清毒栓血清药对宫颈癌SiHa细胞凋亡及周期的影响

目的 通过研究中药含药血清对宫颈癌SiHa细胞凋亡及细胞周期的影响,探讨中药抑制宫颈癌SiHa细胞生长可能的作用机制.方法 以不同浓度含药血清培养液作用于SiHa细胞,并设立空向血清及含中、西药阳性药血清为对照,用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测.结果 口服各组含药血清组S期所占比例较空白血清对照组减少,其差异有显著性(P＜0.05),尤以西药阳性组明显(P＜0.01),清毒栓组次之,中药阳性组再次之.而G0～G1期所占比例较空白血清对照组增加,其差异有显著性(P＜0.01).结论 清毒栓对人宫颈癌SiHa细胞的作用可能是通过阻断细胞从G0～G1期向S期分化及促进其凋亡而抑制细胞生长.     

清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞MDM2基因的影响

目的研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓对抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。方法以不同浓度清毒栓含药血清培养液作用于SiHa细胞,并设立空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过MTT法检测清毒栓对细胞生长增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测,并用RT—PCR法半定量检测原癌基因MDM2表达。结果经清毒栓含药8％的血清培养液作用后细胞数量减少,其中以血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白组比较,差异有显著性（P〈0．01）;细胞周期各时相中,清毒栓含药血清S期细胞所占的比例明显减少,对细胞凋亡有影响,但未见明显规律性,RT—PCR结果示清毒栓含药血清细胞中MDM2表达明显减少。结论清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过下调MDM2基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。     

清毒栓血清药理对宫颈癌SiHa细胞P53基因调控作用的研究

[目的]研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。[方法]以不同浓度含药血清培养液作用于SiHa细胞,并以空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过噻唑蓝(MTT)法检测该药对细胞生长及增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测对抑癌基因P53表达的影响。[结果]经含药血清培养液作用后细胞数量减少,其中以8%浓度含药血清作用72h时对细胞抑制作用最强;细胞周期各时相中,S期细胞所占的比例明显减少;对细胞凋亡有影响但未见明显规律性,RT-PCR结果示细胞中P53表达明显增加。[结论]清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过调控P53基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。     

清毒栓对宫颈癌SiHa细胞及PTEN—MDM2-p53网络环路的影响

目的从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及对PTEN—MDM2-p53网络中各个蛋白表达的影响。方法以4％含药血清培养液作用于SiHa细胞,设立正常对照组、空白血清组、清毒栓组、保妇康栓组及干扰素组,通过MTT法检测含药血清对细胞增殖抑制的影响;同时运用Western blot法检测PTEN—MDM2-p53蛋白的表达情况。结果经含药血清培养液作用后各组细胞数量减少,其中以4％浓度含药血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白血清组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;同时,含药血清可升高PTEN、P53抑癌蛋白的表达,降低癌蛋白MDM2的表达。结论清毒栓含药血清可能是通过调控PTEN-MDM2-P53网络环路而达到抑制肿瘤的目的。     

清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨清毒栓含药血清对人宫颈癌SiHa细胞的诱导凋亡作用及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 以不同浓度清毒栓含药血清分别处理SiHa细胞24～72 h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达.结果 显微镜下观察到细胞圆缩、染色体凝聚等凋亡细胞的形念学改变,随着清毒栓含药血清浓度的增加,Bax蛋白的表达增加而Bcl-2的表达减少.结论 清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞的生长具有抑制作用,可诱导SiHa细胞发生凋亡,Bcl-2蛋白表达减少与Bax蛋白表达增多可能是SiHa细胞凋亡的机制之一.     

清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨清毒栓含药血清对人宫颈癌SiHa细胞的诱导凋亡作用及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法以不同浓度清毒栓含药血清分别处理SiHa细胞24～72h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果显微镜下观察到细胞圆缩、染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变,随着清毒栓含药血清浓度的增加,Bax蛋白的表达增加而Bcl-2的表达减少。结论清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞的生长具有抑制作用,可诱导SiHa细胞发生凋亡,Bcl-2蛋白表达减少与Bax蛋白表达增多可能是SiHa细胞凋亡的机制之一。     

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞P53泛素化降解途径的实验研究

目的 从细胞生物学及分子生物学水平探讨中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及P53泛素化降解途径中各个蛋白表达的情况.研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用.方法 以4%含药血清培养液作用于SiHa细胞,设立正常对照组、空白血清组、清毒栓组及保妇康组、安达芬组.通过MTT法检测含药血清对细胞增殖抑制的影响;同时运用Western-Blot的方法检测HPV16E6、P53、UBcH8、E6-AP蛋白的表达情况.结果 经含药血清培养液作用后各组细胞数量减少,其中以4%浓度含药血清作用72 h时对细胞抑制作用最强,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);同时含药血清可升高P53、UBcH8蛋白的表达,降低HPV16E6、E6-AP的表达.结论 清毒栓含药血清可能是通过调控P53泛素化降解途径而达到抑制肿瘤的目的.     

