降氮汤对5/6肾切除大鼠肾小球CTGF表达的影响

肾小球硬化是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾衰的共同通路 ,及早阻止甚或逆转肾小球硬化对防治终末期肾衰有重大意义。在肾小球硬化的发病机制中 ,细胞因子网络始终是人们研究的热点。通过中和或抑制某些细胞因子以阻止促炎症细胞因子网络已成为今后肾脏病治疗的重要方向。近年来的大量研究显示中药在这一领域有巨大潜力。结缔组织生长因子(CTGF)作为一种新发现的生长因子在转化生长因子β(TGFβ)的诱导下有促进肾小球硬化的作用 ,其作用日益受到重视。〔1〕 本研究旨在观察中药降氮汤对 5 6肾切除大鼠肾小球CTGF表达的影响 ,以探讨…     

肾乐胶囊对大鼠5/6肾切除肾衰模型作用机理的实验研究

目的 :通过对大鼠 5/6肾切除 (5/6NX)所致肾衰模型的研究 ,探讨中药复方肾乐胶囊治疗慢性肾衰的作用机理。方法 :采用纤维蛋白原平板溶环法 ,检测尿中纤溶酶原激活物PA的活性 ;用半定量法分析残肾组织中组织型纤溶酶原激活物 ,尿激酶型纤溶酶原激活物 /纤溶酶原激活物抑制物 (tPA ,uPA/PAI-1)的染色强度和面积 ;用Northernblot来观察转化生长因子β(TGF-β)mRNA的表达。 结果 :模型对照组大鼠尿PA活性下降 ,肾组织tPA ,uPA表达下降 ;而肾组织中PAI-1和TGF-βmRNA表达增高。肾乐胶囊治疗后 ,尿PA的活性升高 ,肾组织中tPA ,uPA的表达增强 ;而肾组织中PAI-1和TGF-βmRNA的表达却下降。 结论 :肾乐胶囊可以通过调节 5/6NX模型大鼠尿PA的活性 ,肾组织tPA ,uPA/PAI-1,TGF-βmRNA的表达 ,延缓肾小球硬化和间质纤维化病变的进展。     

加减抵挡汤对肾小球硬化大鼠TIMP-1及PAI-1mRNA表达的影响

目的:探讨加减抵挡汤治疗肾小球硬化的机制。方法:采用单侧肾切除重复阿霉素注射造成肾小球硬化大鼠模型,以加减抵挡汤治疗并用西药科素亚为阳性对照,观察模型组和各治疗组的肾功能及24h尿蛋白定量,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠肾组织TIMP-1及其PAI-1的mRNA的表达。结果:加减抵挡汤各组均能降低肾小球硬化大鼠增高的24h尿蛋白,改善肾功能,且加减抵挡汤能下调大鼠肾组织TIMP-1和PAI-1mRNA的表达。结论:加减抵挡汤通过下调肾小球硬化大鼠肾组织TIMP-1和PAI-1 mRNA的表达,延缓肾功能衰竭。     

肾苏Ⅱ号方对局灶节段性肾小球硬化大鼠TGF-β1及PAI-1表达的影响

目的 观察中药复方肾苏Ⅱ号方对局灶节段性肾小球硬化( FSGS)大鼠肾功能、肾小球细胞外基质(ECM)积聚、转化生长因子-β1(TGF-β1)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响.方法 阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS型阿霉素肾病模型,依体重随机分为模型组、西药组及中药组,每组各12只,另设空白对照组(对照组,12只).西药组予灌胃贝那普利(0.33 mg/100 g),中药组予肾苏Ⅱ号方(3.5 g/100 g)灌胃,对照组和模型组予等量生理盐水灌胃.实验过程中死亡6只大鼠,其中,对照组1只,模型组2只,西药组1只,中药组2只.检测24 h尿蛋白定量(24 hU,邻苯三酚红法)、血尿素氮(BUN,尿素酶法)、血肌酐(SCr,肌酐酶法)、血清总蛋白(TP,双缩脲比色终点法)、血清白蛋白(ALB,溴甲酚绿比色测定法);观察肾小球病理形态学改变;半定量分析肾小球纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原( ColⅣ)全肾平均硬化指数(GSI)、ECM与肾小球面积比(ECM/GA)及TGF-β1、PAI-1表达.结果 治疗第12周末,中药组FSGS大鼠生化指标24 hU [(38.55 ±2.49)mg]、BUN[ (10.87±1.78) mmol/L]、SCr[(51.70±1.50) μmol/L]、TP[(68.28±2.31) g/L]、ALB[(42.43±1.95) g/L]改善;病理形态学观察肾小球硬化进展显著延缓;半定量分析GSI[ (1.68 ±0.33)级]、ECM/GA[(7.11±2.46)％]、FN[ (4.15±1.55)％]、ColⅣ[(1.47±0.48)％]、TGF-β1[(19.70±5.05)％]、PAI-1[ (22.57±10.65)％],与模型组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 肾苏Ⅱ号方可能通过抑制TGF-β1、PAI-1表达,阻抑基质过度积聚,进而延缓FSGS大鼠肾小球硬化进展.     

