rAd-p53对人肝癌细胞放射敏感性影响的实验研究

目的探讨重组p53腺病毒(rAd-p53)对不同p53基因型的肝癌细胞放射敏感性的影响及差异。方法用rAd-p53、Ad-EGFP(构建方式及载体的结构与rAd-p53完全相同,仅目的基因不同的腺病毒),分别感染人肝癌细胞HepG2(p53野生型)和人肝癌细胞PLC/PRF/5(p53突变型),MTT法检测细胞存活率;不同剂量X射线照射克隆形成率检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 15MOIrAd-p53感染48 h后,2种细胞生长抑制率分别为(7.30±1.78)%、(11.51±1.53)%,并且随着病毒滴度或感染时间的增加,生长抑制效应亦逐渐增强(P<0.01);HepG2和PLC/PRF/5细胞放射增敏比(SER值)分别为1.24和1.52;细胞凋亡率分别为(22.19±1.04)%、(30.36±2.74)%;均明显高于空白组和Ad-EGFP组(P<0.01)。结论 rAd-p53能显著抑制人肝癌细胞生长、诱导细胞凋亡和提高细胞放射敏感性,并且对PLC/PRF/5细胞(p53突变型)作用强于HepG2(p53野生型)。     

RNPC1基因对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响

目的：研究RNPC1对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响。方法：在MCF-7细胞中使用慢病毒转染法,设敲除（shRNPC1）组和过表达RNPC1组、敲除对照（SCR）组和过表达对照（NC）组。用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组MCF-7细胞中RNPC1的mRNA和蛋白水平。以不同浓度的阿霉素处理各组MCF-7细胞,CCK-8法检测各组细胞生长抑制率。阿霉素处理各组MCF-7细胞后, 用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中调亡相关蛋白的表达。结果：shRNPC1组RNPC1 mRNA和蛋白相对表达量均低于SCR组,过表达RNPC1组RNPC1 mRNA及蛋白相对表达量均高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞后,shRNPC1组IC50明显于低于SCR组（P<0.05）,过表达组IC50明显高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,发现shRNPC1组凋亡率明显高于SCR组;过表达RNPC1组凋亡率显著低于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,shRNPC1组抑凋亡蛋白BCL-XL、BCL-2的表达低于SCR组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达高于SCR组;过表达RNPC1组抑凋亡蛋白BCL-CL、BCL-2的表达高于NC组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达低于NC组。结论：RNPC1能降低乳腺癌细胞MCF-7对阿霉素的敏感性,其机制与抗细胞凋亡有关。     

节律基因mPerl对化疗药物阿霉素敏感性的影响

目的 评价小鼠乳腺癌EMT6细胞中节律基因moPerl过表达对化疗药物阿霉素(ADM)敏感性的影响.方法 将pcDNA3.1( )-mPerl质粒转染至EMT6细胞中(EMT6-mPerl组),以pcDNA3.1( )质粒为对照(EMT6-vect组),通过RT-PCR、Western Blotting检测转染效率;给予ADM处理,MTT法检测细胞生长情况.流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA的水平.结果 在ADM处理后.与对照组比较,转染mPerl基因细胞表现为:S期比例增加,凋亡率升高(EMT6-vect;(65.65±0.07)%;EMT6-mPerll(72.35±0.57)%],细胞生长抑制率增加[EMT6-vect:(42.18±5.73)%;EMT6-mPerl:(53.28±7.32%)]及p53 mRNA表达量增加(EMT6-vect:0.48±0.08;EMT6-mPerl; 1.18±0.02).结论 节律基因mPerl过表达可以提高该细胞对阿霉素的敏感性.     

