miR-944表达能够显著增强含有S100PBP基因3'-非翻译区（3'-UTR）的报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）,增加miR-944表达能够显著降低含有S100PBP基因3'-UTR的报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）。结论:在宫颈癌组织中,miR-944呈高表达状态;miR-944能够促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭;miR-944可靶向调节S100PBP基因表达,这可能是miR-944促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的内在机制。     

LPS诱导宫颈癌上皮间质转化的作用

目的:探讨LPS在宫颈癌细胞株Hela细胞增殖和上皮间质转化中的作用。方法:体外培养Hela细胞,以LPS(10μg/ml)诱导后,利用MTT法检测细胞的增殖情况。qPCR检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的RNA水平上的表达。Western blot检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白水平上的表达。Transwell检测LPS对Hela细胞迁移能力的影响。结果:在LPS诱导后能够明显的促进Hela细胞的增殖。E-cadherin在RNA和蛋白水平上都明显下降,N-cadherin、Vimentin在RNA和蛋白水平上都明显升高;LPS诱导后,明显促进Hela细胞的迁移能力。结论:LPS能够诱导宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖和上皮间质转化。     

UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究泛素结合酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C）在宫颈癌细胞中的表达情况,并明确UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:首先查阅GEPIA数据库,了解UBE2C在宫颈癌中的表达;其次通过qRT-PCR和Western blotting 法明确UBE2C在宫颈癌HeLa细胞及正常宫颈上皮细胞End1/E6E7中表达差异,然后分别构建si-UBE2C及si-NC转染宫颈癌HeLa细胞,检测转染后细胞中 UBE2C mRNA和蛋白表达;最后采用CCK-8 实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化,并鉴定UBE2C下游靶基因PTEN、P-p53的表达情况。结果:UBE2C在宫颈癌中高表达,能够促进宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并下调抑癌基因PTEN、P-p53的表达。结论:UBE2C能够加重宫颈癌细胞恶性表型;UBE2C可能作为宫颈癌诊断及治疗的判定指标之一。     

沉默S100P基因抑制肺腺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的:探讨肺癌组织及细胞中S100P基因表达对增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法:在GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库和HPA数据库（Human Protein Atlas）得到肺癌数据,分析S100P 基因在不同分型肺癌组织与正常组织中差异表达。使用shRNA -S100P RNA下调肺癌细胞系中S100P基因表达水平;细胞的增殖活性使用MTS比色法检测;细胞周期变化运用流式细胞仪检测;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。RT-qPCR与Western blot分别验证S100P表达及细胞周期、凋亡蛋白表达水平。结果:S100P基因在肺癌组织中表达水平明显高于正常组织(P＜0.01);不同分型的肺癌组织中S100P基因表达存在差异。与对照组相比,下调S100P使A549增殖、迁移和侵袭能力均降低。结论:S100P基因在肺癌中高表达且下调后可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

ALMS 1-IT1在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:探讨lncRNA ALMS1-IT1在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达及预后意义,明确ALMS1-IT1对CRC细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:通过GEPIA网络平台分析癌症基因图谱(The Ca...     

Harmine suppresses breast cancer cell migration and invasion by regulating TAZ-mediated epithelial-mesenchymal transition

Breast cancer is a highly lethal disease due to cancer metastasis. Harmine (HM), a β-carboline alkaloid, is present in various medicinal plants. Our previous study demonstrated that HM suppresses cell proliferation and migration by regulating TAZ in breast cancer cells and accelerates apoptosis. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) plays an important role in the development of breast cancer by inducing the characteristics of cancer stem cells, cancer metastasis and recurrence. Overexpression of TAZ was shown to mediate EMT in breast cancer cells. We aimed to investigate whether HM inhibits EMT and metastasis of breast cancer cells by targeting TAZ. In this study, the cells treated with HM or with downregulated expression of TAZ showed an increase in epithelial markers and decrease in mesenchymal markers in breast cancer cells. Consistently, the breast cancer cells treated with HM or with downregulated expression of TAZ showed suppressed migration and proliferation. Moreover, TAZ overexpression reversed EMT and metastasis induced by HM in breast cancer cells. Thus, HM suppresses EMT and metastasis and invasion by targeting TAZ in breast cancer cells. HM can be used as an anticancer drug for breast cancer treatment and chemoprevention.     