生药水蛭对残肾大鼠肾组织纤溶酶原激活物蛋白定位表达的影响

目的:探讨慢性进展性肾小球硬化及小管间质纤维化过程中肾组织中组织型纤溶酶原激活物(tPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)蛋白表达及生药水蛭对其的影响。方法:以7/8肾切除 SD 大鼠为实验动物模型,予水蛭治疗后分别检测大鼠体重、血压、血尿生化、尿纤溶酶原激活物(PA)活性及残肾组织常规病理,用免疫组化染色定性定量评价残肾 tPA、uPA 蛋白表达。结果:于7/8肾切除后,大鼠肾功能进行性丧失,表现为尿蛋白、血压、血 BuN、SCr 及血脂增高,残肾组织出现肾小球硬化和间质纤维化。免疫组化染色提示肾组织 tPA、uPA 表达下降。经水蛭治疗后,大鼠肾功能改善,血压下降,尿蛋白下降,残肾组织 tPA、uPA 蛋白表达增加。结论:水蛭治疗可通过改善7/8肾切除大鼠 PAs 系统的紊乱而干预肾纤维化病变的进展。     

尿毒清胶囊及其拆方对5／6肾切除大鼠肾组织TGF-β1FNLN表达的影响

目的:观察尿毒清胶囊及其拆方对5/6肾切除法制作的慢性肾功能衰竭大鼠模型肾组织TGF-β1、FN、LN表达的影响.方法:5/6肾切除法建立慢性肾功能衰竭大鼠模型分为黄芪组、丹参组、大黄组、黄芪丹参大黄组、尿毒清组、空白对照组,空白对照组予以蒸馏水灌胃,其他组给予相应的药物煎剂灌胃干预6周.治疗前后,检测各组大鼠血尿素氮、血肌酐的水平;并采用免疫组化SABC法检测各组大鼠肾组织TGF-β1、FN、LN的表达情况,并进行定量分析.结果:TGF-β1、FN、LN在各组均有表达,上述指标在空白组表达最为强烈,与其他各组比较,差别均有显著性意义(P<0.01或P<0.05).尿毒清组表达最轻,黄芪大黄丹参组次之.尿毒清组与黄芪组、丹参组、大黄组比较,差别有显著性意义(P<0.01或P<0.05).其中,尿毒清组TGF-β1表达量低于黄芪大黄丹参组,差别有显著性意义(P<0.01).结论:中药治疗CRF的分子作用机理之一,可能与通过下调TGF-β1、FN、LN在肾组织中的表达,减少ECM的聚集,减轻或延缓肾脏纤维化,保护肾功能有关.而中药复方尿毒清胶囊在下调TGF-β1、FN、LN在肾组织中的表达作用要比单味中药好.     

抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质细胞外基质的调节

目的：通过观察抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质转化生长因子-β1（TGF-β1）、纤维连接蛋白（FN）以及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）表达的影响,探讨其对细胞外基质（ECM）沉积与降解的调节。方法：建立大鼠UUO模型,90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组和抗纤灵二号方低、中、高剂量组,于治疗4周后收集24h尿液检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、B2-广微球蛋白（B2-MG）,取术侧肾组织,HE、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察TGF-β1、FN及PAI-1在。在间质的表达,并应用图像分析系统进行半定量分析。结果：抗纤灵二号方能够显著减少UUO大鼠尿NAG、β2-MG的排泄．减轻肾间质胶原纤维的积聚．降低TGF-β1、FN及PAI-1在肾间质的表达。结论：抗纤灵二号方可能通过减轻肾小管损伤,减少胶原纤维积聚,下调TGF-β1、FN及PAI-1表达,抑制ECM沉积,促进ECM降解,从而达到改善肾间质纤维化的作用。     

抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阴大鼠肾间质细胞外基质的调节

目的:通过观察抗纤灵二号方对单侧榆尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)以及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达的影响,探讨其对细胞外基质(ECM)沉积与降解的调节.方法:建立大鼠UUO模型,90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组和抗纤灵二号方低、中、高剂量组,于治疗4周后收集24h尿液检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG),取术侧肾组织,HE、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察TGF-β1、FN及PAI-1在肾间质的表达,并应用图像分析系统进行半定量分析.结果:抗纤灵二号方能够显著减少UUO大鼠尿NAG、β2-MG的排泄,减轻肾间质胶原纤维的积聚,降低TGF-β1、FN及PAI-1在肾间质的表达.结论:抗纤灵二号方可能通过减轻肾小管损伤,减少胶原纤维积聚,下调TGD-β1、FN及PAI-1表达,抑制ECM沉积,促进ECM降解,从而达到改善肾间质纤维化的作用.     

茜草和茜草炭对正常大鼠凝血-纤溶系统的影响

目的:研究茜草和茜草炭对正常Wistar大鼠凝血-纤溶系统的影响,通过其药理作用探讨它们的止血化瘀机制.方法:将Wistar大鼠随机分为6组,每组7只,分别为茜草和茜草炭水煎制低剂量、高剂量组(含生药5.0,10.0 g·kg-1),阳性对照组(氨甲苯酸0.6 g·kg-1),空白对照组(生理盐水10 mL·kg-1).灌胃7d,用ELISA法检测大鼠血浆中组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)和纤溶酶原(PLG)活性.结果:和空白对照组比较,茜草在实验剂量下均能提高t-PA的活性,且高剂量时提高t-PA的活性更显著(P＜0.01).高剂量茜草炭能使大鼠t-PA活性提高(P＜0.05),但其作用低于高剂量茜草组.低剂量时对大鼠t-PA活性影响不显著.茜草和茜草炭对PAI和PLG的活性影响均不显著.结论:茜草高、低剂量均能提高t-PA的活性,且在高剂量时提高更显著,进而影响凝血-纤溶系统,从而发挥其止血化瘀作用.茜草炭对纤溶系统也有一定作用,但可能是多种酶的综合作用.茜草和茜草炭对凝血-纤溶系统药理作用效果不同,进而影响它们的临床使用.     

通络保肾复方对5/6肾切除大鼠肾功能及肾组织FN表达的影响

选取雄性Wistar大鼠40只，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，周龄6～8周，体重180g～220g，随机分为正常组、模型组、代文组、保肾康组、中药组（通络保肾复方组）5组，每组8只。除正常组外，其余各组按照文献介绍的方法做5／6肾切除模型。正常组、模型组给予生理盐水按5ml／kg灌胃，保肾康组、     

和肾络颗粒对5/6肾大部切除大鼠肾脏增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察和肾络颗粒治疗5/6肾大部切除慢性肾衰竭模型大鼠肾组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨其对肾纤维化的保护作用。方法:采用5/6肾切除模型大鼠,设立正常对照组、模型组、西药福辛普利组、和肾络低剂量组、中剂量组及高剂量组。检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr),取残肾组织行HE染色,光镜观察肾组织病理变化,免疫组化检测PCNA的变化。结果:中药组与福辛普利组BUN、SCr明显低于模型组;PCNA在术后表达较正常对照组升高,用药组表达明显低于模型组。结论:和肾络抑制PCNA在肾组织内的过度表达,延缓肾脏纤维化的进程。     

旋覆代赭汤对混合性反流性食管炎模型大鼠PCNA表达的影响

目的观察旋覆代赭汤对混合性反流性食管炎模型大鼠食管黏膜组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法采用"食管十二指肠端侧吻合术"制作动物模型。80只大鼠随机分为正常对照组、模型组、中药(旋覆代赭汤)治疗组、西药(莫沙必利)对照组,给予相应处理或用药后,取食管组织行HE染色,用免疫组化的方法测其PCNA的表达。结果旋覆代赭汤能显著抑制反流性食管炎模型大鼠PCNA表达的升高,与模型组相比PCNA的表达率显著降低(P<0.01),其疗效与西药组相当,与正常组相比亦无显著性差异(P>0.01)。结论旋覆代赭汤可明显降低混合性反流性食管炎食管黏膜PCNA的高表达,并能抗食管反流,从而起到治疗混合性反流性食管炎、预防复发及癌变的作用。     