表阿霉素和阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡

目的　观察和比较表阿霉素和阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的作用 ,为临床治疗肝癌的药物选择提供依据 .方法　用 2 0 μmol· L- 1表阿霉素和阿霉素分别作用于人肝癌细胞株HCC- 92 0 4细胞 3h,换液继续培养 8h.用细胞形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪判定细胞凋亡情况 .结果　表阿霉素和阿霉素分别作用于 HCC- 92 0 4细胞 11h后 ,细胞形态学改变均符合凋亡细胞特征 .凋亡细胞分别占细胞总数的13.8%和 13.1% .MTT试验示各实验组与空白对照组间比较相差显著 ,表阿霉素和阿霉素相同剂量处理组之间比较无显著差异 .细胞周期检测表阿霉素组 G1 期、G2 期和 S期分别为 5 6 .4% ,10 .4%和 38.2 % ,阿霉素组分别为 6 1.1% ,8.6 %和 30 .3% ,对照组为 31.1% ,6 1.9%和 6 .0 % .结论　表阿霉素和阿霉素均能有效地诱导人肝癌细胞株 HCC- 92 0 4细胞发生凋亡 ,无明显差异 .     

变异型p53蛋白表达对人乳腺癌细胞阿霉素抗药性的影响

目的　探讨变异型p53蛋白表达对人乳腺癌细胞阿霉素抗药性的影响。方法　应用琼脂培养MTT法检测阿霉素 (ADM)对 9例人乳腺癌新鲜标本药物敏感性。用S -P免疫组化技术观察变异型p53蛋白表达 ,并用ICM - 10 0细胞DNA图像分析系统作半定量分析 ;同时观察阿霉素对人乳腺癌手术前化疗疗效。结果　 (1) 9例人乳腺癌新鲜标本中 7例变异型p53蛋白表达阳性 (阳性率为 77.77% )。 (2 )变异型p53蛋白表达量 (阳性面积占总面积百分比 )与人乳腺癌细胞阿霉素抗药指数 (人乳腺癌新鲜标本阿霉素的IC50值与 1/ 10阿霉素血浆峰值浓度的比值 )呈正相关 (r =0 .7956 ,P <0 .0 1)。 (3)变异型p53蛋白表达量与人乳腺癌患者手术前阿霉素化疗疗效积分呈负相关 (r =- 0 .86 37,P <0 .0 1)。结论　变异型p53蛋白表达与人乳腺癌细胞阿霉素抗药性相关     

三氧化二砷联合阿霉素对人淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合阿霉素（adriamycin, ADM）对淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法：将Raji细胞分为实验组与对照组,实验组分为1 μmol/L As2O3组、2 μmol/L As2O3组、ADM组、1 μmol/L As2O3与ADM联合组、2 μmol/L As2O3与ADM联合组。用As2O3和ADM干预不同时间的人淋巴瘤细胞株Raji,采用Wright-Giemsa染色法观察细胞凋亡的形态学变化;采用噻唑蓝比色法检测As2O3联合ADM对淋巴瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测As2O3联合ADM对淋巴瘤细胞凋亡率及淋巴瘤细胞内ADM荧光强度的影响;半定量聚合酶链反应检测As2O3和ADM对淋巴瘤细胞p53表达的影响。结果：As2O3联合ADM作用细胞24h后,可观察到细胞出现凋亡形态学改变。与As2O3和ADM单药组相比,As2O3联合ADM可增强对Raji细胞的抑制率,差异有统计学意义（P＜0.05）,其作用呈浓度和时间依赖性;As2O3与ADM联合组与单药组相比,Raji细胞的凋亡率差异具有统计学意义（P＜0.05）;As2O3和ADM单药组及联合组p53的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;另外,加入1 μmol/L和2 μmol/L As2O3后细胞内ADM的荧光强度分别为18.53和18.12,分别增加0.056倍和0.023倍,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：As2O3和ADM单药及两种药物联合体外均可抑制淋巴瘤细胞增殖,诱导凋亡和下调突变型p53;As2O3和ADM联合体外有协同抗淋巴瘤作用;As2O3对Raji细胞内ADM浓度无显著影响;As2O3可增强淋巴瘤细胞的化疗敏感性,其下调突变型p53的表达可能是其分子水平的作用机制之一。     