中期因子诱导上皮间质转化促进结直肠癌细胞增殖和侵袭的分子机制

目的:探讨中期因子（midkine,MK）诱导肠癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）促进结直肠癌增殖和侵袭的分子机制。方法:MTT法检测MK对肠癌细胞增殖及侵袭的影响,倒置显微镜下观察其形态学变化,Western blot检测其EMT标志物、NF-κB(p65)、Zbe1和MMP-9蛋白表达变化。结果:在10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和200ng/ml的MK作用下,SW480细胞的增殖率分别为:（106.33±4.57）%、（119.83±6.01）%、（148.52±8.31）%和(162.51±8.98)%,（F=70.954,P＜0.01）;HCT116细胞的增殖率分别为:(116.49±9.77）%、（129.79±2.31）%、（155.38±8.98）%和（158.11±6.75）%,（F=55.027,P＜0.01）。100ng/ml MK作用下,SW480细胞的侵袭数为每视野（40.34±2.52）个,而NF-κB信号通路抑制剂5μmol/L Bay11-7082预处理后的侵袭数为每视野（14.13±2.06）个,（F=41.391,P＜0.01）;HCT116细胞的侵袭数为每个视野（42.21±3.25）个,而Bay11-7082预处理后的细胞侵袭数为每视野（14.32±2.52）个,（F=69.206,P＜0.01）。MK诱导SW480和HCT116呈现梭形或长条形改变,E-cad蛋白表达下调,Vimentin、β-catenin、NF-κB (p65)和MMP-9蛋白表达上调,而Zbe1蛋白表达无明显变化。结论:MK通过上调NF-κB(p65)信号蛋白诱导肠癌细胞上皮间质转化,促进下游靶蛋白MMP-9表达上调,从而促进肠癌细胞增殖和侵袭。     

大肠癌组织和细胞中KDM3A的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究大肠癌组织和细胞中赖氨酸组蛋白甲基化酶(lysine histone demethylase 3A,KDM3A)的表达及其对大肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过生物信息学检索分析公开数据库中KDM3A在大肠癌组织中的表达及相关临床信息。采用qRT-PCR技术检验KDM3A在4种大肠癌细胞HT-29、SW480、SW620、DLD-1以及正常人结肠上皮细胞NCM460中的表达水平,筛选出KDM3A表达量低的大肠癌细胞系进行过表达并进行CCK-8增殖实验、Transwell实验及Western blot检测KDM3A过表达对细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结果:KDM3A在大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织,且KDM3A高表达患者生存率更低。过表达KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:高表达的KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

S100A4 regulates cell motility and invasion in an in vitro model for breast cancer metastasis

Elevated levels of the calcium-binding protein S100A4 are associated with poor patient survival in breast cancer patients and induce metastasis in rodent models. To investigate the effects of S100A4 on different components of the metastatic process, epithelial cells lines have been isolated from nonmalignant tumours in neu transgenic mice and from malignant tumours in neu/S100A4 double transgenic mice. Additional cell lines expressing both Neu and S100A4 have also been derived by transfection of rat S100A4 cDNA into tumour cell lines cloned from neu single transgenic mice. Using these cells in transfilter migration assays, it has been shown that increases in either motility or invasive properties correlate with each other and with the level of S100A4 protein. Injection of three of the cell lines separately into the mammary fat pads of nude mice showed that elevated levels of S100A4 correlated with the degree of metastasis to the lungs. In contrast, changes in cell proliferation and cell-substrate adhesion did not correlate with S100A4 levels. Neither motility nor invasiveness correlated with proteolytic degradation of gelatin as measured by zymography. Thus, the results suggest that the main effect of increases in S100A4 levels in metastasis is to generate increased cell motility and invasion and that this latter change is not dependent upon an increased ability to degrade the intercellular matrix.     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

MIIP 对膀胱癌 T24细胞增殖和迁移侵袭能力的抑制作用及其机制

目的：探讨迁移侵袭抑制蛋白（migration invasion inhibitory protein,MIIP）对膀胱癌 T24细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及作用机制。方法：设计并合成 MIIP 过表达质粒,并利用脂质体转染方法上调 T24细胞系中 MIIP 的表达。Western blot 及实时定量聚合酶链反应（Real －time PCR）检测过表达 MIIP 的效果,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）及平板克隆法观察 MIIP 过表达对 T24细胞增殖能力的影响,划痕及 Transwell 实验检验 MIIP过表达对 T24细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot 及 Real －time PCR 检测过表达 MIIP 后其上皮间充质转化（epithelial －mesenchymal transition,EMT）过程相关标志物钙黏蛋白 E（E －cadherin）、钙连蛋白 N（N －cadherin）、转录因子 Snail 蛋白和 mRNA 变化情况。结果：过表达质粒能有效上调 T24细胞系中 MIIP 蛋白及mRNA 的表达,上调 MIIP 表达后 T24细胞增殖能力明显下降,克隆形成能力下降,迁移侵袭能力减弱;上调MIIP 表达后 E －cadherin 表达增加,N －cadherin 及转录因子 Snail 表达减少。结论：过表达 MIIP 可能通过降解转录因子 Snail,从而抑制 EMT 进程降低膀胱癌 T24细胞的增殖及迁移侵袭能力。     

Claudin-1蛋白在胃癌组织和细胞中的表达及促进其表达后对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究紧密连接跨膜蛋白(Claudin-1)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学行为及裸鼠皮下成瘤能力的影响.方法:收集50例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织,采用RT-qPCR和免疫组化检测Claudin-1的表达;RT-qPCR和Western Blot检测Claudin-1在人胃癌细胞株MKN45、SGC790...