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞P53泛素化降解途径的实验研究

目的从细胞生物学及分子生物学水平探讨中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及P53泛素化降解途径中各个蛋白表达的情况,研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用。方法以4%含药血清培养液作用于SiHa细胞,设立正常对照组、空白血清组、清毒栓组及保妇康组、安达芬组,通过MTT法检测含药血清对细胞增殖抑制的影响;同时运用Western-Blot的方法检测HPV16E6、P53、UBcH8、E6-AP蛋白的表达情况。结果经含药血清培养液作用后各组细胞数量减少,其中以4%浓度含药血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时含药血清可升高P53、UBcH8蛋白的表达,降低HPV16E6、E6-AP的表达。结论清毒栓含药血清可能是通过调控P53泛素化降解途径而达到抑制肿瘤的目的。     

血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血府逐瘀胶囊及血塞通胶囊含药血清对溶血磷脂酸（LPA）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖效应的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC并分为7组：空白血清组,血府逐瘀胶囊含药血清组,血塞通胶囊含药血清组,3组分别＋LPA组,卡托普利含药血清＋LPA组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察不同含药血清对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果空白血清＋LPA组、血府逐瘀胶囊含药血清组较空白血清组0D值升高（P〈0．05）,S期指数升高（P〈0．01）。血府逐瘀胶囊含药血清＋LPA组、血塞通胶囊含药血清＋LPA组较卡托普利含药血清＋LPA组0D值降低（P〉0．05,P〈0．01）;S期指数升高（P〈0．01,P〉0．05）。结论LPA、血府逐瘀胶囊对体外培养的VSMC有促增殖作用,血塞通胶囊无促增殖作用。血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,血塞通胶囊作用更强。其作用机制部分与抑制DNA合成、阻止细胞进入S期有关。     

清毒栓提取物通过调节Foxp3影响β-catenin通路从而抑制SiHa细胞活性的研究

[目的] 考察清毒栓提取物对宫颈癌SiHa细胞活性的影响,并基于叉状头/翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）探讨其可能的作用机制。[方法] 利用脂质体介导转染方法,建立Foxp3过表达人乳头瘤病毒（HPV）感染阳性SiHa细胞株,同时利用pcDNA3.1空载体转染SiHa细胞株作为阴性对照。用蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测经空白血清和15%含药血清分别处理的Foxp3过表达质粒组及空白质粒组SiHa细胞中Foxp3蛋白及其下游信号分子水平,并用CCK8法检测4组SiHa细胞活性。[结果] Foxp3过表达载体转染处理可以显著增加SiHa细胞中Foxp3蛋白、Foxp3下游信号分子β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的蛋白含量并增加SiHa细胞活性（P<0.01）,而抑制凋亡基因含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）剪切（P<0.05）;清毒栓含药血清可以显著抑制SiHa细胞中Foxp3及其下游信号分子蛋白水平（P<0.05）并抑制SiHa细胞活性（P<0.01）,促进Caspase-3剪切（P<0.01）。Foxp3过表达质粒可以抑制含药血清诱导的SiHa细胞中Foxp3下调和活性下降,抑制含药血清诱导的β-catenin、c-Myc、cyclinD1含量下调以及Caspase-3剪切增加。[结论] Foxp3可通过激活β-catenin通路来增加SiHa细胞活性,在SiHa细胞中扮演着原癌基因角色,而清毒栓含药血清通过调节Foxp3影响β-catenin通路从而抑制SiHa细胞活性。     

养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨养阴清肺方对钴60照射后肺成纤维细胞的生长周期及凋亡的影响。方法：制备实验用含药血清：空白组、中药组、激素组、中药加激素组;采用钴60射线照射肺成纤维细胞后,用不同含药血清培养细胞,分别于24、48、72 h后用流式细胞技术检测各组的细胞周期及细胞凋亡。结果：24 h,各药物组的细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,中药组的作用最突出。各药物组的细胞周期主要阻滞在G2/M期;空白组与各药物组的S期有显著差异（P〈0.05）。48 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）,而各药物组之间没有差异（P〉0.05）。72 h,各药物组细胞凋亡与空白组均有差异（P〈0.05）;各药物组之间亦有差异（P〈0.05）。48、72h各组出现了以G0/G1期比例增高为主的G0/G1期和G2/M期同时阻滞的现象。结论：养阴清肺方能够影响细胞生长周期,减少细胞合成期,诱导G2/M期阻滞,促进肺成纤维细胞的凋亡。     