节律基因mPer1对化疗药物阿霉素敏感性的影响

目的评价小鼠乳腺癌EMT6细胞中节律基因mPer1过表达对化疗药物阿霉素(ADM)敏感性的影响。方法将pcDNA3.1( )-mPer1质粒转染至EMT6细胞中(EMT6-mPer1组),以pcDNA3.1( )质粒为对照(EMT6-vect组),通过RT-PCR、Western Blotting检测转染效率;给予ADM处理,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA的水平。结果在ADM处理后,与对照组比较,转染mPer1基因细胞表现为:S期比例增加,凋亡率升高〔EMT6-vect:(65.65±0.07)%;EMT6-mPer1:(72.35±0.57)%〕,细胞生长抑制率增加〔EMT6-vect:(42.18±5.73)%;EMT6-mPer1:(53.28±7.32%)〕及p53 mRNA表达量增加(EMT6-vect:0.48±0.08;EMT6-mPer1:1.18±0.02)。结论节律基因mPer1过表达可以提高该细胞对阿霉素的敏感性。     

阿霉素对人肝癌细胞SMMC—7721抑制作用的研究

目的 研究阿霉素对人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１生长的影响。方法 应用ＭＴ法、流式细胞术及航向电镜技术观察阿霉素对ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长的作用及细胞周期和形态学改变。结果 阿霉素明显抑制人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１的生长（Ｐ〈０．０５）,半数生长抑制剂量（ＩＣ５０）为０．４４ｍｇ／Ｌ。流式细胞术证实,阿霉素作用１２ｈ,细胞阻滞于Ｇ２期,４８ｈ细胞阻滞于Ｇ１期。航向电镜超微结构观察发现阿霉素可使肿     

转染野生型p53基因对肝癌细胞生长的影响

目的：通过转染野生型p53基因致肝癌细胞株BEL-7404，研究其对肝癌细胞的生长及凋亡作用。方法：野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株BEL-7404。用四甲基偶氮唑（MTT）法测定细胞生长曲线，用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果：肝癌细胞BEK-7404转染野生型p53基因后，其生长作用明显受到抑制．细胞生长抑制率在第4天可达50．8％。流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．7％，转染pUHD10-3组为3．2％．转染pUHD10-3-p53组为40．7％。结论：野生型p53基因可诱导肝癌细胞BEL-7404的生长抑制及发生凋亡。     

利用重组真核表达载体pCMV—p53转染wt p53基因及对大鼠C6胶质瘤细胞的热增敏效应

目的:探讨C6细胞在加热后的生物学行为改变及转染外源性野生型p53基因(wt p53)对C6胶质瘤热疗的影响.方法:提取与鉴定真核表达载体pCMV-p53,利用红色荧光蛋白确定转染质粒和脂质体的最佳比例.wt p53真核表达质粒稳定转染至大鼠C6胶质瘤细胞系,通过neo基因表达的检测确定目的基因转染的成功性.设置C6/p53(+)细胞组、C6细胞加热组、C6/p53(+)细胞加热组、反复加热后生长的热耐受C6细胞组和对照组,观察各组细胞的生物学行为及裸鼠接种成瘤率.对裸鼠皮下各组异种胶质瘤做激光间质热疗(laser interstitial thermotherapy,LITT)并比较抑瘤效果.结果:wt p53基因片断经正确鉴定和提取,转染质粒和脂质体的最佳转染比例为1∶6.neo基因稳定表达于转染了阳性质粒的C6细胞中.热耐受C6细胞的生长未受影响,C6/p53(+)细胞组生长速度减慢,加热组在加热12 h后细胞增殖明显受影响,而C6/p53(+)细胞加热组的细胞增殖活性从6 h起受到显著抑制;在C6/p53(+)细胞组、C6细胞加热组、C6/p53(+)细胞加热组中都可以观察到细胞凋亡形态学改变,流式细胞技术证实C6/p53(+)细胞加热组凋亡率增加最为明显,达对照组的30倍,差异有显著性(P<0.01).C6细胞加热组、C6/p53(+)细胞组、C6/p53(+)细胞加热组的裸鼠成瘤率均有下降,分别为75%、57%、20%,而热耐受C6细胞组为100%.C6/p53(+)裸鼠LITT组与假手术组疗效比较差异有显著性(P<0.001),较C6裸鼠LITT组也有统计学差异(P<0.05).而热耐受C6裸鼠的抑瘤效果在所有的LITT 实验组最低.结论:p53基因可通过真核载体基因转染技术实现在C6细胞中稳定表达,并能在体内、外抑制大鼠C6胶质瘤细胞的生长,wt p53表达上调可增加C6细胞对加热的敏感性.     