大蒜素对血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察大蒜素对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖细胞核抗原（ＰＣ－ＮＡ）表达的影响。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达，同时测定培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的含量。结果：大蒜素能增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ，升高ＰＧＩ２和ｃＡＭＰ水平，抑制ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达（Ｐ〈０．０５－０．０１）。结论：大蒜素有抑     

增殖细胞核抗原法研究莪术和三氧化二砷对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的:探讨用增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达法研究莪术和三氧化二砷对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用,为防治后发性白内障提供实验依据。方法:采用重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导体外培养的牛晶体上皮细胞(LEC)增殖;流式细胞术(FCM)检测莪术(RC)和三氧化二砷(As2O3)对增殖状态的牛LEC增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的抑制作用,并探讨浓度—效应关系。结果:①rhbFGF使PCNA蛋白表达率明显上升(89.82±2.79)%,与对照组(63.13±3.23)%比较有显著性差异(P<0.01);②RC和As2O3对LEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用,低、中、高不同浓度的RC和As2O3作用24h后,其PCNA蛋白表达率分别为(51.00±3.34)%、(34.29±3.66)%、(23.06±2.91)%和(46.67±4.63)%、(21.97±1.75)%、(13.89±1.61)%。与增殖组(89.82±2.79)%比较有显著性差异(P<0.01);③随着RC和As2O3浓度升高,PCNA蛋白表达率下降,呈明显的剂量—效应关系(P<0.01)。结论:莪术和三氧化二砷可抑制晶状体上皮细胞增殖,对防治后发性白内障具有广阔的前景。     

肾衰合剂对急性肾功能衰竭大鼠促肾脏修复作用及其机理初探

目的动态观察中药复方肾衰合剂对急性肾功能衰竭（ARF）大鼠肾脏修复的影响.方法雄性SD大鼠分为4组,除正常组外,其余大鼠均予肌肉注射甘油造成ARF模型,同时正常组、模型组予生理盐水,西药组予维拉帕米、中药组予肾衰合剂灌胃.观察各组大鼠1～5天肾功能、肾脏病理、肾组织表皮细胞生长因子（EGF）mRNA、增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化.结果（1）肾功能：模型组及两用药组第1天时血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）显著增高（与正常组比较,P＜0.01）,但中药组、西药组大鼠SCr上升幅度较模型组低（P＜0.05）;中药组大鼠第3天时肾功能优于模型组和西药组（P＜0.01）,至第5天时接近正常组.（2）肾脏病理：中药组大鼠各期肾组织病变均较模型组轻,尤其在第3天时（约中期）可见部分肾小管细胞再生,至第5天（约恢复期）肾组织重建良好,且明显优于西药组.（3）免疫组化及原位杂交：中药组大鼠第3天时肾小管上皮细胞EGF mRNA、PCNA的表达显著增高,与同期其他组比较差异有显著性（P＜0.05）.结论肾衰合剂通过促进肾小管上皮细胞EGF mRNA的表达,促进肾脏组织的再生修复,缩短了ARF的病程.     

加减抵当汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织PAI-1基因表达的影响

目的：探讨加减抵当汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织PAI-1 mRNA表达的影响。方法：造模大鼠随机分成正常组、模型组、加减抵当汤高、中、低剂量组、罗格列酮组,用RT-PCR方法检测加减抵当汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏组织PAI-1 mRNA表达的影响。结果：加减抵当汤高、中剂量组能明显下调胰岛素抵抗大鼠PAI-1 mRNA的表达（P〈0.05和P〈0.01）。结论：加减抵当汤能下调PAI-1 mRNA的表达,可能是其改善胰岛素抵抗的机理之一。     

强肌健力方对脾肾两虚证大鼠胸腺增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察强肌健力方对脾肾两虚证大鼠胸腺组织的作用及机理。方法将72只SD大鼠随机分为5组,即正常对照组(10只),模型组(16只),强肌健力方组(15只),黄芪减量方组(15只),单味黄芪组(16只)。采用灌服大黄复制脾虚模型(14天),在脾虚基础上采用肌肉注射氢化可的松复制肾虚模型(10天)。造模同时分别给予蒸馏水、强肌健力方、黄芪减量方、单味黄芪灌胃,连续给药24d后,取胸腺组织行HE染色,光学显微镜下观察各组大鼠胸腺组织形态学的变化,用免疫组化的方法测定增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果模型组体质量比正常对照组显著减轻(P<0.01),而各用药组均可使大鼠体质量升高(P<0.05或P<0.01);模型组大鼠胸腺组织有不同程度损伤,而强肌健力方组、单味黄芪组能使已遭损伤的胸腺组织得以修复;与正常对照组比较,模型组胸腺组织PCNA蛋白表达减少,阳性面积率显著降低(P<0.01);而强肌健力方能使胸腺组织PCNA表达升高(P<0.05)。结论强肌健力方能有效促进脾肾两虚证大鼠胸腺组织细胞增殖,并对受损的胸腺组织具有保护作用,其健脾益气的作用机理与升高PCNA表达有关。     