清毒栓提取物通过调节Zeste基因增强子同源物2抑制SiHa细胞活性的研究

目的研究清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌(SiHa)细胞活性的影响,并基于Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)探讨其可能的作用机制。方法取稳定并进入对数生长期的SiHa细胞,采用血清药理学方法制备的清毒栓含药血清和EZH2抑制剂GSK126进行干预,使用八肽胆囊收缩素、实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法、染色质免疫沉淀技术等技术,研究清毒栓含药血清对SiHa细胞活性、增殖与凋亡、叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead box P3,Foxp3)表达与其组蛋白甲基化水平、β-连环蛋白通路、EZH2表达影响。结果清毒栓含药血清促进Foxp3启动子区组蛋白甲基化水平,并可增加EZH2含量;而Foxp3过表达质粒和EZH2抑制剂GSK126可以逆转清毒栓含药血清诱导的Foxp3表达下调,增殖凋亡相关蛋白表达改变以及SiHa细胞活性下调。结论清毒栓对SiHa细胞的抑制作用是通过增加EZH2含量促进Foxp3启动子组蛋白甲基化来改变Foxp3表达,从而抑制SiHa细胞中β-连环蛋白通路实现的。     

三七提取物对经MNNG转化后的GES-1细胞增殖抑制及促凋亡作用

目的通过细胞培养方法,研究灌服三七提取物后犬血清对胃癌前病变细胞增殖抑制及促凋亡作用。方法采用永生化的人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞被N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）进一步转化后的细胞（简称MC细胞）作为胃癌前病变细胞的体外研究模型;以三七提取物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清及给药后不同时点的血清作为实验药物血清。以四甲基固氮唑盐（MTT）法分别检测每个采血时间点上含药血清对MC细胞作用72h后的抑制情况,找出最佳含药血清时点（2h、6h）;根据以上结果,以流式细胞仪（flow cytometry）分别检测2h和6h药物血清对MC细胞作用72h后的促凋亡作用。结果2h和6h时点的药物血清对MC细胞的抑制率最高,分别达到45．3％和42．4％,与空白血清组比较差异有显著性（P〈0．01）;其能明显促进MC细胞的凋亡,与空白血清组比较其凋亡比例增加（P〈0．05）。在2h和6h药物血清的作用下MC细胞在G0／G1期细胞比例明显下降（P〈0．05）;而G2／M期细胞显著增加（P〈0．05）;但S期并没有一致性的变化。结论灌服三七提取物后2h、6h药物血清对MC细胞的增殖抑制作用最强;均对MC细胞有显著的促凋亡作用,且能降低MC细胞在G0／G1期的比例及增加G2／M期的比例．这可能是其抑制MC细胞增殖及促凋亡的原因之一。     

六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡影响的体外实验研究

目的:研究六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:取1月龄新西兰兔关节软骨经胶原酶Ⅱ消化,建立软骨细胞体外培养体系,随机分为3组,分别加入培养液、空白血清和中药血清继续培养72小时后,用MTT比色法检测其OD值变化,采用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:中药血清组的OD值显著高于正常对照组、空白血清组(P<0.05);流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,其G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白血清组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:六味地黄汤能有效促进软骨细胞增殖、抑制软骨细胞凋亡。     

安颤灵对蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导PC12细胞凋亡的影响

观察安颤灵含药血清对lactacystin诱导Pc12细胞凋亡的影响。方法：按照血清药理学实验方法制备安颤灵含药血清,采用lactacystin作用于PC12细胞,建立泛素-蛋白酶体系统损伤的细胞模型。将含药血清分为大、中、小剂量组,MTT方法检测各组的细胞活力;将对数生长期的PC12细胞分为正常组、lactacystin组（损伤组）、中药组,通过Tunel及免疫细胞化学方法,观察各组细胞凋亡情况。结果：与大、小剂量组相比,中剂量组细胞的存活率显著升高（P〈0．01）;与正常组相比,lactacystin组细胞凋亡指数明显增加（P〈0．01）;与lactacystin组相比,中药组细胞凋亡指数明显降低（P〈0．01）。结论：安颤灵含药血清具有抗lactacystin诱导的细胞凋亡作用。     

二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的作用研究

目的：研究二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的抑制作用、最佳给药方案及诱导细胞凋亡。方法：采用MTT法,观察不同给药天数、不同剂量、不同采血时间、不同培养时间的二冬汤血清对肺癌细胞A549的抑制效应,及应用FITC／PI流式细胞术检测最佳给药方案含药血清对A549细胞的凋亡率。结果：二冬汤含药血清对人肺癌细胞A549具有抑制作用,中剂量组[7．99g／（kg·d）]给药5天、10天,末次给药2h的含药血清与细胞培养48h后的抑制作用最明显,抑制率分别为42．27％和39．67％,与空白血清组比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）;但从给药天数以及与肺癌细胞培养时间上来看,与空白血清组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）;FITC／PI双染法显示二冬汤含药血清对A549的凋亡总计为（28．45±0．68）％,与空白血清组（6．75±0．46）％比较,差异有非常显著性意义护〈0．01）。结论：二冬汤最佳给药方案为给药5天,末次给药2h后取血,此时制备的含药血清能诱导细胞发生凋亡。     