雷帕霉素联合阿霉素对肝癌细胞BEL-7402增殖及迁移的影响及其作用机制

目的:探讨雷帕霉素(RAPA)与阿霉素(ADM)联合应用对肝癌细胞BEL-7402增殖和迁移的影响,阐明其作用机制.方法:选取处于对数生长期肝癌细胞株BEL7402随机分为空白对照组、乙醇溶媒组、RAPA组、ADM组以及联合用药组,采用MTT法检测各组细胞6 d内的增殖情况,采用RT-PCR方法检测cyclin D1和...     

The Effects of Wild-type p5 3Gene Transfection on the Growth and Chemotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

In gliomas,p5 3 mutations are among the mostfrequently observed genetic findings[1] .As a tu-mor- suppressor gene,p5 3 mutations can lead touncontrolled cell proliferation[2 ] . It was reportedthat loss of wild- type p5 3 function decreased sensi-tivity of tumor cells to chemotherapy[3 ] . In thisstudy,wild- type p5 3 gene was delivered into hu-man glioma cell line U2 5 1 by using liposome- medi-ated transfection technique to observe the effects ofp5 3 gene treatment and combined treatment of …     

Effect of Wild-type p53 Gene Transfection on the Growth and Radiotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

Ingliomas,p53mutationsareamongthemostfrequentlyobservedgeneticfindings[1].Asatumorsuppressorgene,p53mutationcanleadtouncon trolledcellproliferation[2].Itwasreportedthattransfectionofwild typep53genemayenhancetheradiosensitivityoftumorcellscontainingwild typep53[3].Inthisstudy,wild typep53genewasde liveredintohumangliomacelllineU251byusingliposome mediatedtransfectiontechniquetoob servetheeffectofp53genetreatmentandcom binedtreatmentofp53andirradiationtherapyongliomacell.1MATERIALSANDMET…     

艾迪联合抗癌药物对肝癌细胞系体外药物敏感性研究

目的 通过测定艾迪及艾迪联合抗癌药物ADM、DDP、5—Fu、MMC对肝磁细胞系7721细胞的体外药物敏感性试验，为肝癌化疗、介入治疗用药提供参考依据。方法 用24孔板培养肝癌细胞系7721细胞，观察细胞在单药及联合用药时的生长、抑制和集落形成情况，以判定药物的敏感性。结果 艾迪对肝癌细胞系7721细胞有抑制作用，引起癌细胞G0／G1期阻滞，艾迪与MMC和ADM有协同作用，其中以艾迪和ADM联合应用时作用最强。结论 艾迪对肝癌细胞系7721细胞有抑制作用，剂量增加与疗效提高有较大关系；艾迪与ADM和MMC联合应用，有协同作用。     

大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性研究

目的研究大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性.方法用MTT比色法检测20位大肠癌患者的癌细胞对化疗药物的敏感性,并用PCR-SSCP技术分析其癌细胞的p53基因突变.结果大肠癌细胞对5-Fu[IR=(54.7±14.1)%]比对MMC[IR=(43.9±10.8)%]及ADM[IR=(43.9±9.4)%]更敏感(P＜0.05),但对DDP有耐药性[IR=(25.9±12.8)%,P＜0.01].p53基因的突变率为45%(9/20).癌细胞对MMC和ADM的敏感性与p53基因突变呈正相关(rmmc=0.589,rabm=0.624,P＜0.005).结论化疗药物MMC和ADM对大肠癌的作用依赖于p53基因的状态,而大肠癌对5-Fu和DDP的敏感性却与p53基因突变无关.     