从痰论治非酒精性脂肪性肝炎痰瘀证对纤溶状态的影响

目的 观察从痰论治非酒精性脂肪性肝炎（Non—alcoholic steatohepatitis,NASH）痰瘀证的临床疗效。方法 62例NASH痰瘀证患者随机分为两组,治疗组34例,给予化痰利湿、舒肝利胆、活血化瘀中药（组成：青黛10g明矾3g草决明15g生山楂15g醋柴胡10g郁金10g丹参12g泽兰12g六一散15g）每日1剂,水煎分两次口服;对照组28例,予熊去氧胆酸片口服,每次150mg,每日3次。两组共治疗12周,并分别于治疗前后评价肝功能（ALT、AST、ALP）、胰岛素抵抗指标（HOMA—IR、Ins）、组织纤溶酶原激活物（t-PA）、1型纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）及主要症状、体征改善情况。结果 （1）治疗组治疗后ALT、AST、HOMA-IR、t—PA、PAI-1及主要症状均较治疗前改善（P〈0．05或P〈0．01）;（2）与对照组治疗后比较,ALP、HOMA-IR、t-PA、PAI-1差异有显著性（P〈0．05或P〈0．01）;（3）熊去氧胆酸片对肝功能指标的改善以谷丙转氨酶、t—PA显著（P〈0．01）,HOMA-IR、Ins、PAI-1及症状亦有所改善。结论 从痰论治NASH痰瘀证能有效改善肝功能及纤溶状态,且优于熊去氧胆酸片。     

益气活血方对球囊损伤大鼠颈总动脉后PCNA表达的影响

目的观察损伤血管细胞核增殖抗原（PCNA）的表达情况,探讨益气活血方对球囊损伤大鼠颈总动脉内膜平滑肌细胞（VSMCs）增殖的干预机制。方法随机将108只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、阿司匹林组及益气活血方大、中、小剂量组。球囊损伤大鼠颈总动脉前给予高脂饲料喂养30d,造成高脂血症;然后经右股动脉穿刺球囊扩张损伤大鼠左颈总动脉,造成颈总动脉管腔的狭窄。手术前1d开始给药,每组动物于术后（5d、14d、28d）处死,取损伤颈总动脉,常规固定、包埋、切片,分别做HE染色和免疫组织化学SABC法检测PCNA的表达。结果各组PCNA均表达阳性,模型组明显增多,用益气活血方干预后14d和28dPCNA表达量与模型组比较有统计学意义（P〈0.05）。结论益气活血方对球囊损伤后动脉血管内膜VSMCs增生有明显的抑制作用,其机制可能与下调细胞核增殖抗原的表达,抑制血管内膜VSMCs的细胞分裂周期进程有关。     

丹酚酸B对糖尿病动脉粥样硬化斑块内血栓相关因子的影响

[目的]观察丹酚酸B对抗糖尿病动脉粥样硬化斑块血栓形成的作用及可能的发生机制。[方法]选取50只8周龄雌性ApoE-/-小鼠,腹腔注射链尿佐菌素200 mg/kg联合高脂饲料喂养12周,将血糖水平11.1 mol/L 40只ApoE-/-小鼠作为糖尿病动脉粥样硬化模型小鼠,随机分为模型组(MOD)、丹酚酸B高剂量组(SalBH)、丹酚酸B中剂量组(SalBM)与洛伐他汀组(LVT)4组,每组10只。各组均连续灌胃8周。实验期满后,测定空腹血糖水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的浓度。免疫组织化学染色检测斑块内组织因子(TF)的表达,利用Image-Pro Plus Version 6.0(IPP)图像分析系统计算结果。[结果]与MOD组比较,各治疗组TF平均光密度值明显降低(P0.05);与MOD组比较,SalBM组PAI-1浓度明显降低(P0.05)[。结论]丹酚酸B能够降低糖尿病动脉粥样硬化斑块内TF的表达和血清PAI-1含量,提示丹酚酸B可能是通过以上机制来减少粥样硬化斑块内的血栓形成。