加味宫外孕Ⅰ号方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡率和细胞周期的影响

目的:运用血清药理学方法,观察加味宫外孕Ⅰ号方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡率和细胞周期的影响。方法:根据血清药理学的方法,用SD大鼠制备中药组(加味宫外孕Ⅰ号方含药血清),西药组(甲氨蝶呤含药血清)和对照组(正常血清),分别加入体外培养的滋养细胞培养体系中。培养72 h后,流式细胞法测定3组的细胞凋亡率和细胞周期。结果:中药组与对照组相比,滋养细胞凋亡率显著上升(P0.01),细胞周期发生阻滞,G0/G1期细胞百分比显著增多(P0.01);中药组与西药组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:加味宫外孕Ⅰ号方诱导滋养细胞凋亡,改变细胞周期进程可能是其发挥杀胚效应的机制之一。     

股骨头坏死愈胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的保护作用

目的:观察股骨头坏死愈胶囊含药血清对体外大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的保护作用。方法:在体外分离、筛选、培养大鼠BMSCs细胞,制备0.36,0.72,1.44 g·kg-1灌胃处理得到的股骨头坏死愈胶囊含药血清作用后,选择第3代大鼠BMSCs,实验分为空白组(加入不含大鼠血清的培养液),正常组(加入体积分数为20%正常大鼠血清培养液),模型组(加入体积分数为20%正常大鼠血清培养液和全反式维甲酸诱导细胞凋亡)和中药血清低、中、高剂量组(培养过程中分别加入对应剂量、体积分数为20%的股骨头坏死愈胶囊含药血清培养液和全反式维甲酸诱导细胞凋亡),共6组,MTT法检测各组细胞相对存活率,流式细胞仪检测各组细胞周期,进行比较。结果:与正常组比较,模型组,中药血清低、中、高剂量组相对存活率下降,细胞周期中G1期比例上升,G2及S期比例下降,差异有显著性意义(P0.01)。与模型组比较,中药血清低、中、高剂量组相对存活率上升,G1期比例减少,G2及S期比例增加,且随着中药剂量增加而差值明显,差异有显著性意义(P0.01)。结论:股骨头坏死愈胶囊含药血清可提高大鼠BMSCs的存活率,对全反式维甲酸所致的细胞凋亡有保护作用。     

补肾化瘀方对宫腔粘连子宫内膜细胞生长周期及MMP-9的影响

目的:研究家兔补肾化瘀方含药血清对宫腔粘连子宫内膜基质细胞的生长周期及MMP-9因子的影响,探讨其部分作用机制。方法:选取宫腔粘连患者子宫内膜组织,制备宫腔粘连子宫内膜基质细胞模型。将家兔分为中药高、中、低剂量组及西药补佳乐组、空白组5组,用不同浓度补肾化瘀中药以及西药补佳乐灌胃7d,心脏采血并取含药血清,用家兔含药血清干预细胞模型,应用流式细胞检测仪检测细胞周期,ELISA法检测MMP-9因子的表达。结果:各组家兔含药血清作用于宫腔粘连患者子宫内膜基质细胞模型24h后,与空白组比较,各给药组的增殖指数(PI)和MMP-9含量均增高,凋亡指数(API)均降低,S期细胞百分比均增高,差异有统计学意义(P0.01)。与西药组比较,中药各组PI增高,API降低,S期细胞百分比增高,中药中、低剂量组MMP-9表达减少,差异有统计学意义(P0.01);但中药高剂量组MMP-9表达与西药组差异无统计学意义(P0.05)。与中药中剂量组比较,中药高剂量组MMP-9表达增多,PI增高,API降低,S期细胞百分比增高,中药低剂量组PI降低,API增高,差异均有统计学意义(P0.01);中药中、低剂量组的S期细胞百分比差异无统计学意义(P0.05)。与中药低剂量组比较,中药高、中剂量组与西药组MMP-9表达增多,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:含有补肾化瘀方的家兔含药血清可以提高宫腔粘连子宫内膜基质细胞中MMP-9因子的水平,促进宫腔粘连子宫内膜基质细胞的增殖,并降低其凋亡,不同浓度的补肾化瘀方对于宫腔粘连子宫内膜基质细胞的影响也有区别。