抑癌基因p53在原发性肝癌发病中的作用

该文通过复习有关p53突变研究的所有文献,并将他们的研究结果做一总结分析,综述了抑癌基因p53突变在肝癌发病中的作用。结果发现：肝癌的发病机制非常复杂,涉及了一系列基因和细胞因子。同时表明肝癌的发病是一个多步骤的过程,在此过程中,HBV和AFB1是两个非常重要的致癌因子,他们可通过激活癌基因或使抑癌基因失活而发挥作用,其中发挥重要作用的基因为p53,p53 249编码子的突变在肝癌发病中起着非常重要的作用。p53 249编码子的突变可使p53功能丧失,同时也可使与p53相关的信号传导路径发生改变,并与其他因子共同作用,进而导致肝癌的发生。     

人野生型p53肿瘤抑制基因在烟草中的遗传转化

目的:构建人野生型p53肿瘤抑制基因的植物表达载体,并建立p53转基因烟草植株.方法:将人野生型p53肿瘤抑制基因编码区克隆于pUC19,pBI426和pCAMBIA2301载体,构建含人野生型p53基因的植物表达载体pCAM-BIA2301/p53,p53基因由2×CaMV 35S启动子控制表达.利用叶盘共培养法经根瘤农杆菌EHA105介导转化烟草,获得转基因烟草植株;用组织化学法,PCR、Southern杂交检测转基因烟草植株.结果:经组织化学法,PCR,Southern杂交检测表明人野生型p53基因已整合到转基因烟草植株的基因组中,并获得了的转p53基因烟草植株.结论:成功建立了含人野生型p53基因的转基因烟草植株,为进一步检测p53基因的生物活性和开辟生产药用蛋白的新途径奠定了基础.     

半叶马尾藻多糖对抑癌基因p53和Rb的影响

目的 研究半叶马尾藻多糖(SP)对抑癌基因p53和R6的影响.方法 称重法检测SP对小鼠S180肉瘤的抑瘤率;RT-PCR分析抑癌基因p53和Rb中mRNA的含量:Western-blotting检测p53和Rb中蛋白质的表达水平.结果 将浓度分别为50、100和200mg/kg的SP经腹腔注射人S180肉瘤小鼠体内,连续10d,抑瘤率分别为30.5%、47.6%和63.5%.SP可上调抑癌基因p53和R6中mRNA的表达以及增加p53和Rb中蛋白质含量.结论 SP对小鼠S180肉瘤具有一定的体内抑制作用,并上调抑癌基因的表达.     

Relationship between hepatitis B virus associated primary hepatocellular carcinoma and alteration of tumor suppressor gene p53

ChronicinfectionofhepatitisBvirus(HBV)isoneoftheimportantfactorsrelatedwithprimaryhepatocellularcarcinoma(PHC).Yetthemecha-nlsmbywh1chHBVpartlcipatesinthedeveIop-mentofPHCremainstobeelucidated.Thoughthechangesofseveraltumorgeneswerethoughttobeinvolved1nthepathogenesisofPHC,itwasbe-Ilevedthatpo3playedakeyrolepartlcularlyinthemutatlonatcodon249ha'.However,verydlfferentresultshavebeenreportedamongPHCfromdiffer-entpopulationsandareasf'.'-.ltwasreportedthatpointmutationofp53geneatcodon249wa…